專利名稱：耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆通用的標(biāo)準(zhǔn)分子檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)試劑盒，具體涉及已經(jīng)商品化的四種耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆的轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)用的試劑盒。
背景技術(shù)：
標(biāo)準(zhǔn)分子是一種重組質(zhì)粒分子，其一般包含轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)的外源基因或品系特異性片段以及物種特異性片段。由于操作簡(jiǎn)便、生產(chǎn)成本低、容易獲得高純度和高濃度DNA樣品，且在一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)分子中可容納多個(gè)目標(biāo)序列等突出優(yōu)點(diǎn)，近年來(lái)，標(biāo)準(zhǔn)分子被認(rèn)為是解決轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)缺乏的有效途徑之一，已作為新型DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)和定量分析。鑒于標(biāo)準(zhǔn)分子質(zhì)粒具有方便、易獲得、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，構(gòu)建陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)分子已經(jīng)成為國(guó)際上轉(zhuǎn)基因檢測(cè)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，但是現(xiàn)有技術(shù)中所用的EP管都需要在冰盒中保存，在常溫操作下，藥品極易失效。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型為了解決現(xiàn)有EP管都需要在冰盒中保存以免藥品長(zhǎng)期在常溫下失效的技術(shù)問(wèn)題，提供了一種耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆通用的標(biāo)準(zhǔn)分子檢測(cè)試劑盒。耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆通用的標(biāo)準(zhǔn)分子檢測(cè)試劑盒包括密封盒、載樣板、標(biāo)準(zhǔn)分子EP管、無(wú)菌水試劑瓶、IF引物EP管、IR引物EP管、2F引物EP管、2R引物EP管、3F引物EP管、3R引物EP管、4F引物EP管、4R引物EP管、5F引物EP管、5R引物EP管和PCR預(yù)混液試劑管，所述載樣板設(shè)置在密封盒內(nèi)，載樣板上設(shè)有第一載樣孔、第二載樣孔、第三載樣孔、第四載樣孔、第五載樣孔、第六載樣孔、第七載樣孔、第八載樣孔、第九載樣孔、第十載樣孔、第十一載樣孔、第十二載樣孔和第十三載樣孔，標(biāo)準(zhǔn)分子EP管設(shè)置在第一載樣孔中，無(wú)菌水試劑瓶設(shè)置在第二載樣孔中，IF引物EP管設(shè)置在第三載樣孔中，IR引物EP管設(shè)置在第四載樣孔中，2F引物EP管設(shè)置在第五載樣孔中，2R引物EP管設(shè)置在第六載樣孔中，3F引物EP管設(shè)置在第七載樣孔中，3R引物EP管設(shè)置在第八載樣孔中，4F引物EP管設(shè)置在第九載樣孔中，4R引物EP管設(shè)置在第十載樣孔中，5F引物EP管設(shè)置在第十一載樣孔中，5R引物EP管設(shè)置在第十二載樣孔中，PCR預(yù)混液試劑管設(shè)置在第十三載樣孔中，所述標(biāo)準(zhǔn)分子EP管包括標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)壁、標(biāo)準(zhǔn)分子EP管外壁、標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)腔和筋板，所述標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)壁位于標(biāo)準(zhǔn)分子EP管外壁的內(nèi)部,標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)壁與標(biāo)準(zhǔn)分子EP管外壁所形成的空腔為標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)腔,標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)壁與標(biāo)準(zhǔn)分子EP管外壁由筋板連接。本實(shí)用新型只需用I個(gè)標(biāo)準(zhǔn)分子即只有I個(gè)標(biāo)準(zhǔn)分子EP管便滿足轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)需要。