一種封閉式超濾管道系統(tǒng)的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本實(shí)用新型提供一種封閉式超濾管道系統(tǒng)，包括緩沖液容器、待濃縮液容器、最終收集液容器、濃縮液容器和超濾設(shè)備，有管道穿過(guò)頂蓋從容器中引出；緩沖液容器引出的管道與待濃縮液容器引出的管道分別連接三通兩個(gè)接口，三通的第三個(gè)接口通過(guò)泵和管道與另一三通連接；最終收集液容器和濃縮液容器引出的管道分別連接三通的兩個(gè)接口，其第三個(gè)接口與三通的另一個(gè)接口連接；所述三通的第三個(gè)接口與連接超濾設(shè)備的回流管路連接。本實(shí)用新型提出的系統(tǒng)可簡(jiǎn)化生產(chǎn)步驟，使生產(chǎn)效率提高，其可拆卸清潔和組合后高壓的超濾封閉式組合管道，便于清潔、高壓，且保障了專(zhuān)管專(zhuān)用，可多次重復(fù)使用，降低了生產(chǎn)的成本，增加了疫苗無(wú)菌生產(chǎn)的可控性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種封閉式超濾管道系統(tǒng)
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于生物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種病毒載體的純化系統(tǒng)及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]在疫苗生產(chǎn)的工序中，需要對(duì)所收獲的病毒液進(jìn)行純化以去除非抗原類(lèi)的雜分子物質(zhì)，獲得較純的抗原用來(lái)制備疫苗終產(chǎn)品。在病毒純化的工藝中，超濾濃縮和透析為常用的方法。在病毒的濃縮和提純工藝中，需要向病毒液中加入外源性的物質(zhì)，比如沉淀工藝中引入的PEG6000，抽提工藝中引入的三氯甲烷，層析過(guò)程中引入的吐溫-80等。上述外源物質(zhì)的殘留影響產(chǎn)品質(zhì)量，為獲得純化后病毒液，在對(duì)病毒進(jìn)行濃縮的同時(shí)需要去除引入的雜質(zhì)分子。純化階段常常采用超濾濃縮和多次透析相結(jié)合的方法去除上一工序所引進(jìn)的外源物質(zhì)，如PEG6000、三氯甲烷、吐溫-80等。
[0003]在疫苗的生產(chǎn)工藝中，采用PEG6000沉淀后離心的方式將病毒液按工藝所需倍數(shù)進(jìn)行濃縮，以等體積或多倍體積的方式加入磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L PBS溶液)稀釋?zhuān)瑢⑾♂尯蟮牟《疽涸俅芜M(jìn)行濃縮，如此反復(fù)進(jìn)行以達(dá)到去除病毒液中雜質(zhì)分子的作用，稱(chēng)此步驟為透析。經(jīng)多次透析后即可獲得符合生產(chǎn)所要求標(biāo)準(zhǔn)的疫苗病毒液。
[0004]疫苗生產(chǎn)工藝中無(wú)菌的控制非常必要，直接影響終產(chǎn)品的質(zhì)量，特別是非滅活類(lèi)的疫苗，主要依靠疫苗生產(chǎn)過(guò)程中的無(wú)菌控制。在現(xiàn)有的疫苗生產(chǎn)工藝技術(shù)中，多數(shù)企業(yè)采用的病毒超濾步驟多為分步進(jìn)行，即對(duì)超濾系統(tǒng)分別進(jìn)行沖堿清潔后沖注射用水，再用緩沖液平衡超濾系統(tǒng)，最后濃縮和透析病毒液，且使用硅膠管道分別連接超濾系統(tǒng)的進(jìn)液、回流與濾過(guò)端，在操作過(guò)程中分別將與超濾系統(tǒng)的進(jìn)液、回流與濾過(guò)端連接的硅膠管直接伸入桶內(nèi)，在操作環(huán)境中屬于敞口生產(chǎn)，采用的這種管道為非閉合式分類(lèi)管道。