国产精品1024永久观看,大尺度欧美暖暖视频在线观看,亚洲宅男精品一区在线观看,欧美日韩一区二区三区视频,2021中文字幕在线观看

  • <option id="fbvk0"></option>
    1. <rt id="fbvk0"><tr id="fbvk0"></tr></rt>
      <center id="fbvk0"><optgroup id="fbvk0"></optgroup></center>
      <center id="fbvk0"></center>

      <li id="fbvk0"><abbr id="fbvk0"><dl id="fbvk0"></dl></abbr></li>

      提高l-精氨酸發(fā)酵產(chǎn)酸的工藝的制作方法

      文檔序號:523353閱讀:2086來源:國知局
      提高l-精氨酸發(fā)酵產(chǎn)酸的工藝的制作方法
      【專利摘要】本發(fā)明的目的在于提供一種提高L-精氨酸發(fā)酵產(chǎn)酸的工藝。所采用的技術(shù)方案是:采用黃色短桿菌ATCC21493(SDR)為出發(fā)菌,經(jīng)NTG處理,誘變得到TA189菌株,該菌株可以利用葡萄糖直接合成精氨酸,而且產(chǎn)酸能力強,菌種生產(chǎn)能力和發(fā)酵工藝控制達(dá)到的指標(biāo),其綜合水平達(dá)到國內(nèi)領(lǐng)先水平。本發(fā)酵工藝結(jié)合氨基酸和抗生素的發(fā)酵工藝特點,采用趨勢控制,中途補料、補糖工藝嚴(yán)格控制,始終菌體的活力,得到較高的產(chǎn)酸水平。
      【專利說明】提高L-精氨酸發(fā)酵產(chǎn)酸的工藝
      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001]本發(fā)明涉及生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】,具體地說是一種提高L-精氨酸發(fā)酵產(chǎn)酸的工藝?!颈尘凹夹g(shù)】
      [0002]L-精氨酸是氨基酸中最重要的品種之一,在醫(yī)藥、營養(yǎng)保健、食品等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛、需求量大,對于治療生理功能、心血管疾病、激勵免疫系統(tǒng)、維持嬰兒的營養(yǎng)平衡、促進(jìn)人體解毒等都具有良好的療效,被專家稱為是機(jī)體內(nèi)運輸和貯存氨基酸的重要載體,在肌內(nèi)代謝中極為重要。L-精氨酸具有以下功能:L-精氨酸是一氧化氮在體內(nèi)的最主要前體,一氧化氮是內(nèi)源性細(xì)胞舒展因子,能擴(kuò)張小動脈血管(如陰莖的血管,使他堅挺起來)。補充L-精氨酸促進(jìn)ESRF的生成可防治某些心血管病??煞乐剐叵偻嘶?,補充L-精氨酸能增加胸腺的重量,促進(jìn)胸腺中淋巴細(xì)胞與CD細(xì)胞的增長,提高免疫力。在肌肉的代謝過程中非常重要,它能促進(jìn)肌肉的增加與減少脂肪,因此在減肥中精氨酸起著重要作用。L-精氨酸及其鹽類廣泛用作氨中毒性肝昏迷的解毒劑和肝功能的促進(jìn)劑,添加L-精氨酸的功能性口服液或保健飲料具有保肝、護(hù)肝功能。
      [0003]L-精氨酸的生產(chǎn)方法有水解法和發(fā)酵法。我國現(xiàn)有的生產(chǎn)廠家目前大多仍主要依靠蛋白質(zhì)水解法來生產(chǎn)L-精氨酸,該法操作費時、收率低,工藝穩(wěn)定性不好且環(huán)境污染嚴(yán)重,不適于大規(guī)模生產(chǎn)。發(fā)酵法克服了蛋白質(zhì)水解提取法所存在的工藝復(fù)雜和污染大等缺點,具有廣闊的發(fā)展前景。但是,以微生物發(fā)酵法生產(chǎn)L-精氨酸,國內(nèi)大多數(shù)發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)的產(chǎn)酸水平較低、成本較高,生產(chǎn)水平和產(chǎn)量遠(yuǎn)不能滿足國內(nèi)市場的需求。因此,開展提高精氨酸發(fā)酵產(chǎn)率的研究具有極其重要的意義。
      [0004]由此可見,精氨酸從功能和需求上都具有十分廣闊的市場前景。基于上述狀況,國家科技部把L-精氨酸列入“十五”重點公關(guān)項目是十分正確、十分必要的,由于種種原因,“十五”以來,L-精氨酸發(fā)酵法產(chǎn)酸水平較低(最大3.8%),因而未能工業(yè)化生產(chǎn),國家科技部又將發(fā)酵法生產(chǎn)L-精氨酸作為“十二五”重點攻關(guān)項目。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0005]本發(fā)明的目的在于提供一種提高L-精氨酸發(fā)酵產(chǎn)酸的工藝。
