一種原位判定混合釀造體系中風(fēng)味功能微生物的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種原位判定混合釀造體系中風(fēng)味功能微生物的方法，屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明主要包括以下步驟：（1）通過酵母26S?rDNA?D1/D2區(qū)PCR-DGGE指紋圖譜分析確定發(fā)酵過程酵母群落結(jié)構(gòu)；（2）測定不同發(fā)酵過程揮發(fā)性產(chǎn)物；（3）主成分分析方法比較不同發(fā)酵過程酵母群落結(jié)構(gòu)與風(fēng)味輪廓差異；（4）偏最小二乘法回歸分析建立揮發(fā)性產(chǎn)物譜圖與酵母數(shù)據(jù)之間的聯(lián)系，確定酵母原位代謝特征、功能酵母。將所得風(fēng)味功能微生物添加到釀造食品發(fā)酵系統(tǒng)中提高產(chǎn)品品質(zhì)。本發(fā)明可應(yīng)用于發(fā)酵食品中酵母原位代謝特征分析，確定酵母對發(fā)酵食品風(fēng)味的影響，判定食品自然混合釀造體系中的風(fēng)味功能酵母，為調(diào)控和優(yōu)化自然發(fā)酵食品微生態(tài)系統(tǒng)的功能提供指導(dǎo)。
【專利說明】一種原位判定混合釀造體系中風(fēng)味功能微生物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種原位判定混合釀造體系中風(fēng)味功能微生物的方法，屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]自然微生態(tài)系統(tǒng)在發(fā)酵食品生產(chǎn)部門中具有重要地位，酵母群落在白酒、干酪、酸奶、酒釀等多個エ業(yè)部門中都具有重要的用途。這些傳統(tǒng)食品生產(chǎn)エ業(yè)是我國傳統(tǒng)優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)之一，歷史悠久、文化底蘊深厚，是國民經(jīng)濟發(fā)展中增長最快、最具活力的產(chǎn)業(yè)之一。傳統(tǒng)發(fā)酵食品釀造エ藝往往比較復(fù)雜，包括若干個エ藝階段或者若干個エ藝組成部分。比如說茅臺酒的釀造エ藝一年ー個周期，投料兩次，總共要經(jīng)過八次發(fā)酵，八次蒸酒。在整個釀造過程中，酵母群落的活動會改變系統(tǒng)中的物理、化學(xué)參數(shù)以及營養(yǎng)的組成，從而影響下ー次發(fā)酵時的酵母群落結(jié)構(gòu)組成，因此酵母群落的時空演替貫穿于整個自然發(fā)酵食品發(fā)酵過程。酵母群落結(jié)構(gòu)的時空演替不斷進行，使毎次發(fā)酵后得到的產(chǎn)品質(zhì)感完全不同。酵母群落結(jié)構(gòu)決定了最終發(fā)酵食品的品質(zhì)，因此對于不同發(fā)酵階段酵母群落時空演替的分析，以及酵母原位功能的分析，能夠使我們在系統(tǒng)的水平上對整個エ藝進行優(yōu)化和調(diào)控，并在發(fā)酵食品品質(zhì)出現(xiàn)問題時對品質(zhì)發(fā)生變化的原因進行分析。同時，認識微生物在自然釀造中的原位功能，對于在生產(chǎn)中去強化有用的功能菌株，對于提高白酒品質(zhì)具有重要的意義。但是，目前沒有酵母原位功能分析的任何報道，目前認識酵母功能的方法主要通過菌株分離后逐一進行功能測定的方法盡管能初歩認識菌株的功能，但是由于單ー菌株培養(yǎng)條件無法完全模擬混合微生物自然發(fā)酵條件，所測定的體外功能與自然釀造體系中微生物的原位功能是不相同的，因此，這種錯誤的判斷使我們對微生物在生產(chǎn)中的功能會造成誤導(dǎo)，從而無法有效判定功能菌株，也無法有效應(yīng)用功能菌株。
