一株灰色鏈霉菌cccq171及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株灰色鏈霉菌（Streptomyces?griseochromogenes）CCCQ171及其應用，所述灰色鏈霉菌CCCQ171其保藏編號為：CGMCC?No.6227，根據產地命名為嘉陵菌。本發(fā)明還公開了所述灰色鏈霉菌CCCQ171在農用微生物菌劑中的應用及其農用微生物菌劑，所述農用微生物菌劑中含有灰色鏈霉菌CCCQ171，所述農用微生物菌劑用于防治煙草病害或誘導煙草對煙草病害產生抗性。所述灰色鏈霉菌CCCQ171是從煙田土壤中分離獲得，與自然生態(tài)具有天然的和諧相融性，與化學農藥相比對土壤生態(tài)無毒副作用、無殘留，因此，在病害的生物防治實踐中具有潛在的商業(yè)開發(fā)和應用價值。
【專利說明】—株灰色鏈霉菌CCCQ171及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物及微生物應用煙草病害防治領域，具體涉及具有煙草病害防治功能的菌株一株灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)及其應用。
【背景技術】
[0002]自然界在長期進化過程中，植物與周圍環(huán)境微生物之間存在普遍互作現(xiàn)象。有兩類有益的植物-微生物共生:一類是有營養(yǎng)功能的，如固氮細菌或菌根真菌(mycorrhizalfungi);一類是有防御功能的，如抑制病原菌的內生菌和附生菌。這兩類有益的共生微生物都能提高植物的適應能力。農用化學物質(化肥和農藥)和“精耕細作”的栽培方式在農業(yè)生產中發(fā)揮著重要作用。在這種栽培方式下，栽培作物中植物一微生物這一平衡體系被打破，缺乏有益的植物-微生物共生，使得作物生產高度依賴于化肥和農藥。而化肥農藥的頻繁使用造成了全球環(huán)境的污染，并且污染物最終通過食物鏈進入人體。因此外源應用有益微生物，重建生態(tài)友好的、有益的植物-微生物共生體受到人們的極大關注，并顯示了應用這種微生物制劑進行生物防治的潛力。
[0003]煙草病害的綜合防治一直是煙葉生產中的重要環(huán)節(jié)，長期以來化學防治在煙草病害防治策略中占據非常重要的地位。煙草生產上化學農藥的大量和長期連續(xù)使用以及使用技術的不合理，使得煙草根黑腐病菌產生抗藥性，且不同來源的根黑腐病原菌株的抗藥性也存在著差異。耐藥性菌株的出現(xiàn)不僅增加防治病害的成本，而且加重使用農藥對環(huán)境的污染，生態(tài)系統(tǒng)的破壞，同時也直接影響煙葉品質。在克服植物病害的抗藥性、減少化學殺菌劑對環(huán)境的污染、生態(tài)的破壞及農副產品中化學農藥的殘留方面，生防微生物具有獨特的優(yōu)勢，利用放線菌的次生 代謝產物制備的生物農藥，具有無污染、無殘留、不易使有害生物產生抗藥性、與環(huán)境相容性高、對人畜安全等特點已成為無公害綠色農藥的主體和未來農藥的發(fā)展方向。因此，大力開展生防微生物的生物防治研究是農業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要途徑，具有重要的生產實際意義 。

【發(fā)明內容】

[0004]為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供一株灰色鏈霉菌(Streptomycesgriseochromogenes) CCCQl71 及其應用。
[0005]一株灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes) CCCQ171,其保藏編號為:CGMCC N0.6227，保藏單位為:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，保藏日為:2012年6月15日。
[0006]所述灰色鏈霉菌CCCQ171的16S rDNA序列如SEQ ID No:1所示。
[0007]所述灰色鏈霉菌CCCQ171在農用微生物菌劑中的應用。