      [0006]所采用的技術(shù)方案是:采用黃色短桿菌ATCC21493 (SDk)為出發(fā)菌,經(jīng)NTG處理,誘變得到TA189菌株,該菌株可以利用葡萄糖直接合成精氨酸,而且產(chǎn)酸能力強,菌種生產(chǎn)能力和發(fā)酵工藝控制達(dá)到的指標(biāo),其綜合水平達(dá)到國內(nèi)領(lǐng)先水平。
      [0007]本發(fā)酵工藝結(jié)合氨基酸和抗生素的發(fā)酵工藝特點,采用趨勢控制,中途補料、補糖工藝嚴(yán)格控制,始終菌體的活力,得到較高的產(chǎn)酸水平。
      [0008]一種提高L-精氨酸發(fā)酵產(chǎn)酸的工藝步驟如下:
      菌種選育:從黃色短桿菌ATCC21493 (SDe)為出發(fā)菌,在選擇性培養(yǎng)基中加一定濃度的AHV ( α -氨基-β -羥基戊酸)或2-ΤΑ ( α -噻唑丙氨酸),誘變得到ΤΑ174 (SD\ AHVe,Z-TAe)菌株;經(jīng)過 NTG 處理得到 ΤΑ188 (SDK、AHVK、2-TAK、L-His0 菌株;把 TA188 再經(jīng)過 NTG處理后篩選出突變株TA189 (SDK、AHVK、2-TAK、L-His_)菌株,最后發(fā)酵產(chǎn)酸。
      [0009]作為優(yōu)選,所述黃色短桿菌TA174的篩選:
      出發(fā)菌株:黃色短桿菌ATCC214939 (SDe)
      所述的菌種,篩選所用誘變培養(yǎng)基的組成為:
      培養(yǎng)基
      a、完全培養(yǎng)基:蛋白胨1.0%、牛肉膏1.0%、酵母膏0.5%、氯化鈉0.5%、瓊脂粉2.0%,PH7.0-7.2 (試紙),滅菌溫度121°C,滅菌時間20分鐘。
      [0010]b、選擇抗性菌株的基本培養(yǎng)基:
      葡萄糖 1.0%、(NH4)2SO40.3%、KH2PO40.1%、K2HPO4.3Η200.3%、MgSO4.7Η200.05%、FeSO4.7Η20 0.002%、MnS04.H2O0.002%、VH5(^g/l、Vbi.HC120(^g/l,瓊脂粉 2.0%,PH6.8-7.0,121°C 滅菌 20 分鐘。
      [0011]選擇性培養(yǎng)基加一定濃度的AHV ( α -氨基-β -羥基戊酸)或2_ΤΑ ( α -噻唑丙氨酸)
      C、種子培養(yǎng)基葡萄糖 3 %、尿素 0.25 %、K2HPO4.3Η200.15 %、KH2PO40.05 %、MgSO4.7Η20 0.04 %、維生素仏25邶/1、(:.5丄2.5%卬!17.0-7.2。115°C滅菌 15 分鐘。裝液量20ml/250ml三角瓶或150ml/1000ml三角瓶。
      [0012]發(fā)酵產(chǎn)酸:
      發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖 12.5 %、(NH4)2S045-7 %、K2HPO4.3Η200.05 %、KH2PO4 0.10%、MgSO4.7Η200.05 %、硫胺素鹽酸鹽 100ug/l、C.S.L1.2 % (分消)、CaC035 % (分消),PH7.0-7.2,裝液量20ml/500ml三角瓶。在搖瓶階段每瓶加苯酚紅2_4滴,115°C滅菌15分鐘;
      作為優(yōu)選,所述該菌的誘變方法及抗性菌檢出:
      取活化的培養(yǎng)基(I)斜面菌苔(30~33°C培養(yǎng)18~24小時),(Φ 15X 150斜面試管4支)接入裝30ml 1/30M磷酸緩沖液及玻璃珠的250ml三角瓶中振搖15min使菌體分散成單細(xì)胞,加入事先溶解的NTG使終濃度25(T500ug/ml,30°C振搖處理30min后吸0.5ml入液體完全培養(yǎng)基(I) (25ml/250ml三角瓶)中30°C振蕩培養(yǎng)至培養(yǎng)液微混(對數(shù)生長初期),不稀釋涂布在選擇性培養(yǎng)基平板上(每皿0.1~0.2ml),30°C培養(yǎng)3飛天,挑出大菌落即視為抗性菌。
      [0013]附:1/30M磷酸緩沖液的配制(ρΗ7.0)
      甲液:Na2HP04.12H20 23.9g/l
      乙液:NaH2P04.2H20 10.4g/l
      使用時甲液61 ml加乙液39 ml稀釋成200 ml。
      [0014]附:1 / 30M磷酸緩沖液的配制(ΡΗ7.0)
      甲液:Na2HP04.12H20 23.9g / I
      乙液:NaH2P04.2H20 10.4 g / I 使用時甲液61ml加乙液39ml稀釋成200ml.TA 174的發(fā)酵產(chǎn)酸統(tǒng)計:
      ①、30L自控罐發(fā)酵產(chǎn)酸成績統(tǒng)計
      【權(quán)利要求】
      1.一種提高L-精氨酸發(fā)酵產(chǎn)酸的工藝,其特征在于:采用黃色短桿菌ATCC21493(SDk) 為出發(fā)菌,經(jīng)NTG處理,誘變得到TA189菌株,該菌株可以利用葡萄糖直接合成精氨酸;具體工藝步驟如下:菌種選育:從黃色短桿菌ATCC21493 (SDE)為出發(fā)菌,在選擇性培養(yǎng)基中加一定濃度 的AHV (a-氨基-運-羥基戊酸)或2-TA ( a -噻唑丙氨酸),誘變得到TA174 (SDK、AHV\ Z-TAe)菌株;經(jīng)過 NTG 處理得到 TA188 (SDK、AHVK、2-TAK、L_His0 菌株;把 TA188 再經(jīng)過 NTG 處理后篩選出突變株TA189 (SDK、AHVK、2-TAK、L-His_)菌株,最后發(fā)酵產(chǎn)酸。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高L-精氨酸發(fā)酵產(chǎn)酸的工藝,其特征在于:所述黃色 短桿菌TA174的篩選:出發(fā)菌株:黃色短桿菌ATCC214939 (SDE)所述的菌種,篩選所用誘變培養(yǎng)基的組成為:培養(yǎng)基a、完全培養(yǎng)基:蛋白胨1.0%、牛肉膏1. 0%、酵母膏0. 5%、氯化鈉0. 5%、瓊脂粉2. 0%, PH7. 0-7. 2 (試紙),滅菌溫度121°C,滅菌時間20分鐘;b、選擇抗性菌株的基本培養(yǎng)基:葡萄糖 1. 0%、(NH4)2S040. 3%、KH2P040. 1%、K2HP04 ? 3H200. 3%、MgS04 ? 7H200. 05%、 FeS04 ? 7H20 0. 002%、MnS04 ? H200. 002%、VH50Pg/l、VB1 ? HC1200l^g/l,瓊脂粉 2. 0%, PH6. 8-7. 0,121°C 滅菌 20 分鐘;選擇性培養(yǎng)基加一定濃度的AHV ( a -氨基-0 -羥基戊酸)或2-TA ( a -噻唑丙氨酸)c、種子培養(yǎng)基葡萄糖 3 %、尿素 0. 25 %、K2HP04.3H200. 15 %、KH2P040 . 05 %、 MgS04. 7H20 0. ,04 %、維生素 HH25ug/l、C. S. L2. 5 %,pH7. 0-7. 2。
      3.115°C滅菌15分鐘。
      4.裝液量20ml/250ml三角瓶或150ml/1000ml三角瓶;發(fā)酵產(chǎn)酸:d、發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖 12. 5 %、(NH4)2S045-7 %、K2HP04.3H200. 05 %、KH2P04 0. 10 %、MgS04. 7H200. 05 %、硫胺素鹽酸鹽 100ug/l、C. S. LI. 2 % (分消)、CaC035 % (分消), pH7. 0-7. 2,裝液量 ,20ml/500ml 三角瓶。
      5.在搖瓶階段每瓶加苯酚紅2-4滴,115°C滅菌15分鐘。
      6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高L-精氨酸發(fā)酵產(chǎn)酸的工藝,其特征在于:所述該菌 的誘變方法及抗性菌檢出:取活化的培養(yǎng)基(1)斜面菌苔(30?33°C培養(yǎng)18?24小時),((M5X150斜面試管4支) 接入裝30ml 1/30M磷酸緩沖液及玻璃珠的250ml三角瓶中振搖15min使菌體分散成單細(xì) 胞,加入事先溶解的NTG使終濃度25(T500ug/ml,30°C振搖處理30min后吸0. 5ml入液體 完全培養(yǎng)基(1) (25ml/250ml三角瓶)中30°C振蕩培養(yǎng)至培養(yǎng)液微混(對數(shù)生長初期),不稀 釋涂布在選擇性培養(yǎng)基平板上(每皿0. ro. 2ml),30°C培養(yǎng)3飛天,挑出大菌落即視為抗性 菌。
      【文檔編號】C12N1/20GK103540626SQ201310531269
      【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年11月1日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月1日
      【發(fā)明者】高法民, 高樹營, 李令娣, 王威 申請人:山東民強生物科技股份有限公司
      網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
      • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
      1