采用本實(shí)用新型可以檢測(cè)耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆A2704-12、耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆A5547-127、抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆M0N89788、抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆GTS40-3-2的外源基因和大豆的內(nèi)參基因。本實(shí)用新型輕巧、簡(jiǎn)便快捷，不僅可以解決實(shí)驗(yàn)室普遍缺乏陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的難題，還可以提高檢測(cè)效率、縮短檢測(cè)周期，本實(shí)用新型由于采用了雙層結(jié)構(gòu)，EP管內(nèi)腔3-4內(nèi)裝有水或者冰，保證了實(shí)驗(yàn)操作時(shí)的低溫環(huán)境，不需要將EP管放在冰盒中保存，解決了現(xiàn)有EP管都需要在冰盒中保存以免藥品長(zhǎng)期在常溫下失效的技術(shù)問(wèn)題。

圖1是本實(shí)用新型的整體結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是載樣板的示意圖；圖3是標(biāo)準(zhǔn)分子EP管的整體結(jié)構(gòu)示意圖；圖4是圖3的A-A剖視圖。
具體實(shí)施方式
本實(shí)用新型技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的任意組合。
具體實(shí)施方式
一:本實(shí)施方式耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆通用的標(biāo)準(zhǔn)分子檢測(cè)試劑盒包括密封盒1、載樣板2、標(biāo)準(zhǔn)分子EP管3、無(wú)菌水試劑瓶4、IF引物EP管5、IR引物EP管6、2F引物EP管7、2R引物EP管8、3F引物EP管9、3R引物EP管10、4F引物EP管11、4R引物EP管12、5F引物EP管 13和5R引物EP管14和PCR預(yù)混液試劑管15，所述載樣板2設(shè)置在密封盒I內(nèi)，載樣板2上設(shè)有第一載樣孔3-1、第二載樣孔4-1、第三載樣孔5-1、第四載樣孔6-1、第五載樣孔7-1、第六載樣孔8-1、第七載樣孔9-1、第八載樣孔10-1、第九載樣孔11-1、第十載樣孔12-1、第十一載樣孔13-1和第十二載樣孔14-1和第十三載樣孔15_1，標(biāo)準(zhǔn)分子EP管3設(shè)置在第一載樣孔3-1中，無(wú)菌水試劑瓶4設(shè)置在第二載樣孔4-1中，IF引物EP管5設(shè)置在第三載樣孔5-1中，IR引物EP管6設(shè)置在第四載樣孔6_1中，2F引物EP管7設(shè)置在第五載樣孔7-1中，2R引物EP管8設(shè)置在第六載樣孔8_1中，3F引物EP管9設(shè)置在第七載樣孔9-1中，3R引物EP管10設(shè)置在第八載樣孔10-1中，4F引物EP管11設(shè)置在第九載樣孔11-1中，4R引物EP管12設(shè)置在第十載樣孔12-1中，5F引物EP管13設(shè)置在第i^一載樣孔13-1中，5R引物EP管14設(shè)置在第十二載樣孔14_1中，PCR預(yù)混液試劑管15設(shè)置在第十三載樣孔15-1中，所述標(biāo)準(zhǔn)分子EP管3包括標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)壁3_3、標(biāo)準(zhǔn)分子EP管外壁3-2、標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)腔3-4和筋板3_5，所述標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)壁3_3位于標(biāo)準(zhǔn)分子EP管外壁3-2的內(nèi)部，標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)壁3-3與標(biāo)準(zhǔn)分子EP管外壁3_2所形成的空腔為標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)腔3-4,標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)壁3-3與標(biāo)準(zhǔn)分子EP管外壁3_2由筋板3-5連接。利用本實(shí)用新型進(jìn)行檢測(cè)耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆A2704-12基因、耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆A5547-127基因、抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆M0N89788基因、抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆GTS40-3-2的外源基因和大豆的內(nèi)參基因的方法如下:一、取10個(gè)反應(yīng)管,然后向第一個(gè)反應(yīng)管中加入0.5 μ LlF引物EP管5中的溶液、