在無(wú)菌生產(chǎn)過(guò)程中這類(lèi)管道較分散，在物品準(zhǔn)備的清潔過(guò)程及生產(chǎn)操作過(guò)程中需要多次重復(fù)的拆裝和組合，工作量大且管道易混淆，不能保證專(zhuān)管專(zhuān)用，增加交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)?？傊?，這類(lèi)非閉合式分類(lèi)管道不僅在操作過(guò)程中步驟繁瑣、耗時(shí)耗力，而且整個(gè)過(guò)程很難保證無(wú)菌，操作過(guò)程中帶來(lái)的污染風(fēng)險(xiǎn)程度較高。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0005]介于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足和疫苗生產(chǎn)的需要，本申請(qǐng)?zhí)岢鲆环N可拆卸清潔和組合后再滅菌使用的封閉式超濾組合管道系統(tǒng)，不僅有效地保證了疫苗生產(chǎn)工藝中的無(wú)菌生產(chǎn)，而且操作簡(jiǎn)便，適合大規(guī)模的生產(chǎn)。
[0006]實(shí)現(xiàn)本實(shí)用新型目的的技術(shù)方案為:
[0007]—種封閉式超濾管道系統(tǒng)，包括緩沖液容器1、待濃縮液容器2、最終收集液容器
3、濃縮液容器4和超濾設(shè)備5 ；
[0008]所述緩沖液容器1、待濃縮液容器2、最終收集液容器3和濃縮液容器4的均設(shè)置有頂蓋，頂蓋上設(shè)置有孔，有管道穿過(guò)所述孔從容器中弓I出；
[0009]所述緩沖液容器I引出的管道6與待濃縮液容器2引出的管道7分別連接三通11的兩個(gè)接口，所述三通11的第三個(gè)接口通過(guò)泵16和管道與三通12的一個(gè)接口連接；所述最終收集液容器3和濃縮液容器4引出的管道10、8分別連接三通13的兩個(gè)接口，所述三通13的第三個(gè)接口與三通12的另一個(gè)接口通過(guò)管道9連接；所述三通12的第三個(gè)接口與連接超濾設(shè)備5的回流管路14連接；所述濃縮液容器4還通過(guò)泵17、進(jìn)液管路15與超濾設(shè)備5連接。
[0010]其中，所述緩沖液容器I引出的管道6與待濃縮液容器2引出的管道7均通過(guò)所述孔插入容器底部，所述管道6、7與容器底部接觸的部分為不銹鋼材質(zhì)或可高壓滅菌的塑料材質(zhì)的直管，所述管道6、7其余部分為硅膠材質(zhì)，優(yōu)選鉬金硫化硅膠。
[0011]其中，所述進(jìn)液管路15和/或管道8與濃縮液容器(4)底部接觸部分管道為不銹鋼材質(zhì)或可高壓滅菌的塑料材質(zhì)的直管，其余部分為硅膠材質(zhì)。
[0012]其中，所述最終收集液容器3和濃縮液容器4引出的管道10、8、回流管路14、進(jìn)液管路15均為硅膠材質(zhì)，優(yōu)選為鉬金硫化硅膠。
[0013]其中，所述三通11為T(mén)三通，所述三通12、13為Y三通，所述T三通與Y三通的材質(zhì)為可高壓的塑料材質(zhì)，如聚丙烯PP。
[0014]其中，所述超濾設(shè)備5還連接有用于排出廢液的濾過(guò)管路16。
[0015]本實(shí)用新型所述的封閉式超濾管道系統(tǒng)的應(yīng)用包括步驟:
[0016]I)濃縮:將病毒液接入待濃縮液容器2，封閉管道6、回流管道14和管道10，用泵16將病毒液泵入濃縮液容器4 ；
[0017]然后打開(kāi)回流管道14，開(kāi)啟泵17，啟動(dòng)超濾設(shè)備5運(yùn)行，超濾設(shè)備5產(chǎn)生的濃縮液通過(guò)回流管道14進(jìn)入濃縮液容器4 ；
