微生物分離培養(yǎng)裝置及其方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種微生物分離培養(yǎng)裝置及其方法；該裝置采用連接件將兩個(gè)培養(yǎng)瓶的瓶口連接，且連接件中配裝過濾組件；該過濾組件是針對目標(biāo)菌株設(shè)置的，因此，將消化培養(yǎng)液經(jīng)過濾組件過濾后，理論上即可分離出目標(biāo)菌株，且過濾得到的目標(biāo)菌株能夠通過連接件流入用于富集培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶中，由此可知，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，目標(biāo)菌株的分離以及轉(zhuǎn)移培養(yǎng)更為便利，能夠減少操作過程中的可能污染，以提高分離效率、減少各項(xiàng)成本。
【專利說明】微生物分離培養(yǎng)裝置及其方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種微生物分離培養(yǎng)裝置及其方法，屬于微生物分離培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，主要應(yīng)用于微生物培養(yǎng)過程的雜菌感染監(jiān)測；另外，本發(fā)明所述微生物分離培養(yǎng)裝置也可以用于病菌分離培養(yǎng)，便于致病菌種類判斷。
【背景技術(shù)】
[0002]自然界的微生物包括細(xì)菌、真菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次體、病毒、螺旋體。微生物檢測是生命科學(xué)領(lǐng)域最基本和最重要的工作。待檢樣品中?；祀s著多種微生物，影響目標(biāo)微生物的分離和培養(yǎng)，干擾檢測結(jié)果和效率；因此，根據(jù)待檢樣本的特征以及待檢微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)、細(xì)胞大小、培養(yǎng)條件、生化特性等，選擇合適的方法對其進(jìn)行分離、培養(yǎng)，是微生物檢測的前提。
[0003]在對目標(biāo)微生物進(jìn)行分離、培養(yǎng)時(shí)，常規(guī)或傳統(tǒng)的方法是采用平皿分離培養(yǎng)法，使其能夠分散生長形成單一菌落，以便于觀察形態(tài)特征或進(jìn)行生化鑒定。這種過程一般需2~3種培養(yǎng)基；除了對標(biāo)本或者樣品進(jìn)行必要的預(yù)處理外，分離培養(yǎng)一般還需通過特殊的接種方法來完成；常用的接種方法有:分區(qū)劃線法、傾注平板法、菌落分純法、斜面接種法、穿刺培養(yǎng)法、液體培養(yǎng)基接種法等；分離培養(yǎng)的操作繁瑣復(fù)雜，人工和材料成本都比較高。
[0004]微生物種的多樣性和待檢樣本的復(fù)雜性，使得目標(biāo)微生物的分離培養(yǎng)工作成為影響微生物檢測的效率與準(zhǔn)確度的一個(gè)關(guān)鍵技術(shù)。普通細(xì)菌的分離培養(yǎng)可采用上述傳統(tǒng)或常規(guī)的平皿分離培養(yǎng)法進(jìn)行；而對于支原體、L型細(xì)菌、某些特殊細(xì)菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，則需要采用更為完善的方法與技術(shù) ，原因在于這類菌種分離效率較低，培養(yǎng)增殖困難，從而增加了培養(yǎng)成本。
[0005]支原體是一類缺乏細(xì)胞壁、有別于細(xì)菌和病毒的原核微生物，其體積微小，直徑一般在0.2~0.3 μ m之間，可通過除菌濾膜。支原體種類繁多(約120多種)，分布非常廣泛，是人類和非人類動(dòng)物以及植物幾種常見疾病的病原體，也是生物制劑生產(chǎn)中最常見的污染物。工業(yè)細(xì)胞培養(yǎng)液中存在的支原體污染，既廣泛又不易被察覺。支原體生長緩慢，通常培養(yǎng)比較困難，對它的鑒定如果采用液體培養(yǎng)法則假陽性率高，準(zhǔn)確性低；如果用固體培養(yǎng)法雖然可以觀察到菌落，但判讀結(jié)果所需時(shí)間較長。同時(shí)使用兩相培養(yǎng)法則操作極為繁瑣，且易受環(huán)境微生物污染，人工及材料的成本較高。
