一種基于ttc染色法的高活力酵母細胞定量篩選方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于TTC染色法的高活力酵母細胞定量篩選方法，將待檢測酵母細胞菌液涂布于平板，培養(yǎng)待其長出單菌落；然后接種于96孔細胞培養(yǎng)板各孔培養(yǎng)液中，培養(yǎng)至測定得到菌體OD值在1-3之間，離心棄上清；在96孔細胞培養(yǎng)板各孔中加入TTF萃取劑，震蕩10-15S后離心；將震蕩離心后的上清液吸取到96孔酶標板中，利用酶標儀在486nm波長下測定TTF吸收值，根據(jù)TTF標準曲線及測定的細胞OD值，計算每個孔中TTF含量，以此確定細胞活力大小。本方法篩選結果定量可靠地直接反應細胞活力，不僅能明顯降低篩選時間，而且能降低操作過程中的視覺判斷產生的人為錯誤。
【專利說明】一種基于TTC染色法的高活力酵母細胞定量篩選方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明適用于生物工程技術及醫(yī)學、藥學領域，具體涉及一種基于TTC染色法的高活力酵母定量篩選方法。
【背景技術】
[0002]2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)是一種顯色劑，能夠對多種細胞(酵母，細菌，植物細胞等)發(fā)生呈色反應，TTC本身為無色，當其與正常細胞中的脫氫酶反應而呈紅色，其原理是TTC在細胞呼吸中替代O2接受H+，TTC被還原為紅色的TTF (三苯基甲月替)而呈現(xiàn)紅色。反應方程式如下:
【權利要求】
1.一種基于TTC染色法的高活力酵母細胞定量篩選方法，其特征在于包括以下步驟:1)將待檢測酵母細胞菌液涂布于平板，培養(yǎng)待其長出單菌落；2)將步驟I)中培養(yǎng)的單菌落接種于96孔細胞培養(yǎng)板各孔培養(yǎng)液中，培養(yǎng)至測定得到菌體OD值在1-3之間，離心棄上清；然后在96孔細胞培養(yǎng)板各孔中加入TTF萃取劑，震蕩 10-15S后離心；3)將步驟2)中震蕩離心后的上清液吸取到96孔酶標板中，利用酶標儀在486nm波長下測定TTF吸收值，根據(jù)TTF標準曲線及步驟2)中測定的細胞OD值，計算每個孔中TTF含量，以此確定細胞活力大小。
2.根據(jù)權利要求1所述的基于TTC染色法的高活力酵母細胞定量篩選方法，其特征在于:步驟2)中培養(yǎng)液中TTC濃度為0.3%-0.5% (ff (g) /V(mL) )，pH為6-8。
3.根據(jù)權利要求1所述的基于TTC染色法的高活力酵母細胞定量篩選方法，其特征在于步驟2)中所述TTF萃取劑為二甲基亞砜溶液，濃度范圍為85%-100% (V/V)。
4.根據(jù)權利要求1所述的基于TTC染色法的高活力酵母細胞定量篩選方法，其特征在于步驟2)中TTF萃取劑與細胞培養(yǎng)液體積比為1:1。
【文檔編號】C12Q1/06GK103525896SQ201310447516
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年9月27日 優(yōu)先權日:2013年9月27日
【發(fā)明者】陳怡露, 徐俊, 韋萍, 陳亞利, 雍曉雨, 鄭濤, 柏建新, 許琳, 費文斌 申請人:南京工業(yè)大學