一種胰酶粉的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種制備胰酶粉的方法，步驟如下：（1）采集胰臟；（2）將胰臟低溫保藏；（3）解凍，去雜，絞碎；（4）抽提胰臟，得胰漿；用板框式壓濾機過濾，得提取液；（5）向提取液中加入乙醇靜置，用板框式壓濾機過濾，收集濾餅；（6）將濾餅洗滌后離心取沉淀；（7）將沉淀真空干燥，粉碎，得到胰酶粉。本發(fā)明提供了符合伊斯蘭教法的牛胰酶粉，填補了市場空白；并對現(xiàn)有利用豬胰臟來制備工業(yè)胰酶粉的方法進行了工藝改進。本發(fā)明的方法生產(chǎn)成本低，避免了對最終產(chǎn)品的污染及環(huán)境污染，大大提高了生產(chǎn)安全性；簡化了操作程序，耗時短，每批只需45～48h，易于產(chǎn)業(yè)化。應(yīng)用本發(fā)明的方法得到的產(chǎn)品三酶活力高，收率達11.0%。
【專利說明】一種胰酶粉的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物制藥和食品加工【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種胰酶粉的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]胰酶廣泛存在于豬、牛、羊等動物胰臟，主要成分為胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶。是我國和國際上多國藥典收載的助消化藥品，也是生物制藥和食品行業(yè)中的主要原輔材料，但目前國內(nèi)外市場上胰酶主要從豬胰臟中提取，不符合伊斯蘭教法，清真胰酶粉的缺乏，嚴重制約了開發(fā)符合穆斯林群體的藥物和食品類產(chǎn)品，甘肅具有豐富的胰臟資源優(yōu)勢，有良好的符合伊斯蘭教法的胰酶生產(chǎn)原料，如果能合理有效的開發(fā)和利用這些資源，不僅可以充分的利用動物臟器資源，提高其附加值，而且還可以為國內(nèi)外廣大穆斯林消費者提供符合伊斯蘭教法的胰酶，填補市場空白，滿足不同的市場消費需求，市場前景十分看好。
[0003]傳統(tǒng)的胰酶提取工藝主要采用有機溶劑沉淀法和鹽析法，所用溶劑丙酮和乙醚等都易揮發(fā)、易燃；所用硫酸銨、硫酸鈉等化學(xué)用品造成環(huán)境污染，造成生產(chǎn)成本高，產(chǎn)品收率低，對酶活力影響較大，而且，生產(chǎn)存在嚴重安全隱患，對工人的健康有較大的損害。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了一種胰酶粉的制備方法。該方法以牛胰臟為原料，為國內(nèi)外廣大穆斯林消費者提供符合伊斯蘭教法的胰酶粉，滿足了不同的市場消費需求，填補了市場空白；同時，該方法提出了一種新的利用豬胰臟制備胰酶粉的方法，不添加防腐劑等一些化學(xué)物質(zhì)，避免了對最終產(chǎn)品的污染，使用板框等物理方法進行處理，降低了生產(chǎn)成本，安全性好、操作簡便、能耗低、易于產(chǎn)業(yè)化。
[0005]本發(fā)明提供一種制備胰酶粉的方法，步驟如下:
(1)采集胰臟；
(2)將胰臟低溫保藏；
(3)解凍，去雜，絞碎；
(4)抽提胰臟，得胰漿；用板框式壓濾機過濾，得提取液；
(5)向提取液中加入乙醇靜置，用板框式壓濾機過濾，收集濾餅；
(6)將濾餅洗滌后離心取沉淀；
(7)將沉淀真空干燥，粉碎，得到胰酶粉。
[0006]優(yōu)選地，所述胰臟為牛胰臟或豬胰臟。
[0007]進一步地，步驟(4)中所述抽提胰臟是使用乙醇抽提的。
[0008]進一步地，步驟(4)中所述用乙醇抽提胰臟的方法是在步驟(3)中絞碎的胰臟中加入乙醇為提取劑，加入胰臟量的0.1~0.2%氯化鈣，胰臟量的0.1~0.5%淀粉、0.1~
0.5%氯化鈉，調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5，攪拌3-8小時，得胰漿。