[0006]L型細(xì)菌是一類細(xì)胞壁有缺陷、且在普通環(huán)境中能夠生長和致病的細(xì)菌，包括原生質(zhì)體(革蘭氏陽性菌L型)和原生質(zhì)球(革蘭氏陰性菌L型)，營養(yǎng)要求與原菌基本相同，但必須補(bǔ)充特殊營養(yǎng)物質(zhì)，并加入一定濃度穩(wěn)定劑以提高培養(yǎng)基的滲透壓。某些體積較小的L型細(xì)菌可通過除菌濾膜。此類細(xì)菌生長較緩慢，培養(yǎng)2~7天才能在平板上形成細(xì)小菌落，而在液體培養(yǎng)基中生長后呈較疏松的絮狀顆粒沉于管底。
[0007]軍團(tuán)菌系需氧革蘭氏陰性桿菌，大小為(0.3~0.4) ym X (2~3)μπι，菌體多形性，呈桿狀或線狀，可通過除菌濾膜。軍團(tuán)菌包括45個(gè)種，其中以嗜肺軍團(tuán)菌最為常見，廣泛存在于自然環(huán)境中，在溫水里及潮熱的地方蔓延，常隱藏在包淋浴器、礦泉池、噴泉以及空調(diào)設(shè)備的冷卻水塔等人工供水系統(tǒng)中。本菌生長緩慢，需要3~5日方見菌落。分離培養(yǎng)軍團(tuán)菌，需先對標(biāo)本作酸處理殺滅其他雜菌，并使用富含半骯氨酸和鐵的特殊培養(yǎng)基。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種微生物分離培養(yǎng)裝置，該分離培養(yǎng)裝置利用能否穿透一般的細(xì)菌濾器并在無生命的培養(yǎng)基中生長繁殖等條件，可以分離得到支原體和某些細(xì)菌，再通過選擇性增殖培養(yǎng)等方法來進(jìn)行進(jìn)一步的分離，這樣可以減少操作過程中的可能污染，以提高分離效率、減少各項(xiàng)成本。
[0009] 為實(shí)現(xiàn)以上的技術(shù)目的，本發(fā)明將采取以下的技術(shù)方案:
一種微生物分離培養(yǎng)裝置，包括兩個(gè)培養(yǎng)瓶，每一個(gè)培養(yǎng)瓶的底部通過底蓋封接，且兩個(gè)培養(yǎng)瓶的瓶口之間通過連接件連接，該連接件沿自身軸線開設(shè)通孔，所述通孔的孔壁對應(yīng)于兩個(gè)培養(yǎng)瓶的瓶口分別設(shè)置有一個(gè)連接部位，連接件的兩個(gè)連接部位之間設(shè)置有過濾組件安裝部位，該過濾組件安裝部位安裝有用于過濾目標(biāo)微生物的過濾組件，而每一個(gè)培養(yǎng)瓶的瓶口與連接件的相應(yīng)連接部位之間為可拆卸的密封連接。
[0010]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述的兩個(gè)培養(yǎng)瓶中，其中一個(gè)培養(yǎng)瓶在另一個(gè)培養(yǎng)瓶的上方，且兩個(gè)培養(yǎng)瓶的瓶口相對設(shè)置。
[0011]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，每一個(gè)培養(yǎng)瓶的瓶口均設(shè)置有外螺紋，所述連接件的兩個(gè)連接部位均包括開設(shè)在通孔孔壁上的內(nèi)螺紋以及緊鄰該內(nèi)螺紋設(shè)置的密封槽，所述培養(yǎng)瓶瓶口的外螺紋與連接件上對應(yīng)位置處的內(nèi)螺紋螺紋配合連接，同時(shí)培養(yǎng)瓶的瓶口端部通過置于密封槽中的密封件與連接件密封。
[0012]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述的過濾組件包括濾膜以及濾膜固定裝置，所述的濾膜固定裝置與過濾組件安裝部位螺紋配合連接，而濾膜則通過墊片配裝在濾膜固定裝置上，墊片嵌裝在通孔的孔壁緊鄰過濾組件安裝部位所開設(shè)的墊片槽中，而濾膜則位于墊片和濾膜固定裝置之間。
[0013]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述的培養(yǎng)瓶中設(shè)置有培養(yǎng)支架，該培養(yǎng)支架包括支桿以及培養(yǎng)盤，所述培養(yǎng)盤的開口與培養(yǎng)瓶瓶口朝向一致。