[0008]如上所述灰色鏈霉菌CCCQ171在農用微生物菌劑中的應用，所述農用微生物菌劑用于防治煙草病害或誘導煙草對煙草病害產生抗性。
[0009]如上所述灰色鏈霉菌CCCQ171在農用微生物菌劑中的應用，所述煙草病害為煙草根黑腐病、煙草黑脛病或煙草赤星病。
[0010]一種農用微生物菌劑，含有灰色鏈霉菌CCCQ171。
[0011]如上所述的農用微生物菌劑，所述農用微生物菌劑用于防治煙草病害或誘導煙草對煙草病害產生抗性。
[0012]如上所述的農用微生物菌劑，所述煙草病害為煙草根黑腐病、煙草黑脛病或煙草赤星病。
[0013]從煙株根際土壤中分離獲得的灰色鏈霉菌CCCQ171，是首次發(fā)現(xiàn)并鑒定的一個新菌株，其本身對煙草根黑腐病病菌等多種植物病原菌有很強的抑制作用，其發(fā)酵液對煙草根黑腐病有很好的防控效果。根據菌株菌落培養(yǎng)性狀、形態(tài)特征和生理生化性狀及16SrDNA序列比對分析，確定CCCQ171菌株為灰色鏈霉菌，根據產地命名為嘉陵菌。因為該菌株是從煙田土壤中分離獲得，與自然生態(tài)具有天然的和諧相融性，與化學農藥相比對土壤生態(tài)無毒副作用、無殘留，因此，在病害的生物防治實踐中具有潛在的商業(yè)開發(fā)和應用價值。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1為本發(fā)明實施例2中CCCQ171菌株對煙草根黑腐病病菌的平板拮抗效果圖。
[0015]圖2為本發(fā)明實施例3中CCCQ171菌株對煙草根黑腐病的溫室控病效果圖。
[0016]圖3為本發(fā)明實 施例3中CCCQ171菌株對煙草根黑腐病病菌菌絲的直接抑制效果圖。
【具體實施方式】
[0017]為了更好的理解本發(fā)明，下面結合附圖和實施例對本發(fā)明做進一步描述。
[0018]如無特殊說明，以下實施例中所采用的操作均為本領域技術人員所熟知的常規(guī)操作，試劑、菌種等均為市售產品。
[0019]實施例1CCCQ171菌株的篩選與鑒定
[0020]從重慶煙田土壤中分離獲得的多個菌株經初篩和復篩后得到有抑菌活性的放線菌17株。初篩采用平板對峙法，復篩采用氯仿熏蒸法。最后經過控病防效試驗確定對煙草根黑腐病有較好防治作用的為本發(fā)明灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)CCCQl71 菌株。
[0021]1.1菌落特征觀察
[0022]用酵母精麥芽糖瓊脂培養(yǎng)基(ISP-2)、燕麥粉瓊脂培養(yǎng)基(ISP-3)、無機鹽淀粉瓊脂培養(yǎng)基(ISP-4)、甘油天門冬素瓊脂培養(yǎng)基(ISP-5)以及馬鈴薯浸汁培養(yǎng)基、查氏(Czapck)培養(yǎng)基和改良高氏I號培養(yǎng)基制成固體平板培養(yǎng)基。將CCCQ171菌株劃線接種于以上7種培養(yǎng)基平板上，28°C恒溫培養(yǎng)7-14d，待其菌絲生長穩(wěn)定后，用解剖鏡分別觀察單菌落形態(tài)、氣生菌絲、基內菌絲、孢子絲顏色。
[0023]在不同培養(yǎng)基中CCCQ171菌落形態(tài)分別為:
[0024]ISP-2培養(yǎng)基:菌落圓形，中間有褶皺凸起，菌落邊緣有暈圈，氣生菌絲白色，短絨毛狀，孢子絲灰白色，基內菌絲深褐色。
[0025]ISP-3培養(yǎng)基:菌落圓形，邊緣菌絲呈短絨毛狀，氣生菌絲絮狀或粉狀，先白色后變灰，孢子絲灰色，基內菌絲絳褐色，產生色素。[0026]ISP-4培養(yǎng)基:菌落邊緣不規(guī)則，略圓形，氣生菌絲白色長絨毛狀，孢子絲白色，基內菌絲淡黃色，不產色素。
[0027]ISP-5培養(yǎng)基:菌落圓形，邊緣菌絲呈放射狀，稀疏，氣生菌絲灰色長絨毛狀，孢子絲灰褐色，基內菌絲從淡黃色到褐黃色，產生色素。
[0028]馬鈴薯浸汁培養(yǎng)基:菌落中間凸起，邊緣有暈圈，氣生菌絲白色長絨毛狀，孢子絲灰色，基內菌絲從絳紫色到灰色，略產淡褐色色素。
[0029]Czapck培養(yǎng)基:菌落邊緣呈放射狀，氣生菌絲白色長絨毛狀，邊緣稀疏，中間孢子絲呈絮狀，灰色，基內菌絲無色，不產色素。
[0030]改良高氏I號培養(yǎng)基:菌落較大，呈圓形，中間凸起，氣生菌絲白色，孢子絲灰白色，基內菌絲絳黃色至深褐色，產生色素。
