巨大芽孢桿菌同化硝酸還原酶和亞硝酸還原酶基因及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種生物【技術(shù)領(lǐng)域】的巨大芽孢桿菌同化硝酸還原酶和亞硝酸還原酶基因及應(yīng)用，包括編碼同化硝酸鹽還原酶Nas的催化亞基nasC（Seq?ID?No.1）以及編碼同化亞酸鹽還原酶NiR的大亞基nasD（Seq?ID?No.2）。本發(fā)明通過(guò)從巨大芽孢桿菌NCT-2中提取得到總RNA后進(jìn)行cDNA合成，得到cDNA模板后經(jīng)熒光定量PCR實(shí)現(xiàn)功能表達(dá)；并進(jìn)一步用于進(jìn)行土壤中過(guò)多硝酸鹽的去除研究。
【專利說(shuō)明】巨大芽孢桿菌同化硝酸還原酶和亞硝酸還原酶基因及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及的是一種生物【技術(shù)領(lǐng)域】的基因及應(yīng)用，具體是一種巨大芽孢桿菌同化硝酸還原酶和亞硝酸還原酶基因及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]由于大棚、溫室等是在人為改變傳統(tǒng)露地的前提下形成的一種高度集約化的設(shè)施栽培，具有常年高溫、高濕、無(wú)降水淋洗、高施肥、高產(chǎn)出、超強(qiáng)度使用等特點(diǎn)，與露天土壤相t匕，其特殊的生態(tài)環(huán)境與不合理的水肥管理從而導(dǎo)致土壤次生鹽潰化。硝酸鹽的積累既是設(shè)施栽培土壤次生鹽潰化的主要特征之一，同時(shí)也是引起設(shè)施栽培作物生理障礙的主導(dǎo)因子，造成蔬菜作物生長(zhǎng)受阻，產(chǎn)量減少以及作物體內(nèi)硝酸鹽的大量累積。由于次生鹽潰化問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重，已經(jīng)成為制約設(shè)施栽培生產(chǎn)的主要障礙因子，如何有效地控制和去除環(huán)境中硝酸鹽成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。
[0003]在整個(gè)氮循環(huán)中，土壤中的硝酸鹽主要有三個(gè)去向，即通過(guò)同化硝酸鹽還原(同化作用)、發(fā)酵性硝酸鹽還原、呼吸性硝酸鹽還原(發(fā)酵性和呼吸性硝酸鹽還原共同組成異化硝酸鹽還原)3種作用，所得產(chǎn)物分別為細(xì)菌等生物體內(nèi)的有機(jī)氮化物、亞硝酸鹽和銨鹽、亞硝酸鹽或NH3或N2O或N2。同化硝酸鹽還原是硝酸鹽被硝酸鹽還原酶還原成亞硝酸鹽，亞硝酸鹽被亞硝酸鹽還原酶還原為氨，氨被同化成氨基酸的過(guò)程。
[0004]已有研究表明，細(xì)菌Bacilus subtilis硝酸鹽的同化作用基因簇為nasABCDEF，硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)子NasA負(fù)責(zé)將硝酸鹽由生物體外轉(zhuǎn)運(yùn)至體內(nèi)；硝酸鹽還原酶NasBC將體內(nèi)的硝酸鹽還原成亞硝酸鹽；亞硝酸鹽還原酶NasDE進(jìn)一步將亞硝酸鹽還原酶還原成銨鹽。隨后在ATP供能下，谷氨酰胺合成酶(GS)將谷氨酸和NH4+轉(zhuǎn)換成谷氨酰胺，最終銨參與微生物體內(nèi)到氨基酸的合成。所以，研究微生物的硝酸鹽同化作用，提高同化作用的效率，在為作物提供更多、更有效的氮素營(yíng)養(yǎng)這一重要目標(biāo)的同時(shí)，還可適當(dāng)降低異化硝酸鹽還原的趨勢(shì)，以減少致癌物質(zhì)亞硝酸鹽和臭氧層殺手、溫室氣體N2O等的排放，符合“低碳”、“減排”的發(fā)展方向。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，提出一種巨大芽孢桿菌同化硝酸還原酶和亞硝酸還原酶基因及應(yīng)用，能夠針對(duì)解決設(shè)施大棚土壤硝酸鹽的去除問(wèn)題。
[0006]本發(fā)明提供的基因?qū)ρ芯课⑸锵跛猁}同化作用機(jī)理具有重要的價(jià)值，同時(shí)為進(jìn)一步研究環(huán)境中硝酸鹽的去除提供理論基礎(chǔ)。
