一種從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法，通過將黃芩藥材粉碎，加入適量水以及食用酶進行酶解，將酶解后的藥材進行超臨界萃取，使用夾帶劑分段收集，進行重結(jié)晶后可分別得到黃芩素與漢黃芩素；所述方法從黃芩藥材中同時提取出黃芩苷元類化合物單體，且收率比直接分離法高出3倍以上，制備的漢黃芩素和黃芩素單體純度均在98%以上，且流程簡便、綠色環(huán)保，具有非常重要的生產(chǎn)實踐意義，適合規(guī)模化工業(yè)生產(chǎn)的需要。
【專利說明】一種從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及天然活性物質(zhì)分離領(lǐng)域，尤其是一種從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黃岑為唇形科植物黃岑Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎之功效。黃芩的主要成分是黃芩苷(Baicalin)、漢黃芩苷(Wogonside)、千層紙素A(Oroxylin)和少量的白楊素(Chrysin)等黃酮類成分。藥物代謝研究發(fā)現(xiàn)，黃芩提取物吸收入血的主要成分為黃芩苷元和漢黃芩苷元及少量的千層紙素，黃芩苷以及漢黃芩苷很難被腸道吸收，生物利用度極低。近年來已證實漢黃芩素具有明確的抗腫瘤效果，如漢黃芩素能恢復(fù)腫瘤壞死因子受體細胞凋亡誘導(dǎo)配體
[0003](Tumornecrosisfactorreceptorapoptosis-1nducingligand, TRAIL)在失活的癌細胞中TRAIL的敏感性；在人結(jié)腸癌HCTl 16細胞，漢黃芩素可通過p53依賴的PUMA (凋亡誘導(dǎo)因子)誘導(dǎo)作用誘導(dǎo)細胞凋亡。因此，漢黃芩素有望開發(fā)成為新一代抗腫瘤藥物。
[0004]目前黃芩素以及漢黃芩素制備的方法主要有傳統(tǒng)硅膠柱分離法、酸水解法聯(lián)合硅膠柱分離法、利用內(nèi)源酶及柱分離等方法。由于黃芩素以及漢黃芩素在植物中含量低(一般為0.05-0.5%)，因此直接分離較困難；酸水解方法，可以將部分黃芩苷轉(zhuǎn)化為其苷元，但由于黃酮苷類為7-0-葡萄糖醛酸結(jié)合苷，糖苷鍵較為牢固不易斷裂，因此酸水解轉(zhuǎn)移率受到一定限制；利用內(nèi)源酶法降解條件比較溫和，但用時較長，降解后仍需采用硅膠柱以及大量有機溶劑才能分離得到黃芩素以及漢黃芩素，因此，現(xiàn)有制備方法在轉(zhuǎn)移率、可操作性、安全性、成本等方面均存在一定局限性。加之，黃芩素、漢黃芩素結(jié)構(gòu)上具有鄰三酚羥基，性質(zhì)不穩(wěn)定，極易被氧化為醌類結(jié)`構(gòu)而變性，加大了這類化合物分離制備的難度。為了使黃芩素與漢黃芩素更為廣泛的應(yīng)用于臨床，對于黃芩素與漢黃芩素的大規(guī)模生產(chǎn)制備方法有待創(chuàng)新與突破。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0007]—種從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法，具體步驟為:向黃芩中加入適量水以及食用酶進行酶解，將酶解后的藥材進行超臨界萃取，使用夾帶劑分段收集，進行重結(jié)晶后可分別得到黃芩素與漢黃芩素，其中，所述食用酶為葡萄糖苷酶、β-D-葡萄糖醛酸酶、纖維素酶、苦杏仁酶、蝸牛酶的一種或任意組合而成的復(fù)合酶，所述夾帶劑為乙醇、甲醇、丙酮或乙酸乙酯。
[0008]優(yōu)選的，上述從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法，包括如下步驟:
[0009](I)將黃芩藥材粉碎，加入藥材重量3-15倍量的蒸餾水和0.01-10%食用酶，控制溫度在35-60。。，酶解1-10小時；
[0010](2)將蒸餾水過濾，黃芩藥材裝入超臨界萃取釜中，預(yù)熱后，設(shè)定萃取壓力為10-35Mpa，溫度為40_60°C，萃取時間為1_5小時，夾帶劑用量為5-100ml/100g黃芩藥材；
[0011](3)分段收集，將夾帶劑溶液濃縮后用乙酸乙酯、石油醚或丙酮進行重結(jié)晶后可分別得到黃芩素與漢黃芩素。
