原位雜交方法
【專利摘要】本發(fā)明提供原位雜交方法，包括以下步驟：(a)原位雜交系統(tǒng)中的主控板根據(jù)原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制所述原位雜交系統(tǒng)中的蠕動(dòng)泵從原位雜交系統(tǒng)中的清洗液體罐中將選取的清洗液體泵入原位雜交系統(tǒng)中的雜交盒；(b)主控板根據(jù)原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制原位雜交系統(tǒng)中的雜交盒的搖動(dòng)；(c)主控板根據(jù)原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制蠕動(dòng)泵將雜交盒中的廢液泵入原位雜交系統(tǒng)中的廢液罐中；以及(d)主控板根據(jù)原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制雜交盒中的溫度。本發(fā)明的原位雜交方法可以自動(dòng)實(shí)現(xiàn)整體胚胎雜交過程，并且實(shí)現(xiàn)原位雜交實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化、可重復(fù)性和高通量。
【專利說明】原位雜交方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種雜交方法，尤其是一種原位雜交方法。

【背景技術(shù)】
[0002]斑馬魚、爪蟾和小鼠等模式生物的使用正逐漸拓展并深入到生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，例如:發(fā)育生物學(xué)(包括神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、器官發(fā)育等)、細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)等生物技術(shù)的開發(fā)，以及與人類生命息息相關(guān)的疾病(包括神經(jīng)退行性疾病、遺傳性心血管疾病、糖尿病等)模型、疾病機(jī)理的研究和治療。這些模式生物已廣泛應(yīng)用于小分子化合物的大規(guī)模新藥篩選，為生命科學(xué)的進(jìn)步與人類健康和持續(xù)發(fā)展奠定基礎(chǔ)。
[0003]原位雜交技術(shù)從RNA水平檢測基因的表達(dá)水平和表達(dá)部位，免疫組化和蛋白印跡雜交等基本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)則來檢測蛋白水平變化，這些都是生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中檢測基因及其產(chǎn)物時(shí)空表達(dá)特異性的基本技術(shù)和有力手段。這些基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于發(fā)育生物學(xué)、解剖學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、進(jìn)化生物學(xué)、分子生物學(xué)、生物技術(shù)開發(fā)、免疫學(xué)以及癌癥和干細(xì)胞等的研究，并為這些領(lǐng)域的發(fā)展與進(jìn)步提供了巨大的幫助。
[0004]雖然原位雜交技術(shù)是一種常用的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)，但是該技術(shù)步驟冗長而復(fù)雜，耗時(shí)耗力，每一次實(shí)驗(yàn)往往需要幾天的時(shí)間，其中包括很多簡單但又重復(fù)的清洗和孵育過程。而且傳統(tǒng)的人工操作模式又存在枯燥繁瑣、耗時(shí)耗力等缺點(diǎn)。因此，上述傳統(tǒng)的手工操作模式很難保證全部試驗(yàn)過程的一致性，往往會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度和可信度。此外，現(xiàn)有的一些原位雜交方法，主要針對(duì)切片或膜雜交進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，無法應(yīng)用在整體胚胎上。
[0005]綜上所述，現(xiàn)有的原位雜交技術(shù)具有以下缺點(diǎn):(1)核酸原位雜交的步驟多、時(shí)間長、容易出錯(cuò)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定；(2)在整體胚胎的實(shí)驗(yàn)過程中，重復(fù)勞動(dòng)多，胚胎易破碎；
(3)雜交需要配備專用雜交爐，占用空間大，控制條件復(fù)雜；(4)很難實(shí)現(xiàn)高通量；以及(5)現(xiàn)有自動(dòng)化儀器無法實(shí)現(xiàn)自動(dòng)換液。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明旨在解決上面描述的問題。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種解決以上問題中的任何一個(gè)的原位雜交方法。具體地，本發(fā)明提供一種原位雜交方法，以自動(dòng)實(shí)現(xiàn)整體胚胎雜交過程，并且實(shí)現(xiàn)原位雜交實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化、可重復(fù)性和高通量。