[0007]本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0008]本發(fā)明涉及一種編碼同化硝酸鹽還原酶Nas (assimilation nitrate reductase)的催化亞基nasC，其氨基酸序列如Seq ID N0.1所示，由716個(gè)氨基酸組成。
[0009]本發(fā)明涉及一種編碼`同化亞酸鹽還原酶NiR的大亞基nasD，其氨基酸序列如SeqID N0.2所示，由804個(gè)氨基酸組成。[0010]本發(fā)明涉及一種基因功能表達(dá)方法，通過(guò)從巨大芽孢桿菌NCT-2中提取得到總RNA后進(jìn)行cDNA合成，得到cDNA模板后經(jīng)熒光定量PCR實(shí)現(xiàn)功能表達(dá)。
[0011]所述的基因是指:編碼同化硝酸鹽還原酶Nas的催化亞基nasC以及編碼同化亞酸鹽還原酶NiR的大亞基nasD。
[0012]所述的巨大芽孢桿菌NCT-2通過(guò)以下方式進(jìn)行培養(yǎng):無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中加入不同量的KNO3,使其濃度分別為:10、30和50mM，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)。陰性對(duì)照以(NH4) 2S04為氮源，培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱30°C，180rpm培養(yǎng)。分別在2、4、8、12、24h取樣。
[0013]所述的總RNA通過(guò)以下方式進(jìn)行提取:按照Takara的RNAi so Plus試劑的說(shuō)明書進(jìn)行，基本實(shí)驗(yàn)步驟如下:將ImL RNAiso Plus試劑加入上述培養(yǎng)的細(xì)菌中，室溫放置5min后，12, OOOrpm離心,取上清，加入0.2mL氯仿；用力振蕩15s后室溫放置2-3min, 12，000rpm4 V離心15min ；小心取出上清，加入等體積異丙醇，室溫靜置IOmin后，12，000rpm4°C再次離心15min ;棄去上清，用70%乙醇洗滌沉淀后，室溫干燥mRNA至半透明狀；于55-60°C的水浴中用20-100 μ L無(wú)RNA酶的焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate, DEPC)水使RNA全部溶解；取少量于RNA的濃度米用NanodropND-1000測(cè)定含量及純度的測(cè)定，其余保存于-80°C冰箱。
[0014]所述的cDNA合成是指:利用PrimeScript? RT反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRaBiotechnology, Japan)進(jìn)行樣品的反轉(zhuǎn)錄,得到的cDNA樣本于-20O保存,用于突光定量PCR。
[0015]所述的反轉(zhuǎn)錄的反應(yīng)體系為:5XPrimeScript?Buffer2 μ L ；PrimeScript? RTEnzyme Mix 10.5 μ L ；01igo dT Primer(5 X10 5mol/L)0.5 μ L ；Random6mers(I X10 4mol/L) 0.5 μ L ；RNA 模板(3 X l(T2g/L) 6.5 μ L,總體系為 10 μ L。
[0016]所述的反轉(zhuǎn)錄的條件如下:37°C 15min,85°C 5s。
[0017]所述的熒光定量PCR是指:采用TaKaRa公司的SYBR Green I熒光定量PCR試劑盒和ABI公司的StepOne?熒光定量PCR儀進(jìn)行熒光實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄定量PCR。
[0018]所述的定量PCR 的反應(yīng)體系為:2XSYBR Premix Ex TaqlO μ L ；cDNAtemplatel μ L (0.lg/L);引物(I X 10 4mol/L) 0.4 μ L ;無(wú)酶水 8.2 μ L。
