豬10號染色體上一個與產(chǎn)仔數(shù)相關的分子標記及其引物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及與豬產(chǎn)仔數(shù)性狀相關的分子標記，具體涉及豬10號染色體上一個與產(chǎn)仔數(shù)相關的分子標記及其引物，屬生物【技術領域】。該分子標記位點為基因組版本NCBI?Build?Sscrofa?10.2的Chr10:16018894；該位點的等位基因為T和C，有C/C、T/C和T/T三種基因型，該位點及其側翼序列如SEQ?ID?NO:1所示。擴增該分子標記位點的引物及延伸引物為：Chr10-PCRU：5’-TGC?CAA?ACC?TGT?GTC?ACC-3’；Chr10-PCRL：5’-GGC?TGG?AGA?GGA?AAA?GGG-3’；Chr10-SNPU：5’-TGA?CTA?GAA?GCA?GCC?ATG?GGG?CCC?TGC?AGA-3’。帶有T/T基因型的豬產(chǎn)仔數(shù)高于T/C和C/C基因型。本發(fā)明的有益效果在于：運用全基因組重測序方法，能夠快速、批量地篩選與性狀相關的分子標記或候選基因，Chr10:16018894這個位點能夠作為遺傳標記用于豬的遺傳育提高母豬的產(chǎn)仔數(shù)。
【專利說明】豬10號染色體上一個與產(chǎn)仔數(shù)相關的分子標記及其引物
【技術領域】:
[0001]本發(fā)明涉及與豬產(chǎn)仔數(shù)性狀相關的分子標記，具體涉及豬10號染色體上一個與產(chǎn)仔數(shù)相關的分子標記及其引物，屬生物【技術領域】。
【背景技術】:
[0002]豬的產(chǎn)仔數(shù)性狀是豬繁殖性狀的主要組成部分，提高豬產(chǎn)仔數(shù)對提高養(yǎng)豬業(yè)的總體經(jīng)濟效益意義重大。但產(chǎn)仔數(shù)屬于遺傳力很低的數(shù)量性狀，難以用常規(guī)育種技術進行遺傳改良。我國的太湖豬以高產(chǎn)而聞名，窩產(chǎn)仔數(shù)比大多數(shù)其它中國地方豬種以及國外豬種的窩產(chǎn)仔數(shù)多4-5頭(《中國豬品種志》張仲葛主編，上?？萍汲霭嫔?，1986)。二花臉豬是太湖豬的一種，是世界上繁殖力最高的豬種。太湖豬中與高產(chǎn)仔數(shù)相關的多態(tài)位點，能夠作為遺傳標記用于提高母豬的產(chǎn)仔數(shù)。
[0003]國內(nèi)外研究人員采用全基因組掃描和候選基因的方法對產(chǎn)仔數(shù)性狀進行QTL定位及候選基因的研究。Li 等人(Li, K., J.Ren, et al.Anim Genet.2009.40(6): 963-966)利用覆蓋了豬19條染色體的183個微衛(wèi)星標記對與豬產(chǎn)仔數(shù)相關的總產(chǎn)仔數(shù)，產(chǎn)活仔數(shù)，產(chǎn)死仔數(shù)進行QTL (Quantitative Trait Locus,數(shù)量性狀基因座)定位。他們研究了 299個杜洛克豬與中國二花臉豬雜交的F2代，在6，7，8和15號染色體上定位了與總產(chǎn)仔數(shù)，產(chǎn)活仔數(shù)和產(chǎn)死仔數(shù)相關的QTL。
[0004]Rothschild 等(Rothischild, M.，Jacobson, D.et al.Proc Natl Acad Sci U SA.1996.93(1):201-205)通過候選基因法，利用包括中國梅山系太湖豬在內(nèi)的兩個極端品種雜交，發(fā)現(xiàn)I號染色體上雌激素受體座位的一個基因(ESR)與高產(chǎn)仔數(shù)主效基因連鎖。通過雌激素受體基因 座位的RFLPs分析，認為具有3.7kb條帶的純合型母豬(BB型)比具有4.3kb條帶的純合型母豬(AA型)初產(chǎn)時要多2.3頭(P〈0.01)，每胎平均多產(chǎn)1.5頭(Ρ〈0.01)。目前已報道與產(chǎn)仔數(shù)相關的基因還有0PN(US6410227B1)，PRLR(Tomas, A.，J.Casellas, et al.J Anim Sc1.2006.84 (8): 1991-1998), FSHβ (Zhao, Y.Li N, et al.SciChina C Life Sc1.1998.41(6):664-668)和 RBP4(Spotter, A.，S.Muller, et al.ReprodDomest Anim.2009.44(1):100-105)等。