[0014]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述培養(yǎng)盤的盤面與支桿呈傾斜設(shè)置。
[0015]本發(fā)明的另一個(gè)技術(shù)目的是提供一種基于上述微生物分離培養(yǎng)裝置的微生物分離培養(yǎng)方法，所述微生物分離培養(yǎng)裝置中的兩個(gè)培養(yǎng)瓶，分別為培養(yǎng)瓶1、培養(yǎng)瓶II;所述微生物分離培養(yǎng)方法包括以下步驟:步驟一、待檢樣本的消化處理一首先，將待檢樣本接種到備有消化培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶I 100中；接著，通過連接件將培養(yǎng)瓶I 100的瓶口與培養(yǎng)瓶II 300的瓶口連接，且培養(yǎng)瓶I 100的瓶口、培養(yǎng)瓶II 300的瓶口均與連接件密封，同時(shí)連接件中配裝過濾組件；然后，以培養(yǎng)瓶I 100在下、培養(yǎng)瓶II 300在上的狀態(tài)，在37度恒溫條件下?lián)u瓶培養(yǎng)12~24小時(shí)；步驟二、消化培養(yǎng)液的倒置過濾分離——培養(yǎng)瓶I 100在上、培養(yǎng)瓶II 300在下，通過培養(yǎng)瓶II 300的抽濾口 II 302進(jìn)行負(fù)壓抽濾，使菌液由培養(yǎng)瓶I 100流向培養(yǎng)瓶II 300 ;步驟三、含有目標(biāo)菌株的富集液體培養(yǎng)——通過培養(yǎng)瓶I 100的底蓋I 101向培養(yǎng)瓶II 300內(nèi)加入富集培養(yǎng)液，在37度恒溫條件下培養(yǎng)12~24小時(shí)；步驟四、按照目標(biāo)菌株的生化特征判斷富集液體培養(yǎng)液中是否含有目標(biāo)菌株。
[0016]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟四的判斷結(jié)果表明富集液體培養(yǎng)液中含有目標(biāo)菌株，則繼續(xù)進(jìn)行如下操作:步驟五、更換新的培養(yǎng)瓶I 100、連接件及連接件內(nèi)的配件，再將備有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)支架800置入新更換的培養(yǎng)瓶I 100內(nèi)，培養(yǎng)盤801的正面朝向培養(yǎng)瓶I 100的瓶壁外側(cè)，蓋好底蓋I 101 ;步驟六、將步驟五組裝好的裝置倒置，即培養(yǎng)瓶I 100在下、培養(yǎng)瓶II 300在上，通過抽濾口 I 102進(jìn)行負(fù)壓抽濾，使菌液流入培養(yǎng)瓶I 100，菌液浸沒培養(yǎng)支架800，并接種到培養(yǎng)盤801內(nèi)的固體培養(yǎng)基上；步驟七、將上述裝置再次倒置，即培養(yǎng)瓶I 100在上、培養(yǎng)瓶II 300在下，通過抽濾口 II 302進(jìn)行負(fù)壓抽濾，使菌液流入培養(yǎng)瓶II 300 ;步驟八:將上述裝置置于培養(yǎng)箱內(nèi)，并在適合目標(biāo)菌株的溫度下培養(yǎng)24~48小時(shí)；步驟九:觀察培養(yǎng)支架800上培養(yǎng)盤801中的菌落形態(tài)。
[0017]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，在步驟二和步驟六中，進(jìn)行負(fù)壓抽濾時(shí)，將所述瓶蓋I 101旋松。
[0018]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，在步驟六中，進(jìn)行負(fù)壓抽濾時(shí)，將所述瓶蓋II 301旋松。
[0019]根據(jù)以上的技術(shù)方案，相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下的優(yōu)點(diǎn):