[0003]目前關(guān)于自然釀造 體系中，如白酒中微生物的研究主要在分析微生物的菌群結(jié)構(gòu)，例如，Xiao-Ran Li等人使用ITSl區(qū)域的16S rRNA基因克隆庫結(jié)合qPCR技術(shù)對汾酒釀造過程的微生物群落的時間演替進行了描述。但是，該文獻沒有提出方法對酵母群落演替模式進行深入分析尋找決定白酒品質(zhì)的關(guān)鍵酵母。趙立平等人建立了ー種工程化微生態(tài)系統(tǒng)運行狀態(tài)診斷方法，該方法比較正常系統(tǒng)與故障系統(tǒng)之間群落演替模式差別，找出了正常和故障系統(tǒng)中差異的微生物，但是通過簡單的比較正常系統(tǒng)與故障系統(tǒng)微生物組成的差別，無法判斷在自然原位發(fā)酵過程中不同微生物生成的揮發(fā)性產(chǎn)物對食品風(fēng)味的影響。
[0004]本發(fā)明g在提供ー種適合于自然釀造體系中微生物原位功能的方法，利用原位的方法判定食品自然混合釀造體系中風(fēng)味功能酵母。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種原位判定混合釀造體系中風(fēng)味功能微生物的方法。通過分析白酒發(fā)酵過程不同時間酵母群落及揮發(fā)性產(chǎn)物時空演替的差別，以及不同種類酵母與揮發(fā)性產(chǎn)物關(guān)系的確立，來確定白酒釀造微生態(tài)中關(guān)鍵優(yōu)良酵母。[0006]所述方法主要包括以下步驟:
[0007](I)基于酵母26S rDNA D1/D2區(qū)PCR-DGGE指紋圖譜分析確定發(fā)酵過程酵母群落結(jié)構(gòu)；
[0008]所述指紋圖譜分析是提取白酒釀造ー輪次不同時間點的酒醅樣品中的基因組DNA，進行26S rDNA D1/D2區(qū)PCR，并通過DGGE指紋圖譜分析所有樣品的酵母群落結(jié)構(gòu)；所述26S rDNA D1/D2 區(qū)PCR分兩步，第一歩PCR體系包括:引物NLl (5’_GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’)和 NL4 (5 ’-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3 ’)各 6.25pmol，dNTP5mmol，模板 DNAlOng，Taq DNA聚合酶IU以及配套I Xbuffer及50mmol MgCl2 ;擴增程序為:94°C預(yù)變性3分鐘，然后94°C變性I分鐘，50°C退火2分鐘，72°C延伸I分鐘，共進行30個循環(huán)，最后72°C延伸10分鐘；采用UVI band/map軟件對條帶的遷移位置和亮度進行分析。
[0009]所述的26S rDNA D1/D2區(qū)PCR擴增第二步反應(yīng)體系如下:引物GC_NL1(5’_CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCCATATCAATAAGC-3’)和 LS2 (5 ’-ATTCCCAAACAACTCGACTC-3 ”)各 6.25pmol, dNTP5mmol,模板 DNAlOng, Taq DNA 聚合酶 IU 以及配套 I Xbuffer 及 50mmolMgCl2 ;擴增程序同第一步反應(yīng)；采用UVIband/map軟件對條帶的遷移位置和亮度進行分析。
[0010](2)通過主成分載量分析找到在群落演替中起著重要作用的DGGE條帶，鑒定其代表的酵母種群；
[0011]主成分分析確定對酵母群落時空演替差異顯著的酵母DGGE條帶，從原始凝膠上將重要條帶分離下來，用相應(yīng)引物進行擴増，按步驟(1)中所述方法進行PCR、測序，將DNA序列提交數(shù)據(jù)庫進行比對，確定所對應(yīng)的種屬。
[0012](3)測定不同窖池酒醅揮發(fā)性產(chǎn)物，對揮發(fā)性產(chǎn)物演替軌跡作主成分分析，比較不同過程風(fēng)味輪廓差異；