[0019]所述的定量PCR的擴(kuò)增條件為:95°C 30s ；95°C 10s，59°C 30s，72°C 30s，在延伸階段檢測(cè)熒光強(qiáng) 度，收集信號(hào)，40個(gè)循環(huán)；72°C IOs ;熔解曲線為:加熱樣品從70°C到95°C，每隔0.5°C停留Is檢測(cè)I次熒光強(qiáng)度變化。
[0020]所述的定量PCR的內(nèi)標(biāo)基因?yàn)?6S rRNA。
[0021]所述的PCR的引物序列包括:
[0022]①nasC熒光定量RT-PCR用的引物序列為:
[0023]正向弓丨物序列:5，-CGGCGAAATCAAACACGA-3，和反向引物序列:5’ -TAATCCGCGATCCCTCCT-3’。
[0024]②nasD熒光定量RT-PCR用的引物序列為:
[0025]正向引物序列:5’ -TTCTTCC GATTCCAGGGTC-3’和反向引物序列:5’ -AGTCCGCCTCCAATAACC-3’。
[0026]③內(nèi)標(biāo)基因16S rRNA所用引物序列為:
[0027]正向引物序列:5’ -CCTTACCAGG TCTTGACATCC-3’和反向引物序列:5’ -CCTTAGAGTGCCCAACTGAAT-3’。
[0028]本發(fā)明渉及一種基于上沭nasC基因以及nasD基因的應(yīng)用，將其用于從土壤中去除硝酸鹽。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0029]圖1菌株NCT-2在不同硝酸鹽濃度的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)下硝酸鹽還原酶nasC基因表達(dá)差異示意圖；
[0030]圖中可見菌株在硝酸鹽濃度為50mM培養(yǎng)8h后nasC基因表達(dá)量最高.[0031]圖2菌株NCT-2在不同硝酸鹽濃度的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)下硝酸鹽還原酶nasD基因表達(dá)差異示意圖；
[0032]圖中可見菌株在硝酸鹽濃度為50mM培養(yǎng)12h后nasD基因表達(dá)量最高。
【具體實(shí)施方式】
[0033]下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明，本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過(guò)程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。
實(shí)施例1
[0034]菌株NCT-2同化硝酸鹽還原酶和亞硝酸鹽還原酶序列獲得
[0035]1.1菌株來(lái)源:巨大芽孢桿菌NCT-2分離自上海市崇明島設(shè)施栽培12_15年的大棚，保藏編號(hào)為CGMCC N0.4698，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，地址是北京市朝 陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)微生物研究所；保存日期為2011年3月21日。
[0036]1.2該菌種接種于菌種培養(yǎng)基，置于30°C, 150rpm,搖床振蕩培養(yǎng)24h。
[0037]菌種培養(yǎng)基:KNO3IOg,KH2PO40.5g，KCllg，MgSO4.7Η200.5g，CaCl2Img,FeSO4.7H2010mg,葡萄糖15g,去離子水定容至1L,用NaOH調(diào)pH至7.0,高壓滅菌。
[0038]1.3基因組DNA的提取:采用CTAB法，基因組DNA提取后樣進(jìn)行品質(zhì)量檢測(cè)，其要求包括以下三個(gè)方面:1)樣品純度:A260/280值應(yīng)在1.8-2.0之間；2)樣品濃度:樣品的濃度越高越好，最低不應(yīng)低于30ng/y L ；3)樣品量:每次SE樣品制備至少需要5 μ g樣品，大于2kb大片段PE樣品制備至少需要30 μ g以上的樣品。
[0039]1.4文庫(kù)構(gòu)建:檢測(cè)通過(guò)后的樣品采用超聲波處理，將基因組DNA隨機(jī)打斷成500bp左右的小片段；DNA片段膠回收后進(jìn)行末端補(bǔ)平；在DNA的5’端磷酸化和3’末端加堿基A ;將Adapter連接在DNA片段末端；連接產(chǎn)物經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增后在Flowcell上進(jìn)行長(zhǎng)簇操作。
