雞clock基因不同轉(zhuǎn)錄本的擴(kuò)增方法及其引物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種雞CLOCK基因不同轉(zhuǎn)錄本的擴(kuò)增方法及其引物，鑒定每個轉(zhuǎn)錄本的特異序列，根據(jù)每個轉(zhuǎn)錄本的特異序列，設(shè)計特異性引物，對雞mRNA進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min；35個循環(huán)：94℃變性30s，60.9℃退火30s，72℃延伸30s；72℃延伸5min；4℃保存；擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，根據(jù)電泳結(jié)果和目的條帶大小可以分辨出不同轉(zhuǎn)錄本，所述的特異性引物序列如SEQ?ID?NO：1-SEQ?ID?NO：4所示。本發(fā)明針對每個轉(zhuǎn)錄本序列，設(shè)計了轉(zhuǎn)錄本特異引物，通過反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)可以擴(kuò)增出特定的轉(zhuǎn)錄本，對不同轉(zhuǎn)錄本功能的分析研究奠定基礎(chǔ)。
【專利說明】雞CLOCK基因不同轉(zhuǎn)錄本的擴(kuò)增方法及其弓I物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及的是一種雞CLOCK基因不同轉(zhuǎn)錄本的擴(kuò)增方法及其引物。
【背景技術(shù)】
[0002]一個基因在不同的發(fā)育階段、分化細(xì)胞和生理狀態(tài)下，可以通過不同的剪切方式得到不同的mRNA和翻譯產(chǎn)物。每個轉(zhuǎn)錄本可能發(fā)揮著獨(dú)特的功能。
[0003]晝夜節(jié)律是生物節(jié)律的一種，它是在外源性因素和內(nèi)源性因素的共同作用下所呈現(xiàn)出的節(jié)律。它的內(nèi)源性因素是由一組生物節(jié)律基因和其基因產(chǎn)物相互作用構(gòu)成的一個閉環(huán)震蕩系統(tǒng)。其中生物節(jié)律基因是晝夜節(jié)律的重要內(nèi)在固定物質(zhì)基礎(chǔ)，在維持機(jī)體的體溫、呼吸、睡眠、進(jìn)食、血壓、血糖、內(nèi)分泌等諸多穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。CLCOK基因在這個系統(tǒng)中起著核心作用。CLOCK基因與不孕不育、肥胖及脂肪代謝異常、糖尿病、腫瘤、高血壓疾病、急性心肌梗塞(AMI)等病理過程高度相關(guān)(Filipski et al.，2002 ；Laurence et al.，2003)。研究表明雞CLOCK基因與雞對沙門氏菌感染抗性中發(fā)揮著重要作用(Li etal.,2010)。
[0004]雞CLOCK基因存在2個不同的轉(zhuǎn)錄本，對每個轉(zhuǎn)錄本的功能了解較少，目前尚無擴(kuò)增雞CLOCK基因不同轉(zhuǎn)錄本的技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足提供一種雞CLOCK基因不同轉(zhuǎn)錄本的擴(kuò)增方法及其引物。
[0006]本發(fā)明的技術(shù) 方案如下:
[0007]—種雞CLOCK基因不同轉(zhuǎn)錄本的擴(kuò)增方法，鑒定每個轉(zhuǎn)錄本的特異序列，根據(jù)每個轉(zhuǎn)錄本的特異序列，設(shè)計特異性引物，對雞mRNA進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增程序?yàn)?94°C預(yù)變性5min ；35 個循環(huán):94°C變性 30s, 60.9°C退火 30s，72。。延伸 30s ;72°C延伸 5min ;4°C保存；擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，根據(jù)電泳結(jié)果和目的條帶大小可以分辨出不同轉(zhuǎn)錄本，所述的特異性引物序列如SEQ ID NO =1-SEQ ID N0:4所示。
[0008]所述的擴(kuò)增方法中的特異性引物，所述的特異性引物序列如SEQ ID NO =1-SEQ IDNO -A所示。
[0009]本發(fā)明針對每個轉(zhuǎn)錄本序列，設(shè)計了轉(zhuǎn)錄本特異引物，通過反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)可以擴(kuò)增出特定的轉(zhuǎn)錄本，對不同轉(zhuǎn)錄本功能的分析研究奠定基礎(chǔ)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1:雞CLOCK基因2個轉(zhuǎn)錄本的擴(kuò)增結(jié)果；A為轉(zhuǎn)錄本2 (ENSGALT00000037539)，B 為轉(zhuǎn)錄本 I (ENSGALT00000037540)。
【具體實(shí)施方式】[0011]以下結(jié)合具體實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0012]比對雞CLOCK 基因 2 個轉(zhuǎn)錄本序列(Transcript ID:ENSGALT00000037540,ENSGALT00000037539)，鑒定每個轉(zhuǎn)錄本的特異序列，根據(jù)每個轉(zhuǎn)錄本的特異序列，設(shè)計特異性引物(表I)。在相應(yīng)條件下(表2)對雞mRNA進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增程序?yàn)?94°C預(yù)變性5min ；35個循環(huán):94°C變性30s, 60.9°C退火30s，72。。延伸30s ;72°C延伸5min ;4°C保存;擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(圖1)，根據(jù)電泳結(jié)果和目的條帶大小可以分辨出不同轉(zhuǎn)錄本。
[0013]表I雞CL0CK2個轉(zhuǎn)錄本的特異引物
【權(quán)利要求】
1.一種雞CLOCK基因不同轉(zhuǎn)錄本的擴(kuò)增方法，其特征在于，鑒定每個轉(zhuǎn)錄本的特異序列，根據(jù)每個轉(zhuǎn)錄本的特異序列，設(shè)計特異性引物，對雞mRNA進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增程序?yàn)?94°C預(yù)變性 5min ;35 個循環(huán):94°C變性 30s，60.9°C退火 30s，72。。延伸 30s ;72°C延伸 5min ；4°C保存；擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，根據(jù)電泳結(jié)果和目的條帶大小可以分辨出不同轉(zhuǎn)錄本，所述的特異性引物序列如SEQ ID NO =1-SEQ ID N0:4所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的擴(kuò)增方法中的特異性引物，所述的特異性引物序列如SEQIDNO:1-SEQ ID NO:4 所示。
【文檔編號】C12Q1/68GK103436607SQ201310335196
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月2日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月2日
【發(fā)明者】劉肖意, 劉麗英, 張懋志, 李顯耀 申請人:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)