[0013]測定發(fā)酵過程不同時間點酒醅樣品的揮發(fā)性產(chǎn)物，具體為:5g樣品與20mL無菌生理鹽水混合，添加1%的CaCl2粉末，浸泡過夜；超聲30分鐘后離心，上清液用0.22 ii m的無機膜過濾，濾液用GC-MS分析揮發(fā)性產(chǎn)物。
[0014]對所有樣品中的揮發(fā)性產(chǎn)物半定量數(shù)據(jù)進行主成分分析，比較不同發(fā)酵過程之間揮發(fā)性產(chǎn)物差異，具體為:每ー時間點上的揮發(fā)性產(chǎn)物指紋圖譜可以轉(zhuǎn)換為ー組多維向量，不同的遷移位置代表不同的維度，而揮發(fā)性產(chǎn)物濃度作為每ー維度的數(shù)值；每ー個樣品的揮發(fā)性產(chǎn)物指紋圖譜就對應(yīng)了多維空間的ー個點，把每次發(fā)酵的每個時間點所對應(yīng)的點在多維空間中連接起來就組成了一條系統(tǒng)軌跡，再使用主成分分析對多維空間里的揮發(fā)性產(chǎn)物變化軌跡進行降維，然后可以直觀地在一個二維平面或者三維空間里比較不同發(fā)酵過程之間揮發(fā)性產(chǎn)物的差別。
[0015](4)偏最小二乗法回歸分析建立發(fā)酵食品揮發(fā)性產(chǎn)物譜圖與酵母數(shù)據(jù)之間的聯(lián)系:
[0016]通過偏最小二乗法回歸分析建立不同種類酵母與揮發(fā)性產(chǎn)物之間的預(yù)測模型，確定發(fā)酵過程中對酵母群落時空演替貢獻較大的酵母與揮發(fā)性產(chǎn)物之間的關(guān)系，即酵母的原位代謝特征；具體為:對不同發(fā)酵過程不同時間點的樣品酵母DGGE譜圖進行亮度分析，獲得不同種類酵母的相對量，以所有不同發(fā)酵過程不同時間點樣品的酵母數(shù)量作為自變量X矩陣，相對應(yīng)時間點某種揮發(fā)性產(chǎn)物的量構(gòu)成ー個ー維向量，作為Y變量，即應(yīng)變量向量；偏最小二乗法回歸分析采用對變量X和Y都進行分解的方法，從變量X和Y中同時提取成分(通常稱為因子)，再將因子按照它們之間的相關(guān)性從大到小排列。
[0017]本發(fā)明的技術(shù)方案可以建立所有酵母與不同揮發(fā)性產(chǎn)物之間的聯(lián)系，表現(xiàn)方式是對應(yīng)檢測到的每ー種化合物都可以建立用酵母數(shù)量表達的預(yù)測方程，在方程中不同種類酵母前面的系數(shù)有正有負，方程中酵母系數(shù)為正即表示這種酵母與相對應(yīng)的化合物呈正相關(guān)，體系中的化合物含量隨這種酵母數(shù)量增多而增多。
[0018]應(yīng)用上述技術(shù)方案，本發(fā)明從清香型白酒中鑒定篩選得到下述與白酒風(fēng)味功能微生物:
[0019](I)釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) CGMCC N0.8130 原位功能在于與多種白酒關(guān)鍵風(fēng)味物質(zhì)相關(guān)，包括苯こ醇，辛醇，辛酸，乳酸乙酯，辛酸乙酯；單純液態(tài)發(fā)酵測定風(fēng)味產(chǎn)物時，能夠測到苯こ醇，辛醇，辛酸，但無法測到該菌能夠產(chǎn)生辛酸こ酯和乳酸乙酯，而將該菌株用于白酒生產(chǎn)中能夠增加白酒中苯こ醇，辛醇，辛酸，乳酸こ酯，辛酸こ酯的含量;
[0020](2)異常畢赤酵母Pichia anomala CGMCC N0.4740原位功能在于與多種白酒關(guān)鍵風(fēng)味物質(zhì)相關(guān)，包括こ酸乙酯，乳酸乙酯，己酸，1-辛烯-3-醇，異丁酸こ酯；單純液態(tài)發(fā)酵測定風(fēng)味產(chǎn)物時，能夠測到こ酸乙酯，乳酸乙酯，己酸和異丁酸乙酯，但未測到該菌能夠產(chǎn)生1-辛烯-3-醇，而將該菌株用于白酒生產(chǎn)中能夠增加白酒中こ酸乙酯，乳酸乙酯，己酸，1-辛烯-3-醇，異丁酸こ酯的含量；
