一種快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法，通過PET掃描的方式測定細胞與放射性標記物結(jié)合的放射性攝取值，并通過計算所述待測定細胞的放射性攝取值與放射性標記物總攝取值的比例，進而評價所述細胞與放射性標記物的結(jié)合能力，解決了現(xiàn)有技術(shù)中用于評價細胞的放射性結(jié)合能力的方法操作復(fù)雜，受人為操作因素影響，耗時的問題。
【專利說明】一種快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于核醫(yī)學(xué)及動物實驗【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種快速測定細胞與放射性藥物的結(jié)合能力的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在新藥研發(fā)及藥物代謝研究中，細胞實驗在整個動物實驗中起到了舉足輕重的作用，體外細胞實驗是體內(nèi)給藥的指導(dǎo)，有效、客觀的細胞實驗數(shù)據(jù)尤為重要。由于體外細胞沒有抗感染能力，實驗者在進行操作時的粗心大意或不規(guī)范操作都會對細胞造成影響，因此減少細胞實驗的操作步驟可有效的避免細胞污染。
[0003]體外細胞放射性攝取實驗的目的是考察細胞與放射性藥物的結(jié)合能力?，F(xiàn)有技術(shù)中常規(guī)的測定方法是通過Y計數(shù)儀檢測放射性計數(shù)CPM得到某一放射性藥物與細胞結(jié)合的情況，并計算細胞結(jié)合率(％)進而考察細胞與該放射性藥物的結(jié)合能力。以18F-FDG與細胞的體外實驗為例，測定其細胞結(jié)合率具體步驟包括:取一定密度的細胞進行鋪板，并設(shè)一組空白對照組，于37°C，5%C02, 二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，加18F-FDG (10 μ Ci/mL),于37°C，5%C02, 二氧化碳培養(yǎng)箱孵育60min，吸去上清液，加生理鹽水200 μ I洗2次，存于放免管中記為上清液管(F)，隨后向余下的細胞中加胰酶消化(由于細胞貼壁生長，不方便細胞的轉(zhuǎn)移)，然后將細胞轉(zhuǎn)移到放免管中，用200 μ I生理鹽水洗2次同時加入放免管中，記為細胞攝取管(B)，由WizardY計數(shù)儀分別檢測上清液管(F)和細胞攝取管(B)的放射性計數(shù)CPM，按照公式B/(B+F) X 100%來計算18F-FDG的細胞結(jié)合率(％)，考察了細胞與放射性藥物的結(jié)合能力。
[0004]然而上述方法仍然存在諸多不足，首先，該方法中存在將細胞或吸取的上清液轉(zhuǎn)移到放免管中的步驟，受人為操作因素影響，進而增大了由于人員進行操作時的粗心大意或不規(guī)范操作可能對細胞造成污`染等不利影響的機會；其次，為了便于細胞轉(zhuǎn)移到放免管中，在該方法中還需要添加胰酶消化，使細胞脫離孔板，但是由于胰酶消化需要反應(yīng)一段時間才能使貼壁生長的細胞脫離孔板，因此其比較耗時，效率較低；最后，由于該方法中存在人為的操作即將細胞或吸取的上清液轉(zhuǎn)移到放免管中、添加胰酶消化便于細胞脫離孔板以及吸取上清液或細胞轉(zhuǎn)移后加生理鹽水清洗等步驟使得該方法步驟過多，操作起來較復(fù)雜，不方便。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于現(xiàn)有技術(shù)中用于評價細胞的放射性結(jié)合能力的方法存在操作復(fù)雜、耗時、極易引起誤差等問題，進而提供一種操作步驟簡單、客觀可靠的快速測定細胞與放射性藥物的結(jié)合能力的方法。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的快速測定細胞與放射性藥物的結(jié)合能力的方法，包括
[0007]( I)取采用常規(guī)培養(yǎng)液按照常規(guī)方法進行培養(yǎng)的待測定細胞進行鋪孔板操作，并將鋪孔板后的細胞連同孔板進行常規(guī)孵育培養(yǎng)，備用；
[0008](2)向所述步驟(1)處理后的細胞中加入放射性標記物，并進行常規(guī)孵育培養(yǎng)，隨后對含有細胞及培養(yǎng)液的孔板進行PET掃描，得到總放射性攝取值，記為PETUnitg ；
[0009](3)除去所述孔板中的培養(yǎng)液，以生理鹽水對待測定細胞進行洗滌并除去生理鹽水，隨后對僅含有細胞的孔板進行PET掃描，得到細胞的放射性攝取值，記為PETUnit ；