[0018]當(dāng)待濃縮液容器2內(nèi)的病毒液被完全泵入濃縮液容器4內(nèi)，關(guān)閉泵16和管道7，將濃縮液容器4內(nèi)病毒液濃縮至工藝要求倍數(shù)時(shí)，關(guān)閉泵17和回流管道14 ;所述工藝要求的濃縮倍數(shù)視病毒液而定，例如為2-15倍。
[0019]2)透析:所述緩沖液容器I內(nèi)裝緩沖液，封閉管道7和回流管道14，通過(guò)管道6和泵16將緩沖液泵入濃縮液容器4，然后封閉管道6和關(guān)閉泵16，打開(kāi)回流管道14、開(kāi)啟泵17，啟動(dòng)超濾設(shè)備5以去除非抗原性成分；
[0020]3)收集:封閉管道8、濾過(guò)管路16，打開(kāi)管路10，啟動(dòng)泵17將濃縮液容器4內(nèi)的溶液經(jīng)超濾設(shè)備5處理后進(jìn)入最終收集液容器3。
[0021 ] 其中，用止血鉗或彈簧夾夾住管道，實(shí)現(xiàn)對(duì)管道的封閉。
[0022]其中，所述步驟I)中的病毒液是細(xì)胞培養(yǎng)制得的病毒收獲液，或者指收獲后加入非抗原性成分，所述非抗原性成分選自PEG6000、三氯甲烷或吐溫-80中的一種或其它用在病毒濃縮、透析工藝中添加的外源物質(zhì)；
[0023]所述步驟2)中的緩沖液為磷酸緩沖液。
[0024]其中，所述步驟2)重復(fù)進(jìn)行2-10次。
[0025]本實(shí)用新型提出的超濾封閉式組合管道，取代了現(xiàn)有方法用分類(lèi)管道進(jìn)行疫苗的超濾生產(chǎn)工作，主要可實(shí)現(xiàn)以下的有益技術(shù)效果:
[0026]I)簡(jiǎn)化生產(chǎn)步驟，減短了生產(chǎn)時(shí)間，使生產(chǎn)的效率提高。
[0027]2)這是一種可拆卸清潔和組合后高壓的超濾封閉式組合管道，便于清潔、高壓，且保障了專(zhuān)管專(zhuān)用，可多次重復(fù)使用，降低了生產(chǎn)的成本。[0028]3)減少了用于生產(chǎn)疫苗的病毒液在外部環(huán)境暴露的時(shí)間及次數(shù)，增加了疫苗無(wú)菌生產(chǎn)的可控性。
[0029]4)避免了疫苗生產(chǎn)的中間產(chǎn)品過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的放置于室溫中，提高了疫苗的品質(zhì)質(zhì)量。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0030]圖1為封閉式超濾管道系統(tǒng)結(jié)構(gòu)圖。
[0031]圖中，I為緩沖液容器，2為待濃縮液容器，3為最終收集液容器，4為濃縮液容器，5為超濾設(shè)備，6、7、8、9、10為管道，11為T(mén)三通，12、13為Y三通，14為回流管路，15為進(jìn)液管路,16、17為泵’ 18為濾過(guò)管路。
【具體實(shí)施方式】
[0032]現(xiàn)以以下最佳實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本實(shí)用新型，但不用來(lái)限制本實(shí)用新型的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。
[0033]實(shí)施例1:封閉式超濾管道系統(tǒng)
[0034]封閉式超濾管道系統(tǒng)，包括緩沖液容器1、待濃縮液容器2、最終收集液容器3、濃縮液容器4和超濾設(shè)備5 ；
[0035]所述緩沖液容器1、待濃縮液容器2、最終收集液容器3和濃縮液容器(4)的頂蓋上均設(shè)置有孔，有管道穿過(guò)所述孔從容器中引出；
