一種以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法，是以廉價(jià)的棉籽糖蜜及棉籽油替代價(jià)格昂貴的葡萄糖和油酸實(shí)現(xiàn)發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂。本發(fā)明方法具有原料價(jià)格低廉，工藝簡(jiǎn)便，產(chǎn)槐糖脂能力高的特點(diǎn)，為提高棉籽利用率，減少能源消耗以及推廣槐糖脂工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)提供了基礎(chǔ)。
【專利說(shuō)明】一種以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種槐糖脂生產(chǎn)的方法，尤其涉及一種以棉籽糖蜜及棉籽油為底物由擬威克酵母變種(Wickerhamiella domercqiae var.sophorolipid)發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]槐糖脂是一種重要的表面活性劑，其和化學(xué)表面活性劑相比，具有生物可降解性，低毒性及良好的環(huán)境兼容性等優(yōu)點(diǎn)，而被廣泛應(yīng)用于石油、食品、醫(yī)藥、環(huán)境保護(hù)、化妝品等工業(yè)領(lǐng)域。
[0003]槐糖脂目前主要是通過(guò)微生物發(fā)酵獲得。制備成本較高是制約槐糖脂應(yīng)用的一個(gè)重要因素。因此，設(shè)法降低槐糖脂的生產(chǎn)成本，提高槐糖脂的產(chǎn)量是其在各領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用的先決條件。
[0004]中國(guó)是世界產(chǎn)棉大國(guó)，種植面積在500萬(wàn)公頃左右(約合7500萬(wàn)畝)，棉花產(chǎn)量大約700萬(wàn)噸，棉籽占棉花比例的35-40%。棉籽糖蜜為利用棉籽生產(chǎn)棉籽糖的下腳料，價(jià)格低廉，但是其目前主要作為飼料，利用效率低；棉籽油由于其含有難以去除的棉酚，食品安全要求較高，作為食用油市場(chǎng)前景并不明朗，因此造成由棉籽壓榨得到的棉籽油及生產(chǎn)棉籽糖而產(chǎn)生的副產(chǎn)物棉籽糖蜜具有產(chǎn)量大，價(jià)格低，行業(yè)使用率低的現(xiàn)狀，成為行業(yè)負(fù)擔(dān)?；诖耍悦拮烟敲奂懊拮延蜑檫M(jìn)行槐糖脂發(fā)酵的原料發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂在實(shí)際應(yīng)用方面具有重要的價(jià)值。經(jīng)文獻(xiàn)和專利檢索，利用棉籽糖蜜及棉籽油作為廉價(jià)底物生產(chǎn)槐糖脂的研究國(guó)內(nèi)外還未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明要解決的問(wèn)題是提供一種以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法。
[0006]本發(fā)明所述以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法，步驟是:
[0007](I)制備發(fā)酵培養(yǎng)基:
[0008]取含水量〈20%的棉籽糖蜜，以w/v計(jì)配制成10~15%的水溶液，在35~55°C水浴10~30min至棉籽糖蜜完全溶解,然后向溶液中加入棉籽油并使其濃度以v/v計(jì)為5~9%，得適于發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的發(fā)酵培養(yǎng)基，115°C滅菌30~40min后，冷卻備用；
[0009](2)發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂:
[0010]將活化好的擬威克酵母變種(Wickerhamierlladomercqiae var.sophorolipid)CGMCCN0.1576以體積百分比為I~4%的接種量接種于含上述發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，于25±2°C、150~300rpm，搖床振蕩發(fā)酵培養(yǎng)7~9天，得到含槐糖脂的發(fā)酵液；
[0011]或者，
