一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種發(fā)酵乳用發(fā)酵劑的制備方法，包括培養(yǎng)基配制、種子活化與改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng)、保護(hù)劑添加、冷凍真空干燥及無菌真空包裝過程。通過開發(fā)改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng)技術(shù)及發(fā)酵劑制備與保藏方法，達(dá)到提高發(fā)酵劑的菌濃與細(xì)胞活性，減少發(fā)酵所用時(shí)間，簡化生產(chǎn)操作，降低生產(chǎn)成本之目的。所制備的干粉發(fā)酵劑內(nèi)含活菌量達(dá)3.7×1011/g，接種量為1g/L的發(fā)酵乳凝乳時(shí)間為1.95h。
【專利說明】一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及乳酸菌的高密度培養(yǎng)、發(fā)酵劑的冷凍真空干燥與包裝及保藏，即高效發(fā)酵劑制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]高密度培養(yǎng)技術(shù)(HighCell Density Cultivation / high cell densityfermentation)，即高密度發(fā)酵技術(shù)，是一種顯著提高生物量進(jìn)而提高生產(chǎn)效率的重要生物技術(shù)。由于菌株之間的差異很大，目前對(duì)不同菌株的高密度標(biāo)準(zhǔn)不同。一般指微生物在液體培養(yǎng)中細(xì)胞群體密度超過常規(guī)培養(yǎng)10倍以上時(shí)稱之為高密度培養(yǎng)。不同的菌株可通過不同的培養(yǎng)方法和條件或裝置，使菌體密度或代謝產(chǎn)物在培養(yǎng)液中的濃度較之傳統(tǒng)培養(yǎng)方式有顯著提高，從而減少培養(yǎng)體積，縮短生產(chǎn)周期，達(dá)到提高特定產(chǎn)物產(chǎn)量和產(chǎn)率之目的。最終實(shí)現(xiàn)減少設(shè)備投資，降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)品的市場(chǎng)競爭力。
[0003]改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng)(modified sem1-continuous culture)指在微生物培養(yǎng)過程中，當(dāng)菌體生長處于對(duì)數(shù)生長期時(shí)按一定比例轉(zhuǎn)到(或加入)新的未接種的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，如此反復(fù)，稱之謂改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng)。改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng)保持乳酸菌始終處于活躍的細(xì)胞繁殖時(shí)期，同時(shí)補(bǔ)充新的培養(yǎng)基營養(yǎng)成份和稀釋代謝產(chǎn)生的有害物質(zhì)以達(dá)到菌體高密度積累之目的。該發(fā)明技術(shù)具有方法簡便，過程中無需調(diào)節(jié)溶氧及pH值之特點(diǎn)。
[0004]保護(hù)劑具有對(duì)微生物的防冷凍和防脫水之功效，特別是降低在冷凍過程中冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷。目前，對(duì)乳酸菌的冷凍刺激反應(yīng)及其適應(yīng)性的深層機(jī)理研究不是很多。一般認(rèn)為，冷凍過程對(duì)乳酸菌的生理影響主要表現(xiàn)三個(gè)方面:一是細(xì)胞膜的流動(dòng)性下降，進(jìn)而影響細(xì)胞的代謝活性；二是影響乳酸菌DNA和RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性及酶的活性，進(jìn)而影響DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯效率；三是冰晶的形成造成對(duì)細(xì)胞的物理損傷等。乳酸菌的保護(hù)劑目前根據(jù)其滲透性可分非滲透·性保護(hù)劑(如多羥基化合物、多糖等)，半滲透性保護(hù)劑(如單糖、二糖、氨基酸等)，滲透性保護(hù)劑(如甘油、二甲基亞砜等)及生物活性因子(如維生素、核苷酸及氨基酸等)。