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種原位雜交方法，所述方法包括以下步驟:(a)原位雜交系統(tǒng)中的主控板根據(jù)原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制所述原位雜交系統(tǒng)中的蠕動(dòng)泵從所述原位雜交系統(tǒng)中的清洗液體罐中將選取的清洗液體泵入所述原位雜交系統(tǒng)中的雜交盒；(b)所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制所述原位雜交系統(tǒng)中的雜交盒的搖動(dòng)；(C)所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制所述蠕動(dòng)泵將所述雜交盒中的廢液泵入所述原位雜交系統(tǒng)中的廢液罐中；以及(d)所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制所述雜交盒中的溫度。
[0008]此外，所述方法在所述步驟(a)之前還包括:所述主控板通過其上的通信接口模塊將所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序下載到所述主控板上。
[0009]此外，所述方法重復(fù)執(zhí)行所述步驟(a) - (C)，直至所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序完成對(duì)胚胎的所有清洗操作。
[0010]此外，所述方法在所述步驟(a)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序通過控制插入在所述清洗液體罐中的導(dǎo)管上的閥門的開啟與閉合來將選取的清洗液體泵入所述雜交盒中。
[0011]此外，所述方法在所述步驟(b)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序通過所述原位雜交系統(tǒng)中搖床裝置控制所述雜交盒的搖動(dòng)。
[0012]此外，所述方法在步驟(C)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序通過控制插入在所述廢液罐中的導(dǎo)管上的閥門的開啟與閉合來將所述雜交盒中的廢液泵入所述廢液te中。
[0013]此外，所述方法在步驟(d)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序通過控制所述原位雜交系統(tǒng)中的溫控裝置來控制所述雜交盒中的溫度。
[0014]此外，所述主控板控制所述溫控裝置通過所述原位雜交系統(tǒng)中的搖床裝置進(jìn)行熱傳導(dǎo)來控制所述雜交盒中的溫度。
[0015]此外，所述方法還包括:操作者通過所述主控板調(diào)整所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序。
[0016]此外，所述方法還包括:所述主控板顯示原位雜交實(shí)驗(yàn)的當(dāng)前狀態(tài)。
[0017]采用本發(fā)明的自動(dòng)核酸原位雜交方法，通過主控板對(duì)清洗液體導(dǎo)管上的閥門以及廢液導(dǎo)管上的閥門的控制，自動(dòng)實(shí)現(xiàn)不同清洗液體的選擇以及廢液的排出；通過主控板對(duì)蠕動(dòng)泵的控制，可以精密控制各種清洗液體的精確用量；通過主控板對(duì)搖床裝置的控制，可以使清洗液體與胚胎充分接觸，實(shí)現(xiàn)徹底地清洗；以及通過主控板對(duì)溫控裝置的控制，可以自動(dòng)設(shè)定精確的反應(yīng)溫度。
[0018]因此，采用本發(fā)明的技術(shù)方案，可以自動(dòng)實(shí)現(xiàn)整體胚胎雜交過程，并且實(shí)現(xiàn)原位雜交實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化、可重復(fù)性和高通量。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]并入到說明書中并且構(gòu)成說明書的一部分的附圖示出了本發(fā)明的實(shí)施例，并且與描述一起用于解釋本發(fā)明的原理。在這些附圖中，類似的附圖標(biāo)記用于表示類似的要素。下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實(shí)施例，而不是全部實(shí)施例。對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0020]圖1是根據(jù)本發(fā)明的自動(dòng)核酸原位雜交方法的流程圖。

【具體實(shí)施方式】
[0021]為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，下文中將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說明。需要說明的是，在不沖突的情況下，本申請(qǐng)中的實(shí)施例及實(shí)施例中的特征可以相互任意組合。
[0022]根據(jù)本發(fā)明的原位雜交方法，原位雜交系統(tǒng)中的主控板根據(jù)其中存儲(chǔ)的原位雜交實(shí)驗(yàn)程序，控制原位雜交系統(tǒng)中的蠕動(dòng)泵從原位雜交系統(tǒng)的清洗液體罐中將選取的清洗液體泵入原位雜交系統(tǒng)的雜交盒中；接著主控板控制雜交盒進(jìn)行搖動(dòng)；然后主控板控制蠕動(dòng)泵將雜交盒中的廢液泵入原位雜交系統(tǒng)的廢液罐中；主控板還控制雜交盒中的溫度。
[0023]下面詳細(xì)描述根據(jù)本發(fā)明的原位雜交方法。