[0010](4)另取相同孔板，并按照步驟(1)和步驟(2)中的添加量先后加入所述培養(yǎng)液和放射性標記物，進行相同條件的孵育培養(yǎng)，隨后除去所述培養(yǎng)液，以生理鹽水洗滌所述孔板并除去生理鹽水，并對洗滌處理后的所述孔板進行PET掃描，得到所述孔板的放射性攝取值，記為PETUnit空白；
[0011](5)按照公式PETUnit-PETUnit空白/PETUnit總*100%計算得到待測定細胞的放射性結(jié)合率，用以評價所述細胞的放射性結(jié)合能力。[0012]所述的放射性標記物包括18F-FDG、18F-FLT或11C-膽堿。
[0013]所述的放射性標記物的濃度為8-12 μ Ci/mL,優(yōu)選的為10 μ Ci/mL。
[0014]優(yōu)選的，所述待測定細胞的濃度為7.0-9.0*104個/mL。
[0015]所述待測定細胞鋪孔板時每孔190-210 μ L0
[0016]所述生理鹽水的濃度為0.8-1.0%。
[0017]所述步驟(1)中，所述常規(guī)孵育培養(yǎng)的步驟，培養(yǎng)條件為35_40°C，3-8%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)22-24h。
[0018]所述步驟(2)中，所述常規(guī)孵育培養(yǎng)的步驟，培養(yǎng)條件為35_40°C，3_8%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培0.5-2h。
[0019]所述步驟(2)中加入放射性標記物后的操作是為了測定培養(yǎng)基、孔板以及細胞整體的放射性結(jié)合能力的影響。本領(lǐng)域技術(shù)人員可知，由于一般常規(guī)的細胞培養(yǎng)液均為有糖培養(yǎng)基，而當使用的示蹤劑為18F-FDG時，因為示蹤劑本身為葡萄糖類化合物，如果為有糖培養(yǎng)基細胞攝取時會形成競爭抑制。因此必須采用無糖培養(yǎng)液進行測定，所以當使用的示蹤劑為18F-FDG時，在加入示蹤劑進行培養(yǎng)并檢測之前，需要先除去其中的常規(guī)培養(yǎng)液，并加入等量的常規(guī)可用的無糖培養(yǎng)液，才能加入示蹤劑進行培養(yǎng)，以此來消除培養(yǎng)基成分對檢測結(jié)果的影響，進一步加大準確率。而對于其他的示蹤劑而言，則不存在此問題，只需按照本發(fā)明所示方法進行測定即可。
[0020]本發(fā)明提供的一種快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法廣泛應(yīng)用于體外細胞實驗中。
[0021]本發(fā)明的上述技術(shù)方案相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點:
[0022](I)本發(fā)明所述的快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法，通過PET掃描的方式測定細胞與放射性標記物結(jié)合的放射性攝取值，并通過計算所述待測定細胞的放射性攝取值與放射性標記物總攝取值的比例，進而評價所述待測定細胞與放射性標記物的結(jié)合能力，由于本方法中僅僅需要對各步標記產(chǎn)物進行常規(guī)PET掃描即可，省卻了通過Y計數(shù)儀檢測方法中的細胞和培養(yǎng)液需要轉(zhuǎn)移到放免管中進行檢測的步驟，不僅操作步驟簡單易行、且大幅降低了人為操作因素的影響，而且檢測結(jié)果客觀準確；
[0023](2)本發(fā)明所述的方法可以快速、簡易的測定細胞的放射性結(jié)合能力，操作簡單、驗證結(jié)果準確，可廣泛應(yīng)用于動物實驗或核醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的體外細胞實驗中。【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實施例并結(jié)合附圖，對本發(fā)明作進一步詳細的說明，其中
[0025]圖1是實施例1中測定的總放射性攝取值的PET顯影圖；
[0026]圖2是實施例1中測定的細胞的放射性攝取值的PET顯影圖；
[0027]圖3是實施例1中測定的孔板的放射性攝取值的PET顯影圖。
【具體實施方式】
