一種調(diào)理腸道菌群的配方驢奶粉的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種調(diào)理腸道菌群的配方驢奶粉，配方以驢奶粉為主，添加胡蘿卜粉、大豆低聚糖、菊粉、蘆根多糖，并輔以添加含低聚異麥芽糖和低聚半乳糖的益生元和鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌兩種益生菌。該配方驢奶粉能顯著增加小鼠腸道中的乳酸菌和厭氧總菌數(shù)量，降低腸桿菌和腸球菌的數(shù)量；并且能顯著提高Shannon-Wiener指數(shù)和豐富度，顯著增加小鼠腸道菌群的多樣性。
【專利說(shuō)明】—種調(diào)理腸道菌群的配方驢奶粉
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于保健領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)是一種能夠調(diào)理腸道菌群的配方驢奶粉。
【背景技術(shù)】
[0002]腸道菌群對(duì)宿主的影響受到越來(lái)越多學(xué)者的關(guān)注，正常情況下腸道菌群穩(wěn)定，與宿主處于平衡的共生狀態(tài)。腸道菌群對(duì)宿主的生理學(xué)功能主要有以下三大方面:一是維持宿主腸道的正常結(jié)構(gòu)和生理功能(營(yíng)養(yǎng)吸收與代謝)，二是拮抗外源病原微生物的定植(防御感染)，三是調(diào)控宿主的免疫功能。驢奶由于具有良好的藥效，在國(guó)內(nèi)外典籍中多有涉及。如在我國(guó)《本草綱目》中記載:“驢乳，氣味甘，冷利，無(wú)毒，熱頻飲之可治氣郁，解小兒熱毒，不生痘疹”;在維吾爾和蒙古等少數(shù)名族醫(yī)學(xué)中，有用驢奶治療結(jié)核病、肝硬化和胃潰瘍、百日咳的記載。此外，秘魯人認(rèn)為驢奶可治氣喘、氣管炎、糖尿病等疾病。已有科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，鮮驢奶對(duì)豬霍亂沙門氏菌及志賀氏菌具有顯著的抑制作用；同時(shí)Xueying Mao報(bào)道，驢奶與人肺癌細(xì)胞A549共孵育后，起到抗腫瘤和抑制腫瘤增殖分化的作用；馬龍等研究證實(shí)鮮驢奶脂肪在體外具有抑制結(jié)核桿菌生長(zhǎng)的作用。因此，開(kāi)展驢奶粉復(fù)合配方的應(yīng)用基礎(chǔ)研究，充分發(fā)揮其微生態(tài)調(diào)節(jié)劑的功能將為驢奶的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供以下技術(shù)路線:
本發(fā)明旨在為驢奶的市場(chǎng)開(kāi)發(fā)提供新途徑，以驢奶粉為基質(zhì)，添加胡蘿卜粉、大豆低聚糖、菊粉、蘆根多糖，并輔以添加含低聚異麥芽糖和低聚半乳糖的益生元和鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌兩種益生菌。本發(fā)明包括如下技術(shù)方案:
一種調(diào)理腸道菌群的配方驢奶粉，依照如下步驟制備:
(O新鮮胡蘿卜清洗磨皮，修整后再次清洗；切斷、脫水，于恒溫箱70-8(TC下烘干；打粉并過(guò)60目篩得到胡蘿卜粉，將胡蘿卜粉28 mg/g劑量添加到驢奶中；
(2)選取粒圓飽滿的大豆，倒入高速組織搗碎機(jī)中搗碎后通過(guò)100目篩過(guò)濾；稱取100g粉碎后的豆粉，按1:10的料液比加入70%的乙醇溶液，將其充分振蕩混勻；放入微波爐中，將微波功率調(diào)至高火，處理2 min ;轉(zhuǎn)移至離心機(jī)，4500 r/min離心10 min ;將上清液旋轉(zhuǎn)蒸干得到大豆低聚糖，將大豆低聚糖按7.9 mg/g劑量添加到驢奶中；
(3)選取菊芋，將其洗凈切絲，準(zhǔn)確稱取定量菊芋絲200g ;放置在加熱容器中，加入200g的水，加熱到90°C后保溫20 min，將保溫的菊芋絲及蒸煮液用榨汁機(jī)榨汁取得的菊芋提取液；運(yùn)用加石灰乳、充二氧化碳?xì)怏w、絮凝、沉降、減壓過(guò)濾、脫色等化學(xué)和物理方法將提取液中的蛋白質(zhì)、果膠、氨基酸、色素等雜質(zhì)除去，得到無(wú)色透明的菊粉溶液；將純化的菊粉溶液按200 μ L /g添加到驢奶中；