[0024]參照?qǐng)D1所示，在步驟11，原位雜交系統(tǒng)中的主控板根據(jù)其中存儲(chǔ)的原位雜交實(shí)驗(yàn)程序，控制原位雜交系統(tǒng)中的蠕動(dòng)泵從原位雜交系統(tǒng)的清洗液體罐中將選取的清洗液體泵入原位雜交系統(tǒng)的雜交盒中。在步驟12，主控板控制雜交盒進(jìn)行搖動(dòng)。在步驟13，主控板控制蠕動(dòng)泵將雜交盒中的廢液泵入原位雜交系統(tǒng)的廢液罐中。在步驟14，主控板還控制雜交盒中的溫度。
[0025]具體地，在步驟11中，主控板根據(jù)原位雜交實(shí)驗(yàn)程序中各種清洗液體的用量要求控制蠕動(dòng)泵在泵取每種液體時(shí)的次數(shù)和速度。例如在核酸原位雜交實(shí)驗(yàn)中，有10種清洗液體，主控板控制蠕動(dòng)泵在不同的階段以需要的次數(shù)和速度分別泵取這10種清洗液體，對(duì)胚胎進(jìn)行清洗操作。
[0026]在清洗液體注入雜交盒后，為了實(shí)現(xiàn)更好的清洗效果，在步驟12中，主控板控制雜交盒進(jìn)行搖動(dòng)。這可以通過主控板控制原位雜交系統(tǒng)中的搖床裝置搖動(dòng)來實(shí)現(xiàn)。在原位雜交系統(tǒng)中，雜交盒被置于搖床裝置上，當(dāng)主控板控制搖床裝置搖動(dòng)時(shí)，雜交盒也隨之搖動(dòng)，以使胚胎與清洗液體充分接觸，實(shí)現(xiàn)更好的清洗效果。主控板根據(jù)原位雜交實(shí)驗(yàn)程序，可以通過控制搖床裝置搖動(dòng)的幅度和頻率來使得雜交盒搖動(dòng)。
[0027]胚胎在雜交盒中被清洗之后，在步驟13中，主控板控制蠕動(dòng)泵將雜交盒中的廢液排出到廢液罐中。當(dāng)完成所有的清洗操作后，在步驟14中，主控板根據(jù)原位雜交實(shí)驗(yàn)程序通過控制原位雜交系統(tǒng)中溫控裝置的操作來控制雜交盒中的溫度，給胚胎提供合適的孵育條件。在原位雜交系統(tǒng)中，溫控裝置緊貼搖床裝置的底部放置，通過搖床裝置控制雜交盒內(nèi)的溫度。因此，搖床裝置采用可傳遞熱量的材料制成，如鋁合金。這樣，當(dāng)溫控裝置需要使雜交盒增加或降低溫度時(shí)，直接通過搖床裝置進(jìn)行熱傳導(dǎo)就可以實(shí)現(xiàn)。這樣，主控板控制溫控裝置通過搖床裝置進(jìn)行熱傳導(dǎo)來控制雜交盒的溫度。
[0028]根據(jù)本發(fā)明的原位雜交方法在步驟11之前還可以包括通過主控板上的通信接口模塊將實(shí)驗(yàn)所用的原位雜交實(shí)驗(yàn)程序下載到主控板上，從而主控板可以根據(jù)其上存儲(chǔ)的原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制蠕動(dòng)泵的泵取、搖床裝置的搖動(dòng)以及溫控裝置的操作。
[0029]此外，為了實(shí)現(xiàn)更好的清洗效果，往往在原位雜交實(shí)驗(yàn)中，需要使用多種清洗液體對(duì)胚胎進(jìn)行多次清洗。這樣，就需要重復(fù)上述步驟11、12、13，直至使用多種清洗液體對(duì)胚胎完成所有清洗操作為止。例如，在核酸原位雜交實(shí)驗(yàn)中，需要使用10中清洗液體分別對(duì)胚胎進(jìn)行清洗，這樣，就需要重復(fù)10次步驟11-13。
[0030]此外，在步驟11中，為了使得清洗液體在蠕動(dòng)泵的作用下按需要進(jìn)入雜交盒，主控板還需要根據(jù)原位雜交實(shí)驗(yàn)程序來控制插入在所述清洗液體罐中的導(dǎo)管上的閥門的開啟與閉合來將選取的清洗液體泵入所述雜交盒中。當(dāng)主控板根據(jù)雜交實(shí)驗(yàn)程序判斷需要選取一種清洗液體清洗胚胎時(shí)，就控制連接所需清洗液體的導(dǎo)管上的閥門開啟，連接其他清洗液體的導(dǎo)管上的閥門以及連接廢液槽的導(dǎo)管上的閥門閉合。這樣所選取的清洗液體就可以通過開啟的閥門在蠕動(dòng)泵的作用下進(jìn)入原位雜交系統(tǒng)的雜交盒的換液槽中。當(dāng)然，根據(jù)雜交試驗(yàn)程序的需要,主控板也可以控制連接多種清洗液體的導(dǎo)管上的多個(gè)閥門同時(shí)開啟，以同時(shí)將該多種清洗液體注入原位雜交系統(tǒng)的雜交盒的換液槽中。
[0031]并且，在步驟13中，當(dāng)主控板根據(jù)雜交實(shí)驗(yàn)的程序判斷需要從原位雜交系統(tǒng)的雜交盒的換液槽中排出廢液時(shí)，就控制連接廢液槽的導(dǎo)管上的閥門開啟，連接所有清洗液體的導(dǎo)管上的閥門都閉合。這樣換液槽中的廢液就在蠕動(dòng)泵的作用下通過那個(gè)開啟的閥門進(jìn)入廢液槽。
[0032]此外，在根據(jù)本發(fā)明的原位雜交方法中，操作者可以通過鍵盤和與該鍵盤進(jìn)行通信的主控板上的鍵盤接口模塊，來調(diào)整主控板上的原位雜交實(shí)驗(yàn)程序，從而使得原位雜交實(shí)驗(yàn)?zāi)軌虬凑詹僮髡叩男枰M(jìn)行。需要說明的是，操作者對(duì)原位雜交實(shí)驗(yàn)程序的調(diào)整可以在上述步驟11-14中的任何一個(gè)步驟之前或之中進(jìn)行。
[0033]此外，根據(jù)本發(fā)明的原位雜交方法還包括在主控板上顯示原位雜交實(shí)驗(yàn)的當(dāng)前狀態(tài)。其中主控板包括LCD顯示模塊，主控板根據(jù)原位雜交實(shí)驗(yàn)程序以及其對(duì)原位雜交實(shí)驗(yàn)進(jìn)程的控制，在LCD顯示模塊上顯示原位雜交實(shí)現(xiàn)的當(dāng)前狀態(tài)，例如當(dāng)前的閥門開啟和閉合狀態(tài)、當(dāng)前蠕動(dòng)泵工作狀態(tài)、當(dāng)前搖床裝置工作狀態(tài)，以及當(dāng)前的實(shí)驗(yàn)溫度。