[0012]優(yōu)選的，上述從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法，包括如下步驟:
[0013](I)將黃芩藥材粉碎，加入藥材重量3-15倍量的蒸餾水和0.1-3%食用酶，該食用酶為β-D-葡萄糖醛酸酶、β-葡萄糖苷酶或苦杏仁酶，控制溫度在40-50°C，酶解2-8小時；
[0014](2)將蒸餾水過濾，黃芩藥材裝入超臨界萃取釜，預(yù)熱后，設(shè)定萃取壓力為15-28Mpa，溫度為45_55°C，萃取時間為2_4小時，夾帶劑為乙醇、甲醇或乙酸乙酯，用量為10-50ml/100g 黃芩藥材；
[0015](3)分段收集，將夾帶劑溶液濃縮后用乙酸乙酯或丙酮進行重結(jié)晶后可分別得到黃芩素與漢黃芩素。
[0016]優(yōu)選的，上述從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法，包括如下步驟:
[0017](I)將黃芩藥材粉碎， 加入藥材重量7倍量的蒸餾水和1.0% β -D-葡萄糖醛酸酶，控制溫度50°C，酶解3小時；
[0018](2)將蒸餾水過濾，黃芩藥材裝入超臨界萃取釜，預(yù)熱后，設(shè)定萃取壓力最優(yōu)選為20Mpa，溫度為50°C，萃取時間為3.5小時，夾帶劑為乙醇，用量為40ml/100g黃芩藥材；
[0019](3)分段收集，將乙醇溶液濃縮后用乙酸乙酯進行重結(jié)晶后可分別得到黃芩素與漢黃芩素。
[0020]本發(fā)明的有益效果是:
[0021]所述從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法，從黃芩藥材中同時提取出黃芩苷元類化合物單體，與以往的黃芩藥材中提取的黃芩苷類提取物有本質(zhì)上的區(qū)別，該方法通過酶進行生物降解，獲得能吸收入血的有效成分黃芩素和漢黃芩素，在抗菌、抗病毒、抑制炎癥反應(yīng)、保肝、利膽、利尿等方面，具有較好的臨床應(yīng)用價值，尤其是漢黃芩素具有非常重要的藥理活性，該方法收率比直接分離法高出3倍以上，制備的漢黃芩素和黃芩素單體純度均在98%以上，且流程簡便、綠色環(huán)保，具有非常重要的生產(chǎn)實踐意義，適合規(guī)模化工業(yè)生產(chǎn)的需要。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1為漢黃芩素LC-100液相色譜圖；
[0023]圖2為漢黃芩素對照品LC-100液相色譜圖；
[0024]圖3為黃芩素LC-100液相色譜圖；
[0025]圖4為黃芩素對照品LC-100液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0026]為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合附圖及【具體實施方式】對本發(fā)明所述技術(shù)方案作進一步的詳細說明。[0027]實施例1
[0028]—種從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法，包括如下步驟:
[0029](I)將500g黃芩藥材粉碎，加入藥材重量6倍量的蒸餾水和5g β -D-葡萄糖醛酸酶(食用酶)，控制溫度50 V，酶解3小時；
[0030](2)將蒸餾水過濾，黃芩藥材裝入超臨界萃取釜，預(yù)熱后，設(shè)定萃取壓力為20Mpa，溫度為50°C，萃取時間為3.5小時，夾帶劑為乙醇，用量為200ml ；
[0031](3)分段收集，將乙醇溶液濃縮后用乙酸乙酯進行重結(jié)晶后分別得到25.18g黃芩素與13.64g漢黃芩素，經(jīng)HPLC檢測，黃芩素純度為98.23%，漢黃芩素純度為98.35%。
[0032]對上述所得漢黃芩素和黃芩素進行鑒別和含量測定:
[0033]1、檢測方法
[0034]儀器設(shè)備:伍豐LC-100
[0035]色譜柱:菲羅門C_18250*4.6mm5 μ
[0036]柱溫:25°C
[0037]流動相:甲醇-水-甲酸65-35-0.2
[0038]流速:1.0ml/min
[0039]檢測波長:276nm
[0040]2、漢黃芩素含量測定:
[0041]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-甲酸(65:35-0.2)為流動相；檢測波長為276nm。理論板數(shù)按斑蝥素峰計算應(yīng)不低于3000。