[0021](3)東方伊薩酵母(Issatchenkia orientalis) CGMCC N0.4741 原位功能在于與白酒中こ酸乙酯，こ酸異戊酷，1-壬醇、壬酸こ酯含量正相關(guān)；單純液態(tài)發(fā)酵測定風(fēng)味產(chǎn)物時，能夠測到こ酸乙酯， 1-壬醇，但未測到該菌能夠產(chǎn)生こ酸異戊酯和壬酸乙酯，而將該菌株用于白酒生產(chǎn)中能夠增加白酒中こ酸乙酯，こ酸異戊酷，1-壬醇、壬酸こ酯的含量；
[0022](4)葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum) CGMCC N0.8134原位功能在于與白酒中辛酸，癸酸，己酸乙酯，辛酸乙酯，癸酸こ酯含量正相關(guān)；將單純液態(tài)發(fā)酵測定風(fēng)味產(chǎn)物吋，也能測到上述風(fēng)味產(chǎn)物，將該菌株用于白酒生產(chǎn)中能夠增加白酒中辛酸，癸酸，己酸乙酯，辛酸乙酯，癸酸こ酯的含量；
[0023](5) Saccharomyces servazzii CGMCC N0.8132 原位功能，其特征在于與白酒中苯こ醇，こ酸，1-壬醇含量呈正相關(guān)；單純液態(tài)發(fā)酵測定風(fēng)味產(chǎn)物吋，能夠測到苯こ醇和こ酸，但未測到該菌能夠產(chǎn)生1-壬醇。將該菌株用于白酒生產(chǎn)中能夠增加白酒中相應(yīng)的物質(zhì)的含量；
[0024](6)德爾布有抱酵母(Torulaspora de lbrueckii) CGMCC N0.8133 原位功能在于與白酒中異丁酸乙酯、十二烷酸乙酯，壬內(nèi)酯含量正相關(guān)；單純液態(tài)發(fā)酵測定風(fēng)味產(chǎn)物吋，能夠測到異丁酸こ酯和壬內(nèi)酷，但未測到該菌能夠產(chǎn)生十二烷酸乙酯，將該菌株用于白酒生產(chǎn)中能夠增加白酒中異丁酸こ酯、十二烷酸こ酯，壬內(nèi)酯的含量；
[0025](7) Pichia scaptomyzae CGMCC N0.8131原位功能在于與白酒中1-壬醇、異辛醇、3-羥基-2- 丁酮含量正相關(guān)；單純液態(tài)發(fā)酵測定風(fēng)味產(chǎn)物吋，能夠測到1-壬醇和3-羥基-2_ 丁酮，但未測到該菌能夠產(chǎn)生異辛醇，將該菌株用于白酒生產(chǎn)中能夠增加白酒中1-壬醇、異辛醇、3-羥基-2- 丁酮的含量；
[0026](8)膜酸畢赤酵母(Pichia membranifaciens) CGMCC N0.4751 原位功能在于與白酒中3-羥基-2-丁酮含量正相關(guān)；單純液態(tài)發(fā)酵測定風(fēng)味產(chǎn)物時，能夠測到3-羥基-2-丁酮，將該菌株用于白酒生產(chǎn)中能夠增加白酒中3-羥基-2- 丁酮的含量。
[0027] 將上述酵母組合2種、3種、4種或更多種組合應(yīng)用于白酒生產(chǎn)中，白酒中由上述酵母貢獻的對應(yīng)的風(fēng)味物質(zhì)可累積增加。
[0028]以上結(jié)果表明該原位判定方法可以預(yù)測到比單純發(fā)酵更多的物質(zhì)，并且，在白酒生產(chǎn)中也證明了該法的有效性。
[0029]本發(fā)明技術(shù)方案可應(yīng)用于多微生物發(fā)酵的各種釀造食品的發(fā)酵系統(tǒng)中，包括白酒、黃酒、醬油、醋、各種發(fā)酵生產(chǎn)食品中，用以判定出風(fēng)味功能微生物；將判定出的功能微生物添加到相應(yīng)的發(fā)酵過程中可以增加相應(yīng)風(fēng)味物質(zhì)的含量。
[0030]利用所述原位判定方法獲得的食品自然混合釀造體系中的風(fēng)味功能酵母，可単獨或混合應(yīng)用于各種釀造食品發(fā)酵系統(tǒng)，包括白酒、黃酒、醬油、醋、各種發(fā)酵生產(chǎn)食品中，以增加產(chǎn)品中相應(yīng)的風(fēng)味物質(zhì)含量。