[0028]本發(fā)明下述實施例和對比例中細胞培養(yǎng)所使用的常規(guī)培養(yǎng)液配方中各組分的濃度如下:L-精氨酸290mg/L、L-門冬酰胺50mg/L、L-門冬氨酸20mg/L、L-胱氨酸二鹽酸鹽65.15mg/L、L-谷氨酸20mg/L、甘氨酸10mg/L、L-組氨酸15mg/L、L-輕脯氨酸20mg/L、L-異亮氨酸50mg/L、L-亮氨酸50mg/L、L-賴氨酸鹽酸鹽40mg/L、L-甲硫氨酸15mg/L、L-苯丙氨酸15mg/L、L-脯氨酸20mg/L、L-絲氨酸30mg/L、L-蘇氨酸20mg/L、L-色氨酸5mg/L、L-酪氨酸23.19mg/L、L-纟顏氨酸20mg/L、對氨基苯甲酸lmg/L、硝酸鈣100mg/L、無水硫酸鎂48.84mg/L、無水磷酸二氫鈉676.13mg/L、氯化鉀400mg/L、氯化鈉6000mg/L、葡萄糖2000mg/L、還原谷胱甘肽lmg/L、酹紅5mg/L、L-谷氨酰胺300mg/L、生物素0.20mg/L>D-泛酸|丐0.25mg/L、葉酸lmg/L、i_肌醇35mg/L、煙酰胺lmg/L、氯化膽堿3mg/L、鹽酸吡口多醇lmg/L、核黃素0.2mg/L、鹽酸硫胺素lmg/L、維生素B120.005mg/L、青霉素100U/mL、鏈霉素100U/mL、小牛(胎牛)血清10-20%和碳酸氫鈉2000mg/L ;其中所述小牛(胎牛)血清是在所述常規(guī)培養(yǎng)液臨用前加入。本發(fā)明所使用的常規(guī)培養(yǎng)液并不限于上述培養(yǎng)液，采用任何適用于下述實施例中細 胞培養(yǎng)的常規(guī)培養(yǎng)液均可實現(xiàn)本發(fā)明的目的，測定結(jié)果并沒有明顯差異。
[0029]所涉及的無糖培養(yǎng)液配方為上述常規(guī)培養(yǎng)液除去含糖的組分即可。
[0030]實施例1
[0031]本實施例中，所述待測定細胞為SW480直腸癌腫瘤細胞；所述PET掃描儀的型號為Inveon型，購自廠家德國SMENS公司；掃描條件為=MicroPET掃描顯像:層厚:0.78mm，矩陣:128*128，采集時間lOmin，采集能窗350-650kev。掃描圖像采用0SEM3D迭代重建，迭代2次，采集和圖像重建的方法獲得數(shù)據(jù)。
[0032]本實施例快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法具體步驟如下:
[0033](I)取采用常規(guī)培養(yǎng)液按照常規(guī)方法進行培養(yǎng)的濃度為8.0*104個/mL的SW480直腸癌腫瘤細胞鋪孔板，鋪24孔板，每孔200 μ 1，設(shè)6孔，然后鋪孔板后的細胞連同孔板于37°C, 5%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)24h,隨后除去培養(yǎng)細胞所用的常規(guī)培養(yǎng)液后,補充與吸除的培養(yǎng)液等量的無糖培養(yǎng)液，備用；
[0034](2)取10μ I的10 μ Ci/mL的18F-FDG加入到上述處理后的細胞中，并于37°C，5%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)lh，隨后對含有細胞及無糖培養(yǎng)液的孔板進行PET掃描lOmin，進而計算得到總放射性攝取值，記為PETUnit,6，經(jīng)PET掃描lOmin，見圖1所示的PET 顯影圖，測得 PETUniti6=0.001036 ；
[0035](3)除去所述孔板中的無糖培養(yǎng)液，以濃度為0.9%的生理鹽水對待測定細胞進行洗滌并除去生理鹽水，隨后對僅含有細胞的孔板進行PET掃描lOmin，進而計算得到細胞的放射性攝取值，記為PETUnit，經(jīng)PET掃描lOmin，見圖2所示的PET顯影圖，測得PETUnit=2.43E-04 ；
[0036](4)取相同孔板，并按照步驟(1)和步驟(2)中的添加量先后加入所述無糖培養(yǎng)液和放射性標記物，進行相同條件的孵育培養(yǎng)，隨后除去所述無糖培養(yǎng)液，以濃度為0.9%的生理鹽水洗滌所述孔板并除去生理鹽水，并對洗滌處理后的所述孔板進行PET掃描lOmin，進而計算得到所述孔板的放射性攝取值，記為PETUnitse，經(jīng)PET掃描lOmin，見圖3所示的PET顯影圖，測得PETUnit空白=8.48E-06 ；
[0037](5)按照公式PETUnit-PETUnit空白/PETUnit總*100%計算得到待測定細胞的放射性結(jié)合率為22.66%。
[0038]對比例I
[0039]本對比例測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法采用常規(guī)方法檢測細胞結(jié)合率，考察細胞與放射性藥物結(jié)合的能力，是采用Wizard Y計數(shù)儀檢測放射性計數(shù)CPM得到18F-FDG的細胞結(jié)合率(％)，所述WizardY計數(shù)儀的型號為1470型,購自廠家為美國PerkinElmer公司，條件為18F核素測試。具體步驟如下:
[0040]取采用常規(guī)培養(yǎng)液按照實施例1中的培養(yǎng)方法進行培養(yǎng)的濃度為8.0*104個/mL的SW480直腸癌腫瘤細胞鋪孔板,鋪24孔板,每孔200 μ I,設(shè)6孔,然后鋪孔板后的細胞連同孔板于37°C,5%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，除去培養(yǎng)細胞所用的常規(guī)培養(yǎng)液后，補充加入與之前所述吸除的培養(yǎng)液等量的無糖培養(yǎng)液，備用；