[0009]進一步地，所述攪拌是在5-10°C進行的。 [0010]優(yōu)選地，步驟(4)中用板框式壓濾機過濾的條件是:使用5 μ m的濾布在Ibar壓力下。
[0011]優(yōu)選地，步驟(6)中是用預(yù)冷的無水乙醇來洗滌濾餅的。
[0012]優(yōu)選地，按照干燥品計算，每Ig所述胰酶粉中含活力為2580單位的胰蛋白酶，活力為18500單位的胰淀粉酶，活力為10100單位的胰脂肪酶。
[0013]本發(fā)明的第二個目的是提供應(yīng)用上述方法制備的胰酶粉。
[0014]優(yōu)選地，按照干燥品計算，每Ig所述胰酶粉中含活力為2580單位的胰蛋白酶，活力為18500單位的胰淀粉酶，活力為10100單位的胰脂肪酶。
[0015]傳統(tǒng)的胰酶粉提取工藝主要采用有機溶劑沉淀法和鹽析法，所用溶劑丙酮和乙醚等都易揮發(fā)、易燃、易爆，造成生產(chǎn)成本高，產(chǎn)品收率低，對酶活力影響較大，生產(chǎn)存在嚴重安全隱患，對工人的健康有較大的損害。本發(fā)明的方法使用無水乙醇代替異丙醇、正丁醇和丙酮，容易回收，可重復(fù)利用，生產(chǎn)成本低；本發(fā)明的方法不加防腐劑、有機溶劑等一些化學(xué)物質(zhì)，避免了對最終產(chǎn)品的污染，也不使用化學(xué)用品造成環(huán)境污染，大大提高了生產(chǎn)安全性；在生產(chǎn)過程中使用5~10°C攪拌(在該溫度下攪拌酶不會失活，且低溫使用酒精比較安全)、板框壓濾等物理方法進行處理，與離心處理相比，簡化了操作程序。耗時短，每批只需45~48h，易于產(chǎn)業(yè)化。應(yīng)用本發(fā)明的方法得到的產(chǎn)品三酶活力高:三酶指胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶，按照干燥品計算，每Ig中含胰蛋白酶活力為2580單位，胰淀粉酶活力為18500單位，胰脂肪酶活力為10100單位；收率達11.0%。
[0016]本發(fā)明充分利用了甘肅省當?shù)亓己玫姆弦了固m教法的牛胰臟資源，原料來源可靠，為國內(nèi)外廣大穆斯林消費者提供符合伊斯蘭教法的牛胰酶粉，填補了市場空白；并對現(xiàn)有利用豬胰臟來制備工業(yè)胰酶粉的方法進行了工藝改進，滿足不同的市場消費需求。
【具體實施方式】
[0017]以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。如未說明，“％”為質(zhì)量百分數(shù)。
[0018]實施例1
本發(fā)明的一種胰酶粉的制備方法步驟如下:
(1)采集:牛經(jīng)過符合伊斯蘭教法的方法屠宰后，30min內(nèi)采集牛胰臟，將采集的牛胰臟經(jīng)0.125mol/L的稀硫酸浸泡IOmin后保藏，稀硫酸浸泡是為了防止酶失活，防止胰臟自溶，而影響三酶活力和收率；
(2)保藏:將(I)中的新鮮牛胰臟置于_18°C保存；
(3)解凍:將(2)中保藏的牛胰臟取出，置5°C解凍牛胰臟，待牛胰臟解凍后，進一步去除脂肪、結(jié)締組織等雜質(zhì)；
(4)絞碎:將(3)中的牛胰臟用絞肉機將其絞碎，稱重；
(5)抽提:將(4)中加入體·積百分數(shù)為25%的乙醇(牛胰臟:25%的乙醇的質(zhì)量比=1:1)為提取劑，加入胰臟量0.15%氯化鈣為激活劑，加入胰臟量0.3%淀粉、0.3%氯化鈉為保護劑，用NaHCO3調(diào)pH至7.0，5°C攪拌5小時，得胰漿;使用8 μ m的濾布在1.5bar壓力下，用板框式壓濾機過濾，得到提取液；低溫攪拌是為了防止酶失活，同時確保乙醇的安全使用；
(6)沉淀:向提取液中加入8°C預(yù)冷乙醇使其體積百分比濃度達到72%，置4°C靜置12小時后，使用8 μ m的濾布在1.5bar壓力下,用板框式壓濾機過濾,收集濾餅；使用預(yù)冷乙醇是為了防止酶失活；
(7)脫水脫脂:將步驟(6)中的濾餅用體積比1:1的8°C預(yù)冷無水乙醇，洗滌2次，使用8 μ m的濾布在1.5bar壓力下，用板框式壓濾機過濾，取沉淀以達到脫水脫脂的作用；使用預(yù)冷乙醇是為了防止酶失活；