[0031]本發(fā)明首次提供了ー種適合于自然釀造體系中微生物原位功能的方法，利用原位的方法判定食品自然混合釀造體系中風(fēng)味功能酵母能夠有效、準(zhǔn)確認識酵母在白酒中的釀造功能，并有助于在白酒生產(chǎn)中強化這些酵母，提高白酒品質(zhì)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0032]圖1清香型酒一輪次四次發(fā)酵過程酵母群落PCR-DGGE指紋圖譜示意圖，所標(biāo)記的是在發(fā)酵過程中酵母群落空間演替過程中起重要作用的條帶。
[0033]圖2四楂次發(fā)酵過程的酵母群落空間演替軌跡的主成分分析示意圖，A、B、C、D分別代表4個不同楂次。
[0034]圖3四楂次發(fā)酵過程揮發(fā)性產(chǎn)物時間演替軌跡的主成分分析示意圖，A、B、C、D分別代表4個不同楂次。
【具體實施方式】
[0035]實施例1清香型白酒發(fā)酵過程酵母群落結(jié)構(gòu)空間演替模式的比較
[0036]某清香型白酒是采用清蒸四次清，瓷片窖池或磚砌窖池固態(tài)分離發(fā)酵，固態(tài)蒸餾取酒的生產(chǎn)エ藝。
[0037]在本實施例中，對ー輪次生產(chǎn)過程中的四楂次發(fā)酵過程(A、B、C、D)分別在0天、5天、10天、15天、20天進行了取樣，大楂發(fā)酵過程樣品構(gòu)建編號如下:A0、A5、A10、A15、A20 ；二楂發(fā)酵過程B0、B5、B10、B15、B20 ;三楂發(fā)酵過程C0、C5、C10、C15、C20 ;四楂發(fā)酵過程D0、D5、D10、D15、D20。其中大楂二楂發(fā)酵過程蒸餾所得的大楂、二楂酒清香純凈，無雜味；三楂四楂發(fā)酵過程蒸餾所得的三楂、四楂酒則風(fēng)味一般，有苦澀味。
[0038]首先使用26S rDNA D1/D2區(qū)PCR-DGGE指紋圖譜分析了所有樣品中酵母群落的組成(如圖1所示)。在A、B、C、D四次發(fā)酵過程中總共有188條條帶分布在28個不同的遷移位置上。因此，每ー個發(fā)酵過程的DGGE指紋圖譜可以轉(zhuǎn)換為ー個28維向量，其中28個不同的遷移位置分別代表不同的維度，而條帶的亮度作為每ー維度的數(shù)值(如果沒有條帶則相應(yīng)維度上的值為O)。這樣每一發(fā)酵過程的DGGE指紋圖譜就對應(yīng)了這個28維空間里的一個點，把系統(tǒng)中每個發(fā)酵過程所對應(yīng)的點沿著群落演替的順序分別連接起來就組成了一條系統(tǒng)軌跡。這樣的一條軌跡就代表了發(fā)酵過程的空間群落演替模式。因此A、B、C、D四次發(fā)酵過程的微生物群落空間演替的模式可以分別用四條28維空間中的系統(tǒng)軌跡來代表。可以進一歩使用PCA分析對這些復(fù)雜的多維系統(tǒng)軌跡進行降維，這樣就可以在ー個二維平面或者三維的空間里對這兩個窖池的微生物群落空間演替模式進行直觀比較(圖2)。PCl和PC2分別能夠解釋44%和21%的數(shù)據(jù)差異。條帶7、12、21、23、25、26、28具有較大的PCl載量，這些條帶代表了四楂次發(fā)酵過程酵母群落演替中重要的種群。這些不同酵母種群的動態(tài)變化是這些酵母種群在群落演替的過程中相互協(xié)作和競爭的結(jié)果。通過構(gòu)建克隆文庫或者直接割膠對這些條帶進行鑒定(如表1所示)。26和28具有最大的PCl正載量，21具有最大的PCl負載量，所以這些種群都是四楂次發(fā)酵過程酵母群落空間演替中最重要的種群。[0039]表1四楂次發(fā)酵過程中重要的酵母種群[0040]
【權(quán)利要求】