[0005]冷凍真空干燥的原理是將待保藏的微生物細(xì)胞懸浮液凍結(jié)后，在真空下使冰升華，使之達(dá)到干燥和便于保藏和使用之目的。無菌真空包裝的原理是隔絕空氣中的氧和水份，使細(xì)胞處于休眠狀態(tài)，有利于發(fā)酵劑的長期保藏。
[0006]目前，關(guān)于發(fā)酵劑生產(chǎn)的研究已有少量報(bào)道，涉及其生產(chǎn)工藝與專用設(shè)備。本發(fā)明技術(shù)不同于已報(bào)道生產(chǎn)方法的主要特征是:根據(jù)微生物生理及生化特點(diǎn)，開發(fā)出改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng)技術(shù)及發(fā)酵劑制備與保藏方法。用這種方法生產(chǎn)的發(fā)酵劑與其他方法生產(chǎn)的發(fā)酵劑相比具有活菌存活率高、生物活性高、保存期長、接種量少等特點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明發(fā)明提供一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，通過開發(fā)改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng)技術(shù)及發(fā)酵劑制備與保藏方法，達(dá)到提高發(fā)酵劑的菌濃與細(xì)胞活性，減少發(fā)酵所用時(shí)間，簡化生產(chǎn)操作，降低生產(chǎn)成本之目的。進(jìn)而實(shí)現(xiàn)本公司發(fā)酵劑的自主生產(chǎn)使用，從根本上扭轉(zhuǎn)對(duì)進(jìn)口發(fā)酵劑的依賴，實(shí)現(xiàn)更大的社會(huì)與經(jīng)濟(jì)效益。
[0008]一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于:包括以下步驟:培養(yǎng)基配制、種子活化與改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng)、保護(hù)劑添加、冷凍真空干燥及無菌真空包裝。
[0009]一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，包括以下步驟:培養(yǎng)基配制好后，按
0.01-10% (W/V)的接種量接乳酸菌菌種干粉于培養(yǎng)基中，35-45 °C下靜置培養(yǎng)2_18 h至充分凝乳進(jìn)行活化；活化種子按1-100 % (V:V)接入新的含1-15%全脂奶或脫脂奶的培養(yǎng)基中，35-45 °C，調(diào)控pH5-8擴(kuò)大培養(yǎng)1-10 h至凝乳，重復(fù)擴(kuò)大培養(yǎng)1-5次；按0.0001-1%(W/V)加入保護(hù)劑并混合均勻，冷凍真空干燥及無菌真空包裝，即得。
[0010]一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于:包括以下步驟:用符合國家衛(wèi)生飲用標(biāo)準(zhǔn)的水制備1-15%的全脂奶粉或脫脂奶粉培養(yǎng)基；按0.01-10% (W/V)的接種量接乳酸菌菌種干粉于培養(yǎng)基中，35-45 °C下靜置培養(yǎng)2-18 h至充分凝乳進(jìn)行活化；活化種子按1-100 % (V:V)接入新的含1-15%全脂奶或脫脂奶的培養(yǎng)基中，35-45 °C，調(diào)控pH5_8擴(kuò)大培養(yǎng)1-10 h至凝乳，重復(fù)擴(kuò)大培養(yǎng)1-5次；按0.0001-1% (W/V)加入保護(hù)劑并混合均勻；-20 °(:左右預(yù)凍4-24 h，轉(zhuǎn)至-40 °C左右真空冷凍干燥12-48 h至干粉；干燥后的發(fā)酵劑進(jìn)行無菌真空包裝，真空度(0.20 Mpa，即得，于-20 °(:左右長期保藏。