[0040]1.5測(cè)序:構(gòu)建好的文庫(kù)使用Illumina Genome Analyzer測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序,采用雙末端測(cè)序策略，兩末端各測(cè)Slbp的長(zhǎng)度。測(cè)序完成后對(duì)獲得的reads序列進(jìn)行預(yù)處理操作，去除接頭引物序列等，然后使用組裝軟件Velvet assembler對(duì)reads序列進(jìn)行組裝，生成 Scaffolds 和 Contigs 序列。
[0041]1.6拼接:將拼接得到的結(jié)果contigs與參考基因組比對(duì)后，將所有congtigs排序并合并。對(duì)合并的基因組進(jìn)行蛋白質(zhì)預(yù)測(cè)，運(yùn)用GeneMarker, Glimmer3和Gismo三個(gè)基因預(yù)測(cè)軟件同時(shí)進(jìn)行預(yù)測(cè)，將3種結(jié)果對(duì)比，取出兩種或兩種以上軟件預(yù)測(cè)出的基因，剩余的基因通過(guò)Blast和Interproscan比對(duì),取出有比對(duì)結(jié)果的序列和前面取出的序列合并后進(jìn)行后續(xù)分析。對(duì)于基因的功能注釋利用蛋白氨基酸序列與NCBI非冗余蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)(nr)進(jìn)行Blastp比對(duì)?；駽OG分類通過(guò)將蛋白氨基酸序列與NCBI，Go和COGs數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Blastp比對(duì)。為了注釋和鑒定代謝途徑，基因組序列同時(shí)提交到KEGG。根據(jù)基因注釋結(jié)果尋找到硝酸鹽同化硝酸鹽還原酶和亞硝酸還原酶基因序列。
[0042]1.7實(shí)施結(jié)果
[0043]得到的硝酸鹽還原酶和亞硝酸還原酶相關(guān)的基因，名稱為nasC和nasD。同化硝酸鹽還原酶和亞硝酸鹽還原酶分別具有序列表中Seq ID N0.1和Seq ID N0.2的所示的氨基酸序列。
實(shí)施例2
[0044]菌株NCT-2在不同硝酸鹽濃度培養(yǎng)下同化硝酸鹽還原酶和亞硝酸還原酶基因表達(dá)量變化
[0045]2.1菌株NCT-2在不同硝酸鹽濃度培養(yǎng)
[0046]1)無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中加入不同量的KNO3,使其濃度分別為:10、30和50mM，每個(gè)濃度
設(shè)3個(gè)重復(fù)。
[0047]2)陰性對(duì)照以(NH4)2SO4為氮源，無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中分別加入不同量的(NH4)2SO4使其濃度分別為:10、30和50mM，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)。
[0048]3)母液培養(yǎng):以IOmM (NH4)2SO4氮源的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)菌種。一個(gè)三角瓶200mL培養(yǎng)基加入菌種培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，培養(yǎng)條件為30°C，180rpm。陰性對(duì)照同此。
[0049]4)每個(gè)三角瓶加培養(yǎng)基95mL，加菌液5mL。放入培養(yǎng)箱30°C，180rpm培養(yǎng)。
[0050]5)在 2、4、8、12、24h 分別取樣。
[0051]2.2 總 RNA 提取
