一種從蜘蛛香藥渣中獲得高純度橙皮素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從蜘蛛香藥渣中獲得高純度橙皮素的方法，該方法對提取總萜后的蜘蛛香藥渣加熱浸提2次，提取液調(diào)節(jié)pH后用大孔吸附樹脂柱富集，先用去離子水洗脫，當(dāng)流出液澄清后，再用質(zhì)量濃度1%左右的氫氧化鈉溶液洗脫，收集洗脫液，調(diào)洗脫液pH值，經(jīng)酶解，離心過濾，重結(jié)晶，得到淡黃色針狀結(jié)晶的高純度橙皮素。該方法操作簡單，生產(chǎn)成本低，資源利用率高，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種從蜘蛛香藥渣中獲得高純度橙皮素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥有效成分提取分離方法，特別涉及一種從蜘蛛香藥渣中獲得高純度橙皮素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蜘蛛香為敗醬科纟顏草屬植物蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)的干燥根莖和根。分布于為我國四川，貴州，云南，湖南，湖北，陜西等地。具有疏散風(fēng)熱，利咽，透疹，明目退翳，解痙之效。用于治療風(fēng)熱感冒，咽痛音啞，麻疹不透，風(fēng)疹瘙癢，目赤翳障，驚風(fēng)抽搐，破傷風(fēng)。藥理研究顯示:蜘蛛香可作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，有鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥和抗焦慮的作用；還可以治療病毒性腹瀉、季節(jié)性腹瀉和腸易激綜合癥；而且其中環(huán)烯醚萜類化合物還能治療良性的前列腺增生?；瘜W(xué)成分研究表明:蜘蛛香中主要含有揮發(fā)油、環(huán)烯醚萜類和黃酮類，其中橙皮苷的含量是纈草屬植物中含量最高的植物，隨產(chǎn)地不同含量在0.4%~1.2%之間波動(dòng)。
[0003]橙皮素(Hesperitin)屬于二氫黃酮類化合物，別名:3，5，7_三羥基_4_甲氧基黃酮、圣草酚4-甲基醚。分子式為C16H14O6,分子量為302.27，淡黃色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)2260C -228°C。橙皮素易溶于乙醇、甲醇、丙酮，溶于稀堿溶液，部分溶于乙醚，微溶于水、氯仿和苯。藥理作用:抗氧化，橙皮素可通過清除過氧亞硝酸根離子，避免過氧化反應(yīng)帶來的危害，如癌變?？寡?， 橙皮素可以抑制炎性介質(zhì)的介導(dǎo)作用，從而間接抑制炎癥反應(yīng)。與橙皮苷相比，橙皮素有更強(qiáng)的抗炎作用。降血脂，橙皮素可以抑制膽固醇的生成酶及酯化酶的作用，從而達(dá)到降血脂的作用。保護(hù)心血管，橙皮素具有降低血管滲透性的功效，可以起到預(yù)防血栓形成的作用。還可以通過刺激某些線粒體酶如琥珀酸脫氫酶等起到保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞組織的缺氧作用，預(yù)防由內(nèi)皮細(xì)胞壞死引起的凝血而誘發(fā)血栓形成。
[0004]目前制備橙皮素的方法主要有直接分離法，全合成法，水解法，微生物轉(zhuǎn)化法等。因植物中的橙皮素含量很低使直接分離法得到橙皮素的成本高，收率低，不適于工業(yè)化生產(chǎn)；全合成法制備橙皮素的操作繁瑣，收率低，成本高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)；微生物轉(zhuǎn)化法對生產(chǎn)條件要求苛刻,使獲得橙皮素的成本高,不適于工業(yè)化生產(chǎn)；水解法主要是從蕓香科植物(橙、柚、枳實(shí)等)中分離出橙皮苷再進(jìn)行酸水解或是先進(jìn)行水解在分離出橙皮素，該方法成本適中，但對環(huán)境的影響較大，不適于大面積推廣。酶解法是近年來用于制備苷類化合物苷元的方法，該方法的優(yōu)勢在于酶解反應(yīng)專屬性高，副產(chǎn)物少，反應(yīng)條件溫和，對產(chǎn)物破壞小，產(chǎn)品收率高，操作簡單，且對環(huán)境影響小。
[0005]如何從藥用資源保護(hù)及合理利用的角度出發(fā)，尋找一種可以最大化的利用植物資源來獲得橙皮素的方法，是一項(xiàng)非常有技術(shù)價(jià)值的研究課題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 申請人:通過研究發(fā)現(xiàn)蜘蛛香是除蕓香科植物外橙皮苷含量最高的植物之一，而且目前蜘蛛香的主要藥用部位為環(huán)烯醚萜類，在提取環(huán)烯醚萜類成份后藥渣便棄掉，既污染環(huán)境又浪費(fèi)資源。
[0007] 申請人:發(fā)現(xiàn)提取蜘蛛香中的環(huán)烯醚萜類成份使用的是體積濃度> 90%的高濃度乙醇，而蜘蛛香中所含的橙皮苷是二氫黃酮雙糖苷類成分，高濃度乙醇是不能講其溶解提取的，因此，大量的橙皮苷還保留在提取總萜后的蜘蛛香藥渣中。