[0011]的一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于:所述的培養(yǎng)基是合成培養(yǎng)基，特別是符合國家食品衛(wèi)生質(zhì)量安全標(biāo)準(zhǔn)的全脂奶粉或脫脂奶粉。
[0012]所述的一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于:所述的保護(hù)劑指的是單糖、雙糖、甘油、多糖及其它多羥基化合物、二甲基亞砜、維生素、核苷酸及氨基酸中的一種。
[0013]所述的一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于:所述種子活化與改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng)收集的菌體處于對(duì)數(shù)`期，轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基中能夠直接進(jìn)入對(duì)數(shù)期，其培養(yǎng)條件是世代時(shí)間最短所需的條件，如此半連續(xù)培養(yǎng)得到的最終活菌濃度能夠達(dá)IO9~1012個(gè)/ml。
[0014]所述的一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于:所述的保護(hù)劑對(duì)貯藏期內(nèi)的細(xì)胞存活率和發(fā)酵時(shí)的微生物活性及品質(zhì)穩(wěn)定性起保護(hù)作用。
[0015]所述的一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于:所述的預(yù)凍可以幫助乳酸菌在冷刺激之后產(chǎn)生冷激蛋白，飽和脂肪酸轉(zhuǎn)化成不飽和脂肪酸，進(jìn)而對(duì)乳酸菌在后期的冷凍干燥和冷藏中起重要的保護(hù)作用；所述的冷凍真空干燥在低溫下去除發(fā)酵劑中的水份，便于發(fā)酵劑的保藏和運(yùn)輸。
[0016]所述的一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于:所述的無菌真空包裝可隔絕空氣中的氧和微生物，有利于發(fā)酵劑的長期保藏。
[0017]本發(fā)明所說的一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，包括以下步驟:
(O培養(yǎng)基配制:用符合國家衛(wèi)生飲用標(biāo)準(zhǔn)的水配制2.5%和10 %脫脂奶粉或全脂奶粉培養(yǎng)基各I L，115 oC滅菌15 min ；
(2)種子活化與改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng):按0.01-10% (W/V)的接種量接乳酸菌菌種(干粉)于培養(yǎng)基中，35-45 °C下靜置培養(yǎng)至充分凝乳進(jìn)行活化(2-18 h);活化種子按1-100 % (V:V)接入新的含2.5-10%全脂奶或脫脂奶的培養(yǎng)基中，35-45 °C，調(diào)控pH5_8擴(kuò)大培養(yǎng)至凝乳(2-10 h)，重復(fù)擴(kuò)大1-5次；
(3)保護(hù)劑添加:按0.0001-1% (W/V)加入保護(hù)劑并混合均勻，配制的保護(hù)劑成分及比例為0.0001-0.1 %谷胱甘肽，0.01-1 %海藻糖，0.1-10 %寡糖，0.1-10 %甘油;
(4)冷凍真空干燥:-20°C預(yù)凍4-24 h，轉(zhuǎn)至-40 °C左右真空冷凍干燥至干粉(24-72
h)；
(5)無菌真空包裝:干燥后的發(fā)酵劑進(jìn)行無菌真空包裝(真空度(0.20MPa);于-20oC長期保藏。
[0018]所制備的干粉發(fā)酵劑內(nèi)含活菌量為101° _12/ g，接種量為I g / L的發(fā)酵乳凝乳時(shí)間≤3 h。
[0019]本發(fā)明的原理為:
本發(fā)明所說的一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，過程主要包括:培養(yǎng)基配制、種子活化與改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng)、保護(hù)劑添加、冷凍真空干燥及無菌真空包裝。其特征在于，改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng)過程中的細(xì)胞始終處于生長的對(duì)數(shù)期，以幾何指數(shù)的方式進(jìn)行細(xì)胞增長，其保護(hù)劑的添加可保護(hù)細(xì)胞免遭質(zhì)壁分離及細(xì)胞膜免遭機(jī)械損傷，進(jìn)而達(dá)到提高細(xì)胞存活之目的。
