用基質(zhì)輔助激光解吸電離法(maldi)進行微生物的自動選擇和鑒定的制作方法
【專利摘要】一種可在一個培養(yǎng)皿上定位和選擇一個微生物菌落，并用MALDI技術(shù)在所述選擇的菌落中鑒定微生物的方法和儀器。該方法包括以下幾個自動的步驟：在一個培養(yǎng)皿上定位和選擇一個菌落；從所述選擇的菌落中獲得一份樣本；將從所述選擇的菌落中的所述樣本的至少一部分沉積在一個靶板上；將含有所述樣本的所述靶板專一的一個執(zhí)行MALDI的儀器內(nèi)，以對所述選擇的菌落的所述樣本進行鑒定。一個微生物菌落的樣本自動沉積到一個沉積點上從而使樣本最多只覆蓋靶板上所述其中一個沉積點的一半。微生物樣本的懸浮液是自動制備的，其方法是用一個取樣工具自動選擇樣本并將該取樣工具連同所述樣本一同浸入懸浮液中，然后該取樣工具只在垂直方向上振蕩，以將樣本從取樣工具上釋放。
【專利說明】用基質(zhì)輔助激光解吸電離法(MALDI)進行微生物的自動選擇和鑒定

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明總體上涉及一種定位和選擇微生物菌落并用MALDI，特別是MALD1-T0F-MS (基質(zhì)輔助激光解吸和電離飛行時間質(zhì)譜)技術(shù)鑒定微生物，以及執(zhí)行這些方法的系統(tǒng)。
[0002]MALDI分析是一種有用的工具，可解決生物化學(xué)，免疫學(xué)，遺傳學(xué)和生物學(xué)的結(jié)構(gòu)性問題。樣本在氣相下電離，并通過飛行時間(TOF)分析儀來測量離子的質(zhì)量。TOF分析從離子形成時，以及在離子進入漂移區(qū)的同時被加速至某一恒定動能時開始。離子在經(jīng)過不同的飛行時間后到達一個探測器，飛行時間與其質(zhì)量的平方根成正比。之所以能生成質(zhì)量譜，是因為質(zhì)量不同的離子到達探測器的時間不同。
[0003]質(zhì)譜分析法在藥物發(fā)現(xiàn)與開發(fā)、基因分型和蛋白質(zhì)組研究領(lǐng)域是一種強大的工具。此外，MALDI技術(shù)已在細菌和微生物的定性與鑒定領(lǐng)域得到了應(yīng)用。目前的研究趨勢是用大量的個體樣本(從微摩爾水平到阿托摩爾水平)來分析越來越大的樣本數(shù)。結(jié)果是樣本也變得更小，這就需要對合適數(shù)量的微生物進行高效而可靠的采集，并且能將所采集的一定數(shù)量的樣本存放在MALDI儀器的靶板上。
[0004]在典型的MALDI TOF MS操作中，將待分析樣本放在或沉積在一個金屬平板(又稱靶板或MALDI平板)上，先添加支持電離的試劑(基質(zhì))，然后將其干燥形成晶體。在這些儀器中，靶板放置在MALDI儀器中的一個固定位置。靶板上有多個沉積點(例如單個靶板上有24到384個沉積點)，并且這些沉積點相對于靶板邊緣的方向是固定的。靶板放置在一個X-Y定位平臺上，這樣就能把從微生物菌落中采集的樣本沉積在選定的沉積點上。在靶板和一個金屬格柵之間保持高壓電位。此電壓既可以維持恒定，也可以是脈沖的，這取決于需要的結(jié)果。在腔室內(nèi)產(chǎn)生了真空度。激光被發(fā)射到樣本/基質(zhì)內(nèi)，形成一團離子霧。電壓差用來使離子加速進入一個飛行管內(nèi)，以對這些離子進行分析。分析時將飛行時間和離子化組分的質(zhì)量直接關(guān)聯(lián)。
[0005]有多個參數(shù)能影響結(jié)果的質(zhì)量，包括靶板的平度、基質(zhì)的量和類型、樣本的濃度、樣本靶的導(dǎo)電性、沉積點的放置精度，以及其他一些可變因素。
[0006]尤其重要的因素是樣本的處理和樣本的濃度。已知的是從一個微生物菌落中采集的樣本已經(jīng)制成懸浮液，并且研究員通過一個移液管，動手從制得的含有樣本的懸浮液中取一滴放在靶板中的一個沉積點上。但如果要進行正確的分析，懸浮液中一開始就必須含有足夠濃度的樣本。
[0007]在將微生物樣本制成懸浮液時，需使用一個帶驅(qū)動裝置的手持設(shè)備。所述驅(qū)動裝置包含一個帶旋轉(zhuǎn)驅(qū)動電機的外殼和一個連接器，該連接器的配置可保證樣本采集裝置和驅(qū)動裝置之間以可釋放的方式連接。該樣本采集裝置包含一個樣本收集區(qū)，此收集區(qū)首先與待分析的生物材料(大多在培養(yǎng)皿中生長)接觸。然后，所述樣本收集區(qū)與旋轉(zhuǎn)驅(qū)動裝置連接，從而與一個試管中的一種液體介質(zhì)相接觸，而所述旋轉(zhuǎn)驅(qū)動裝置會啟動一段時間，使樣本采集裝置中的一個生物材料樣本被釋放到液體介質(zhì)中。在樣本收集區(qū)從試管內(nèi)移除后，樣本即留在懸浮液試管中的懸浮液中，可用于MALDI分析等。
