雙鏈siRNA分子及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了雙鏈siRNA分子及其應(yīng)用，其中，該雙鏈siRNA分子由具有下述核苷酸序列的正義鏈和反義鏈組成：正義鏈：5′-GCAUCUCUACAUUCAAGAA-3′(SEQ?ID?NO：1)，反義鏈：5′-UUCUUGAAUGUAGAGAUGC-3′(SEQ?ID?NO：2)。該雙鏈siRNA分子能夠針對(duì)性地對(duì)survivin基因的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)進(jìn)行干擾，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的有絲分裂，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移時(shí)的血管形成和降低腫瘤細(xì)胞放化療的耐受性，進(jìn)而能夠用于抗腫瘤藥物的制備。
【專利說(shuō)明】雙鏈SiRNA分子及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及雙鏈SiRNA分子及其應(yīng)用，更具體地，本發(fā)明涉及兩種雙鏈siRNA分子、質(zhì)粒及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用、Survivin基因沉默試劑盒以及藥物。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤的治療是長(zhǎng)期困擾醫(yī)學(xué)界的世界性難題，盡管各種的治療方法不斷出現(xiàn)，但目前還沒(méi)有真正有效的根治方法。因此這也迫使科研工作者不斷尋找新的技術(shù)和方法，試圖抑制腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移，進(jìn)而從根本上攻克癌癥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列發(fā)現(xiàn)而完成的:
[0004]腫瘤的治療是長(zhǎng)期困擾醫(yī)學(xué)界的世界性難題，盡管各種的治療方法不斷出現(xiàn)，但目前還沒(méi)有真正有效的根治方法，因此這也迫使科研工作者不斷尋找新的技術(shù)和方法，試圖從根本上攻克癌癥。
[0005]RNA干擾技術(shù)是近幾年發(fā)展起來(lái)的被認(rèn)為是研究功能基因組最有力工具之一。這種新興的生物技術(shù)為腫瘤分子水平的基因治療提供了新的技術(shù)和方法。RNA干擾，是由雙鏈 RNA(double stranded RNA, dsRNA)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后的基因沉默(post-transcriptionalgene silencing, PTGS)現(xiàn)象。通過(guò)在多種生物細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入外源或內(nèi)源的dsRNA可以使內(nèi)源性mRNA發(fā)生特異性降解，從而引起相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄的阻抑。RNAi已作為一種簡(jiǎn)單有效的基因敲除的技術(shù)，廣泛地應(yīng)用于功能基因組學(xué)研究以及抗病毒、抗腫瘤治療的研究中。
`[0006]survivin是1997年耶魯大學(xué)Aitieric.DC等人在人類基因組庫(kù)中首先篩選分離出來(lái)的IAP (凋亡抑制蛋白)家族的一個(gè)成員。它定位于17q25，全長(zhǎng)15KB，含4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子，基因編碼產(chǎn)物為由142個(gè)氨基酸組成的蛋白，分子量16.2KD，具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂的雙重功能，是聯(lián)系細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡界面的重要因子。該基因幾乎在所有種類的腫瘤組織中特異性地表達(dá)，而正常組織幾乎沒(méi)有表達(dá)；該基因在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)后，不但促進(jìn)腫瘤細(xì)胞抗凋亡、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞有絲分裂，還參與血管形成和放化療耐受:等多種功能，
[0007]進(jìn)而，發(fā)明人認(rèn)為，應(yīng)用RNA干擾技術(shù)，以小分子RNA作為靶向藥物，有針對(duì)性地對(duì)survivin基因的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)進(jìn)行干擾，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的有絲分裂，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移時(shí)的血管形成和降低腫瘤細(xì)胞放化療的耐受性，多層次，多途徑對(duì)腫瘤進(jìn)行抑制，這可能成為了一種新的腫瘤治療策略。而且survivin基因選擇性地表達(dá)在幾乎所有種類的腫瘤組織中，而正常組織幾乎不表達(dá)，則可使這種基因治療對(duì)正常組織和細(xì)胞的毒副作用降到最低，應(yīng)用RNAi特異地抑制survivin等腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)有望成為一種新的腫瘤基因治療方式。
