一種對亞型禽流感病毒h5n1的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種對亞型禽流感病毒H5N1的檢測方法，其特征在于，步驟如下：首先提取目的病毒的RNA片段；建立擴(kuò)增反應(yīng)體系：包括RNA、DNA聚合緩沖液以及適當(dāng)?shù)姆崔D(zhuǎn)錄酶等；將上述物質(zhì)與三倍提及的醫(yī)用蒸餾水混合，輕微振蕩；將引物引入其中；35攝氏度的環(huán)境下進(jìn)行溫水??；瓊脂糖凝膠泳進(jìn)行電測；高速離心；懸??；棄上清；與HA基因區(qū)進(jìn)行對比即可；其中所述瓊脂糖凝膠電泳質(zhì)量百分比為百分之一到百分之二；所述醫(yī)用蒸餾水在使用前需要在室溫下溫?zé)嶂辽?4小時，使其溫度至少保持在25攝氏度。本發(fā)明的有益效果是，實驗的特異性和靈敏性比較高，能夠配合闡述核酸序列結(jié)構(gòu)，操作相對簡單，對條件要求不高。
【專利說明】一種對亞型禽流感病毒H5N1的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生化實驗方法，具體來說是指一種對亞型禽流感病毒H5N1的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]禽流感病毒(AIV)屬甲型流感病毒。流感病毒屬于RNA病毒的正黏病毒科，分甲、乙、丙3個型。其中甲型流感病毒多發(fā)于禽類，一些亞型也可感染豬、馬、海豹和鯨等各種哺乳動物及人類；乙型和丙型流感病毒則分別見于海豹和豬的感染。一般來說，禽流感病毒與人流感病毒存在受體特異性差異，禽流感病毒是不容易感染給人的。個別造成人感染發(fā)病的禽流感病毒可能是發(fā)生了變異的病毒。變異的可能性一是兩種以上的病毒進(jìn)入同一細(xì)胞進(jìn)行重組，如豬既可感染人流感病毒，又可能感染禽流感病毒，每種病毒都具有8個基因片段，從理論上講，可以形成256個新的重組病毒；二是病毒基因位點由于某種因素的影響，1983年4月，美國賓夕法尼亞州曾暴發(fā)H5N2型病毒引起的雞和火雞低致病性禽流感，由于沒有及時得到有效控制，到同年10月份，同樣的H5N2型毒株突然由低致病性變成高致病性，造成禽類大量死亡。因此對于禽流感病毒的研究刻不容緩。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明為克服上述技術(shù)不足，具體技術(shù)方案如下:
一種對亞型禽流感病毒H5N1的檢測方法，步驟如下:首先提取目的病毒的R N A片段；建立擴(kuò)增反應(yīng)體系:包括R NA、D N A聚合緩沖液以及適當(dāng)?shù)姆崔D(zhuǎn)錄酶等；將上述物質(zhì)與三倍提及的醫(yī)用蒸餾水混合，輕微振蕩；將引物引入其中；3 5攝氏度的環(huán)境下進(jìn)行溫水浴；瓊脂糖凝膠泳進(jìn)行電測；高速離心；懸浮；棄上清；與11 A基因區(qū)進(jìn)行對比即可。
[0004]本發(fā)明中，其中所述瓊脂糖凝膠電泳質(zhì)量百分比為百分之一到百分之二。
[0005]本發(fā)明中，所述醫(yī)用蒸餾水在使用前需要在室溫下溫?zé)嶂辽? 4小時，使其溫度至少保持在2 5攝氏度。本發(fā)明的有益效果是，實驗的特異性和靈敏性比較高，能夠配合闡述核酸序列結(jié)構(gòu)，操作相對簡單，對條件要求不高。
具體實施例
[0006]具體步驟如下:首先提取目的病毒的R N A片段；建立擴(kuò)增反應(yīng)體系:包括R NA、D N A聚合緩沖液以及適當(dāng)?shù)姆崔D(zhuǎn)錄酶等；將上述物質(zhì)與三倍提及的醫(yī)用蒸餾水混合，輕微振蕩；將引物引入其中；3 5攝氏度的環(huán)境下進(jìn)行溫水??；瓊脂糖凝膠泳進(jìn)行電測；高速離心；懸??；棄上清；與11 A基因區(qū)進(jìn)行對比即可；其中所述瓊脂糖凝膠電泳質(zhì)量百分比為百分之一到百分之二 ；所述醫(yī)用蒸餾水在使用前需要在室溫下溫?zé)嶂辽? 4小時，使其溫度至少保持在2 5攝氏度。
[0007]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都·應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種對亞型禽流感病毒H5N1的檢測方法，其特征在于，步驟如下:首先提取目的病毒的R N A片段；建立擴(kuò)增反應(yīng)體系:包括R N A、D N A聚合緩沖液以及適當(dāng)?shù)姆崔D(zhuǎn)錄酶等；將上述物質(zhì)與三倍提及的醫(yī)用蒸餾水混合，輕微振蕩；將引物引入其中；3 5攝氏度的環(huán)境下進(jìn)行溫水??；瓊脂糖凝膠泳進(jìn)行電測；高速離心；懸??；棄上清；與11 A基因區(qū)進(jìn)行對比即可。
2.如權(quán)利要求1所述的一種對亞型禽流感病毒H5N1的檢測方法，其特征在于，其中所述瓊脂糖凝膠電泳質(zhì)量百分比為百分之一到百分之二。
3.如權(quán)利要求1所述 的一種對亞型禽流感病毒H5N1的檢測方法，其特征在于，所述醫(yī)用蒸餾水在使用前需要在室溫下溫?zé)嶂辽? 4小時，使其溫度至少保持在2 5攝氏度。
【文檔編號】C12Q1/70GK103627819SQ201310541270
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2013年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月6日
【發(fā)明者】李剛 申請人:李剛