1.一種原位判定混合釀造體系中風(fēng)味功能微生物的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)通過對酵母26SrDNA D1/D2區(qū)PCR-DGGE指紋圖譜分析確定發(fā)酵過程酵母群落結(jié)構(gòu)； (2)通過主成分載量分析確定在發(fā)酵過程群落演替中起著重要作用的DGGE條帶，鑒定其代表的酵母種群； (3)測定發(fā)酵過程不同窖池酒醅揮發(fā)性風(fēng)味產(chǎn)物，對揮發(fā)性產(chǎn)物演替軌跡作主成分分祈，比較不同發(fā)酵過程揮發(fā)性風(fēng)味產(chǎn)物輪廓差異； (4)通過偏最小二乗法回歸分析建立揮發(fā)性風(fēng)味產(chǎn)物譜圖與在發(fā)酵過程群落演替中起著重要作用的酵母群落之間的聯(lián)系，確定酵母原位代謝特征，確定功能酵母。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，對發(fā)酵過程不同時間點的白酒酒醅樣品中的基因組DNA進行26S rDNA D1/D2區(qū)PCR，并通過DGGE指紋圖譜分析所有樣品的酵母群落結(jié)構(gòu)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，所述通過偏最小二乗法回歸分析，建立酵母對揮發(fā)性產(chǎn)物的預(yù)測模型，是將發(fā)酵過程不同發(fā)酵時間點時所有重要酵母DGGE條帶作為預(yù)測矩陣，相對應(yīng)時間點時的揮發(fā)性風(fēng)味產(chǎn)物濃度為被預(yù)測量，偏最小二乘回歸模型建立所有重要酵母與這種揮發(fā)性產(chǎn)物之間的聯(lián)系。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，判定出下述清香型白酒中的風(fēng)味功能微生物: (1)釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)CGMCC N0.8130,與風(fēng)味物質(zhì)苯こ醇、辛醇、辛酸、乳酸乙酯、辛酸こ酯相關(guān)； (2)異常畢赤酵母(Pichiaanomala)CGMCC N0.4740,與風(fēng)味物質(zhì)こ酸こ酯、乳酸乙酯、己酸、1-辛烯-3-醇、異丁酸こ酯相關(guān)； (3)東方伊薩酵母(Issatchenkiaorientalis)CGMCC N0.4741,與風(fēng)味物質(zhì)こ酸乙酯、こ酸異戊酷、1-壬醇、壬酸こ酯相關(guān)； (4)葡萄汁酵母(Saccharomycesuvarum)CGMCC N0.8134,與風(fēng)味物質(zhì)辛酸、癸酸、己酸乙酯、辛酸乙酯、癸酸こ酯相關(guān)； (5)Saccharomycesservazzii CGMCC N0.8132,與風(fēng)味物質(zhì)苯こ醇、こ酸、1-壬醇含量相關(guān); (6)德爾布有抱酵母(Torulasporadelbrueckii) CGMCC N0.8133,與風(fēng)味物質(zhì)異丁酸乙酯、十二烷酸乙酯、壬內(nèi)酯相關(guān)； (7)Pichiascaptomyzae CGMCC N0.8131,與風(fēng)味物質(zhì) 1-壬醇、異辛醇、3_ 羥基 _2_ 丁酮相關(guān)； (8)膜酸畢赤酵母(Pichiamembranifaciens) CGMCC N0.4751,與風(fēng)味物質(zhì) 3-輕基-2-丁酮相關(guān)。
5.一種應(yīng)用利要求I所述方法増加食品發(fā)酵系統(tǒng)中風(fēng)味物質(zhì)含量的方法，是將原位判定獲得的風(fēng)味功能微生物添加到釀造食品發(fā)酵系統(tǒng)中。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述釀造食品為白酒、黃酒、醬油、醋。
【文檔編號】C12Q1/02GK103589773SQ201310587080
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】徐巖, 吳群 申請人:江南大學(xué)