[0052]總RNA的提取按照Takara的RNAiso Plus試劑的說(shuō)明書進(jìn)行,基本實(shí)驗(yàn)步驟如下:將ImL RNAiso Plus試劑加入上述培養(yǎng)的細(xì)菌中，室溫放置5min后，12，OOOrpm離心，取上清，加入0.2mL氯仿；用力振蕩15s后室溫放置2-3min, 12, 000rpm4°C離心15min ;小心取出上清，加入等體積異丙醇，室溫靜置IOmin后，12，000rpm4°C再次離心15min ;棄去上清,用70%乙醇洗滌沉淀后，室溫干燥mRNA至半透明狀；于55-60°C的水浴中用20-100 μ L無(wú)RNA酶的焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate, DEPC)水使RNA全部溶解；取少量于RNA的濃度采用Nanodrop ND-1000測(cè)定含量及純度的測(cè)定，其余保存于_80°C冰箱。
[0053]2.3cDNA 合成
[0054]利用PrimeScript? RT 反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRaBiotechnology, Japan)進(jìn)行樣品的反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA樣本于-20°C保存，用于熒光定量PCR。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系為:5XPrimeScript? Buffer2 μ L ；PrimeScript? RT Enzyme Mix 10.5 μ L ；01igo dTPrimer (5 X 10 5mol/L) 0.5 μ L ；Random6mers (I X 10 4mol/L) 0.5 μ L ；RNA 模板(3 X 10 2g/L)6.5yL，總體系為10 μ L0反轉(zhuǎn)錄條件如下:37°C 15min，85°C 5s。
[0055]2.4用突光定量Real-time RT-PCR對(duì)nasC和nasD基因進(jìn)行功能表達(dá)
[0056]采用TaKaRa公司的SYBR Green I熒光定量PCR試劑盒和ABI公司的St印One?熒光定量PCR儀進(jìn)行熒光定量PCR試驗(yàn)。PCR反應(yīng)體系如下:2XSYBR Premix Ex TaqlO μ L ；cDNA templatel μ L (0.lg/L);引物(I X 10_4mol/L) 0.4 μ L ;無(wú)酶水 8.2 μ L。PCR 擴(kuò)增條件如下:95°C 30s ；95°C 10s，59°C 30s, 72°C 30s，在延伸階段檢測(cè)熒光強(qiáng)度，收集信號(hào)，40個(gè)循環(huán)；72°C IOs0熔解曲線:加熱樣品從70°C到95°C，每隔0.5°C停留Is檢測(cè)I次熒光強(qiáng)度變化。mRNA 相對(duì)表達(dá)水平計(jì)算公式為 2 a%t，其中 Δ Δ Ct= (Ct.Target-C16S rENA) x~ (CT.Target-C16Smm)Cl。該公式中X表示任何時(shí)間點(diǎn)或者處理的樣本，對(duì)照組為0。采用16S rRNA為內(nèi)標(biāo)基因，引物由上海生工生物有限公司合成。
[0057]nasC熒光定量RT-PCR用的引物序列為:
[0058]正向引物序列:5，-CGGCGAAATCAAACACGA-3’；
[0059]反向引物序列:5’-TAATCCGCGATCCCTCCT-3’。
[0060]nasD熒光定量RT-PCR用的引物序列為:
[0061]正向引物序列:5’-TTCTTCC GATTCCAGGGTC-3’ ；
[0062]反向引物序列:5’ -AGTCCGCCTCCAA TAACC-3 ’。
[0063]內(nèi)標(biāo)基因16S rRNA所用引物序列為:
[0064]正向引物序列:5’-CCTTACCAGG TCTTGACATCC-3’ ；
[0065]反向引物序列:5，-CCTTAGAGTGCCCAACTGAAT-3，。
[0066]2.5實(shí)施結(jié)果
[0067]nasC 是編碼同化硝酸鹽還原酶 Nas (assimilation nitrate reductase)的基因，硝酸鹽是Nas的反應(yīng)底物。不同硝酸鹽濃度和不同時(shí)間nasC mRNA表達(dá)見圖1。硝酸鹽能調(diào)控菌株NCT-2的nasC mRNA的表達(dá)水平，硝酸鹽的濃度能促進(jìn)其表達(dá)。當(dāng)NO3-濃度為50mM、菌株培養(yǎng)8h時(shí)，同化硝酸鹽還原酶基因表達(dá)量最高，為對(duì)照的4.85倍。
