一種對質(zhì)粒ｄｎａ進(jìn)行有效純化的簡易方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種對質(zhì)粒ＤＮＡ進(jìn)行有效純化的簡易方法，其特征在于，步驟如下：首先，將需要進(jìn)行純化的質(zhì)粒裝至適當(dāng)?shù)脑嚬苤?，加?u;的溶解液消化ＲＮＡ，然后將其混合均勻，在５０攝氏度的環(huán)境下熱浴１－１.５小時；用１.５倍提及的氯仿抽提蛋白；室溫干燥；加二分之一的醋酸鈉溶液和三分之一的醋酸鈣溶液，搖晃；棄上清保留沉淀即可；所述氯仿中，可以混入等體積的酚；其特征在于，最后棄上清的時候，使用四層紗布。本發(fā)明的有益效果是：操作簡單，成本較低，實(shí)驗(yàn)條件要求不高，可以用于反復(fù)性操作，獲得預(yù)期效果。
【專利說明】一種對質(zhì)粒D NA進(jìn)行有效純化的簡易方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生化實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域，具體涉及一種對質(zhì)粒D N A進(jìn)行有效純化的簡易方法。
【背景技術(shù)】
[0002]大量提取的質(zhì)粒DNA —般需進(jìn)一步純化，常用柱層析法和氯化銫梯度離心法。常使用的所有純化方法都利用了質(zhì)粒DNA相對較小及共價閉合環(huán)狀這樣兩個性質(zhì)。例如，用氯化銫一溴化乙錠梯度平衡離心分離質(zhì)粒和染色體DNA就取決于溴化乙錠與線狀以及與閉環(huán)DNA分子的結(jié)合量有所不同。溴化乙錠通過嵌入堿基之間而與DNA結(jié)合，進(jìn)而使雙螺旋解旋。由此導(dǎo)致線狀DNA的長度有所增加，作為補(bǔ)償，將在閉環(huán)質(zhì)粒DNA中引入超螺旋單位。最后，超螺旋度大為增加，從而阻止了溴化乙錠分子的繼續(xù)嵌入。但線狀分子不受此限，可繼續(xù)結(jié)合更多溴化乙錠，直至達(dá)到飽和(每2個堿基對大約結(jié)合I個溴化乙錠分子)。由于染料的結(jié)合量有所差別，線狀和閉環(huán)DNA分子在含有飽和量溴化乙錠的氯化銫度中的浮力密度也有所不同。多年來，氯化銫一溴化乙錠梯度平衡離心已成為制備大量質(zhì)粒DNA的首選方法。然而該過程既昂貴又費(fèi)時，為此發(fā)展了許多替代方法。其中主要包括利用離子交換層析、凝膠過濾層析、分級沉淀等分離質(zhì)粒DNA和宿主DNA的方法。盡管這些方法大多數(shù)均被束之高閣，但其中最好的方法，也應(yīng)是聚乙二醇分級沉淀法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于，針對現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種技術(shù)方案:
一種對質(zhì)粒D N A進(jìn)行有效純化的簡易方法，步驟如下:首先，將需要進(jìn)行純化的質(zhì)粒裝至適當(dāng)?shù)脑嚬苤校尤?u;的溶解液消化RN A，然后將其混合均勻，在5 0攝氏度的環(huán)境下熱浴I 一 1.5小時；用1.5倍提及的氯仿抽提蛋白；室溫干燥；加二分之一的醋酸鈉溶液和三分之一的醋酸鈣溶液，搖晃；棄上清保留沉淀即可。
[0004]本發(fā)明中，所述氯仿中，可以混入等體積的酚。
[0005]本發(fā)明中，最后棄上清的時候，使用四層紗布。
[0006]本發(fā)明的有益效果是:操作簡單，成本較低，實(shí)驗(yàn)條件要求不高，可以用于反復(fù)性操作，獲得預(yù)期效果。
【具體實(shí)施方式】
[0007]—種對質(zhì)粒D N A進(jìn)行有效純化的簡易方法，步驟如下:首先，將需要進(jìn)行純化的質(zhì)粒裝至適當(dāng)?shù)脑嚬苤校尤?u;的溶解液消化R NA，然后將其混合均勻，在5 0攝氏度的環(huán)境下熱浴1 一 1.5小時；用1.5倍提及的氯仿抽提蛋白；室溫干燥；加二分之一的醋酸鈉溶液和三分之一的醋酸鈣溶液，搖晃；棄上清保留沉淀即可。所述氯仿中，可以混入等體積的酚。最后棄上清的時候，使用四層紗布。
[0008]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或 改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種對質(zhì)粒D N A進(jìn)行有效純化的簡易方法，其特征在于，步驟如下:首先，將需要進(jìn)行純化的質(zhì)粒裝至適當(dāng)?shù)脑嚬苤校尤?u;的溶解液消化R N A，然后將其混合均勻，在5 O攝氏度的環(huán)境下熱浴I 一 1.5小時；用1.5倍提及的氯仿抽提蛋白；室溫干燥；加二分之一的醋酸鈉溶液和三分之一的醋酸鈣溶液，搖晃；棄上清保留沉淀即可。
2.如權(quán)利要求1所述的一種對質(zhì)粒DN A進(jìn)行有效純化的簡易方法，其特征在于，所述氯仿中，可以混入等體積的酚。
3.如權(quán)利要求1所述的一種對質(zhì)粒DN A進(jìn)行有效純化的簡易方法，其特征在于，最后棄上清的時候，使用 四層紗布。
【文檔編號】C12N15/10GK103614363SQ201310536694
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月4日
【發(fā)明者】辛竹 申請人:辛竹