[0020]本發(fā)明的有益效果: 本發(fā)明提供一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法。通過培養(yǎng)基配制、種子活化與改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng)、保護(hù)劑添加、冷凍真空干燥及無菌真空包裝過程獲得高菌濃、高活性的乳酸菌的干粉發(fā)酵劑。該方法制備的干粉發(fā)酵劑優(yōu)勢(shì)主要在于:(1)菌濃及活性高，(2)凝乳快，
(3)用量少，(4)成本低，(5)使用方便，(6)便于運(yùn)輸與保藏。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，其目的是更好理解本
【發(fā)明內(nèi)容】
。因此，所舉之例并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。此外，在所列實(shí)施例中如無特別說明勻采用如下材料
I)菌種:乳酸球菌(嗜熱鏈球菌StrepiococciAs thermophiIus) IBL25和乳酸桿菌(德式乳桿菌保加利亞亞種bulgaricus^) IBL26。
[0022]2)培養(yǎng)基:
Lee氏瓊脂培養(yǎng)基(I L) 酵母粉10.0 g，胰蛋白胨10.0 8，乳糖5.0 8，蔗糖5.0 g，K2HP04 0.5 g，溴甲酚紫0.02 g，瓊脂20.0 g，加水定容至1000 ml。分裝，121 °C滅菌20min (用于平板計(jì)數(shù))
實(shí)施例1
一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，包括以下步驟:
(1)培養(yǎng)基配制:用符合國家衛(wèi)生飲用標(biāo)準(zhǔn)的水配制2.5 %和10 %脫脂牛乳培養(yǎng)基各
IL, 115 oC 滅菌 15 min ；
(2)種子活化與改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng):按0.01-10% (W/V)的接種量接乳酸菌菌種(干粉)于培養(yǎng)基中，35-43 °C下靜置培養(yǎng)至充分凝乳進(jìn)行活化(2-10 h);活化的種子按5-100 %接入新的含2.5%脫脂奶的培養(yǎng)基中，35-43 °(:擴(kuò)大培養(yǎng)至凝乳(2-6 h)，重復(fù)2次；
(3)保護(hù)劑添加:不添加除菌液中脫脂乳外的任何保護(hù)劑；
(4)冷凍真空干燥:-20°C預(yù)凍8-24 h，轉(zhuǎn)至-40 °C左右真空冷凍干燥至干粉(24-48h)；
(5)無菌真空包裝:干燥后的發(fā)酵劑進(jìn)行無菌真空包裝(真空度(0.20 MPa);于-20oC長期保藏。
[0023]所制備的濕發(fā)酵劑活菌濃度為5.2X IO9Cfu / ml，接種量為I g / L的發(fā)酵乳凝乳時(shí)間為3.12 h;所制備的干粉發(fā)酵劑內(nèi)含活菌量為2.4X 101° / g，接種量為I g / L的發(fā)酵乳凝乳時(shí)間為3 h。
[0024]實(shí)施例2
一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，包括以下步驟:
(1)培養(yǎng)基配制:用符合國家衛(wèi)生飲用標(biāo)準(zhǔn)的水配制2.5 %和10 %脫脂牛乳培養(yǎng)基各I L, 115 oC 滅菌 15 min ；
(2)種子活化與改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng):按0.01-10% (W/V)的接種量接乳酸菌菌種(干粉)于培養(yǎng)基中，35-43 °C下靜置培養(yǎng)至充分凝乳進(jìn)行活化(2-10 h);活化的種子按5-100 %接入新的含2.5%脫脂奶的培養(yǎng)基中，35-43 °(:擴(kuò)大培養(yǎng)至凝乳(2-6 h)，重復(fù)2次；