[0008]本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于公開(kāi)一種高效的針對(duì)survivin基因的廣譜小分子干擾RNA(siRNA)。因而,根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明還提出了一種雙鏈siRNA分子。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該雙鏈siRNA分子由具有下述核苷酸序列的正義鏈和反義鏈組成:
[0009]正義鏈:5'-GCAUCUCUACAUUCAAGAA-3' (SEQ ID NO:1)，
[0010]反義鏈:5'-UUCUUGAAUGUAGAGAUGC-3' (SEQ ID NO:2)。
[0011]根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還提出了一種雙鏈siRNA分子。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該雙鏈siRNA分子由具有下述核苷酸序列的正義鏈和反義鏈組成:
[0012]正義鏈:5'-GCAUCUCUACAUUCAAGAAX-3'，
[0013]反義鏈:5'-UUCUUGAAUGUAGAGAUGCX-3'，
[0014]其中X代表tt、TT或UU，t代表脫氧胸腺嘧啶。即X代表兩個(gè)脫氧胸腺嘧啶、兩個(gè)T或兩個(gè)U。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，上述序列中3'端的“X”為tt，即兩個(gè)脫氧胸腺嘧啶。
[0015]需要說(shuō)明的是，該雙鏈siRNA分子的主干序列即為SEQ ID NO:1和2所示的核苷酸序列，即前面所述的正 義鏈和反義鏈分別具有SEQ ID NO:1和2所示核苷酸序列的雙鏈siRNA分子。
[0016]體外實(shí)驗(yàn)證明,本發(fā)明的兩種雙鏈siRNA分子的反義鏈能夠特異性地與survivin基因的mRNA結(jié)合，降解其mRNA，從而能夠干擾轉(zhuǎn)錄后翻譯過(guò)程，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞分裂、抑制腫瘤血管的生成。進(jìn)一步，本發(fā)明的雙鏈siRNA分子能夠用于抗腫瘤藥物的制備，從而利用制備獲得的抗腫瘤藥物對(duì)患者進(jìn)行給藥后，能夠有效實(shí)現(xiàn)Survivin基因沉默，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤增殖及轉(zhuǎn)移，以及降低腫瘤細(xì)胞放化療的耐受性，達(dá)到治療腫瘤的目的。
[0017]為方便起見(jiàn)，在下文中，術(shù)語(yǔ)“siRNA”、“siRNA序列”或“siRNA分子”可以互換，它們表不的意思和范圍相同。
[0018]其中，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，siRNA序列可以是單鏈結(jié)構(gòu)，也可以是雙鏈結(jié)構(gòu)。
[0019]根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例,本發(fā)明的siRNA分子來(lái)源于針對(duì)survivin基因開(kāi)放閱讀框的功能保守區(qū)，其優(yōu)點(diǎn)在于所制備得到的siRNA隨機(jī)分布于survivin開(kāi)放閱讀框區(qū)段，長(zhǎng)度可控性分布于19-23bp，可以提高有效靶位點(diǎn)的命中率。
[0020]根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，siRNA的制備可采用多種方法進(jìn)行，比如:化學(xué)合成法、體外轉(zhuǎn)錄、酶切長(zhǎng)鏈dsRNA、載體表達(dá)siRNA、PCR合成siRNA表達(dá)元件等，這些方法為研究者提供了可選擇的空間，從而能夠更好地獲得基因沉默效率。
[0021]根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明還提出了一種質(zhì)粒。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述質(zhì)粒包含前面所述的任意一種雙鏈siRNA分子的脫氧核糖核酸序列。由此，利用該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染動(dòng)物細(xì)胞，能夠使該動(dòng)物細(xì)胞的Survivin基因沉默，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞分裂、抑制腫瘤血管的生成，從而能夠有效治療腫瘤。進(jìn)一步，該質(zhì)粒能夠有效用于抗腫瘤藥物的制備，從而利用制備獲得的抗腫瘤藥物對(duì)患者進(jìn)行給藥后，能夠有效實(shí)現(xiàn)Survivin基因沉默，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞分裂、抑制腫瘤血管的生成，從而能夠有效治療腫瘤。
[0022]根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明還提出了一種Survivin基因沉默試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述試劑盒包含前面所述的任意一種雙鏈siRNA分子，或者質(zhì)粒。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，利用本發(fā)明的試劑盒能夠有效將腫瘤患者的細(xì)胞進(jìn)行Survivin基因沉默，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞分裂、抑制腫瘤血管的生成，從而能夠有效治療腫瘤。