[0041]取10μ I的10 μ Ci/mL的18F-FDG加入到上述處理后的細胞中，并于37°C，5%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)lh`，然后吸去上清液，將上清液存于放免管中，記為上清液管(F)，隨后用濃度為0.9%的生理鹽水200 μ I清洗孔板中容置上清液的孔2次，洗滌所述孔板中容置上清液的孔的生理鹽水存于上清液管(F)中，然后再向容置細胞的孔中加胰酶消化，將每孔脫離孔板壁的細胞轉(zhuǎn)移到放免管中，記為細胞攝取管(B)，然后再用200 μ I濃度為0.9%的生理鹽水洗2次容置細胞的孔，洗滌所述容置待測定細胞的孔的生理鹽水加入存放細胞的放免管(B)中，Wizardy計數(shù)儀分別檢測每個放免管的上清液管(F)和細胞攝取管(B)的放射性計數(shù)CPM，將上述檢測得到的放射性計數(shù)CPM代入以下公式:18F-FDG的細胞結(jié)合率(％) =B/ (B+F) X 100%,即得細胞的結(jié)合率22.18%。
[0042]實施例2
[0043]本實施例中，所述待測定細胞為人淋巴瘤細胞Raji，所用的培養(yǎng)液為常規(guī)培養(yǎng)液；所述PET掃描儀的型號為Inveon型，購自廠家德國SMENS公司；掃描條件=MicroPET掃描顯像:層厚:0.78mm，矩陣:128*128，采集時間lOmin，采集能窗350_650kev。掃描圖像采用0SEM3D迭代重建，迭代2次，采集和圖像重建的方法獲得數(shù)據(jù)。
[0044]本實施例所述快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法具體步驟如下:
[0045](I)取采用常規(guī)培養(yǎng)液按照常規(guī)方法進行培養(yǎng)的濃度為7.0*104個/mL的人淋巴瘤細胞Raji為待測定細胞鋪孔板，鋪24孔板,每孔190 μ I,設(shè)6孔,然后鋪孔板后的細胞連同孔板于35°C,8%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)22h,備用；
[0046](2)取10 μ I的8 μ Ci/mL的18F-FLT加入到上述處理后的細胞中，并于35°C，8%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)2h,隨后對含有細胞及培養(yǎng)液的孔板進行PET掃描IOmin,得到總放射性攝取值，記為PETUnit總，測得PETUnit總=0.000966 ；
[0047](3)除去所述孔板中的培養(yǎng)液，以濃度為0.8%的生理鹽水對待測定細胞進行洗滌并除去生理鹽水，隨后對僅含有細胞的孔板進行PET掃描lOmin，得到細胞的放射性攝取值，記為 PETUnit，測得 PETUnit=2.51E-04 ；
[0048](4)取相同孔板，并按照步驟(1)和步驟(2)中的添加量先后加入所述培養(yǎng)液和放射性標記物，進行相同條件的孵育培養(yǎng)，隨后除去所述培養(yǎng)液，以濃度為0.8%的生理鹽水洗滌所述孔板并除去生理鹽水，并對洗滌處理后的所述孔板進行PET掃描lOmin，得到所述孔板的放射性攝取值，記為PETUnit ，測得PETUnit =7.01Ε-06 ；
[0049](5)按照公式PETUnit-PETUnit空白/PETUnit總*100%計算得到待測定細胞的放射性結(jié)合率為25.24%。
[0050]對比例2
[0051]本對比例測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法采用常規(guī)方法檢測細胞結(jié)合率，考察細胞與放射性藥物結(jié)合的能力，是采用Wizard Y計數(shù)儀檢測放射性計數(shù)CPM得到18F-FLT的細胞結(jié)合率(％)，所述WizardY計數(shù)儀的型號為1470型,購自廠家為美國PerkinElmer公司，條件為18F核素測試。具體步驟如下:
[0052]取采用常規(guī)培養(yǎng)液按照實施例2中的培養(yǎng)方法進行培養(yǎng)的濃度為7.0*104個/mL的人淋巴瘤細胞Raji鋪孔板，鋪24孔板，每孔190 μ I，設(shè)6孔，然后鋪孔板后的細胞連同孔板于35°C, 8%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22h后,備用；