[0008]本發(fā)明的目的在于提供一種從提取總萜后的蜘蛛香藥渣中獲得高純度橙皮素的方法，且該方法簡單易行，收率高，資源利用率高，工業(yè)化前景良好。
[0009]為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采用的技術(shù)解決方案是:
[0010]I)提取:以提取總萜后的蜘蛛香提取渣為原料，用質(zhì)量濃度5%的氫氧化鈣水，在90°C條件下提取2次，第一次加入量為8BV，提取2h，第二次加入量為6BV，提取2h，提取液合并過濾,調(diào)節(jié)pH值為8~9，備用；
[0011]2)純化:將調(diào)節(jié)pH值后的提取液上大孔樹脂柱，樹脂型號為AB_8，pH值為8~9，上樣提取液量為5~6倍樹脂柱體積，吸附流速1.5BV/h ;待吸附飽和后用去離子水沖洗液沖柱，當(dāng)流出液澄清后，洗后的柱體填料用質(zhì)量濃度0.8%~1%的氫氧化鈉洗脫液洗脫，洗脫液用量為2~3倍樹脂柱體積，流速lBV/h，收集洗脫液；
[0012]3)酶解:將所得的洗脫液倒入反應(yīng)釜中，調(diào)pH值至4~6后加熱到35°C~55°C保溫，在保溫條件下加入原料中橙皮苷質(zhì)量3/20~6/20的a -L-鼠李糖苷酶和原料中橙皮苷質(zhì)量1/20~2/20的β -葡萄糖苷酶，酶解6~10h，酶解反應(yīng)機(jī)理如圖1所示。；
[0013]4)結(jié)晶:將酶解液放冷，離心，得到橙皮素粗品，橙皮素粗品用乙醇重結(jié)晶后，即可得淺黃色針狀結(jié)晶的高純度橙皮素。
[0014]本發(fā)明以提取總萜后的蜘蛛香藥渣為原料，再用氫氧化鈣水溶液做提取溶媒，隨后用大孔樹脂進(jìn)行富集，最后用酶解法制備橙皮素；其中提取溶媒對環(huán)境影響小，樹脂可重復(fù)再生利用，且經(jīng)過樹脂的富集使酶解轉(zhuǎn)化率提高，大大提高了資源的利用率。本發(fā)明所述方法操作簡單、生產(chǎn)成本低，資源利用率高，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1，本發(fā)明的酶解反應(yīng)機(jī)理圖。
[0016]圖2，本發(fā)明的具體實(shí)施例分離提純得到的橙皮素HPLC檢測圖譜，圖中峰I表示橙皮素。
【具體實(shí)施方式】
[0017]以下結(jié)合發(fā)明人給出的實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0018]一、橙皮苷的提取工藝研究
[0019]1.1研究目的
[0020]以提取液中橙皮苷的含量為考察指標(biāo)，選擇蜘蛛香藥渣中橙皮苷提取的適宜方法和最佳工藝參數(shù)。
[0021]1.2實(shí)驗(yàn)因素與參數(shù)設(shè)計(jì)
[0022]以質(zhì)量濃度5%的氫氧化鈣水溶液為提取溶劑，蜘蛛香藥渣為原料并采用熱浸法提取橙皮苷的主要影響因素是加堿液量、提取時(shí)間、提取次數(shù)、浸提溫度。因此，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為4因素3水平，采用L9 (34)·正交表實(shí)驗(yàn)。提取實(shí)驗(yàn)的因素水平表設(shè)計(jì)請見表1，正交實(shí)驗(yàn)表請見表2。
[0023]表1提取實(shí)驗(yàn)因素水平表
[0024]
【權(quán)利要求】
1.一種從蜘蛛香藥渣中獲得高純度橙皮素的方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行: 1)取提取總萜后的蜘蛛香藥渣，用質(zhì)量濃度5%的氫氧化鈣水溶液，在90°C條件下提取2次，第一次加入量為8BV，提取2h，第二次加入量為6BV，提取2h，兩次提取液合并過濾，用質(zhì)量濃度5%的氫氧化鈣水溶液調(diào)節(jié)pH值為8~9，備用； 2)將調(diào)節(jié)pH值后的提取液上大孔樹脂柱，樹脂型號為AB-8，pH值為8~9，上樣提取液量為5~6倍樹脂柱體積，吸附流速1.5BV/h ;待吸附飽和后用去離子水沖洗液沖柱，當(dāng)流出液澄清后，洗后的柱體填料用質(zhì)量濃度0.8%~1%的氫氧化鈉洗脫液洗脫，洗脫液用量為2~3倍樹脂柱體積，流速lBV/h，收集洗脫液； 3)將所獲得的洗脫液倒入反應(yīng)釜中，質(zhì)量濃度5%的鹽酸水溶液調(diào)pH值至4~6后加熱到35°C~55°C保溫，在保溫條件下加入原料中橙皮苷質(zhì)量3/20~6/20的a -L-鼠李糖苷酶和原料中橙皮苷質(zhì)量1/20~2/20的β -葡萄糖苷酶，酶解6~IOh ; 4)將酶解液放冷，離心，得到含量為80%的橙皮素粗品，橙皮素粗品用乙醇飽和溶解，然后加入0.5%活性炭脫色，過濾，濾液濃縮至總濾液體積的1/2，加入濃縮液2倍體積水結(jié)晶，即可得淺黃色針狀結(jié)晶的含量為98%的橙皮素。
【文檔編號】C12P17/06GK103667385SQ201310654293
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月5日
【發(fā)明者】申旭霽, 杜杉, 孫穎, 夏傳濤 申請人:楊凌東科麥迪森制藥有限公司