(4)取蘆根試樣200g，粉碎后過(guò)40目篩；加入一定量蒸餾水進(jìn)行超聲處理，提取數(shù)次，合并濾液并真空濃縮至一定體積后，用一定量的濃度95%乙醇沉淀，抽濾，濾餅加蒸餾水復(fù)溶后用Sevag法脫蛋白；水層再次濃縮、醇沉并過(guò)濾；用乙醇洗滌濾餅數(shù)次，最后經(jīng)真空干燥得蘆根多糖；將提取得到的蘆根多糖按6.5 mg/g劑量添加到驢奶中；
(5)將含低聚異麥芽糖、低聚半乳糖的益生元按0.985 mg/g劑量添加到驢奶中；
(6)益生菌凍干活菌粉的制備:首先配制質(zhì)量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于4只500 mL三角瓶?jī)?nèi)，每瓶200 mL，12rC滅菌20 min冷卻至37°C，分別按2%體積比例接種鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌，37°C厭氧培養(yǎng)24-28 h，檢測(cè)2株益生菌培養(yǎng)液的活菌數(shù)，各培養(yǎng)液活菌數(shù)>109 CFU/mL,則可停止培養(yǎng)，如果活菌數(shù)〈109 CFU/mL,繼續(xù)培養(yǎng)直至達(dá)至IJIO9 CFU/mL;將培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下導(dǎo)入玻璃安瓶中，液面高度0.8 cm至I cm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結(jié)后將玻璃安瓶用托盤盛裝，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，制備粉末凍干菌種；鼠李糖乳桿菌凍干菌粉按0.4 mg/g劑量添加驢奶中,植物乳桿菌按0.2 mg/g劑量添加到驢奶中；
(7)將添加了上述材料的驢奶混合物進(jìn)行均質(zhì)，均質(zhì)壓力和溫度分別為20-25MPa和45-50°C ;將均質(zhì)后的驢奶混合物，進(jìn)行噴霧干燥；噴霧干燥條件控制為:進(jìn)風(fēng)溫度為130-160°C，塔溫為75°C，排風(fēng)溫度為70_75°C。
[0004]為評(píng)價(jià)本發(fā)明在驢奶粉的基礎(chǔ)上進(jìn)一步調(diào)理腸道菌群，構(gòu)建頭孢曲松致腸道菌群失衡的小鼠模型，再灌胃配方驢奶粉組進(jìn)行干預(yù)治療。灌胃周期為28天，期間收集灌胃前、灌胃中和灌胃后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集糞便，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)和PCR-DGGE分析從而評(píng)價(jià)配方驢奶粉對(duì)小鼠腸道菌群的影響。
[0005]本發(fā)明的有益效果:
1、本發(fā)明配方驢奶粉具有調(diào)理腸道菌群的效果；
2、本發(fā)明配方驢奶粉味道清新，口感好，更易為普通群眾接受，易于推廣。
[0006]【具體實(shí)施方式】 實(shí)施例1
一種調(diào)理腸道菌群的配方驢奶粉，依照如下步驟制備:
(O新鮮胡蘿卜清洗磨皮，修整后再次清洗；切斷、脫水，于恒溫箱70-8(TC下烘干；打粉并過(guò)60目篩得到胡蘿卜粉，將胡蘿卜粉28 mg/g劑量添加到驢奶中；
(2)選取粒圓飽滿的大豆，倒入高速組織搗碎機(jī)中搗碎后通過(guò)100目篩過(guò)濾；稱取100g粉碎后的豆粉，按1:10的料液比加入70%的乙醇溶液，將其充分振蕩混勻；放入微波爐中，將微波功率調(diào)至高火，處理2 min ;轉(zhuǎn)移至離心機(jī)，4500 r/min離心10 min ;將上清液旋轉(zhuǎn)蒸干得到大豆低聚糖，將大豆低聚糖按7.9 mg/g劑量添加到驢奶中；