[0008]然而，在某些情況下，由于樣本從樣本采集區(qū)釋放的效率不夠高，無法對懸浮在液體介質(zhì)中的微生物進行正確的分析。這就可能導(dǎo)致制備的懸浮液不可用，從而損失時間和金錢。此外，由于樣本收集區(qū)在試管內(nèi)旋轉(zhuǎn)，試管的尺寸必須足夠大，這樣在旋轉(zhuǎn)時樣本收集區(qū)就不會接觸試管的內(nèi)壁，否則將不利于微生物在液體介質(zhì)中的釋放。這樣一個尺寸相對較大的試管里面盛的液體介質(zhì)的量也相對較大，對這些液體懸浮介質(zhì)進一步處理所需的時間也很長。例如，對含樣本的液體懸浮液進行溫浴的時間與懸浮液的量成正比。因此，需要有一種方法能夠自動制備微生物樣本懸浮液，從而能以更便于重現(xiàn)的方式制備這樣一種懸浮液。此外，還需要能以可靠而重現(xiàn)的方式將樣本釋放在靶板的沉積點上。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]為了能至少解決其中一個上述提到的問題，本發(fā)明提出了一種可在一個培養(yǎng)皿上定位和選擇一個微生物菌落，并用MALDI技術(shù)在所述選擇的菌落中鑒定微生物的方法，其中所述的方法包括以下幾個自動的步驟:在一個培養(yǎng)皿上定位和選擇一個微生物菌落；從所述選擇的微生物菌落中獲得一份樣本；將從所述選擇的菌落中的所述樣本的至少一部分沉積在一個靶板上；將含有所述樣本的所述靶板轉(zhuǎn)移至一個執(zhí)行MALDI的儀器內(nèi)，以對所述選擇的微生物菌落的所述樣本進行鑒定?？雌饋韺?dǎo)致上述問題的原因很大程度上在于這些步驟是手動進行的，因此這些步驟容易出現(xiàn)不希望出現(xiàn)的差異和錯誤，使MALDI儀器得出錯誤的結(jié)果，導(dǎo)致成本增加并損失時間。只要能使每個步驟實現(xiàn)自動化，至少能在很大程度上解決這些問題。在本領(lǐng)域中已經(jīng)形成一種成見，那就是這些步驟中至少有一部分只能以手動方式完成，然而本發(fā)明則首次提供了一種可能性，即在定位和選擇一個微生物菌落，并用MALDI技術(shù)在所述選擇的菌落中進行微生物鑒定時，所有必要的步驟均可實現(xiàn)自動化。
[0010]在本發(fā)明所涉方法的一個實施例中，將所述選擇的微生物菌落中的所述樣本的至少一部分沉積到一個靶板上的步驟是通過將所述選擇的微生物菌落中所述已制得的樣本直接放置在所述靶板上實現(xiàn)的。由于是直接將一個樣本放置在靶板上，就不再需要先制備所述樣本的一份懸浮液，這樣就避開了在制備這樣的懸浮液時可能發(fā)生的所有問題。這種方法最好包含進一步自動化的步驟，即能夠?qū)⒁坏蜯ALDI基液覆蓋到沉積到靶板上的那部分樣本中。
[0011]在本發(fā)明所涉方法的另一個實施例中，將所述選擇的微生物菌落中的所述樣本的至少一部分沉積到一個靶板上的步驟是通過以下自動化步驟實現(xiàn)的:將所述制得的樣本轉(zhuǎn)移到一個盛有一定量懸浮介質(zhì)的懸浮液試管中；將至少一部分所述制得的樣本轉(zhuǎn)移到所述懸浮介質(zhì)中，制備樣本懸浮液；取一滴所述樣本懸浮液；將所述一滴樣本懸浮液轉(zhuǎn)移到靶板上。通過使懸浮液的制取完全自動化，本發(fā)明可提供一種準(zhǔn)確而可重現(xiàn)的方法來借助MALDI技術(shù)，對懸浮液中的微生物進行鑒定。特別是在本方法還能自動把一滴MALDI基液覆蓋到沉積到靶板上上的所述一滴樣本懸浮液上時，本發(fā)明非常適合微生物的定性。最佳分析結(jié)果可通過本發(fā)明所涉方法的另一個實施例來獲得，其中:在覆蓋所述MALDI基液滴之前，先使所述沉積在靶板上的一滴樣本懸浮液干燥。這種使用懸浮液的替代方法在需要對該微生物菌落樣本進行另一次測試或分析時極其有用。在本發(fā)明所涉方法的一個實施例中，上述其他分析能以特別可重現(xiàn)且高效的方式實現(xiàn)，該方法進一步包括以下自動步驟:取第二滴所述樣本懸浮液；將所述第二滴樣本懸浮液沉積在一個測試培養(yǎng)皿上；將所述測試培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到一臺儀器上，進行藥敏試驗或其他分析。因此，本發(fā)明的方法可用于自動獲取或采集樣本并加入現(xiàn)有的ID/AST儀器中，包括但不僅限于BACTEC?、Phoenix、MGIT、BacT/Alert。
