一種質(zhì)粒的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種質(zhì)粒的提取方法。步驟如下：首先挑取平板上的菌落，在10-15mlLB條件下接種，隨后經(jīng)過35攝氏度振蕩培養(yǎng)過夜；第二步，吸取3毫升過夜培養(yǎng)的菌液，6000rpm離心27秒，丟棄上清，收集菌落；第三步，使用200ul的溶液重懸菌體沉淀，渦旋振蕩，直至徹底懸浮未知；第三步，重復(fù)上述步驟一次；第四步，去除吸附柱，然后放進(jìn)一個干凈的離心管中；最后提取到的質(zhì)粒溶液在零下20-25度的條件下凍存。本發(fā)明的有益效果是，實驗簡單，費用較低，抗體的制備為將來檢測臨床器官和人工肝中的PERV的表達(dá)及傳播具有重要意義。
【專利說明】一種質(zhì)粒的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種實驗方法，具體來說，一種質(zhì)粒的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]質(zhì)粒是真核細(xì)胞細(xì)胞核外或原核生物擬核區(qū)外能夠進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳單位，包括真核生物的細(xì)胞器(主要指線粒體和葉綠體)中和細(xì)菌細(xì)胞擬核區(qū)以外的環(huán)狀脫氧核糖核酸(DNA)分子?，F(xiàn)在習(xí)慣上用來專指細(xì)菌(大腸桿菌)、酵母菌和放線菌等生物中細(xì)胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質(zhì)粒常被用做基因的載體(Vector)。許多細(xì)菌除了擬核中的DNA外，還有大量很小的環(huán)狀DNA分子，這就是質(zhì)粒(plasmid)(補(bǔ)充:部分質(zhì)粒為RNA)。質(zhì)粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環(huán)素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質(zhì)粒稱為附加體(episome)，這類質(zhì)粒能夠整合進(jìn)真菌的染色體，也能從整合位置上切離下來成為游離于染色體外的DNA分子。質(zhì)粒在宿主細(xì)胞體內(nèi)外都可復(fù)制，通過個些特性，人們可以把一些目的DNA片斷構(gòu)建在質(zhì)粒中，通過轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，不斷的復(fù)制，來得到目的產(chǎn)物。這就是轉(zhuǎn)化的目的。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為克服上述技術(shù)問題，我們提出了以下技術(shù)方案:
一種質(zhì)粒的提取方法，步驟如下:首先挑取平板上的菌落，在10-15mlLB條件下接種，隨后經(jīng)過35攝氏度振蕩培養(yǎng)過夜；第二步，吸取3毫升過夜培養(yǎng)的菌液，6000rpm離心27秒，丟棄上清，收集菌落；第三步，使用200ul的溶液重懸菌體沉淀，渦旋振蕩，直至徹底懸浮未知；第三步，重復(fù)上述步驟一次；第四步，去除吸附柱，然后放進(jìn)一個干凈的離心管中；最后提取到的質(zhì)粒溶液在零下20-25度的條件下凍存。
[0004]本發(fā)明中，凍存的時候要在21攝氏度。
[0005]本發(fā)明的有益效果是，實驗簡單，費用較低，抗體的制備為將來檢測臨床器官和人工肝中的PERV的表達(dá)及傳播具有重要意義。
【具體實施方式】
[0006]一種質(zhì)粒的提取方法，步驟如下:首先挑取平板上的菌落，在10_15mlLB條件下接種，隨后經(jīng)過35攝氏度振蕩培養(yǎng)過夜；第二步，吸取3毫升過夜培養(yǎng)的菌液，6000rpm離心27秒，丟棄上清，收集菌落；第三步，使用200ul的溶液重懸菌體沉淀，渦旋振蕩，直至徹底懸浮未知；第三步，重復(fù)上述步驟一次；第四步，去除吸附柱，然后放進(jìn)一個干凈的離心管中；最后提取到的質(zhì)粒溶液在零下21度的條件下凍存。
[0007]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種質(zhì)粒的提取方法，其特征在于，步驟如下:首先挑取平板上的菌落，在10-15mlLB條件下接種，隨后經(jīng)過35攝氏度振蕩培養(yǎng)過夜；第二步，吸取3毫升過夜培養(yǎng)的菌液，6000rpm離心27秒，丟棄上清，收集菌落；第三步，使用200ul的溶液重懸菌體沉淀，渦旋振蕩，直至徹底懸浮未知；第三步，重復(fù)上述步驟一次；第四步，去除吸附柱，然后放進(jìn)一個干凈的離心管中；最后提取到的質(zhì)粒溶液在零下20-25度的條件下凍存。
2.如權(quán)利要求1所述的一種質(zhì)粒的提取方法，其特征在于，凍存的時候要在21攝氏度。
【文檔編號】C12N15/10GK103602661SQ201310522036
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月30日
【發(fā)明者】徐麗 申請人:徐麗