(8)真空干燥:將步驟(7)中的沉淀使用真空干燥機在48°C下干燥3.5小時；
(9)粉碎:將步驟(8)中干燥的胰酶使用粉碎機粉碎成100目的粉末，使用鋁箔袋真空包裝后，即得清真胰酶粉成品。
[0019]本實施例利用牛胰臟來制備胰酶粉，符合穆斯林群體的要求，具有廣泛的伊斯蘭教國家市場。
[0020]實施例2
本發(fā)明的一種胰酶粉的制備方法步驟如下:
(1)采集:牛經(jīng)過符合伊斯蘭教法的方法屠宰后，30min內(nèi)采集牛胰臟，以防止胰臟自溶，影響三酶活力和收率；將采集的牛胰臟經(jīng)0.125mol/L的稀硫酸浸泡IOmin后保藏；
(2)保藏:將(I)中的新鮮牛胰臟置于_15°C保存；
(3)解凍:將(2)中保藏的牛胰臟取出，置2°C解凍牛胰臟，待牛胰臟解凍后，進一步去除脂肪、結(jié)締組織等雜質(zhì)；
(4)絞碎:將(3)中的牛胰 臟用絞肉機將其絞碎，稱重；
(5)抽提:將(4)中加入體積百分數(shù)為25%的乙醇(牛胰臟:25%的乙醇的質(zhì)量比=1:1)為提取劑，加入胰臟量0.1%氯化鈣為激活劑，加入胰臟量0.1%淀粉、0.5%氯化鈉為保護劑，用NaHCO3調(diào)pH至6.5,8°C攪拌3小時,得胰衆(zhòng)；使用5 μ m的濾布在Ibar壓力下,用板框式壓濾機過濾，得到提取液；低溫攪拌是為了防止酶失活，同時確保乙醇的安全使用；
(6)沉淀:向提取液中加入8°C預(yù)冷乙醇使其體積百分比濃度達到70%，置4°C靜置10小時后，使用5 μ m的濾布在Ibar壓力下，用板框式壓濾機過濾，收集濾餅；使用預(yù)冷乙醇是為了防止酶失活；
(7)脫水脫脂:將步驟(6)中的濾餅用體積比1:1的5°C預(yù)冷無水乙醇，洗滌2次，使用5μπι的濾布在Ibar壓力下，用板框式壓濾機過濾，取沉淀以達到脫水脫脂的作用；使用預(yù)冷乙醇是為了防止酶失活；
(8)真空干燥:將步驟(7)中的沉淀使用真空干燥機在45°C下干燥3小時；
(9)粉碎:將步驟(8)中干燥的胰酶使用粉碎機粉碎成100目的粉末，使用鋁箔袋真空包裝后，即得清真胰酶粉成品。
[0021]本實施例利用牛胰臟來制備胰酶粉，符合穆斯林群體的要求，具有廣泛的伊斯蘭教國家市場。
[0022]實施例3
本發(fā)明的一種胰酶粉的制備方法步驟如下:
(1)采集:牛經(jīng)過符合伊斯蘭教法的方法屠宰后，30min內(nèi)采集牛胰臟，以防止胰臟自溶，影響三酶活力和收率；將采集的牛胰臟經(jīng)0.125mol/L的稀硫酸浸泡IOmin后保藏；
(2)保藏:將(I)中的新鮮牛胰臟置于_20°C保存；
(3)解凍:將(2)中保藏的牛胰臟取出，置8°C解凍牛胰臟，待牛胰臟解凍后，進一步去除脂肪、結(jié)締組織等雜質(zhì)；(4)絞碎:將(3)中的牛胰臟用絞肉機將其絞碎，稱重；
(5)抽提:將(4)中加入體積百分數(shù)為25%的乙醇(牛胰臟:25%的乙醇的質(zhì)量比=1:1)為提取劑，加入胰臟量0.2%氯化鈣為激活劑，加入胰臟量0.5%淀粉、0.1%氯化鈉為保護劑，用NaHCO3調(diào)pH至7.5，10°C攪拌8小時，得胰漿；使用10 μ m的濾布在2bar壓力下，用板框式壓濾機過濾，得到提取液；低溫攪拌是為了防止酶失活，同時確保乙醇的安全使用；
(6)沉淀:向提取液中加入10°C預(yù)冷乙醇使其體積百分比濃度達到75%，置4°C靜置14小時后，使用10 μ m的濾布在2bar壓力下，用板框式壓濾機過濾，收集濾餅；使用預(yù)冷乙醇是為了防止酶失活；
(7)脫水脫脂:將步驟(6)中的濾餅用體積比1:1的10°C預(yù)冷無水乙醇，洗滌2次，使用ΙΟμπι的濾布在2bar壓力下，用板框式壓濾機過濾，取沉淀以達到脫水脫脂的作用；使用預(yù)冷乙醇是為了防止酶失活；
(8)真空干燥:將步驟(7)中的沉淀使用真空干燥機在50°C下干燥4小時；
(9)粉碎:將步驟(8)中干燥的胰酶使用粉碎機粉碎成100目的粉末，使用鋁箔袋真空包裝后，即得清真胰酶粉成品。
[0023]本實施例利用牛胰臟來制備胰酶粉，符合穆斯林群體的要求，具有廣泛的伊斯蘭教國家市場。