本發(fā)明采用連接件，將用于消化培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶和用于富集培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶連接，并在連接件中配裝過濾組件，該過濾組件是針對目標(biāo)菌株設(shè)置的，因此，將消化培養(yǎng)液經(jīng)過濾組件過濾后，理論上即可分離出目標(biāo)菌株，且過濾得到的目標(biāo)菌株能夠通過連接件流入用于富集培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶中 ，由此可知，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，目標(biāo)菌株的分離以及轉(zhuǎn)移培養(yǎng)更為便利，能夠減少操作過程中的可能污染，以提高分離效率、減少各項(xiàng)成本。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1為本發(fā)明所述的微生物分離培養(yǎng)裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0021]圖2為圖1中局部I的縱切面的放大的示意圖。
[0022]圖3為圖2中瓶蓋的縱切面的放大的示意圖。
[0023]圖4為圖2中瓶蓋的立體示意圖。
[0024]圖5為圖2中濾膜固定裝置的立體示意圖。
[0025]圖6為培養(yǎng)支架實(shí)施例一的立體示意圖。
[0026]圖7為培養(yǎng)支架實(shí)施例二的立體示意圖。
[0027]圖8為圖7的縱切面的示意圖。
[0028]圖9是培養(yǎng)體系中P[CO2]/P [02]的變化曲線，其中:橫坐標(biāo)為液體培養(yǎng)基中特定微生物的細(xì)胞數(shù)量(Cell/ml )，縱坐標(biāo)為Index=P [CO2]/P [02]。
[0029]其中:培養(yǎng)瓶I 100 ;底蓋I 101 ;抽濾口 I 102 ;外螺紋I 103 ;瓶蓋200 ;通孔201 ;內(nèi)螺紋I 211 ;內(nèi)螺紋II 212 ;內(nèi)螺紋III213 ;密封槽I 221 ;密封槽II 222 ;墊片槽223 ；培養(yǎng)瓶II 300 ;底蓋II 301 ;抽濾口 II 302 ;外螺紋II 303 ;密封圈I 401 ;密封圈II 402 ;墊片500 ;濾膜600 ;濾膜固定裝置700 ;十字通孔701 ;外螺紋II 702 ;培養(yǎng)支架800 ;培養(yǎng)盤801 ；支桿802。
【具體實(shí)施方式】
[0030]附圖非限制性地公開了本發(fā)明所涉及優(yōu)選實(shí)施例的結(jié)構(gòu)示意圖；以下將結(jié)合附圖詳細(xì)地說明本發(fā)明的技術(shù)方案。[0031]參見圖1至圖5，本發(fā)明所述的微生物分離培養(yǎng)裝置，包括瓶口帶有外螺紋I 103的培養(yǎng)瓶I 100與側(cè)壁帶有內(nèi)螺紋I 211、蓋中央帶有通孔201的瓶蓋200以及瓶口設(shè)有外螺紋II 303的培養(yǎng)瓶II 300。所述內(nèi)螺紋I 211的頂部內(nèi)側(cè)設(shè)置密封槽I 221，所述密封槽
I221內(nèi)設(shè)有密封圈I 401，所述培養(yǎng)瓶I 100的外螺紋I 103與瓶蓋200的內(nèi)螺紋I 211連接。所述培養(yǎng)瓶I 100的瓶口肩部設(shè)置抽濾口 I 102，并在培養(yǎng)瓶I 100內(nèi)設(shè)置培養(yǎng)支架800，如圖6~圖8所示。所述培養(yǎng)瓶II 300的底部設(shè)置底蓋II 301、瓶口肩部設(shè)置抽濾口 II 303。
[0032]所述瓶蓋200的側(cè)壁反向延長、并在瓶蓋200反向延長的側(cè)壁內(nèi)側(cè)從下往上依次設(shè)置內(nèi)螺紋II 212和內(nèi)螺紋III 213，所述內(nèi)螺紋II 212的內(nèi)直徑小于內(nèi)螺紋III 213的內(nèi)直徑，通孔201的內(nèi)直徑小于內(nèi)螺紋II 212的內(nèi)直徑，內(nèi)螺紋II 212的底部內(nèi)側(cè)設(shè)置墊片槽223，內(nèi)螺紋III 213的底部內(nèi)側(cè)設(shè)置密封槽II 222，所述密封槽II 222內(nèi)放置密封圈II 402。所述瓶蓋200的內(nèi)螺紋III 213與培養(yǎng)瓶II 300的外螺紋II 303連接。