[0012]將活化好的擬威克酵母變種(Wickerhamierlladomercqiae var.sophorolipid)CGMCCN0.1576以體積百分比為I~4%的接種量接種于含上述發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的發(fā)酵參數(shù)設(shè)定為:溫度25 ±2°C，通氣量0.5~2.0L/min，初始轉(zhuǎn)速200~500rpm、12~24h后升至600~900rpm，發(fā)酵時(shí)間7~9天，得到含槐糖脂的發(fā)酵液；
[0013](3)槐糖脂的粗提:
[0014]取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其2~6倍體積的乙酸乙酯萃取，6000~SOOOrpm離心5~15min，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮后烘干，得內(nèi)酯型槐糖脂粗品；
[0015]或取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其3~6倍體積的乙醇，渦旋混合，6000~1000Orpm離心5~15min，收集上清，減壓濃縮后烘干，得總槐糖脂粗品。
[0016]上述以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法中:步驟(1)所述棉籽糖蜜優(yōu)選購(gòu)自濟(jì)南中棉生物科技有限公司，所述棉籽油優(yōu)選購(gòu)自山東省恒興有限公司。
[0017]上述以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法中:步驟(1)所述棉籽糖蜜優(yōu)選以w/v計(jì)配制成11.5~12%的水溶液；所述棉籽油濃度優(yōu)選以v/v計(jì)為6~7%。
[0018]最優(yōu)的適于發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的發(fā)酵培養(yǎng)基為棉籽糖蜜120.0g/L，棉籽油7.0% (v/ V)。
[0019]上述以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法中:步驟(2)所述搖瓶發(fā)酵的溫度優(yōu)選是25°C、搖床振蕩轉(zhuǎn)數(shù)優(yōu)選為200rpm。
[0020]上述以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法中:步驟(2)所述發(fā)酵罐的發(fā)酵參數(shù)優(yōu)選為:溫度25°C，通氣量1.0L/min，初始轉(zhuǎn)速400rpm、12后升至700rpm。
[0021]對(duì)利用棉籽糖蜜及棉籽油發(fā)酵得到的槐糖脂進(jìn)行HPLC-MS鑒定:
[0022]1.HPLC 成分分析:
[0023]制樣:將制得的槐糖脂提取樣品分別溶解于色譜純甲醇，0.22μπι有機(jī)膜過(guò)濾后用于分析。
[0024]條件:分析柱為Venusil MP C18 分析柱(4.6 μ mX 250mmX4.6mm, AgelaTechnologies Inc., USA);流動(dòng)相為乙腈/水，采用梯度洗脫(v/v),總流速I~3ml/min,程序如下:0~15min,乙臆含量從40 ±5%升聞至60 ±5% ； 15~30min,乙臆含量從60 ±5%升高至70±5% ；30~40min乙腈含量從70±5%升高至90±5%，并在90±5%保持5min ;檢測(cè)波長(zhǎng):200~210nm。
[0025]2.使用 API4000 質(zhì)譜儀(Applied Biosystems, USA)對(duì) HPLC 各峰進(jìn)行 MS 分析:
[0026]離子源:ESI ;噴霧電壓:-4500V;離子源溫度:100°C ;霧化氣:25psi ;輔助氣:20psi ;正離子或者負(fù)離子模式，掃描范圍在50~800amu。
[0027]本發(fā)明方法利用棉籽糖蜜及棉籽油為碳源培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂，通過(guò)HPLC-MS檢測(cè)鑒定，發(fā)現(xiàn)7種主要的槐糖脂組分，和利用葡萄糖、油酸為底物發(fā)酵所得槐糖脂成分基本一致，證明棉籽糖蜜和棉籽糖完全可以起到很好的替代作用。實(shí)驗(yàn)還證實(shí)本發(fā)明方法比利用葡萄糖油酸培養(yǎng)基的進(jìn)行發(fā)酵槐糖脂產(chǎn)量基本一致，且無(wú)需添加無(wú)機(jī)鹽及較為昂貴的酵母粉，明顯降低了生產(chǎn)成本，同時(shí)本發(fā)明方法工藝簡(jiǎn)便，提高了棉籽的利用率，減少了能源消耗，非常利于進(jìn)行工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0028]圖1棉籽糖蜜與棉籽油的二因子響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)的結(jié)果曲面圖(A)，等值線圖(B)。