[0024]實施例4
本發(fā)明的一種胰酶粉的制備方法步驟如下:
(O采集:將豬屠宰后，30min內(nèi)采集豬胰臟，以防止胰臟自溶，影響三酶活力和收率；將采集的豬胰臟經(jīng)0.125mol/L的稀硫酸浸泡IOmin后保藏；
(2)保藏:將(I)中的新鮮豬胰臟置于_18°C保存；
(3)解凍:將(2)中保藏的豬胰臟取出，置5°C解凍牛胰臟，待豬胰臟解凍后，進一步去除脂肪、結(jié)締組織等雜質(zhì)；
(4)絞碎:將(3)中的豬胰臟用絞肉機將其絞碎，稱重；
(5)抽提:將(4)中加入體積百分數(shù)為25%的乙醇(豬胰臟:25%的乙醇的質(zhì)量比=1:1)為提取劑，加入豬胰臟量0.15%氯化鈣為激活劑，加入豬胰臟量0.3%淀粉、0.3%氯化鈉為保護劑，用NaHCO3調(diào)pH至7.0，5 °C攪拌5小時，得胰漿；使用8 μ m的濾布在1.5bar壓力下，用板框式壓濾機過濾，得到提取液；低溫攪拌是為了防止酶失活，同時確保乙醇的安全使用；
(6)沉淀:向提取液中加入8°C預(yù)冷乙醇使其體積百分比濃度達到72%，置4°C靜置12小時后，使用8 μ m的濾布在1.5bar壓力下,用板框式壓濾機過濾,收集濾餅；使用預(yù)冷乙醇是為了防止酶失活；
(7)脫水脫脂:將步驟(6)中的濾餅用體積比1:1的8°C預(yù)冷無水乙醇，洗滌2次，使用8 μ m的濾布在1.5bar壓力下，用板框式壓濾機過濾，取沉淀以達到脫水脫脂的作用；使用預(yù)冷乙醇是為了防止酶失活；
(8)真空干燥:將步驟(7)中的沉淀使用真空干燥機在48°C下干燥3.5小時；
(9)粉碎:將步驟(8)中干燥的胰酶使用粉碎機粉碎成100目的粉末，使用鋁箔袋真空包裝后，即得胰酶粉成品。
[0025]實施例5
本發(fā)明的一種胰酶粉的制備方法步驟如下:(O采集:將豬屠宰后，30min內(nèi)采集豬胰臟，以防止胰臟自溶，影響三酶活力和收率；將采集的豬胰臟經(jīng)0.125mol/L的稀硫酸浸泡IOmin后保藏；
(2)保藏:將(I)中的新鮮豬胰臟置于_15°C保存；
(3)解凍:將(2)中保藏的豬胰臟取出，置2°C解凍牛胰臟，待豬胰臟解凍后，進一步去除脂肪、結(jié)締組織等雜質(zhì)； (4)絞碎:將(3)中的豬胰臟用絞肉機將其絞碎，稱重；
(5)抽提:將(4)中加入體積百分數(shù)為25%的乙醇(豬胰臟:25%的乙醇的質(zhì)量比=1:1)為提取劑，加入豬胰臟量0.1%氯化鈣為激活劑，加入豬胰臟量0.1%淀粉、0.5%氯化鈉為保護劑，用NaHCO3調(diào)pH至6.5，7°C攪拌4小時，得胰漿；使用5 μ m的濾布在Ibar壓力下，用板框式壓濾機過濾，得到提取液；低溫攪拌是為了防止酶失活，同時確保乙醇的安全使用；
(6)沉淀:向提取液中加入5°C預(yù)冷乙醇使其體積百分比濃度達到70%，置4°C靜置10小時后，使用5 μ m的濾布在Ibar壓力下，用板框式壓濾機過濾，收集濾餅；使用預(yù)冷乙醇是為了防止酶失活；
(7)脫水脫脂:將步驟(6)中的濾餅用體積比1:1的5°C預(yù)冷無水乙醇，洗滌2次，使用5μπι的濾布在Ibar壓力下，用板框式壓濾機過濾，取沉淀以達到脫水脫脂的作用；使用預(yù)冷乙醇是為了防止酶失活；
(8)真空干燥:將步驟(7)中的沉淀使用真空干燥機在45°C下干燥3小時；
(9)粉碎:將步驟(8)中干燥的胰酶使用粉碎機粉碎成100目的粉末，使用鋁箔袋真空包裝后，即得胰酶粉成品。
[0026] 實施例6
本發(fā)明的一種胰酶粉的制備方法步驟如下:
(O采集:將豬屠宰后，30min內(nèi)采集豬胰臟，以防止胰臟自溶，影響三酶活力和收率；將采集的豬胰臟經(jīng)0.125mol/L的稀硫酸浸泡IOmin后保藏；
(2)保藏:將(I)中的新鮮豬胰臟置于_20°C保存；
(3)解凍:將(2)中保藏的豬胰臟取出，置8°C解凍牛胰臟，待豬胰臟解凍后，進一步去除脂肪、結(jié)締組織等雜質(zhì)；
(4)絞碎:將(3)中的豬胰臟用絞肉機將其絞碎，稱重；