[0053]取10 μ I的8 μ Ci/mL的18F-FLT加入到上述處理后的細胞中，并于35°C，8%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)2h，然后吸去上清液，將上清液存于放免管中，記為上清液管(F)，隨后用濃度為0.8%的生理鹽水200 μ I清洗孔板中容置上清液的孔2次，洗滌所述孔板中容置上清液的孔的生理鹽水存于上清液`管(F)中，然后再向容置細胞的孔中加胰酶消化，將每孔脫離孔板壁的細胞轉(zhuǎn)移到放免管中，記為細胞攝取管(B)，然后再用200 μ I濃度為0.8%的生理鹽水洗2次容置細胞的孔，所得的洗滌所述容置待測定細胞的孔的生理鹽水加入存放細胞的放免管(B)中，Wizardy計數(shù)儀分別檢測每個放免管的上清液管(F)和細胞攝取管(B)的放射性計數(shù)CPM，將上述檢測得到的放射性計數(shù)CPM代入以下公式=18F-FLT的細胞結(jié)合率(％) =B/(B+F) X 100%,即得所述細胞的結(jié)合率約為25.5%。
[0054]實施例3
[0055]本實施例中，所述待測定細胞為人非小細胞肺癌A549 ;所用的培養(yǎng)液為常規(guī)培養(yǎng)液；所述PET掃描儀的型號為Inveon型，購自廠家德國SMENS公司；掃描條件:MicroPET掃描顯像:層厚:0.78mm，矩陣:128*128，采集時間lOmin，采集能窗350_650kev。掃描圖像采用0SEM3D迭代重建，迭代2次，采集和圖像重建的方法獲得數(shù)據(jù)。
[0056]本實施例快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法具體步驟如下:
[0057](I)取采用常規(guī)培養(yǎng)液按照常規(guī)方法進行培養(yǎng)的濃度為9.0*104個/mL的人非小細胞肺癌A549鋪孔板,鋪24孔板,每孔210 μ I,設(shè)6孔,然后鋪孔板后的細胞連同孔板于40°C，3%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)23h，備用；
[0058](2)取ΙΟμ I的12 μ Ci/mL的11C-膽堿加入到上述處理后的細胞中，并于40°C，3%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)0.5h，隨后對含有細胞及培養(yǎng)液的孔板進行PET掃描lOmin，得到總放射性攝取值，記為PETUnit總，測得PETUnit總=0.001119 ；[0059](3)除去所述孔板中的培養(yǎng)液，以濃度為1.0%的生理鹽水對待測定細胞進行洗滌并除去生理鹽水，隨后對僅含有細胞的孔板進行PET掃描lOmin，得到細胞的放射性攝取值，記為 PETUnit，測得 PETUnit=2.35E-04 ；
[0060](4)取相同孔板，并按照步驟(1)和步驟(2)中的添加量先后加入所述培養(yǎng)液和放射性標記物，進行相同條件的孵育培養(yǎng)，隨后除去所述培養(yǎng)液，以濃度為1.0%的生理鹽水洗滌所述孔板并除去生理鹽水，并對洗滌處理后的所述孔板進行PET掃描lOmin，得到所述孔板的放射性攝取值，記為PETUnit ，測得PETUnit =6.63Ε-06 ；
[0061](5)按照公式PETUnit-PETUnit空白/PETUnit總*100%計算得到待測定細胞的放射性結(jié)合率為20.41%。
[0062]對比例3
[0063]本對比例測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法采用常規(guī)方法檢測細胞結(jié)合率，考察細胞與放射性藥物結(jié)合的能力，是采用Wizard Y計數(shù)儀檢測放射性計數(shù)CPM得到11C-膽堿的細胞結(jié)合率(％)，所述WizardY計數(shù)儀的型號為1470型,購自廠家為美國PerkinElmer公司，條件為11C核素測試。具體步驟如下:
[0064]取采用常規(guī)培養(yǎng)液按照實施例3中的培養(yǎng)方法進行培養(yǎng)的濃度為9.0*104個/mL的人非小細胞肺癌A549鋪孔板,鋪24孔板,每孔210 μ I,設(shè)6孔,然后鋪孔板后的細胞連同孔板于40°C, 3%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23h后,備用；
[0065]取10μ I的12 μ Ci/mL的11C-膽堿加入到上述處理后的細胞中，并于40°C，3%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)0.5h，然后吸去上清液，將上清液存于放免管中，記為上清液管(F)，隨后用濃度為1.0%的生理鹽水200 μ I清洗孔板中容置上清液的孔2次，洗滌所述孔板中容置上清液的孔的生理鹽水存于上清液管(F)中，然后再向容置細胞的孔中加胰酶消化，將每孔脫離孔板壁的細胞轉(zhuǎn)移到放免管中，記為細胞攝取管(B)，然后再用200 μ I濃度為1.0%的生理鹽水洗2次容置細胞的孔，洗滌所述容置待測定細胞的孔的生理鹽水加入存放細胞的放免管(B)中，Wizardy計數(shù)儀分別檢測每個放免管的上清液管(F)和細胞攝取管(B)的放射性計數(shù)CPM，將上述檢測得到的放射性計數(shù)CPM代入以下公式=11C-膽堿的細胞結(jié)合率(％) =B/ (B+F) X 100%,即得細胞的結(jié)合率約為20%。