[0033]所述瓶蓋200內(nèi)依次設(shè)置墊片500、濾膜600、濾膜固定裝置700，所述濾膜固定裝置700為中央開設(shè)十字通孔701、外壁設(shè)有外螺紋II 702的圓柱體，所述墊片500設(shè)置在墊片槽223內(nèi)，濾膜固定裝置700的外螺紋II 702與瓶蓋200的內(nèi)螺紋II 212連接。
[0034]所述培養(yǎng)瓶I 100、瓶蓋200、培養(yǎng)瓶II 300、密封圈I 401、密封圈II 402、墊片500、濾膜600、濾膜固定裝置700和培養(yǎng)支架800的中心均同軸。
[0035]由此可知，本發(fā)明所述的瓶蓋200事實(shí)上為一連接件，該連接件具有兩個(gè)連接部位(內(nèi)螺紋I 211、內(nèi)螺紋III 213、密封槽I 221、密封槽II 222)，以分別與培養(yǎng)瓶I 100的瓶口和培養(yǎng)瓶II 300的瓶口實(shí)現(xiàn)密封連接，且這樣的連接方式是可拆卸的，因此，除了上述公開的螺紋連接方式外，卡扣連接也適用于本發(fā)明所述的技術(shù)方案；同時(shí)所述的兩個(gè)連接部位之間，設(shè)置過濾組件安裝部位(內(nèi)螺紋II 212)，以進(jìn)行用于分離待篩選菌株的過濾組件的安裝；過濾組件包括濾膜600、濾膜固定裝置700，通過濾膜600的選擇，進(jìn)行待篩選菌株的分離。
[0036]本發(fā)明主要用于分離培養(yǎng)支原體、L型細(xì)菌、衣原體、少數(shù)立克次氏體、病毒，因此，濾膜600可以為一般的細(xì)菌濾膜；上述的支原體、L型細(xì)菌、衣原體、少數(shù)立克次氏體、病毒均可通過一般的細(xì)菌濾膜。
[0037]以下將以肺炎支原體的分離培養(yǎng)作為案例，具體地說明上述分離培養(yǎng)裝置的使用。
[0038]一、消化復(fù)蘇。
[0039]步驟一:將臨床痰樣本接種到備有消化培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶I 100中；所述消化培養(yǎng)液為含豐富營養(yǎng)物質(zhì)、消化酶及抑菌藥物的選擇性增菌、消化培養(yǎng)液，該消化培養(yǎng)液具有解離分散痰樣本、抑制雜菌污染、釋放并復(fù)蘇肺炎支原體的作用。
[0040]步驟二:培養(yǎng)瓶I 100上依次裝配設(shè)置有密封圈I 401、密封圈II 402、墊片500、濾膜600、濾膜固定裝置700的瓶蓋200和培養(yǎng)瓶II 300，蓋好底蓋II 301。
[0041]步驟三:將上述裝置以培養(yǎng)瓶I 100在下、培養(yǎng)瓶II 300在上的狀態(tài)置于搖床上，在37度恒溫條件下培養(yǎng)12~24小時(shí)。
[0042]二、富集增殖。 [0043]步驟四:將上述裝置倒置，即培養(yǎng)瓶I 100在上、培養(yǎng)瓶II 300在下，通過培養(yǎng)瓶II300的抽濾口 II 302進(jìn)行負(fù)壓抽濾，濾膜600阻隔雜菌，而使菌液中的肺炎支原體透過濾膜600由培養(yǎng)瓶I 100流向培養(yǎng)瓶II 300。為使菌液流動(dòng)通暢，可通過旋松瓶蓋I 101實(shí)現(xiàn)。
[0044]步驟五:通過培養(yǎng)瓶I 100的底蓋I 101向培養(yǎng)瓶II 300內(nèi)加入足量的富集培養(yǎng)液，在37度恒溫條件下培養(yǎng)12~24小時(shí)；所述富集培養(yǎng)液，主要功能是對通過濾膜的某一種特定微生物進(jìn)行選擇性增菌培養(yǎng)，為含豐富營養(yǎng)物質(zhì)、抑菌藥物和/或變色指示劑的選擇性增菌、富集培養(yǎng)液，可根據(jù)檢測需要進(jìn)行配制，〈例如:富含胱氨酸和鐵離子的培養(yǎng)基利于軍團(tuán)菌的生長；培養(yǎng)基中加入10~20%人或動(dòng)物血清可提供支原體生長所需的營養(yǎng)成分；L型細(xì)菌必須在高滲的環(huán)境中生長等；在培養(yǎng)液中添加或減少一種或多種特定的營養(yǎng)成分或某些選擇試劑，如抗菌素或抑菌肽，可達(dá)到選擇性增殖某一類微生物的目的〉，對于本實(shí)施例而言，該富集培養(yǎng)液具有抑制雜菌污染、富集肺炎支原體、指示肺炎支原體生長的作用。