[0023]此外，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，本發(fā)明的SiRNA分子能夠作為抗腫瘤藥物的有效成分。其中，所述腫瘤包括肝癌、肺癌、白血病、胃癌、宮頸癌、多發(fā)性骨髓瘤、皮膚鱗癌、結(jié)腸癌、黑色素瘤、膀胱癌及骨肉瘤。
[0024]因而，根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明還提出了前面所述的任意一種雙鏈SiRNA分子、或者質(zhì)粒在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0025]根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述腫瘤為選自肝癌、肺癌、宮頸癌、膀胱癌、白血病、皮膚鱗癌、胃癌、結(jié)腸癌、多發(fā)性骨髓瘤、骨肉瘤和黑色素瘤中的至少一種。
[0026]進(jìn)而，根據(jù)本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明還提供了一種抗腫瘤藥物。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該抗腫瘤藥物包含前面所述的任意一種雙鏈siRNA分子，或者質(zhì)粒。發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，利用該抗腫瘤藥物能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞分裂、抑制腫瘤血管的生成，從而能夠有效治療腫瘤。
[0027]根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，本發(fā)明的藥物的劑型可以為多種形式，只要適合于相應(yīng)疾病的給藥、并且恰當(dāng)?shù)乇３謘iRNA分子的活性即可。比如，對(duì)于注射用給藥系統(tǒng)，劑型可以是凍干粉。
[0028]根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述藥物還包含藥學(xué)可接受的輔助劑。具體地，上述藥物劑型中可以包含任何藥學(xué)可 接受的輔助劑，只要其適合于相應(yīng)的給藥體系、并且恰當(dāng)?shù)乇３謘iRNA分子的活性即可。
[0029]根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述腫瘤為選自肝癌、肺癌、宮頸癌、膀胱癌、白血病、皮膚鱗癌、胃癌、結(jié)腸癌、多發(fā)性骨髓瘤、骨肉瘤和黑色素瘤中的至少一種。
[0030]此外，根據(jù)本發(fā)明的另一些實(shí)施例，出于應(yīng)用目的，還可以將本發(fā)明的SiRNA分子、表達(dá)該siRNA分子的DNA表達(dá)框、或者包含該siRNA分子表達(dá)框的質(zhì)粒作為藥物直接給藥于受藥者身上特定部位，比如腫瘤組織。同樣能夠達(dá)到誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，進(jìn)而治療腫瘤的目的。
[0031]本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過(guò)本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0032]本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從結(jié)合下面附圖對(duì)實(shí)施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中:
[0033]圖1顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例,化學(xué)合成的siRNA對(duì)survivin基因沉默效果的檢測(cè)結(jié)果，其中，
[0034]圖1a顯示了 siRNA對(duì)癌細(xì)胞MGC-803的survivin基因沉默效果的檢測(cè)結(jié)果，
[0035]圖1b顯示了 siRNA對(duì)癌細(xì)胞Hep G2的survivin基因沉默效果的檢測(cè)結(jié)果，
[0036]圖1c顯示了 siRNA對(duì)癌細(xì)胞A549的survivin基因沉默效果的檢測(cè)結(jié)果，
[0037]圖1d顯示了 siRNA對(duì)癌細(xì)胞SMMC-7721的survivin基因沉默效果的檢測(cè)結(jié)果；
[0038]圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例，本發(fā)明的siRNA分子對(duì)癌細(xì)胞MGC-803、HepG2和SMMC-7721的survivin蛋白質(zhì)表達(dá)的影響的Westernblot檢測(cè)結(jié)果,其中，[0039]圖2a顯示了 siRNA對(duì)癌細(xì)胞MGC-803的survivin蛋白質(zhì)表達(dá)的影響的Westernblot檢測(cè)結(jié)果，
[0040]圖2b顯示了 siRNA對(duì)癌細(xì)胞Hep G2的survivin蛋白質(zhì)表達(dá)的影響的Westernblot檢測(cè)結(jié)果，