[0031]L 2菌絲體與孢子特征觀察
[0032]采用插片法觀察CCCQ171菌株的菌絲形態(tài)以及孢子特征。取CCCQ171菌株菌懸液涂布于改良高氏I號培養(yǎng)基上，用鑷子夾取已滅菌的蓋玻片，以大約45°斜插入培養(yǎng)基內，每平板插4-5片。將插片后的平板倒置于28°C培養(yǎng)，3-5天后用鑷子小心取出蓋玻片，然后將有菌的一面蓋在載玻片上，直接用顯微鏡觀察CCCQ171菌株的氣生菌絲、孢子鏈及孢子的著生情況。CCCQ171菌株的菌絲體與孢子特征:孢子鏈長而直，成簇，有少數孢子鏈螺旋狀，孢子近球形。由此從形態(tài)上初步確定CCCQ171菌株的分類屬于放線菌，鏈霉菌科鏈霉菌屬。
[0033]1.3分子生物學鑒定
[0034]通過提取CCCQ171菌株基因組DNA和16S rDNA PCR擴增，CCCQ171菌株擴增出的16S rDNA片段長度為1487bp,序列如SEQ ID N0.1所示，與鏈霉菌屬(Streptomyces sp.)在遺傳上相近。
[0035]灰色鏈霉菌CCCQ171是首次發(fā)現(xiàn)并鑒定的一個新菌株，結合分子生物學鑒定、培養(yǎng)特性、形態(tài)特征、革蘭氏染色及生理生化試驗結果，將CCCQ171菌株確定為灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes),根據產地命名為嘉陵菌。該菌種的活體純培養(yǎng)已于2012年6月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號=CGMCCN0.6227，地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所。
[0036]實施例2CCCQ171菌株抑菌譜試驗
[0037]采用平板對峙法，取不同病菌菌株進行活化，用滅菌打孔器(直徑6mm)在菌落邊緣區(qū)域打孔制成菌片，轉接至PDA平板中央，28°C培養(yǎng)48h，待其定殖后，在距離中心30mm處兩側接入CCCQ171菌株，每處理重復3次。28°C恒溫培養(yǎng)7d，測量抑菌帶寬，測量病菌的菌落直徑，計算抑菌率。CCCQ171菌株對煙草病菌的拮抗效果如表1所示。
[0038]表1CCCQl71菌株抗菌譜篩選
【權利要求】
1.一株灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)CCCQ171,其特征在于，其保藏編號為:CGMCC N0.6227。
2.根據權利要求1所述的灰色鏈霉菌(Streptomycesgriseochromogenes) CCCQ171,其特征在于，該菌株的16S rDNA序列如SEQ ID No:1所示。
3.權利要求1或2所述的灰色鏈霉菌(Streptomycesgriseochromogenes)CCCQ171在農用微生物菌劑中的應用。
4.根據權利要求3所述的灰色鏈霉菌(Streptomycesgriseochromogenes)CCCQ171在農用微生物菌劑中的應用，其特征在于，所述農用微生物菌劑用于防治煙草病害或誘導煙草對煙草病害產生抗性。
5.根據權利要求4所述的灰色鏈霉菌(Streptomycesgriseochromogenes)CCCQ171在農用微生物菌劑中的應用，其特征在于，所述煙草病害為煙草根黑腐病、煙草黑脛病或煙草赤星病。
6.一種農用微生物菌劑，其特征在于，所述農用微生物菌劑中含有權利要求1或2所述的菌株。
7.根據權利要求6所述的農用微生物菌劑，其特征在于，所述農用微生物菌劑用于防治煙草病害或誘導煙草對煙草病害產生抗性。
8.根據權利要求6所述的農用微生物菌劑，其特征在于，所述煙草病害為煙草根黑腐病、煙草黑脛病或煙草赤星病。`
【文檔編號】C12N1/20GK103695350SQ201310699082
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月18日 優(yōu)先權日:2013年12月18日
【發(fā)明者】王泊理, 馬冠華, 溫好菊, 趙勇 申請人:肇慶市真格生物科技有限公司