(5)抽提:將(4)中加入體積百分數(shù)為25%的乙醇(豬胰臟:25%的乙醇的質(zhì)量比=1:1)為提取劑，加入豬胰臟量0.2%氯化鈣為激活劑，加入豬胰臟量0.5%淀粉、0.1%氯化鈉為保護劑，用NaHCO3調(diào)pH至7.5，10°C攪拌6小時，得胰漿；使用10 μ m的濾布在2bar壓力下，用板框式壓濾機過濾，得到提取液；低溫攪拌是為了防止酶失活，同時確保乙醇的安全使用；
(6)沉淀:向提取液中加入10°C預(yù)冷乙醇使其體積百分比濃度達到75%，置4°C靜置14小時后，使用10 μ m的濾布在2bar壓力下，用板框式壓濾機過濾，收集濾餅；使用預(yù)冷乙醇是為了防止酶失活；
(7)脫水脫脂:將步驟(6)中的濾餅用體積比1:1的10°C預(yù)冷無水乙醇，洗滌2次，使用ΙΟμπι的濾布在2bar壓力下，用板框式壓濾機過濾，取沉淀以達到脫水脫脂的作用；使用預(yù)冷乙醇是為了防止酶失活；
(8)真空干燥:將步驟(7)中的沉淀使用真空干燥機在50°C下干燥4小時；
(9)粉碎:將步驟(8)中干燥的胰酶使用粉碎機粉碎成100目的粉末，使用鋁箔袋真空包裝后，即得胰酶粉成品。 [0027]最后應(yīng)說明的是:以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種制備胰酶粉的方法，步驟如下: (1)采集胰臟； (2)將胰臟低溫保藏； (3)解凍，去雜，絞碎； (4)抽提胰臟，得胰漿；用板框式壓濾機過濾，得提取液； (5)向提取液中加入乙醇靜置，用板框式壓濾機過濾，收集濾餅； (6)將濾餅洗滌后離心取沉淀； (7)將沉淀真空干燥，粉碎，得到胰酶粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述胰臟為牛胰臟或豬胰臟。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于:步驟(4)中所述抽提胰臟是使用乙醇抽提的。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:步驟(4)中所述用乙醇抽提胰臟的方法是在步驟(3)中絞碎的胰臟中加入乙醇為提取劑，加入胰臟量的0.1~0.2%氯化鈣，胰臟量的0.1~0.5%淀粉、0.1~0.5%氯化鈉，調(diào)節(jié)pH至6.5-7.5，攪拌3-8小時，得胰漿。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:所述攪拌是在5-10°C進行的。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于:步驟(4)中用板框式壓濾機過濾的條件是:使用5 μ m的濾布在Ibar壓力下。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于:步驟(6)中是用預(yù)冷的無水乙醇來洗滌濾餅的。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7所述的方法，其特征在于:按照干燥品計算，每Ig所述胰酶粉中含活力為2580單位的胰蛋白酶，活力為18500單位的胰淀粉酶，活力為10100單位的胰脂肪酶。
9.應(yīng)用權(quán)利要求1-8任一所述的方法制備的胰酶粉。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的胰酶粉，其特征在于:按照干燥品計算，每Ig所述胰酶粉中含活力為2580單位的胰蛋白酶，活力為18500單位的胰淀粉酶，活力為10100單位的胰脂肪酶。
【文檔編號】C12N9/94GK103571817SQ201310539814
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年11月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月5日
【發(fā)明者】李明生, 馮玉萍, 喬自林, 馮若飛, 令世鑫, 馬忠仁, 靳冬武 申請人:馬忠仁, 李明生