[0045]步驟六:通過肉眼和\或儀器觀察培養(yǎng)瓶II 300中培養(yǎng)液的渾濁程度、顏色變化、有無熒光現(xiàn)象，或加入試劑進(jìn)行進(jìn)一步的觀察。
[0046]“可通過濾膜”的特定微生物經(jīng)過前述消化處理、倒置過濾分離、液體培養(yǎng)后，已具備一定的細(xì)胞量；進(jìn)行固體增菌培養(yǎng)，要求微生物的數(shù)量在合理的范圍，如數(shù)量太少則其在固體培養(yǎng)基上生長一定時(shí)間后，會(huì)過于稀疏或漏檢；如數(shù)量太多則會(huì)密集成膜，無法形成單一菌落，給后續(xù)的生化試驗(yàn)等鑒定帶來不便。選擇合適的時(shí)機(jī)將微生物從液體培養(yǎng)基轉(zhuǎn)接到固體培養(yǎng)基上至關(guān)重要。支原體生長過程中，會(huì)消耗體系中的氧氣，代謝并向環(huán)境中釋放二氧化碳；因此可以通過監(jiān)測培養(yǎng)體系中p[co2]/p[o2]的變化來判斷微生物在單位統(tǒng)計(jì)中的數(shù)量是否符合要求。
[0047]完成步驟六之后 ，可采用下列兩種方法中的一種或兩種，監(jiān)測培養(yǎng)體系中P[C02]/p[02]的變化，判斷特殊微生物(例如支原體等)的在單位統(tǒng)計(jì)中的數(shù)量:
(1)C02/02指示劑:更換新的培養(yǎng)瓶1、瓶蓋及瓶蓋內(nèi)的配件，再安裝上含有co2/o2指示劑的特定裝置，從而判定細(xì)胞數(shù)；
(2)CO2ZO2熒光傳感器:更換新的培養(yǎng)瓶1、瓶蓋及瓶蓋內(nèi)的配件，再連接C02/02熒光傳感器，通過測定特定物質(zhì)的熒光特性，來監(jiān)測體系中p[co2]/p[o2]的變化，從而判斷細(xì)胞數(shù)。
[0048]若體系中的特殊微生物(例如支原體等)的細(xì)胞數(shù)已經(jīng)達(dá)到固體培養(yǎng)的要求,則繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)操作。
[0049]三、分離培養(yǎng)。
[0050]若在步驟六中，所述培養(yǎng)瓶II 300中培養(yǎng)液鑒定為肺炎支原體呈陽性，則繼續(xù)進(jìn)行如下操作。
[0051]步驟七:更換新的培養(yǎng)瓶I 100、瓶蓋200及瓶蓋200內(nèi)的配件，再將備有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)支架800置入培養(yǎng)瓶I 100內(nèi)，培養(yǎng)盤801的正面朝向培養(yǎng)瓶I 100的瓶壁外偵U，蓋好底蓋I 101。所述固體培養(yǎng)基為分離培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、生化鑒別培養(yǎng)基中的一種或多種；這類培養(yǎng)基包括但不限于顯色培養(yǎng)基，或者是一種培養(yǎng)基，在菌落形成后能和隨后加入的特定化合物起反應(yīng)，并呈現(xiàn)出一些外觀的變化，如:變色、產(chǎn)生氣泡等；該類培養(yǎng)基具有分離，篩選，鑒別肺炎支原體的作用。[0052]固體培養(yǎng)基的配制:富含胱氨酸和鐵離子的培養(yǎng)基利于軍團(tuán)菌的生長；培養(yǎng)基中加入10~20%人或動(dòng)物血清以提供支原體生長所需的膽固醇；L型細(xì)菌必須在生存在高滲環(huán)境中，立克次氏體和衣原體則必須寄生于細(xì)胞內(nèi)，不能在人工培養(yǎng)基中生長等。
[0053]步驟八:將上述組裝好的裝置倒置，即培養(yǎng)瓶I 100在下、培養(yǎng)瓶II 300在上，通過抽濾口 I 102進(jìn)行負(fù)壓抽濾，使菌液流入培養(yǎng)瓶I 100，菌液浸沒培養(yǎng)支架800，并接種到培養(yǎng)盤801內(nèi)的固體培養(yǎng)基上。濾膜600再次起阻隔雜菌的作用。為使菌液流動(dòng)通暢，可通過旋松瓶蓋底蓋II 301實(shí)現(xiàn)。