[0041]圖2c顯示了 siRNA對(duì)癌細(xì)胞SMMC-7721的survivin蛋白質(zhì)表達(dá)的影響的Westernblot檢測(cè)結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0042]下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例。下面通過(guò)參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
[0043]實(shí)施例1:化學(xué)合成的siRNA對(duì)survivin基因沉默效果的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
[0044]1.主要儀器、試劑和材料.[0045]1.1儀器:核酸合成儀(GE公司)、PCR儀(ABI公司);實(shí)時(shí)定量PCR儀(Bio-Rad)；細(xì)胞培養(yǎng)箱(Thermo)等。
[0046]1.2 材料和試劑=RFect siRNA 轉(zhuǎn)染試劑(BIO-TRAN)，DMEM 培養(yǎng)基(Gibco)，TurboCapture mRNA 試劑盒 (QIAGEN), SensiMix? one-step 試劑盒(Quantace)等。其他生化試劑均購(gòu)于上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司。
[0047]1-3PCR 引物:
[0048]survivin 正向引物:5' -cagtgtttcttctgcttcaagg-3'，
[0049]survivin 反向引物:5' -CTTTTTATGTTCCTCTATGGGGTC-3'，
[0050]GAPDH 正向引物；5' -CATCAGCAATGCCTCCTGCAC-3'，
[0051]GAPDH 反向引物:5' -TGAGTCCTTCCACGATACCAAAGTT-3'。
[0052]2.化學(xué)合成法制備siRNA
[0053]根據(jù)survivin基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)小分子干擾RNA(s_siRNA_l),具體序列如下:
[0054]正義鏈:5'-GCAUCUCUACAUUCAAGAAdTdT-3' (SEQ ID NO:3)，
[0055]反義鏈:5'-UUCUUGAAUGUAGAGAUGCdTdT-3' (SEQ ID NO:4)，
[0056]其中，“dT”表示脫氧胸腺嘧啶。
[0057]將該序列在人類EST數(shù)據(jù)庫(kù)中比對(duì)，確定沒(méi)有與它相同的其它基因序列。
[0058]3.沉默效率驗(yàn)證
[0059]3.1細(xì)胞培養(yǎng):癌細(xì)胞MGC-803和H印G2在含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基中，37°C、
5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
[0060]A549 和 SMMC-7721 在含 10% FBS 的 RPM1-1640 培養(yǎng)基中，37°C、5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
[0061]3.2細(xì)胞鋪板并轉(zhuǎn)染:將細(xì)胞按IXlO4 /孔接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)，在無(wú)雙抗含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)染按照RNAiMAX?的說(shuō)明書(shū)轉(zhuǎn)染，實(shí)驗(yàn)分為未轉(zhuǎn)染組、陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組(12.5nM、25nM、50nM)，其中陰性對(duì)照組siRNA為通用對(duì)照RNA,與survivin基因的序列無(wú)同源性,濃度為50nM /孔。同時(shí)分別轉(zhuǎn)染 MGC-803、Hep G2、A549 和 SMMC-7721 細(xì)胞。[0062]3.3實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)survivin基因mRNA水平:用mRNA提取純化試劑盒TurboCapture mRNA kit提取純化細(xì)胞RNA,操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,用80 μ L無(wú)RNA酶水/孔溶解RNA，取4 μ LRNA為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)。
[0063]用基因特異性引物檢測(cè)樣本中survivin mRNA表達(dá)水平，同時(shí)擴(kuò)增看家基因GAPDH作為內(nèi)參對(duì)照。每個(gè)反應(yīng)做3個(gè)平行。建立如下25 μ L反應(yīng)體系:4 μ L模板RNA，12.5 μ L2X SensiMix one-step，I μ L5'正向引物(6 μ Μ)，0.5 μ L50X SYBR Green I，用無(wú)RNA酶水補(bǔ)足體系至25 μ L。反應(yīng)條件:40°C反轉(zhuǎn)錄30min，95°C預(yù)變性7分，95°C變性20秒，60°C退火30秒，72°C延伸30秒，循環(huán)45次。