[0029]圖2利用葡萄糖與油酸作為底物㈧和棉籽糖蜜與棉籽油作為底物⑶進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂，7天后發(fā)酵液槐糖脂HPLC成分比較。
【具體實(shí)施方式】
[0030]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本
【發(fā)明內(nèi)容】
作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0031]實(shí)施例1:[0032](I)第一碳源與第二碳源替換:配制四組發(fā)酵培養(yǎng)基(g/1):a葡萄糖80.0，油酸6% (v/v) ；b葡萄糖80.0,棉籽油6% (v/v) ；c棉籽糖蜜133.33 (含糖80.0)，油酸6% (v/V)，d 棉籽糖蜜 133.33 (含糖 80.0)棉籽油 6% (v/v),每組均加 KH2PO4L O, Na2HPO4L 0，MgSO4.7Η200.50，酵母粉 3.0，pH 自然。
[0033](2)發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂:將(I)中四組發(fā)酵培養(yǎng)基115°C，30min滅菌后，冷卻。將活化好的擬威克酵母變種(Wickerhamierlla domercqiae var.sophorolipid) CGMCC N0.1576以體積百分比為2%的接種量接種于上述四種發(fā)酵培養(yǎng)基中于25°C、200rpm，搖床振蕩發(fā)酵培養(yǎng)7天，得到槐糖脂的發(fā)酵液。
[0034](3)槐糖脂的粗提:取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其2倍體積的乙酸乙酯萃取，6000rpm離心15min，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮后烘干，得內(nèi)酯型槐糖脂粗品；或取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其3倍體積的乙醇，渦旋混合，6000rpm離心15min，收集上清，減壓濃縮后烘干，得總槐糖脂粗品。
[0035](4)槐糖脂粗品HPLC比較:將不同的槐糖脂處提取樣品分別溶解于色譜純甲醇，0.22 μ m有機(jī)膜過(guò)濾后用于分析型HPLC分析。上柱前，超純水與有機(jī)溶劑菌要經(jīng)過(guò)0.22 μ m濾膜過(guò)分別過(guò)濾。分析柱為 Venusil MP C18 分析柱(4.6 μ mX 250mmX 4.6mm, AgelaTechnologies Inc., USA);流動(dòng)相為乙腈/水，采用梯度洗脫(v/v),總流速lml/min,程序如下:0~15min,乙腈含量從40%升高至60% ；15~30min,乙腈含量從60%升高至70% ；30~40min乙腈含量從70%升高至90%，并在90%保持5min ;檢測(cè)波長(zhǎng):207nm。
[0036]結(jié)果表明，利用葡萄糖與油酸作為碳源的培養(yǎng)基進(jìn)行槐糖脂發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，得到槐糖脂45.75g/l，內(nèi)酯型槐糖脂為21.10g/l，對(duì)第一碳源和第二碳源用棉籽糖蜜及棉籽油替換時(shí)，產(chǎn)量均略為下降。
[0037]實(shí)施例2:
[0038](I)氮源梯度設(shè)計(jì):配制五組發(fā)酵培養(yǎng)基(g/Ι):其中以酵母粉添加量分別為
0,1.0g/l,2.0g/1,3.0g/1,4.0g/l 五個(gè)梯度，并均加入棉籽糖蜜 133.33 (含糖 80.0)，KH2PO4L O, Na2HPO4L O, MgSO4.7Η200.50，棉籽油 6% (v/v), pH 自然。
[0039](2)發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂:將(I)中五組發(fā)酵培養(yǎng)基115°C，30min滅菌后，冷卻。將活化好的擬威克酵母變種(Wickerhamierlla domercqiae var.sophorolipid) CGMCC N0.1576以體積百分比為2%的接種量接種于上述發(fā)酵培養(yǎng)基中于25°C、200rpm，搖床振蕩發(fā)酵培養(yǎng)7天，得到槐糖脂的發(fā)酵液。