[0054]步驟九:將上述裝置再次倒置，即培養(yǎng)瓶I 100在上、培養(yǎng)瓶II 300在下，通過抽濾口 II 302進(jìn)行負(fù)壓抽濾，使菌液流入培養(yǎng)瓶II 300。為使菌液流動(dòng)通暢，可通過旋松瓶蓋I 101實(shí)現(xiàn)。
[0055]步驟十:將上述裝置置于培養(yǎng)箱內(nèi)，并在適合肺炎支原體的溫度下培養(yǎng)24~48小時(shí)。[0056]步驟十一:通過肉眼和\或儀器觀察上述裝置內(nèi)培養(yǎng)支架800上培養(yǎng)盤801中菌落形態(tài)。
[0057]另外，本發(fā)明所述的消化培養(yǎng)基、富集培養(yǎng)基以及固體培養(yǎng)基均是針對目標(biāo)菌株進(jìn)行配制的；由于本發(fā)明主要用于是否感染目標(biāo)菌株的檢測，因此，前述的各培養(yǎng)基均是采用現(xiàn)有技術(shù)中的成熟配方；即本發(fā)明的改進(jìn)點(diǎn)主要在于裝置部分以及基于裝置的使用方法。
【權(quán)利要求】
1.一種微生物分離培養(yǎng)裝置，包括兩個(gè)培養(yǎng)瓶，其特征在于，每一個(gè)培養(yǎng)瓶的底部通過底蓋封接，且兩個(gè)培養(yǎng)瓶的瓶口之間通過連接件連接，該連接件沿自身軸線開設(shè)通孔，所述通孔的孔壁對應(yīng)于兩個(gè)培養(yǎng)瓶的瓶口分別設(shè)置有一個(gè)連接部位，連接件的兩個(gè)連接部位之間設(shè)置有過濾組件安裝部位，該過濾組件安裝部位安裝有用于過濾目標(biāo)微生物的過濾組件，而每一個(gè)培養(yǎng)瓶的瓶口與連接件的相應(yīng)連接部位之間為可拆卸的密封連接。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物分離培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述的兩個(gè)培養(yǎng)瓶中，其中一個(gè)培養(yǎng)瓶在另一個(gè)培養(yǎng)瓶的上方，且兩個(gè)培養(yǎng)瓶的瓶口相對設(shè)置。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物分離培養(yǎng)裝置，其特征在于，每一個(gè)培養(yǎng)瓶的瓶口均設(shè)置有外螺紋，所述連接件的兩個(gè)連接部位均包括開設(shè)在通孔孔壁上的內(nèi)螺紋以及緊鄰該內(nèi)螺紋設(shè)置的密封槽，所述培養(yǎng)瓶瓶口的外螺紋與連接件上對應(yīng)位置處的內(nèi)螺紋螺紋配合連接，同時(shí)培養(yǎng)瓶的瓶口端部通過置于密封槽中的密封件與連接件密封。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物分離培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述的過濾組件包括濾膜以及濾膜固定裝置，所述的濾膜固定裝置與過濾組件安裝部位螺紋配合連接，而濾膜則通過墊片配裝在濾膜固定裝置上，墊片嵌裝在通孔的孔壁緊鄰過濾組件安裝部位所開設(shè)的墊片槽中，而濾膜則位于墊片和濾膜固定裝置之間。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物分離培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述的培養(yǎng)瓶中設(shè)置有培養(yǎng)支架，該培養(yǎng)支架包括支桿以及培養(yǎng)盤，所述培養(yǎng)盤的開口與培養(yǎng)瓶瓶口朝向一致。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物分離培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述培養(yǎng)盤的盤面與支桿呈傾斜設(shè)置。