[0042]對照品溶液的制備取漢黃芩素對照品(中檢所批號為111514-200403)12.5389，精密稱定，加甲醇至100ml容量瓶中定容，即得。
[0043]漢黃芩素供試品溶液的制備取本品粗粉約5.0944g，精密稱定，加甲醇至100ml容
量瓶中定容，即得。
[0044]測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果見圖1、圖2，得漢黃芩素，5，7- 二羥基-8-甲氧基-2-苯基-4Η-1-苯并呋喃_4_酮，結(jié)
構(gòu)式如下:
[0045]
OH "
[0046]測得漢黃芩素純度為98.35%。
[0047]3、黃芩素含量測定:
[0048]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-甲酸(65:35-0.2)為流動相；檢測波長為276nm。理論板數(shù)按斑蝥素峰計算應(yīng)不低于3000。
[0049]對照品溶液的制備取黃芩素對照品(中檢所批號為111514-200403)10.2531，精密稱定，加甲醇至100ml容量瓶中定容，即得。
[0050]黃芩素供試品溶液的制備取本品粗粉約9.9045g,精密稱定，加甲醇至100ml容量瓶中定容，即得。[0051]測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果見圖3、圖4，得黃芩素(C15HltlO5),結(jié)構(gòu)式如下:
[0052]
【權(quán)利要求】
1.一種從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法，其特征在于:具體步驟為:向黃芩中加入適量水以及食用酶進行酶解，將酶解后的藥材進行超臨界萃取，使用夾帶劑分段收集，進行重結(jié)晶后可分別得到黃芩素與漢黃芩素，其中，所述食用酶為β-葡萄糖苷酶、β-D-葡萄糖醛酸酶、纖維素酶、苦杏仁酶、蝸牛酶的一種或任意組合而成的復(fù)合酶，所述夾帶劑為乙醇、甲醇、丙酮或乙酸乙酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)將黃芩藥材粉碎，加入藥材重量3-15倍量的蒸餾水和0.01-10%食用酶，控制溫度在35-60。。，酶解1-10小時； (2)將蒸餾水過濾，黃芩藥材裝入超臨界萃取釜中，預(yù)熱后，設(shè)定萃取壓力為10-35Mpa，溫度為40-60°C，萃取時間為1-5小時，夾帶劑用量為5-100ml/100g黃芩藥材； (3)分段收集，將夾帶劑溶液濃縮后用乙酸乙酯、石油醚或丙酮進行重結(jié)晶后可分別得到黃芩素與漢黃芩素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)將黃芩藥材粉碎，加入藥材重量3-15倍量的蒸餾水和0.1-3%食用酶，該食用酶為β -D-葡萄糖醛酸酶、β -葡萄糖苷酶或苦杏仁酶，控制溫度在40-50°C，酶解2-8小時； (2)將蒸餾水過濾，黃芩藥材裝入超臨界萃取釜，預(yù)熱后，設(shè)定萃取壓力為15-28Mpa，溫度為45-55°C，萃取時間為2-4小時，夾帶劑為乙醇、甲醇或乙酸乙酯，用量為10-50ml/100g黃芩藥材；` (3)分段收集，將夾帶劑溶液濃縮后用乙酸乙酯或丙酮進行重結(jié)晶后可分別得到黃芩素與漢黃芩素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的從黃芩中同時分離漢黃芩素與黃芩素單體的方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)將黃芩藥材粉碎，加入藥材重量7倍量的蒸餾水和1.0% β -D-葡萄糖醛酸酶，控制溫度50°C，酶解3小時； (2)將蒸餾水過濾，黃芩藥材裝入超臨界萃取釜，預(yù)熱后，設(shè)定萃取壓力最優(yōu)選為20Mpa，溫度為50°C，萃取時間為3.5小時，夾帶劑為乙醇，用量為40ml/100g黃芩藥材； (3)分段收集，將乙醇溶液濃縮后用乙酸乙酯進行重結(jié)晶后可分別得到黃芩素與漢黃芩素。
【文檔編號】C12P17/06GK103555784SQ201310508967
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月25日
【發(fā)明者】顏世利 申請人:天津士蘭科技有限公司