(3)保護(hù)劑添加:按0.0001-1% (W/V)加入保護(hù)劑并混合均勻，配制的保護(hù)劑成分及比例為0.0001-0.1 %谷胱甘肽，0.01-1 %海藻糖，0.1-10 %寡糖，0.1-10 %甘油;
(4)冷凍真空干燥:-20°C預(yù)凍8-24 h，轉(zhuǎn)至-40 °C左右真空冷凍干燥至干粉(24-48
h)；
(5)無菌真空包裝:干燥后的發(fā)酵劑進(jìn)行無菌真空包裝(真空度(0.20MPa);于-20oC長期保藏。
[0025]所制備的濕發(fā)酵劑活菌濃度為4.7X IO9Cfu / ml，接種量為I g / L的發(fā)酵乳凝乳時(shí)間為2.83 h;所制備的干粉發(fā)酵劑內(nèi)含活菌量為2.6X 101°/ g，接種量為I g / L的發(fā)酵乳凝乳時(shí)間為2.9 h。
[0026]實(shí)施例3
一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，包括以下步驟:
(1)培養(yǎng)基配制:用符合國家衛(wèi)生飲用標(biāo)準(zhǔn)的水配制5%和10 %全脂牛乳培養(yǎng)基各IL, 115 oC 滅菌 15 min ；
(2)種子活化與改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng):按0.01-10% (W/V)的接種量接乳酸菌菌種(干粉)于培養(yǎng)基中，37-41 °C下靜置培養(yǎng)至充分凝乳進(jìn)行活化(2-8 h);活化的種子按10-50 %接入新的含5%全脂奶的培養(yǎng)基中，37-41 °(:擴(kuò)大培養(yǎng)至凝乳(2-6 h)，重復(fù)2次；
(3)保護(hù)劑添加:不添加除菌液中全脂乳外的任何保護(hù)劑；
(4)冷凍真空干燥:-20°C預(yù)凍8-24 h，轉(zhuǎn)至-40 °C左右真空冷凍干燥至干粉(24-48
h)；
(5)無菌真空包裝:干燥后的發(fā)酵劑進(jìn)行無菌真空包裝(真空度(0.20MPa);于-20oC長期保藏。
[0027]所制備的濕發(fā)酵劑活菌濃度為1.4X IO10Cfu / ml，接種量為I g / L的發(fā)酵乳凝乳時(shí)間為2.41 h;所制備的干粉發(fā)酵劑內(nèi)含活菌量為4.0X101(I/ g，接種量為I g / L的發(fā)酵乳凝乳時(shí)間為2.53 h。
[0028]實(shí)施例4
一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，包括以下步驟:(1)培養(yǎng)基配制:用符合國家衛(wèi)生飲用標(biāo)準(zhǔn)的水配制5%和10 %脫脂牛乳培養(yǎng)基各IL, 115 oC 滅菌 15 min ；
(2)種子活化與改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng):按0.01-10% (W/V)的接種量接乳酸菌菌種(干粉)于培養(yǎng)基中，37-41 °C下靜置培養(yǎng)至充分凝乳進(jìn)行活化(2-8 h);活化的種子按10-50 %接入新的含5%全脂奶的培養(yǎng)基中，37-41 °(:擴(kuò)大培養(yǎng)至凝乳(2-6 h)，重復(fù)2次；
(3)保護(hù)劑添加:按0.0001-1% (W/V)加入保護(hù)劑并混合均勻，配制的保護(hù)劑成分及比例為0.0001-0.1 %谷胱甘肽，0.01-1 %海藻糖，0.1-10 %寡糖，0.1-10 %甘油;
(4)冷凍真空干燥:-20°C預(yù)凍8-24 h，轉(zhuǎn)至-40 °C左右真空冷凍干燥至干粉(24-48
h)；
(5)無菌真空包裝:干燥后的發(fā)酵劑進(jìn)行無菌真空包裝(真空度(0.20MPa);于-20oC長期保藏。
[0029]所制備的濕發(fā)酵劑活菌濃度為8.3X IO9Cfu / ml，接種量為I g / L的發(fā)酵乳凝乳時(shí)間為2.28 h;所制備的干粉發(fā)酵劑內(nèi)含活菌量為6.4X 101°/ g，接種量為I g / L的發(fā)酵乳凝乳時(shí)間為2.34 h。
[0030]實(shí)施例5
一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，包括以下步驟:
(1)培養(yǎng)基配制:用符合國家衛(wèi)生飲用標(biāo)準(zhǔn)的水配制5%和10 %脫脂牛乳培養(yǎng)基各IL, 115 oC 滅菌 15 min ；