7.一種基于權(quán)利要求2所述微生物分離培養(yǎng)裝置的微生物分離培養(yǎng)方法，其特征在于，所述微生物分離培養(yǎng)裝置中的兩個(gè)培養(yǎng)瓶，分別為培養(yǎng)瓶1、培養(yǎng)瓶II;所述微生物分離培養(yǎng)方法包括以下步驟:步驟一、待檢樣本的消化處理一首先，將待檢樣本接種到備有消化培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶I (100)中；接著，通過連接件將培養(yǎng)瓶I (100)的瓶口與培養(yǎng)瓶II(300)的瓶口連接，且培養(yǎng)瓶I (100)的瓶口、培養(yǎng)瓶II (300)的瓶口均與連接件密封，同時(shí)連接件中配裝過濾組件；然后，以培養(yǎng)瓶I (100)在下、培養(yǎng)瓶II (300)在上的狀態(tài)，在37度恒溫條件下?lián)u瓶培養(yǎng)12~24小時(shí)；步驟二、消化培養(yǎng)液的倒置過濾分離——培養(yǎng)瓶I(100)在上、培養(yǎng)瓶II (300)在下，通過培養(yǎng)瓶II (300)的抽濾口 II (302)進(jìn)行負(fù)壓抽濾，使菌液由培養(yǎng)瓶I (100)流向培養(yǎng)瓶II (300);步驟三、含有目標(biāo)菌株的富集液體培養(yǎng)——通過培養(yǎng)瓶I (100)的底蓋I (101)向培養(yǎng)瓶II (300)內(nèi)加入富集培養(yǎng)液，在37度恒溫條件下培養(yǎng)12~24小時(shí)；步驟四、按照目標(biāo)菌株的生化特征判斷富集液體培養(yǎng)液中是否含有目標(biāo)菌株。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的微生物分離培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟四的判斷結(jié)果表明富集液體培養(yǎng)液中含有目標(biāo)菌株，則繼續(xù)進(jìn)行如下操作:步驟五、更換新的培養(yǎng)瓶I(100)、連接件及連接件內(nèi)的配件，再將備有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)支架(800)置入新更換的培養(yǎng)瓶I (100)內(nèi)，培養(yǎng)盤(801)的正面朝向培養(yǎng)瓶I (100)的瓶壁外側(cè)，蓋好底蓋I (101)；步驟六、將步驟五組裝好的裝置倒置，即培養(yǎng)瓶I (100)在下、培養(yǎng)瓶II (300)在上，通過抽濾口 I (102)進(jìn)行負(fù)壓抽濾，使菌液流入培養(yǎng)瓶I (100)，菌液浸沒培養(yǎng)支架(800)，并接種到培養(yǎng)盤(801)內(nèi)的固體培養(yǎng)基上；步驟七、將上述裝置再次倒置，即培養(yǎng)瓶I (100)在上、培養(yǎng)瓶II (300)在下，通過抽濾口 II (302)進(jìn)行負(fù)壓抽濾，使菌液流入培養(yǎng)瓶II (300);步驟八:將上述裝置置于培養(yǎng)箱內(nèi)，并在適合目標(biāo)菌株的溫度下培養(yǎng)24~48小時(shí)；步驟九:觀察培養(yǎng)支架(800)上培養(yǎng)盤(801)中的菌落形態(tài)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的微生物分離培養(yǎng)方法，其特征在于，在步驟二和步驟六中，進(jìn)行負(fù)壓抽濾時(shí)，將所述 瓶蓋I (101)旋松。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的微生物分離培養(yǎng)方法，其特征在于，在步驟六中，進(jìn)行負(fù)壓抽濾時(shí)，將所述瓶蓋II (301)旋松。
【文檔編號(hào)】C12N1/00GK103937662SQ201310741589
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2013年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月31日
【發(fā)明者】趙萬千, 王海晶, 楊揚(yáng), 楊焱焱 申請人:江蘇嘉語生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司