[0012]本在發(fā)明還可在從制得的樣本中沒有制備懸浮液的情況下進行上述其他分析。在這種情況下，本發(fā)明所涉及的方法有一個特別有利的實施例，該實施例進一步包括以下步驟的自動化:從培養(yǎng)皿中取得一個微生物菌落的第二份樣本；將所述選擇的微生物菌落的第二份樣本取出轉(zhuǎn)移；將所述選擇的微生物菌落的第二份樣本的至少一部分沉積到一個測試培養(yǎng)皿上；將所述培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到一臺儀器上進行易感性測試或其他測試。
[0013]由于在進行微生物的定性和鑒定時，通常需要將多個菌落在培養(yǎng)皿上培養(yǎng)，更重要的是樣本必須從相關(guān)的菌落中獲得。如果從無關(guān)菌落中采集樣本，則會影響MALDI儀器的高效使用并浪費時間。據(jù)本 申請人:所知，目前還不存在可區(qū)分有關(guān)菌落和無關(guān)菌落的自動流程或儀器。然而，在符合本發(fā)明的方法的一個實施例中，區(qū)分菌落的過程至少可以在保證以很高的確定性正確區(qū)分的前提下做到部分自動化，在該實施例中，該方法在對包含多個微生物菌落的培養(yǎng)皿上定位和選擇一個微生物菌落的步驟進行自動化之前，首先獲得所述包含所有微生物菌落的培養(yǎng)皿的初始圖像，然后將所述包含所有微生物菌落的培養(yǎng)皿的所述初始圖像進行顯示，然后至少選擇所述初始圖像中的一個微生物菌落。通過這一方法，研究員或分析員可根據(jù)所受的教育和掌握的知識來選擇相關(guān)的菌落。在一個特定的實施例中，為所述培養(yǎng)皿提供了具體的標(biāo)識來識別所述培養(yǎng)皿，例如條碼等，并且該方法進一步包含以下步驟:存儲所述包含所有菌落的培養(yǎng)皿的所述初始圖像，存儲涉及至少一個選擇的所述微生物菌落的信息，以及將所述培養(yǎng)皿的所述標(biāo)識存儲到一臺中央控制電腦的內(nèi)存中。在另一個實施例中，研究員或分析員可以手動輸入關(guān)于處理的處理指令，而所述培養(yǎng)皿的選定微生物菌落需經(jīng)該等處理，所述處理指令保存在所述中央控制電腦的內(nèi)存中，以便以后使用。
[0014]在本發(fā)明的另一個實施例中，其方法包含以下自動化步驟:在培養(yǎng)皿平臺上放置所述培養(yǎng)皿、為放置于所述平臺上的所述培養(yǎng)皿生成初始圖像、為所述培養(yǎng)皿生成標(biāo)識、將通過所述取樣工具裝置的成像裝置獲得的圖像與保存的所述培養(yǎng)皿的初始圖像進行比較，以獲得與選定微生物菌落的位置相關(guān)的信息，也可獲得有關(guān)在所述選定微生物菌落中進行處理的處理指令。通過將培養(yǎng)皿在放置于取樣工具裝置上時的所成圖像與初始圖像進行比較，可以自動獲得選定菌落的位置，例如可通過計算機化的圖像比較來實現(xiàn)。
[0015]本發(fā)明所涉方法的另一個實施例中，其方法包含為微生物樣本自動制備懸浮液的過程，包括以下幾個步驟:
[0016]-提供一個第一取樣工具，并且提供一個定位裝置，配備用于支撐取樣工具的取樣工具支架，所述定位裝置的設(shè)置是為了分別進行以下操作:將一個取樣工具定位在一個高于為培養(yǎng)皿上選定微生物菌落所獲得位置的起始位置，自動降低或升高往返于培養(yǎng)皿的取樣工具，以及將一個取樣工具定位在轉(zhuǎn)移位置；
[0017]-將所述第一取樣工具定位在所述定位裝置的取樣工具支架中；
[0018]-通過用所述定位裝置將第一取樣工具定位在高于為培養(yǎng)皿上選定菌落所獲得位置的起始位置，自動使第一取樣工具向著培養(yǎng)皿下降，直至與微生物接觸并選取所述微生物的一個樣本，然后自動使第一取樣工具連同所述樣本從培養(yǎng)皿上向著轉(zhuǎn)移位置升起；
[0019]-提供一個懸浮液試管支架，用于支撐懸浮液試管；
[0020]-將一個懸浮液試管放置在懸浮液試管支架中；
[0021]-提供一個懸浮介質(zhì)自動分配器，以將一種懸浮介質(zhì)自動分配到一個放置于懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管中；
