一種羅非魚親子鑒定的方法
【專利摘要】本發(fā)明公布了一種羅非魚親子鑒定的方法，包括以下步驟：（1）采集待鑒別的羅非魚樣品，提取基因組DNA；（2）用步驟（1）獲得的基因組DNA為模板，選用9對微衛(wèi)星引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；（3）對步驟（2）的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測；（4）將電泳結(jié)果進(jìn)行數(shù)字化處理，用遺傳分析軟件進(jìn)行分析，獲得每個個體之間的遺傳距離，進(jìn)行聚類分析，根據(jù)個體聚類結(jié)果，進(jìn)行親子關(guān)系鑒定。本發(fā)明可以快速準(zhǔn)確地對羅非魚進(jìn)行親子鑒定，區(qū)分不同家系，在羅非魚家系選育中有很大的應(yīng)用價值。
【專利說明】—種羅非魚親子鑒定的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于魚類分子標(biāo)記【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種羅非魚親子鑒定的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]羅非魚(Tilapia)原產(chǎn)于非洲，該魚上世紀(jì)50年代引入我國，得到了較快發(fā)展，現(xiàn)在我國已是世界上最大的羅非魚生產(chǎn)國和出口國。目前，家系選育是廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)育種中的一個方法。選一對親本配組繁殖，得到的后代就是一個家系，用這種方法構(gòu)建多個家系，再通過養(yǎng)殖對比試驗(yàn)，分析各家系的生長、性別比例、抗逆等性狀。由于羅非魚性腺發(fā)育不同步，一對一配組繁殖獲得家系成功率較低，因此常用多尾親本如I雄多雌或多雄I雌的方法來提高構(gòu)建家系的成功率，這就需要對后代進(jìn)行親子鑒定來確定它們的父本和母本。另外，在養(yǎng)殖對比試驗(yàn)中，為減少環(huán)境的影響，常常將不同家系的魚放在同一池塘中養(yǎng)殖，這樣也需要進(jìn)行親子鑒定來區(qū)別不同的家系。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種羅非魚親子鑒定的方法，有助于快速、準(zhǔn)確對羅非魚進(jìn)行親子鑒定和家系區(qū)分。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0005]一種羅非魚親子鑒定的方法，包括以下步驟:
[0006](I)采集待鑒別的羅非魚的血液、鰭條或其他組織樣品，采用DNA提取法提取基因組 DNA ；
[0007](2)用步驟(1)獲得的基因組DNA為模板，選用9個微衛(wèi)星引物進(jìn)行PCR
[0008]擴(kuò)增，這9對特異微衛(wèi)星引物名稱和序列列表如下；
【權(quán)利要求】
1.一種羅非魚親子鑒定的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)采集待鑒別的羅非魚樣品的血樣或鰭條，提取基因組DNA; (2)用步驟(1)獲得的基因組DNA為模板，選用9個微衛(wèi)星引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，這9對特異微衛(wèi)星引物名稱和序列列表如下:正向引物DNA序列~反向引物DNA序列~退火溫
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述步驟(2)中，在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，PCR反應(yīng)總體積為10 μ L，其中含IOX反應(yīng)緩沖液1.0μ L,Mg2+2mmol/L,dNTP200ymol/L,上下游引物各0.2 μ mol/L, Taq酶0.3U, DNA50ng~80ng,用滅菌雙蒸懼水補(bǔ)足體積。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，PCR反應(yīng)條件為:94°C3min ；94°C 20s，退火 20s，72°C 20s, 25 ~30 個循環(huán)；72°C延伸 5min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，使用的遺傳分析軟件為populations 軟件和 MEGA3.1 軟件。
【文檔編號】C12Q1/68GK103555847SQ201310549480
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】李建林, 俞菊華, 唐永凱, 李紅霞, 徐跑 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心