[0036]緩沖液容器I引出的管道6與待濃縮液容器2引出的管道7分別連接T三通11的兩個(gè)接口，T三通11的第三個(gè)接口通過(guò)泵16 (蠕動(dòng)泵)和管道與Y三通12的一個(gè)接口連接；最終收集液容器3和濃縮液容器4引出的管道10、8分別連接Y三通13的兩個(gè)接口，Y三通13的第三個(gè)接口與Y三通12的另一個(gè)接口通過(guò)管道9連接；Y三通12的第三個(gè)接口與連接超濾設(shè)備5的回流管路14連接；所述濃縮液容器4還通過(guò)泵17(蠕動(dòng)泵)、進(jìn)液管路15與超濾設(shè)備5連接。
[0037]管道6、管道7均通過(guò)頂蓋上的孔插入容器底部，管道6、7與容器底部接觸的部分為不銹鋼材質(zhì)的直管，其余部分為鉬金硫化娃膠材質(zhì)。管道8、9、10、回流管路14、進(jìn)液管路15均為鉬金硫化娃膠材質(zhì)。
[0038]進(jìn)液管路15與濃縮液容器4桶底接觸端管道用不銹鋼材質(zhì)的直管或可高壓滅菌的塑料材質(zhì)(如聚丙烯PP)的直管連接。超濾設(shè)備5還連接有用于排出廢液的濾過(guò)管路18。本實(shí)施例的系統(tǒng)還配有若干止血鉗。
[0039]本系統(tǒng)的應(yīng)用方法:
[0040]PEG沉淀甲肝病毒收獲液使用實(shí)施例1的封閉式超濾管道系統(tǒng)生產(chǎn)初純甲肝病毒
I(超濾膜包型號(hào):0S05(F05\0S050T06 ;截留分子量:50_100KD)。
[0041]I)、經(jīng)細(xì)胞工廠(chǎng)培養(yǎng)人二倍體細(xì)胞，接種甲型肝炎病毒培養(yǎng)后，加入細(xì)胞裂解液收獲甲肝病毒液。
[0042]2)、向甲肝病毒收獲液中加入PEG6000溶液，過(guò)夜沉淀。經(jīng)離心后，可收集PEG沉淀甲肝病毒上清液。
[0043]3)、對(duì)PEG沉淀甲肝病毒上清液進(jìn)行超濾，生產(chǎn)初純甲肝病毒1:[0044]3-1)、超濾系統(tǒng)經(jīng)堿清潔、注水平衡及緩沖液平衡后，連接組合管道。
[0045]3-2)、濃縮:將收獲的PEG沉淀病毒液，接入管道7處的待濃縮液容器2，同時(shí)用止血鉗將圖1中位點(diǎn)①、④、⑤管道處夾死，使管道6、管道14和管道10封閉；用蠕動(dòng)泵16將PEG沉淀甲肝病毒液泵入連接管道8處的濃縮容器4內(nèi)。打開(kāi)超濾設(shè)備5的回流管路14，即打開(kāi)圖1中位點(diǎn)④處止血鉗并開(kāi)啟蠕動(dòng)泵17，使整個(gè)超濾系統(tǒng)運(yùn)轉(zhuǎn)，實(shí)現(xiàn)邊加待濃縮病毒液邊濃縮的操作。待待濃縮液容器2內(nèi)的PEG沉淀甲肝病毒液被完全濃縮在濃縮容器4內(nèi)，關(guān)閉蠕動(dòng)泵16，用止血鉗夾死圖1中位點(diǎn)②處的管道7。將濃縮容器4內(nèi)病毒液濃縮至工藝要求倍數(shù)時(shí)，關(guān)閉蠕動(dòng)泵17，用止血鉗夾死超濾系統(tǒng)回流管路14，即附圖中位點(diǎn)④。
[0046]3-3)、透析:打開(kāi)圖1中位點(diǎn)①處的管道6的止血鉗，開(kāi)啟蠕動(dòng)泵16，向管道8處的濃縮容器4內(nèi)等體積加入裝在緩沖液容器I里的0.0lmol/LPBS (pH7.2，)緩沖液，關(guān)閉蠕動(dòng)泵16，用止血鉗夾死圖1中位點(diǎn)①處的管道6，打開(kāi)超濾系統(tǒng)回流管路14，即圖1中位點(diǎn)④處止血鉗,開(kāi)啟螺動(dòng)泵17進(jìn)行透析去除PEG6000等非抗原性成分。等體積加入0.0lmol/LPBS (pH7.2)緩沖液進(jìn)行透析的反復(fù)操作3-6次，完成透析，關(guān)閉蠕動(dòng)泵17。
[0047]3-4)、收集:用止血鉗夾死圖1中位點(diǎn)⑥處管道8，關(guān)閉超濾系統(tǒng)的濾過(guò)端，即關(guān)閉濾過(guò)管路18上的閥門(mén)，打開(kāi)附圖中位點(diǎn)⑤處管道10上的止血鉗，開(kāi)啟蠕動(dòng)泵17將管道8處的濃縮容器4內(nèi)的透析后病毒液經(jīng)超濾系統(tǒng)后打入管道10處的最終收集液容器，此時(shí)收獲的病毒液為超濾后病毒液。