(3)選取菊芋，將其洗凈切絲，準(zhǔn)確稱取定量菊芋絲20kg ;放置在加熱容器中，加入200g的水，加熱到90°C后保溫20 min，將保溫的菊芋絲及蒸煮液用榨汁機(jī)榨汁取得的菊芋提取液；運(yùn)用加石灰乳、充二氧化碳?xì)怏w、絮凝、沉降、減壓過(guò)濾、脫色等化學(xué)和物理方法將提取液中的蛋白質(zhì)、果膠、氨基酸、色素等雜質(zhì)除去，得到無(wú)色透明的菊粉溶液；將純化的菊粉溶液按200 μ L /g添加到驢奶中；
(4)取蘆根試樣200g，粉碎后過(guò)40目篩；加入一定量蒸餾水進(jìn)行超聲處理，提取數(shù)次，合并濾液并真空濃縮至一定體積后，用一定量的濃度95%乙醇沉淀，抽濾，濾餅加蒸餾水復(fù)溶后用Sevag法脫蛋白；水層再次濃縮、醇沉并過(guò)濾；用乙醇洗滌濾餅數(shù)次，最后經(jīng)真空干燥得蘆根多糖；將提取得到的蘆根多糖按6.5 mg/g劑量添加到驢奶中；
(5)將含低聚異麥芽糖、低聚半乳糖的益生元按0.985 mg/g劑量添加到驢奶中；(6)益生菌凍干活菌粉的制備:首先配制質(zhì)量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于4只500 mL三角瓶?jī)?nèi)，每瓶200 mL，12rC滅菌20 min冷卻至37°C，分別按2%體積比例接種鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌，37°C厭氧培養(yǎng)24-28 h，檢測(cè)2株益生菌培養(yǎng)液的活菌數(shù)，各培養(yǎng)液活菌數(shù)>109 CFU/mL,則可停止培養(yǎng)，如果活菌數(shù)〈109 CFU/mL,繼續(xù)培養(yǎng)直至達(dá)到IO9 CFU/mL;將培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下導(dǎo)入玻璃安瓶中，液面高度0.8 cm至I cm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結(jié)后將玻璃安瓶用托盤盛裝，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，制備粉末凍干菌種；鼠李糖乳桿菌凍干菌粉按0.4 mg/g劑量添加驢奶中,植物乳桿菌按0.2 mg/g劑量添加到驢奶中；
(7)將添加了上述材料的驢奶混合物進(jìn)行均質(zhì)，均質(zhì)壓力和溫度分別為20-25MPa和45-50°C ;將均質(zhì)后的驢奶混合物，進(jìn)行噴霧干燥；噴霧干燥條件控制為:進(jìn)風(fēng)溫度為130-160°C，塔溫為75°C，排風(fēng)溫度為70_75°C。
[0007]實(shí)施例2腸道菌群調(diào)理試驗(yàn)
腸道菌群失衡小鼠模型的構(gòu)建:BALB/c小鼠灌胃125 mg/mL的頭孢曲松溶液0.2 mL/次(相當(dāng)于成人正常劑量的10倍)，每天2次，時(shí)間間隔6 h，連續(xù)灌胃5d，造成腸道菌群紊亂模型。
[0008]對(duì)造模小鼠灌胃實(shí)施例1制備的配方驢奶粉，按5 g/kg (配方驢奶粉/小鼠體重)的劑量灌胃，每只小鼠每次的灌胃量為300 UL/日，每日一次，共灌胃28天。
[0009]小鼠糞便的收集:小鼠糞便的采集分三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，依次為造模前、造模后和灌胃后。收取糞便樣品時(shí)，輕揉小鼠的直腸部位，用無(wú)菌離心管收集小鼠糞便，每只小鼠收集3-4粒糞便，送到無(wú)菌操作臺(tái)待檢。
[0010]小鼠糞便微生物的活菌計(jì)數(shù):稱取0.1 g糞便樣品，加入I mL已滅菌的0.85%生理鹽水，置于旋渦振蕩器上將糞便樣品充分振蕩混勻，按10倍倍比稀釋，選取合適的稀釋濃度接種到相應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基(見(jiàn)表1.1)，待培養(yǎng)結(jié)束，計(jì)算每克濕糞便樣中的細(xì)菌數(shù)。