(2)種子活化與改進(jìn)型半連續(xù)培養(yǎng):按1-10%(W/V)的接種量接乳酸菌菌種(干粉)于培養(yǎng)基中，37-41 °C下靜置培養(yǎng)至充分凝乳進(jìn)行活化(2-5 h);活化的種子按20-50 %接入新的含5%全脂奶的培養(yǎng)基中，37-41 °C，1小時(shí)后調(diào)pH于6.0，繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)至凝乳(2-4h)，重復(fù)3次(最后一次于發(fā)酵罐中進(jìn)行)；
(3)保護(hù)劑添加:按0.0001-1% (W/V)加入保護(hù)劑并混合均勻，配制的保護(hù)劑成分及比例為0.001-0.1 %谷胱甘肽，0.1-1 %海藻糖，0.1-10 %寡糖，0.1-10 %甘油； (4)冷凍真空干燥:-20°C預(yù)凍8-18 h，轉(zhuǎn)至-40 °C左右真空冷凍干燥至干粉(24-48
h)；
(5)無菌真空包裝:干燥后的發(fā)酵劑進(jìn)行無菌真空包裝(真空度(0.20MPa);于-20oC長期保藏。
[0031]所制備的濕發(fā)酵劑活菌濃度為5.2X IO10Cfu / ml，接種量為I g / L的發(fā)酵乳凝乳時(shí)間為1.67 h;所制備的干粉發(fā)酵劑內(nèi)含活菌量為3.7X IO11/ g，接種量為I g / L的發(fā)酵乳凝乳時(shí)間為1.95 h。
【權(quán)利要求】
1.一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于:包括以下步驟:培養(yǎng)基配制好后，按0.01-10% (W/V)的接種量接乳酸菌菌種干粉于培養(yǎng)基中，35-45 °C下靜置培養(yǎng)2_18h至充分凝乳進(jìn)行活化；活化種子按1-100 % (V:V)接入新的含1-15%全脂奶或脫脂奶的培養(yǎng)基中，35-45 °C，調(diào)控pH5-8擴(kuò)大培養(yǎng)1-10 h至凝乳，重復(fù)擴(kuò)大培養(yǎng)1_5次；按0.0001-1%(W/V)加入保護(hù)劑并混合均勻，冷凍真空干燥及無菌真空包裝，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于:包括以下步驟:用符合國家衛(wèi)生飲用標(biāo)準(zhǔn)的水制備1-15%的全脂奶粉或脫脂奶粉培養(yǎng)基；按0.01-10% (W/V)的接種量接乳酸菌菌種干粉于培養(yǎng)基中，35-45 °C下靜置培養(yǎng)2_18 h至充分凝乳進(jìn)行活化；活化種子按1-100 % (V:V)接入新的含1-15%全脂奶或脫脂奶的培養(yǎng)基中，35-45 °C，調(diào)控pH5-8擴(kuò)大培養(yǎng)1-10 h至凝乳，重復(fù)擴(kuò)大培養(yǎng)1-5次；按0.0001-1%(W/V)加入保護(hù)劑并混合均勻；_20 0C左右預(yù)凍4-24 h，轉(zhuǎn)至-40 0C左右真空冷凍干燥12-48h至干粉；干燥后的發(fā)酵劑進(jìn)行無菌真空包裝，真空度(0.20 Mpa，即得，于-20 °C左右長期保藏。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于:所述的培養(yǎng)基是合成培養(yǎng)基，特別是符合國家食品衛(wèi)生質(zhì)量安全標(biāo)準(zhǔn)的全脂奶粉或脫脂奶粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種發(fā)酵乳用高效發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于:所述的保護(hù)劑指的是單糖、雙糖、甘油、多糖及其它多羥基化合物、二甲基亞砜、維生素、核苷酸及氨基酸中的一種。
【文檔編號(hào)】C12R1/46GK103710283SQ201310709580
【公開日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2013年12月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月21日
【發(fā)明者】童望宇, 盧云霞, 羅學(xué)才 申請(qǐng)人:安徽大學(xué)