褐藻膠寡糖的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，公開(kāi)了一種褐藻膠寡糖的應(yīng)用。本發(fā)明試驗(yàn)結(jié)果表明，褐藻膠酶解寡糖直接作用于細(xì)菌不產(chǎn)生抑制細(xì)菌生長(zhǎng)效果，但是褐藻膠酶解寡糖可提高人巨噬細(xì)胞THP-1對(duì)異物的吞噬能力，而且對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7誘導(dǎo)刺激后，F(xiàn)-actin表達(dá)量增加，細(xì)胞形態(tài)由圓形向梭形變化、長(zhǎng)寬比增大。GOM刺激THP-1和RAW264.7細(xì)胞后，可以明顯增強(qiáng)其對(duì)外來(lái)微生物的殺傷作用。小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也表明，GOM能顯著誘導(dǎo)小鼠腹水免疫細(xì)胞數(shù)目的增加，增強(qiáng)小鼠對(duì)體內(nèi)微生物的清除能力。因此，將褐藻膠寡糖用于制備促進(jìn)巨噬細(xì)胞活性的藥物和保健品具有廣闊的前景。
【專利說(shuō)明】褐藻膠寡糖的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及褐藻膠寡糖用于制備促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬活性的藥物和保健品的新應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]褐藻膠是由互為C5差向異構(gòu)體的兩種單體——甘露糖醛酸和古羅糖醛酸相互嵌合而成的線性大分子。寡糖 是由2-10個(gè)單糖經(jīng)脫水縮合形成糖苷鍵連接成直鏈或支鏈的低聚糖，其水溶性好，易被吸收。褐藻膠寡糖具有抗氧化、抗凝血、降血脂等多種生物活性，但尚未發(fā)現(xiàn)褐藻膠寡糖用于促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供褐藻膠寡糖制備促進(jìn)巨噬細(xì)胞活性藥物和保健品的新應(yīng)用，所述褐藻膠寡糖制備的藥物和保健品能有效促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬微生物的活性。
[0004]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為:提供褐藻膠寡糖的應(yīng)用，將所述褐藻膠寡糖用于制備促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬活性的藥物或保健品。
[0005]進(jìn)一步地，所述褐藻膠寡糖為褐藻酸鈉經(jīng)褐藻膠裂解酶酶解制得。
[0006]進(jìn)一步地，將所述褐藻膠寡糖用于制備抗腫瘤的藥物或保健品。
[0007]進(jìn)一步地，將所述褐藻膠寡糖用于制備抗菌的藥物或保健品。
[0008]進(jìn)一步地，將所述褐藻膠寡糖用于制備抗病毒的藥物或保健品。
[0009]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)褐藻膠酶解寡糖具有可促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬活性的作用，并提供將褐藻膠酶解寡糖用于制備促進(jìn)巨噬細(xì)胞活性的應(yīng)用。本發(fā)明大量試驗(yàn)結(jié)果表明，褐藻膠酶解寡糖作用于巨噬細(xì)胞可促進(jìn)其活性，提高其對(duì)外來(lái)微生物的吞噬及殺傷能力，將褐藻膠寡糖用于制備促進(jìn)巨噬細(xì)胞活性的藥物或保健品具有廣闊的前
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【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010]圖1是褐藻膠酶解寡糖對(duì)THP-1細(xì)胞吞噬能力的影響圖；
[0011]圖2是褐藻膠酶解寡糖對(duì)經(jīng)IgG調(diào)理及未經(jīng)IgG調(diào)理的THP-1細(xì)胞吞噬作用的影響圖；
[0012]圖3是激光共聚焦顯微鏡所觀察到的RAW264.7細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)圖(注:圖3A為陰性對(duì)照Ctrl組；圖3B為GOM處理組；圖3C為PG處理組)；