[0068]nasD 是編碼同化亞酸鹽還原酶 NiR(assimilation nitrite reductase)的基因，硝酸鹽還原酶產(chǎn)物-亞硝酸鹽是NiR的反應(yīng)底物，NiR催化亞硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氨。不同硝酸鹽濃度和不同時(shí)間nasD mRNA表達(dá)見圖2。
[0069]結(jié)果表明，在10mM-50mM硝酸鹽濃度范圍內(nèi)，菌株NCT-2的nasD mRNA的表達(dá)量隨著濃度的增加而上升，尤其是在硝酸鹽濃度從30mM增加50mM ；nasD最高表達(dá)量出現(xiàn)在N03-濃度為50mM、菌株培養(yǎng)12h時(shí)達(dá)到對(duì)照的7.32倍。
[0070]通過(guò)突光定量PCR驗(yàn)證了 nasC和nasD在不同硝酸鹽濃度下的表達(dá)模式,結(jié)果表明，這兩個(gè)基因在隨著硝酸鹽濃度的提高，轉(zhuǎn)錄水平均有明顯提高。以上結(jié)果表明nasC和nasD在硝酸鹽同化過(guò)程中`發(fā)揮重要作用。
【權(quán)利要求】
1.一種編碼同化硝酸鹽還原酶Nas的催化亞基nasC，其特征在于，其氨基酸序列如SeqID N0.1所示，由716個(gè)氨基酸組成。
2.一種編碼同化亞酸鹽還原酶NiR的大亞基nasD，其特征在于，其氨基酸序列如SeqID N0.2所示，由804個(gè)氨基酸組成。
3.一種基因功能表達(dá)方法，其特征在于，通過(guò)從巨大芽孢桿菌NCT-2中提取得到總RNA后進(jìn)行cDNA合成，得到cDNA模板后經(jīng)熒光定量PCR實(shí)現(xiàn)功能表達(dá)； 所述的基因是指:編碼同化硝酸鹽還原酶Nas的催化亞基nasC以及編碼同化亞酸鹽還原酶NiR的大亞基nasD。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征是，所述的熒光定量PCR是指:采用TaKaRa公司的SYBR Green I熒光定量PCR試劑盒和ABI公司的StepOne?熒光定量PCR儀進(jìn)行熒光實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄定量PCR。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征是，所述的定量PCR的內(nèi)標(biāo)基因?yàn)?6SrRNA。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征是，所述的PCR的引物序列包括: ①nasC熒光定量RT-PCR用的引物序列為: 正向引物序列:5’ -CGGCGAAATCAAACACGA-3’和反向引物序列:5， -TAATCCGCGATCCCTCCT-3，； ②nasD熒光定量RT-PCR用的引物序列為: 正向引物序列:5’ -TTCTTCC GATTCCAGGGTC-3’ 和反向引物序列:5’ -AGTCCGCCTCCAATAACC-3’ ； ③內(nèi)標(biāo)基因16SrRNA所用引物序列為: 正向引物序列:5’ -CCTTACCAGG TCTTGACATCC-3’和反向引物序列:5’ -CCTTAGAGTGCCCAACTGAAT-3’。
7.一種基于巨大芽孢桿菌NCT-2的基因應(yīng)用，其特征在于，將其用于從土壤中去除硝酸鹽； 所述的基因是指:編碼同化硝酸鹽還原酶Nas的催化亞基nasC以及編碼同化亞酸鹽還原酶NiR的大亞基nasD。
【文檔編號(hào)】C12R1/11GK103725654SQ201310674679
【公開日】2014年4月16日 申請(qǐng)日期:2013年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月11日
【發(fā)明者】周培, 支月娥, 時(shí)唯偉, 衛(wèi)星, 初少華, 馮?，| 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)