[0048]以上所述僅是本實(shí)用新型的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本實(shí)用新型技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和替換，這些改進(jìn)和替換也應(yīng)視為本實(shí)用新型的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種封閉式超濾管道系統(tǒng)，其特征在于，包括緩沖液容器(I)、待濃縮液容器(2)、最終收集液容器(3 )、濃縮液容器(4 )、超濾設(shè)備(5 )和若干個(gè)三通；所述緩沖液容器(I)、待濃縮液容器(2)、最終收集液容器(3)和濃縮液容器(4)均設(shè)置有頂蓋，頂蓋上設(shè)置有孔，有管道穿過(guò)所述孔從容器中弓I出；所述緩沖液容器(I)引出的管道(6)與待濃縮液容器(2)引出的管道(7)分別連接三通(11)的兩個(gè)接口，所述三通(11)的第三個(gè)接口通過(guò)泵(16)和管道與三通(12)的一個(gè)接口連接；所述最終收集液容器(3)和濃縮液容器(4)引出的管道(10、8)分別連接三通(13)的兩個(gè)接口，所述三通(13)的第三個(gè)接口與三通(12)的另一個(gè)接口通過(guò)管道(9)連接；所述三通(12)的第三個(gè)接口與連接超濾設(shè)備(5 )的回流管路(14 )連接；所述濃縮液容器(4 )還通過(guò)泵(17 )、進(jìn)液管路(15 )與超濾設(shè)備(5 )連接。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的封閉式超濾管道系統(tǒng)，其特征在于，所述緩沖液容器(I)引出的管道(6)與待濃縮液容器(2)引出的管道(7)均通過(guò)所述孔插入容器底部，所述管道(6、7)與容器底部接觸的部分為不銹鋼材質(zhì)或可高壓滅菌的塑料材質(zhì)的直管，所述管道(6、7)其余部分為硅膠材質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的封閉式超濾管道系統(tǒng)，其特征在于，所述進(jìn)液管路(15)和/或管道(8)與濃縮液容器(4)底部接觸部分管道為不銹鋼材質(zhì)或可高壓滅菌的塑料材質(zhì)的直管，其余部分為硅膠材質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的封閉式超濾管道系統(tǒng)，其特征在于，所述最終收集液容器(3)引出的管道(8)、所述回流管路(14)、進(jìn)液管路(15)均為硅膠材質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的封閉式超濾管道系統(tǒng)，其特征在于，所述三通(11)為T(mén)三通，所述三通(12、13)為Y三通。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的封閉式超濾管道系統(tǒng)，其特征在于，所述超濾設(shè)備(5)還連接有用于排出廢液的濾過(guò)管路(16)。
【文檔編號(hào)】C12M1/12GK203447991SQ201320555158
【公開(kāi)日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2013年9月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月6日
【發(fā)明者】張穎, 張健, 董興華, 黃金鳳, 李靜, 尹衛(wèi)東 申請(qǐng)人:北京科興生物制品有限公司