[0005]應用QTL定位方法能夠定位與性狀緊密連鎖的區(qū)域，但是需要研究幾代家系的很多個體，周期長，費時費力，在一般的實驗室無法完成，而且有些QTL定位很寬泛。利用候選基因法對性狀進行研究，相對來說簡單直接，但是利用候選基因法主要研究的是外顯子區(qū)域的突變，而很多發(fā)揮重要功能的突變很可能在內(nèi)含子或者其它功能區(qū)域；有些復雜性狀是受到多基因調(diào)控的；不能檢出所有的QTL，而且有些用候選基因法研究的基因并沒有找到QTL的定位。
[0006]隨著技術的發(fā)展和成熟，基因組及基因注釋越來越完善。由于測序技術的快速發(fā)展，測序成本的降低，能夠利用全基因組測序或者轉錄組測序?qū)π誀钕嚓P基因或突變位點進行批量篩選。本發(fā)明選擇二花臉豬(太湖豬的一種)，藏豬，巴馬香豬，萊蕪豬，滇南小耳豬等5個中國地方豬種以及野豬進行了全基因組重測序。希望從中篩選出與高產(chǎn)仔數(shù)相關的SNPs (single nucleotide polymorphisms,單核苷酸多態(tài)性)位點作為遺傳標記用于豬的遺傳育種，以提高母豬的產(chǎn)仔數(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0007]本發(fā)明的目的是提供豬10號染色體上一個與產(chǎn)仔數(shù)相關的分子標記及其引物。
[0008]本發(fā)明選擇了二花臉豬(太湖豬的一種)，藏豬，巴馬香豬，萊蕪豬，及滇南小耳豬5個中國地方豬種以及野豬進行了全基因組重測序。6個豬種的重測序個體數(shù)分別為11個，11個，9個，10個，10個和10個。重測序數(shù)據(jù)跟參考基因組(NCBI Build Sscrofa 10.2)進行比對，利用SAMTools軟件進行SNPs位點的提取。發(fā)明人比較了二花臉豬與其它5個豬種，在10號染色體上發(fā)現(xiàn)一個SNP位點(基因組版本NCBI Build Sscrofa 10.2的ChrlO: 16018894)與豬的產(chǎn)仔數(shù)相關。該位點的等位基因為T和C，有C/C、T/C和T/T三種基因型。該位點及其側翼序列(SEQ ID NO:1)為:
[0009]
【權利要求】
1.豬10號染色體上一個與產(chǎn)仔數(shù)相關的分子標記，其特征在于:該分子標記位點為基因組版本NCBI Build Sscrofa 10.2的ChrlO: 16018894，該位點的等位基因為T和C，有C/C、T/C和T/T三種基因型。
2.權利要求1的分子標記，其中所述三種基因型特征在于:帶有T/T基因型的豬產(chǎn)仔數(shù)高于帶有T/C和C/C基因型的豬。
3.權利要求1的分子標記，其中所述等位基因T為提高豬產(chǎn)仔數(shù)的有益等位基因。
4.權利要求1的分子標記，其特征在于:該分子標記位點及其側翼序列如SEQID NO:1所示。
5.權利要求1-4的分子標記，其中所述豬為太湖豬的后代。
6.以豬的DNA為模板擴增包含權利要求1-5所述分子標記在內(nèi)的核苷酸序列片段。
7.以豬的DNA為模板對包含權利要求1-5所述分子標記在內(nèi)的核苷酸序列片段進行測序。
8.擴增權利要求1所述分子標記位點的引物及延伸引物為:
ChrlO-PCRU:5’ -TGC CAA ACC TGT GTC ACC-3’ ；
ChrlO-PCRL:5’ -GGC TGG AGA GGA AAA GGG-3’ ；
ChrlO-SNPU:5’ -TGA CTA GAA GCA GCC ATG GGG CCC TGC AGA-3’。
【文檔編號】C12Q1/68GK103757004SQ201310727912
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年12月26日 優(yōu)先權日:2013年12月26日
【發(fā)明者】張亞平, 黃路生, 謝海兵, 任軍, 艾華水, 徐丹 申請人:中國科學院昆明動物研究所, 江西農(nóng)業(yè)大學