[0034]需要說明是，上述原位雜交方法中的步驟的具體操作可以均包括在原位雜交方法中，以構(gòu)成一個(gè)整體的方法進(jìn)行原位雜交實(shí)驗(yàn)。
[0035]采用本發(fā)明的自動(dòng)核酸原位雜交方法，通過主控板對(duì)清洗液體導(dǎo)管上的閥門以及廢液導(dǎo)管上的閥門的控制，自動(dòng)實(shí)現(xiàn)不同清洗液體的選擇；通過主控板對(duì)蠕動(dòng)泵的控制，可以精密控制各種清洗液體的精確用量；通過主控板對(duì)溫控裝置的控制，可以自動(dòng)設(shè)定精確的反應(yīng)溫度；以及通過主控板對(duì)搖床裝置的控制，可以使清洗液體與胚胎充分接觸，實(shí)現(xiàn)徹底地清洗。
[0036]以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，僅僅參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
【權(quán)利要求】
1.一種原位雜交方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: (^)原位雜交系統(tǒng)中的主控板根據(jù)原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制所述原位雜交系統(tǒng)中的蠕動(dòng)泵從所述原位雜交系統(tǒng)中的清洗液體罐中將選取的清洗液體泵入所述原位雜交系統(tǒng)中的雜交盒； (^)所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制所述原位雜交系統(tǒng)中的雜交盒的搖動(dòng)； (0)所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制所述蠕動(dòng)泵將所述雜交盒中的廢液泵入所述原位雜交系統(tǒng)中的廢液罐中； ((1)所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序控制所述雜交盒中的溫度。
2.如權(quán)利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法在所述步驟仏)之前還包括: 所述主控板通過其上的通信接口模塊將所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序下載到所述主控板上。
3.如權(quán)利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法重復(fù)執(zhí)行所述步驟-((:),直至所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序完成對(duì)胚胎的所有清洗操作。
4.如權(quán)利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法在所述步驟仏)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序通過控制插入在所述清洗液體罐中的導(dǎo)管上的閥門的開啟與閉合來將選取的清洗液體泵入所述雜交盒中。
5.如權(quán)利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法在所述步驟$)中包括: 所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序通過所述原位雜交系統(tǒng)中搖床裝置控制所述雜交盒的搖動(dòng)。
6.如權(quán)利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法在步驟化)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序通過控制插入在所述廢液罐中的導(dǎo)管上的閥門的開啟與閉合來將所述雜交盒中的廢液泵入所述廢液罐中。
7.如權(quán)利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法在步驟((1)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序通過控制所述原位雜交系統(tǒng)中的溫控裝置來控制所述雜交盒中的溫度。
8.如權(quán)利要求7所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述主控板控制所述溫控裝置通過所述原位雜交系統(tǒng)中的搖床裝置進(jìn)行熱傳導(dǎo)來控制所述雜交盒中的溫度。
9.如權(quán)利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法還包括:操作者通過所述主控板調(diào)整所述原位雜交實(shí)驗(yàn)程序。
10.如權(quán)利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法還包括:所述主控板顯示原位雜交實(shí)驗(yàn)的當(dāng)前狀態(tài)。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK104450873SQ201310549114
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2013年11月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月8日
【發(fā)明者】劉劍勤 申請(qǐng)人:直方隆生物科技(北京)有限公司