0.5 μ LlR引物EP管6中的溶液、5 μ LPCR預(yù)混液試劑管15中的PCR預(yù)混液、18.2.μ L無(wú)菌水試劑瓶4中的無(wú)菌水和0.8 μ L待測(cè)樣品；向第二個(gè)反應(yīng)管中加入0.5μ LlF引物EP管5中的溶液、0.5μ LlR引物EP管6中的溶液、5 μ LPCR預(yù)混液試劑管15中的PCR預(yù)混液、18.2.μ L無(wú)菌水試劑瓶4中的無(wú)菌水和0.8 μ L標(biāo)準(zhǔn)分子EP管3中的標(biāo)準(zhǔn)分子；向第三個(gè)反應(yīng)管中加入0.5μ L2F引物EP管7中的溶液、0.5μ L2R引物EP管8中的溶液、5 μ LPCR預(yù)混液試劑管15中的PCR預(yù)混液、18.2.μ L無(wú)菌水試劑瓶4中的無(wú)菌水和0.8 μ L待測(cè)樣品；向第四個(gè)反應(yīng)管中加入0.5μ L2F引物EP管7中的溶液、0.5μ L2R引物EP管8中的溶液、5 μ LPCR預(yù)混液試劑管15中的PCR預(yù)混液、18.2.μ L無(wú)菌水試劑瓶4中的無(wú)菌水和0.8 μ L標(biāo)準(zhǔn)分子EP管3中的標(biāo)準(zhǔn)分子；向第五個(gè)反應(yīng)管中加入0.5 μ L3F引物EP管9中的溶液、0.5 μ L3R引物EP管10中的溶液、5 μ LPCR預(yù)混液試劑管15中的PCR預(yù)混液、18.2.μ L無(wú)菌水試劑瓶4中的無(wú)菌水和0.8 μ L待測(cè)樣品；向第六個(gè)反應(yīng)管中加入0.5 μ L3F引物EP管9中的溶液、0.5 μ L3R引物EP管10中的溶液、5 μ LPCR預(yù)混液試劑管15中的PCR預(yù)混液、18.2.μ L無(wú)菌水試劑瓶4中的無(wú)菌水和0.8 μ L標(biāo)準(zhǔn)分子EP管3中的標(biāo)準(zhǔn)分子；向第七個(gè)反應(yīng)管中加入0.5 μ L4F引物EP管11中的溶液、0.5 μ L4R引物EP管12中的溶液、5 μ LPCR預(yù)混液試劑管15中的PCR預(yù)混液、18.2.μ L無(wú)菌水試劑瓶4中的無(wú)菌水和0.8 μ L待測(cè)樣品；向第八個(gè)反應(yīng)管中加入0.5 μ L4F引物EP管11中的溶液、0.5 μ L4R引物EP管12中的溶液、5 μ LPCR預(yù)混液試劑管15中的PCR預(yù)混液、18.2.μ L無(wú)菌水試劑瓶4中的無(wú)菌水和0.8 μ L標(biāo)準(zhǔn)分子EP管3中的標(biāo)準(zhǔn)分子；向第九個(gè)反應(yīng)管中加入0.5 μ L5F引物EP管13中的溶液、0.5 μ L5R引物EP管14中的溶液、5 μ LPCR預(yù)混液試劑管15中的PCR預(yù)混液、18.2.μ L無(wú)菌水試劑瓶4中的無(wú)菌水和0.8 μ L待測(cè)樣品；向第十個(gè)反應(yīng)管中加入0.5 μ L5F引物EP管13中的溶液、0.5 μ L5R引物EP管14中的溶液、5 μ LPCR預(yù)混液試劑管15中的PCR預(yù)混液、18.2.μ L無(wú)菌水試劑瓶4中的無(wú)菌水和0.8 μ L標(biāo)準(zhǔn)分子EP管3中的標(biāo)準(zhǔn)分子；二、將經(jīng)過(guò)步驟一處理的10個(gè)反應(yīng)管放入PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)條件為:預(yù)變性95°C 3min ;35個(gè)循環(huán):變性95°C 30sec，退火58°C 30sec，延伸72°C 30sec ;后延伸72 °C 3min，獲得 PCR 產(chǎn)物；三、將PCR產(chǎn)物通過(guò)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，然后利用凝膠成像儀進(jìn)行檢測(cè)。
具體實(shí)施方式
二:本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是所述的無(wú)菌水試劑瓶4為白色無(wú)菌水試劑瓶。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三:本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是所述的標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)腔3-4內(nèi)裝有水或者冰。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
權(quán)利要求1.耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆通用的標(biāo)準(zhǔn)分子檢測(cè)試劑盒，耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆通用的標(biāo)準(zhǔn)分子檢測(cè)試劑盒包括密封盒(I)、載樣板(2)、標(biāo)準(zhǔn)分子EP管(3)、無(wú)菌水試劑瓶(4)、1F引物EP管(5)、IR引物EP管(6)、2F弓丨物EP管(7)、2R引物EP管(8)、3F引物EP管(9)、3R引物EP管(10)、4F引物EP管(11)、4R引物EP管(12)、5F引物EP管(13)、5R引物EP管(14)和PCR預(yù)混液試劑管(15)，所述載樣板(2)設(shè)置在密封盒(I)內(nèi)，載樣板(2)上設(shè)有第一載樣孔(3-1)、第二載樣孔(4-1)、第三載樣孔(5-1)、第四載樣孔(6-1)、第五載樣孔(7-1)、第六載樣孔(8-1)、第七載樣孔(9-1)、第八載樣孔(10-1)、第九載樣孔(11-1)、第十載樣孔(12-1)、第^ 