[0011]表1腸道菌群檢驗(yàn)用培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件
【權(quán)利要求】
1.一種調(diào)理腸道菌群的配方驢奶粉，其特征在于依照如下步驟制備: (1)新鮮胡蘿卜清洗磨皮，修整后再次清洗；切斷、脫水，于恒溫箱70-8(TC下烘干，打粉并過(guò)60目篩得到胡蘿卜粉，將胡蘿卜粉28 mg/g劑量添加到驢奶中； (2)選取粒圓飽滿的大豆，倒入高速組織搗碎機(jī)中搗碎后通過(guò)100目篩過(guò)濾；稱取100g粉碎后的豆粉，按1:10的料液比加入70%的乙醇溶液，將其充分振蕩混勻；放入微波爐中，將微波功率調(diào)至高火，處理2 min ;轉(zhuǎn)移至離心機(jī)，4500 r/min離心10 min ;將上清液旋轉(zhuǎn)蒸干得到大豆低聚糖，將大豆低聚糖按7.9 mg/g劑量添加到驢奶中； (3)選取菊芋，將其洗凈切絲，準(zhǔn)確稱取定量菊芋絲200g ;放置在加熱容器中，加入200g的水，加熱到90°C后保溫20 min，將保溫的菊芋絲及蒸煮液用榨汁機(jī)榨汁取得的菊芋提取液；加石灰乳、充二氧化碳?xì)怏w、絮凝、沉降、減壓過(guò)濾、脫色將提取液中的蛋白質(zhì)、果膠、氨基酸、色素雜質(zhì)除去，得到無(wú)色透明的菊粉溶液；將純化的菊粉溶液按200 UL /g添加到驢奶中； (4)取蘆根試樣200g，粉碎后過(guò)40目篩；加入一定量蒸餾水進(jìn)行超聲處理，提取數(shù)次，合并濾液并真空濃縮，95%乙醇沉淀，抽濾，濾餅加蒸餾水復(fù)溶后用Sevag法脫蛋白；水層再次濃縮、醇沉并過(guò)濾；用乙醇洗滌濾餅數(shù)次，最后經(jīng)真空干燥得蘆根多糖；將提取得到的蘆根多糖按6.5 mg/g劑量添加到驢奶中； (5)將含低聚異麥芽糖、低聚半乳糖的益生元按0.985 mg/g劑量添加到驢奶中； (6)益生菌凍干活菌粉的制備:首先配制質(zhì)量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于4只500 mL三角瓶?jī)?nèi)，每瓶200 mL，12rC滅菌20 min冷卻至37°C，分別按2%體積比例接種鼠李糖乳桿菌和植物乳桿菌，37°C厭氧培養(yǎng)24-28 h，檢測(cè)2株益生菌培養(yǎng)液的活菌數(shù)，各培養(yǎng)液活菌數(shù)>109 CFU/mL，則可停止培養(yǎng)，如果活菌數(shù)〈109 CFU/mL，繼續(xù)培養(yǎng)直至達(dá)至IJ 109CFU/mL ;將培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下導(dǎo)入玻璃安瓶中，液面高度0.8 cm至I cm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結(jié)后將玻璃安瓶用托盤盛裝，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，制備粉末凍干菌種；鼠李糖乳桿菌凍干菌粉按0.4 mg/g劑量添加驢奶中,植物乳桿菌按0.2 mg/g劑量添加到驢奶中； (7)將添加了上述材料的驢奶混合物進(jìn)行均質(zhì)，均質(zhì)壓力和溫度分別為20-25MPa和45-500C ;將均質(zhì)后的驢奶混合物，進(jìn)行噴霧干燥。
2.如權(quán)利要求1所述的配方驢奶粉，其特征在于步驟(7)噴霧干燥條件控制為:進(jìn)風(fēng)溫度為130-160°C，優(yōu)選為150°C，塔溫為75°C，排風(fēng)溫度為70_75°C。
【文檔編號(hào)】A23C9/152GK103651847SQ201310694001
【公開(kāi)日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2013年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月18日
【發(fā)明者】魏華, 賴衛(wèi)華, 許恒毅, 彭珊珊, 徐鋒 申請(qǐng)人:南昌大學(xué)