[0040](3)槐糖脂的粗提:取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其2倍體積的乙酸乙酯萃取，6000rpm離心15min，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮后烘干，得內(nèi)酯型槐糖脂粗品；或取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其3倍體積的乙醇，渦旋混合，6000rpm離心15min，收集上清，減壓濃縮后烘干，得總槐糖脂粗品。
[0041](4)槐糖脂粗品HPLC比較:將不同的槐糖脂處提取樣品分別溶解于色譜純甲醇，0.22 μ m有機(jī)膜過(guò)濾后用于分析型HPLC分析。上柱前，超純水與有機(jī)溶劑菌要經(jīng)過(guò)0.22 μ m濾膜過(guò)分別過(guò)濾。分析柱為 Venusil MP C18 分析柱(4.6 μ mX 250mmX 4.6mm, AgelaTechnologies Inc., USA);流動(dòng)相為乙腈/水，采用梯度洗脫(v/v),總流速lml/min,程序如下:0~15min,乙腈含量從40%升高至60% ；15~30min,乙腈含量從60%升高至70% ；30~40min乙腈含量從70%升高至90%，并在90%保持5min ;檢測(cè)波長(zhǎng):207nm。
[0042]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著發(fā)酵液的酵母粉含量降低，其槐糖脂產(chǎn)量升高，當(dāng)不添加酵母粉時(shí)，槐糖脂的產(chǎn)量達(dá)到最大值，此時(shí)產(chǎn)量為利用葡萄糖基本發(fā)酵培養(yǎng)基產(chǎn)量的95%。因此，單獨(dú)不添加氮源既簡(jiǎn)化了配方，降低了成本，又提高了產(chǎn)量。
[0043]實(shí)施例3: [0044](I)無(wú)機(jī)鹽影響:配制兩組發(fā)酵培養(yǎng)基(g/Ι): —組添加KH2PO4L O, Na2HPO4L 0，MgSO4.7H200.50,另一組不添加無(wú)機(jī)鹽離子，兩組均加棉籽糖蜜133.33 (含糖80.0)，棉籽油 6% (v/v), pH 自然。
[0045](2)發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂:將(I)中兩組發(fā)酵培養(yǎng)基115°C，30min滅菌后，冷卻。將活化好的擬威克酵母變種(Wickerhamierlla domercqiae var.sophorolipid) CGMCC N0.1576以體積百分比為2%的接種量接種于上述發(fā)酵培養(yǎng)基中于25°C、200rpm，搖床振蕩發(fā)酵培養(yǎng)7天，得到槐糖脂的發(fā)酵液。
[0046](3)槐糖脂的粗提:取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其2倍體積的乙酸乙酯萃取，6000rpm離心15min，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮后烘干，得內(nèi)酯型槐糖脂粗品；或取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其3倍體積的乙醇，渦旋混合，6000rpm離心15min，收集上清，減壓濃縮后烘干，得總槐糖脂粗品。
[0047](4)槐糖脂粗品HPLC比較:將不同的槐糖脂處提取樣品分別溶解于色譜純甲醇，0.22 μ m有機(jī)膜過(guò)濾后用于分析型HPLC分析。上柱前，超純水與有機(jī)溶劑菌要經(jīng)過(guò)0.22 μ m濾膜過(guò)分別過(guò)濾。分析柱為 Venusil MP C18 分析柱(4.6 μ mX 250mmX 4.6mm, AgelaTechnologies Inc., USA);流動(dòng)相為乙腈/水，采用梯度洗脫(v/v),總流速lml/min,程序如下:0~15min,乙腈含量從40%升高至60% ；15~30min,乙腈含量從60%升高至70% ；30~40min乙腈含量從70%升高至90%，并在90%保持5min ;檢測(cè)波長(zhǎng):207nm。
[0048]實(shí)驗(yàn)表明，不添加無(wú)機(jī)鹽離子與添加無(wú)機(jī)鹽離子的培養(yǎng)基對(duì)槐糖脂最終產(chǎn)量基本沒(méi)有變化，在2%以內(nèi)。因此考慮成本與培養(yǎng)基簡(jiǎn)化可以不添加無(wú)機(jī)鹽。
[0049]實(shí)施例4:
[0050](I)單因子梯度設(shè)計(jì):配制兩組發(fā)酵培養(yǎng)基:一組設(shè)置棉籽糖蜜梯度(w/v)為8.33%, 10.0%, 11.67%, 13.33%, 15.0%,棉籽油濃度為 6% (v/v);另一組設(shè)置糖蜜為 11.67%(w/v)，棉籽油梯度(v/v)為 5.0%, 6.0%, 7.0%, 8.0%, 9.0%，pH 自然。
[0051](2)發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂:將(I)中兩組發(fā)酵培養(yǎng)基115°C，30min滅菌后，冷卻。將活化好的擬威克酵母變種(Wickerhamierlla domercqiae var.sophorolipid) CGMCC N0.1576以體積百分比為2%的接種量接種于上述四種發(fā)酵培養(yǎng)基中于25°C、200rpm，搖床振蕩發(fā)酵培養(yǎng)7天，得到槐糖脂的發(fā)酵液。
[0052](3)槐糖脂的粗提:取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其2倍體積的乙酸乙酯萃取，6000rpm離心15min，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮后烘干，得內(nèi)酯型槐糖脂粗品；或取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其3倍體積的乙醇，渦旋混合，6000rpm離心15min，收集上清，減壓濃縮后烘干，得總槐糖脂粗品。
[0053](4)槐糖脂粗品HPLC比較:將不同的槐糖脂處提取樣品分別溶解于色譜純甲醇，0.22 μ m有機(jī)膜過(guò)濾后用于分析型HPLC分析。上柱前，超純水與有機(jī)溶劑菌要經(jīng)過(guò)
0.22 μ m濾膜過(guò)分別過(guò)濾。分析柱為 Venusil MP C18 分析柱(4.6 μ mX 250mmX 4.6mm, AgelaTechnologies Inc., USA);流動(dòng)相為乙腈/水，采用梯度洗脫(v/v),總流速lml/min,程序如下:0~15min,乙腈含量從40%升高至60% ；15~30min,乙腈含量從60%升高至70% ；30~40min乙腈含量從70%升高至90%，并在90%保持5min ;檢測(cè)波長(zhǎng):207nm。
[0054]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過(guò)對(duì)棉籽糖蜜進(jìn)行梯度實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)棉籽糖蜜在11.67%(w/v，含糖7%)槐糖脂產(chǎn)量最高，棉籽油濃度在7%時(shí)，在5個(gè)棉籽油梯度中，槐糖脂產(chǎn)量達(dá)到最大值。
[0055]實(shí)施例5:
[0056](I) 二因子響應(yīng)面優(yōu)化:以棉籽糖蜜及棉籽油濃度為二因子，以10% (w/v)的棉籽糖蜜，及6%(v/v)棉籽油為基點(diǎn)，設(shè)計(jì)13組實(shí)驗(yàn)，2%為一個(gè)單位，分組情況見(jiàn)表1。
[0057](2)發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂:將(I)中13組發(fā)酵培養(yǎng)基115°C，30min滅菌后，冷卻。將活化好的擬威克酵母變種(Wickerhamierlla domercqiae var.sophorolipid) CGMCCN0.1576以體積百分比為2%的接種量接種于上述發(fā)酵培養(yǎng)基中于25°C、200rpm，搖床振蕩發(fā)酵培養(yǎng)7天，得到槐糖脂的發(fā)酵液。
[0058](3)槐糖脂的粗提:取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其2倍體積的乙酸乙酯萃取，6000rpm離心15min，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮后烘干，得內(nèi)酯型槐糖脂粗品；或取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其3倍體積的乙醇，渦旋混合，6000rpm離心15min，收集上清，減壓濃縮后烘干，得總槐糖脂粗品。
[0059](4)槐糖脂粗品HPLC比較:將不同的槐糖脂處提取樣品分別溶解于色譜純甲醇，0.22 μ m有機(jī)膜過(guò)濾后用于分析型HPLC分析。上柱前，超純水與有機(jī)溶劑菌要經(jīng)過(guò)