載樣孔(13-1)、第十二載樣孔(14-1)和第十三載樣孔(15-1),標(biāo)準(zhǔn)分子EP管(3)設(shè)置在第一載樣孔(3-1)中，無(wú)菌水試劑瓶(4)設(shè)置在第二載樣孔(4-1)中，IF引物EP管(5)設(shè)置在第三載樣孔(5-1)中，IR引物EP管(6)設(shè)置在第四載樣孔(6-1)中，2F引物EP管(7)設(shè)置在第五載樣孔(7-1)中，2R引物EP管⑶設(shè)置在第六載樣孔(8-1)中，3F引物EP管(9)設(shè)置在第七載樣孔(9-1)中，3R引物EP管(10)設(shè)置在第八載樣孔(10-1)中，4F引物EP管(11)設(shè)置在第九載樣孔(11-1)中，4R引物EP管(12)設(shè)置在第十載樣孔(12-1)中，5F引物EP管(13)設(shè)置在第i^一載樣孔(13_1)中，5R引物EP管(14)設(shè)置在第十二載樣孔(14-1)中，PCR預(yù)混液試劑管(15)設(shè)置在第十三載樣孔(15_1)中，其特征在于所述標(biāo)準(zhǔn)分子EP管(3)包括標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)壁(3-3)、標(biāo)準(zhǔn)分子EP管外壁(3-2)、標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)腔(3-4)和筋板(3-5)，所述標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)壁(3_3)位于標(biāo)準(zhǔn)分子EP管外壁(3-2)的內(nèi)部，標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)壁(3-3)與標(biāo)準(zhǔn)分子EP管外壁(3_2)所形成的空腔為標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)腔(3-4),標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi)壁(3-3)與標(biāo)準(zhǔn)分子EP管外壁(3-2)由筋板(3-5)連接。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆通用的標(biāo)準(zhǔn)分子檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的無(wú)菌水試劑瓶(4)為白色無(wú)菌水試劑瓶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆通用的標(biāo)準(zhǔn)分子檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的標(biāo)準(zhǔn)分子EP管內(nèi) 腔(3-4)內(nèi)裝有水或者冰。
專利摘要耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆通用的標(biāo)準(zhǔn)分子檢測(cè)試劑盒，本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)試劑盒。本實(shí)用新型為了解決現(xiàn)有檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆成分需要陽(yáng)性物質(zhì)多的技術(shù)問(wèn)題，提供了一種耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆通用的標(biāo)準(zhǔn)分子檢測(cè)試劑盒。耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆通用的標(biāo)準(zhǔn)分子檢測(cè)試劑盒包括密封盒、載樣板、標(biāo)準(zhǔn)分子EP管、無(wú)菌水試劑瓶、10個(gè)引物EP管和PCR預(yù)混液試劑管，本實(shí)用新型只需用1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)分子即只有1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)分子EP管便滿足轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)需要。本實(shí)用新型輕巧、簡(jiǎn)便快捷，不僅可以解決實(shí)驗(yàn)室普遍缺乏陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的難題，還可以提高檢測(cè)效率、縮短檢測(cè)周期。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK203021569SQ201320039049

公開(kāi)日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2013年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月24日
發(fā)明者仇有文, 張明輝, 曲波, 袁肖寒, 甄貞, 于艷波, 劉營(yíng), 敖金霞, 高學(xué)軍 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)