[0013]圖4是實(shí)施例3中不同處理組RAW264.7細(xì)胞長(zhǎng)寬比變化圖；
[0014]圖5是實(shí)施例3中不同處理組RAW264.7細(xì)胞面積變化圖；
[0015]圖6是實(shí)施例3中不同處理組RAW264.7細(xì)胞的熒光強(qiáng)度變化圖；
[0016]圖7是褐藻膠酶解寡糖作用于THP-1細(xì)胞影響吞噬金黃色葡萄球菌存活率的變化圖；
[0017]圖8為褐藻膠酶解寡糖作用于RAW264.7細(xì)胞影響吞噬金黃色葡萄球菌存活率的變化圖；
[0018]圖9是實(shí)施例6褐藻膠酶解寡糖作用于小鼠腹水上清液中菌落數(shù)比較圖；
[0019]圖10是實(shí)施例6褐藻膠酶解寡糖作用于小鼠腹水貼壁細(xì)胞的吞噬菌落數(shù)比較圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020]為了使本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0021]實(shí)施例1褐藻膠寡糖的制備
[0022]將褐藻酸鈉經(jīng)HCl水解分級(jí)，通過(guò)調(diào)pH至2.85，得到純度較高的聚甘露糖醛酸(PM)和聚古羅糖醛酸(PG)。分別加入適量的褐藻膠裂解酶，于37°C恒溫反應(yīng)過(guò)夜，通過(guò)加熱終止酶解反應(yīng)后，冷卻酶解液，用0.45 μ m濾膜過(guò)濾，凍干備用。PM的酶解產(chǎn)物為甘露糖醛酸寡糖混合物，簡(jiǎn)稱MOM ；PG的酶解產(chǎn)物即古羅糖醛酸寡糖混合物，簡(jiǎn)稱G0M。
[0023]實(shí)施例2褐藻膠寡糖直接抑菌作用測(cè)試
[0024]采用瓊脂擴(kuò)散法中的打孔法，通過(guò)觀察抑菌圈的大小來(lái)考察褐藻膠寡糖的抑菌效果。配制濃度分別為0.1%、0.5%、1%的MOM、GOM三種樣品溶液，用無(wú)菌水作為空白對(duì)照，用氨芐青霉素作為陽(yáng)性對(duì)照。取500 μ I活化菌液(菌種選取:金黃色葡萄球菌(G+)和大腸桿菌(G_))加入到100ml滅菌的LB培養(yǎng)基中，迅速搖勻后倒入培養(yǎng)皿中，同時(shí)用打孔器打孔。待培養(yǎng)基冷卻凝固后，取微量培養(yǎng)基均勻的鋪在洞孔底部。取100μ I各樣品溶液加樣于洞孔中，置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察抑菌圈檢測(cè)抑菌效果。
[0025]測(cè)量抑菌圈，見(jiàn)表1，褐藻膠酶解寡糖MOM和GOM對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌都沒(méi)有產(chǎn)生明顯的抑菌圈，所以都沒(méi)有直接體外抑菌活性。
[0026]表1褐藻膠寡糖對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的作用觀察
[0027]
【權(quán)利要求】
1.褐藻膠寡糖的應(yīng)用，其特征在于，將所述褐藻膠寡糖用于制備促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬活性的藥物或保健品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述褐藻膠寡糖的應(yīng)用，其特征在于，所述褐藻膠寡糖為褐藻酸鈉經(jīng)褐藻膠裂解酶酶解制得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述褐藻膠寡糖的應(yīng)用，其特征在于，將所述褐藻膠寡糖用于制備抗腫瘤的藥物或保健品。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述褐藻膠寡糖的應(yīng)用，其特征在于，將所述褐藻膠寡糖用于制備抗菌的藥物或保健品。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述褐藻膠寡糖的應(yīng)用，其特征在于，將所述褐藻膠寡糖用于制備抗病毒的藥物或保健品。
【文檔編號(hào)】C12P19/00GK103565817SQ201310556900
【公開(kāi)日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2013年11月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月11日
【發(fā)明者】續(xù)旭, 畢德成, 魏高斌, 李超, 吳小婷, 萬(wàn)敏 申請(qǐng)人:深圳大學(xué)