[0064]3.4結(jié)果分析:以GAPDH內(nèi)參，用實(shí)時(shí)定量PCR2-A Δ。'法確定survivin mRNA表達(dá)量，并作出柱狀圖，結(jié)果見(jiàn)圖1。如圖1各圖所示，縱坐標(biāo)表示survivin相對(duì)于GAPDH的mRNA表達(dá)水平；橫坐標(biāo)表示五個(gè)處理實(shí)驗(yàn)組，其中“未轉(zhuǎn)染”為未經(jīng)任何處理的細(xì)胞樣品，NC-siRNA為濃度為50nM的陰性對(duì)照，其他三組為本發(fā)明siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)組，濃度分別為
12.5nM、25nM、50nM。如圖1所示，a、b、C、d各圖分別顯示了 siRNA在癌細(xì)胞MGC-803、H印G2、A549和SMMC-7721里沉默survivin基因的效果，即轉(zhuǎn)染前后survivin的mRNA表達(dá)水平的變化，結(jié)果顯示本發(fā)明的siRNA靶標(biāo)survivin基因的沉默效果明顯。
[0065]實(shí)施例2:survivn基因沉默對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制情況
[0066]按照以下步驟，利用MTT法檢測(cè)實(shí)施例1中制備的siRNA分子s-siRNA_l對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制情況:
[0067]細(xì)胞的生長(zhǎng)情況通過(guò)MTT法進(jìn)行檢測(cè)。將細(xì)胞按I X IO4 /孔接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)，在無(wú)雙抗含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)染按照RNAiMAX?的說(shuō)明書(shū)轉(zhuǎn)染。接著37°C下孵育48h后，每孔加30μ--tΤ(5π^ / mL)，37°C下繼續(xù)孵育4h。吸取含有MTT的培養(yǎng)基，加入200 μ L 二甲基亞礬(DMSO)溶解甲攢晶體。然后，于492nm處測(cè)定其吸光度值。
[0068]小分子干擾RNA(s-siRNA-l)在25nM至IOOnM濃度，作用48小時(shí)后，MTT法檢測(cè)的對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率情況，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0069]表ls-siRNA-Ι作用于腫瘤細(xì)胞48小時(shí)的抑制率
[0070]
【權(quán)利要求】
1.一種雙鏈SiRNA分子，其特征在于，由具有下述核苷酸序列的正義鏈和反義鏈組成: 正義鏈:5' -GCAUCUCUACAUUCAAGAA-3' (SEQ ID NO:1)， 反義鏈:5' -UUCUUGAAUGUAGAGAUGC-3' (SEQ ID NO:2)。
2.一種雙鏈SiRNA分子，其特征在于，由具有下述核苷酸序列的正義鏈和反義鏈組成: 正義鏈:5' -GCAUCUCUACAUUCAAGAAX-3'， 反義鏈:5, -UUCUUGAAUGUAGAGAUGCX-3,， 其中X為tt、TT或UU，t代表脫氧胸腺嘧啶。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙鏈SiRNA分子，其特征在于，所述正義鏈和反義鏈序列中3'端的X為tt。
4.一種質(zhì)粒,其特征在于,所述質(zhì)粒包含權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的雙鏈siRNA分子的脫氧核糖核酸序列。
5.一種Survivin基因沉默試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含權(quán)利要求權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的雙鏈siRNA分子，或者權(quán)利要求4所述的質(zhì)粒。
6.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的siRNA分子、或者權(quán)利要求4所述的質(zhì)粒在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述`的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤為選自肝癌、肺癌、宮頸癌、膀胱癌、白血病、皮膚鱗癌、胃癌、結(jié)腸癌、多發(fā)性骨髓瘤、骨肉瘤和黑色素瘤中的至少一種。
8.一種抗腫瘤藥物，其特征在于，包含權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的雙鏈siRNA分子,或者權(quán)利要求4所述的質(zhì)粒。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物，其特征在于，所述藥物還包含藥學(xué)可接受的輔助劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物，其特征在于，所述腫瘤為選自肝癌、肺癌、宮頸癌、膀胱癌、白血病、皮膚鱗癌、胃癌、結(jié)腸癌、多發(fā)性骨髓瘤、骨肉瘤和黑色素瘤中的至少一種。
【文檔編號(hào)】C12N15/113GK103695420SQ201310545856
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】王天有, 余波, 唐鎖勤, 張曉敏, 張棪, 曲奎堯 申請(qǐng)人:首都兒科研究所, 杭州普施康生物科技有限公司, 中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院