0.22 μ m濾膜過(guò)分別過(guò)濾。分析柱為 Venusil MP C18 分析柱(4.6 μ mX 250mmX 4.6mm, AgelaTechnologies Inc., USA);流動(dòng)相為乙腈/水，采用梯度洗脫(v/v),總流速lml/min,程序如下:0~15min,乙腈含量從40%升高至60% ；15~30min,乙腈含量從60%升高至70% ；30~40min乙腈含量從70%升高至90%，并在90%保持5min ;檢測(cè)波長(zhǎng):207nm。
[0060]通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)，以10% (w/v)的棉籽糖蜜,及6%(v/v)棉籽油為基點(diǎn)，設(shè)計(jì)的13組變量組合，發(fā)酵結(jié)果如表1所示。
[0061]表1棉籽糖蜜與棉籽油的二因子響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)分組及產(chǎn)量情況
[0062]
【權(quán)利要求】
1.一種以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法，步驟是: (1)制備發(fā)酵培養(yǎng)基: 取含水量〈20%的棉籽糖蜜，以w/v計(jì)配制成10~15%的水溶液，在35~55°C水浴10~30min至棉籽糖蜜完全溶解,然后向溶液中加入棉籽油并使其濃度以v/v計(jì)為5~9%,得適于發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的發(fā)酵培養(yǎng)基，115°C滅菌30~40min后，冷卻備用； (2)發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂:
將活化好的擬威克酵母變種(Wickerhamierlla domercqiae var.sophorolipid)CGMCCN0.1576以體積百分比為I~4%的接種量接種于含上述發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，于25±2°C、150~300rpm，搖床振蕩發(fā)酵培養(yǎng)7~9天，得到含槐糖脂的發(fā)酵液； 或者， 將活化好的擬威克酵母變種(Wickerhamierlla domercqiae var.sophorolipid)CGMCCN0.1576以體積百分比為I~4%的接種量接種于含上述發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的發(fā)酵參數(shù)設(shè)定為:溫度25±2°C，通氣量0.5~2.0L/min，初始轉(zhuǎn)速200~500rpm、12~24h后升至600~900rpm，發(fā)酵時(shí)間7~9天，得到含槐糖脂的發(fā)酵液； (3)槐糖脂的粗提: 取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其2~6倍體積的乙酸乙酯萃取，6000~SOOOrpm離心5~15min，收集乙酸乙酯層，減壓濃縮后烘干，得內(nèi)酯型槐糖脂粗品； 或取含槐糖脂的發(fā)酵液加入其3~6倍體積的乙醇，渦旋混合，6000~1000Orpm離心5~15min，收集上清，減壓濃縮后烘干，得總槐糖脂粗品。
2.如權(quán)利要求1所述以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法，其特征在于:步驟(1)所述棉籽糖蜜購(gòu)自濟(jì)南中棉生物科技有限公司，所述棉籽油購(gòu)自山東省恒興有限公司。
3.如權(quán)利要求1所述以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法，其特征在于:步驟(1)所述棉籽糖蜜以w/v計(jì)配制成11.5~12%的水溶液；所述棉籽油濃度以v/v計(jì)為6~7%。
4.如權(quán)利要求1所述以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法，其特征在于:步驟(2)所述搖瓶發(fā)酵的溫度是25°C、搖床振蕩轉(zhuǎn)數(shù)為200rpm。
5.如權(quán)利要求1所述以棉籽糖蜜及棉籽油為底物發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的方法，其特征在于:步驟(2)所述發(fā)酵罐的發(fā)酵參數(shù)為:溫度25°C，通氣量1.0L/min，初始轉(zhuǎn)速400rpm、12后升至700rpm。
【文檔編號(hào)】C12R1/645GK103540631SQ201310500652
【公開日】2014年1月29日 申請(qǐng)日期:2013年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月22日
【發(fā)明者】宋欣 申請(qǐng)人:山東大學(xué)