[0066]綜上可見，采用本發(fā)明所述的評價細胞放射性結(jié)合能力的方法與采用現(xiàn)有常規(guī)技術(shù)得出的結(jié)果基本相同，可見，本發(fā)明所述方法可有效評價細胞的放射性結(jié)合能力，且由于本發(fā)明所述方法在操作過程中降低了人為操作的因素的影響以及簡化了步驟，使得測得的細胞放射性結(jié)合率更為客觀可靠。
[0067]顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護范圍之中。
【權(quán)利要求】
1.一種快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)取采用常規(guī)培養(yǎng)液按照常規(guī)方法進行培養(yǎng)的待測定細胞進行鋪孔板操作，并將鋪孔板后的細胞連同孔板進行常規(guī)孵育培養(yǎng)，備用； (2)向所述步驟(1)處理后的細胞中加入放射性標記物，并進行常規(guī)孵育培養(yǎng)，隨后對含有細胞及無糖培養(yǎng)液的孔板進行PET掃描，得到總放射性攝取值，記為PETUnitg ； (3)除去所述孔板中的培養(yǎng)液，以生理鹽水對待測定細胞進行洗滌并除去生理鹽水，隨后對僅含有細胞的孔板進行PET掃描，得到細胞的放射性攝取值，記為PETUnit ； (4)另取相同孔板，并按照步驟(1)和步驟(2)中的添加量先后加入所述培養(yǎng)液和放射性標記物，進行相同條件的孵育培養(yǎng)，隨后除去所述培養(yǎng)液，以生理鹽水洗滌所述孔板并除去生理鹽水，并對洗滌處理后的所述孔板進行PET掃描，得到所述孔板的放射性攝取值，記為PETUnit空白； (5)按照公式PETUnit-PETUnitse/PETUnit總*100%計算得到待測定細胞的放射性結(jié)合率，用以評價所述細胞的放射性結(jié)合能力。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法，其特征在于，所述的放射性標記物包括18F-FDG、18F-FLT或11C-膽堿。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法，其特征在于，所述的放射性標記物的濃度為8-12 μ Ci/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法，其特征在于，所述待測定細胞的濃度為7-9*104個/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法，其特征在于，所述待測定細胞鋪孔板時每`孔190-210 μ L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法，其特征在于，所述生理鹽水的濃度為0.8-1.0%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述常規(guī)孵育培養(yǎng)的步驟，培養(yǎng)條件為35-40°C，3-8%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)22-24h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一所述的快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述常規(guī)孵育培養(yǎng)的步驟，培養(yǎng)條件為35-40°C，3-8%C02的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育培0.5-2h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一所述的快速測定細胞的放射性結(jié)合能力的方法在體外細胞實驗中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12Q1/02GK103710420SQ201310745055
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月30日
【發(fā)明者】顏成龍, 許波華, 王燕, 張國敏, 瞿凌晨, 劉婷婷 申請人:米度（南京）生物技術(shù)有限公司