[0022]-通過該自動分配器，將一個初始量的懸浮介質(zhì)自動分配到放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中；
[0023]-提供一個轉(zhuǎn)移裝置，以分別自動將一個取樣工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到高于一個放置于懸浮液試管支架的懸浮液試管的位置，并使一個取樣工具下降至一個懸浮液試管中盛放的一種懸浮介質(zhì)中或使其從懸浮介質(zhì)中升起，以及將一個取樣工具定位在一個高于一個放置于懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管的等待位置；
[0024]-通過所述轉(zhuǎn)移裝置自動將所述第一取樣工具連同微生物樣本一起從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移至一個高于懸浮液試管支架中的懸浮液試管的位置，將所述第一取樣工具連同微生物樣本一起下降至懸浮液試管內(nèi)所盛的懸浮介質(zhì)內(nèi)；通過轉(zhuǎn)移裝置，在第一取樣工具連同所述微生物的樣本已經(jīng)一起浸入懸浮介質(zhì)中的情況下，使第一取樣工具在垂直方向沿直線振蕩一段時間；并在所述一段時間結(jié)束后將第一取樣工具從盛于懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中升起至等待位置；
[0025]-提供一個濁度計，以測量盛于一個放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中的懸浮介質(zhì)的濁度；
[0026]-至少在取樣工具的振蕩時間結(jié)束后，用該濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度，并提供指示所測量的濁度的最終測量值；
[0027]-提供一個與定位裝置通訊連接的控制器、轉(zhuǎn)移裝置、自動懸浮介質(zhì)分配器和濁度計，以分別自動控制定位裝置的移動、轉(zhuǎn)移裝置的移動、自動懸浮介質(zhì)分配器的運行和濁度計的運行；
[0028]-通過所述控制器:
[0029]a)確定最終的測量值是否高于預(yù)先保存在控制器內(nèi)存中的一個第一臨界值，如果是，進行步驟b);或最終的測量值是否小于等于該第一臨界值并大于等于預(yù)先保存在控制器內(nèi)存中的一個第二臨界值，同時所述第一臨界值大于等于所述第二臨界值，如果是，進行步驟c);或最終測量值是否小于該第二臨界值，如果是，進行步驟d)；
[0030]b)控制自動懸浮介質(zhì)分配器在懸浮液試管中加入更多的懸浮介質(zhì)；
[0031]c)提供一個信號,表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理；或
[0032]d)提供另一個取樣工具；將所述另一個取樣工具放置于定位裝置的所述取樣工具支架中；用所述定位裝置將另一個取樣工具放置于培養(yǎng)皿上方的起始位置，自動使另一個取樣工具降至培養(yǎng)皿內(nèi)，與微生物接觸并取出所述微生物的另一個樣本，自動使另一個取樣工具連同所述微生物樣本從培養(yǎng)皿升至轉(zhuǎn)移位置；通過所述轉(zhuǎn)移裝置自動將所述另一個取樣工具連同另一個微生物樣本一起從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到一個高于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管的位置，將所述另一個取樣工具連同另一個微生物樣本一起降至懸浮液試管內(nèi)所盛的懸浮介質(zhì)中；在另一個取樣工具連同所述微生物的另一個樣本已經(jīng)一起浸入懸浮介質(zhì)中的情況下，通過轉(zhuǎn)移工具使另一個取樣工具在垂直方向沿直線振蕩一段時間；并在所述一段時間結(jié)束后將另一個取樣工具從盛于懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中升起至等待位置；在至少另一個取樣工具的振蕩時間完成后，通過濁度計來測量放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濃度，從而給出另一個可顯示所測量的濁度的另一個最終測量值；并進行步驟a)。通過這種方式，可以以一種先進的自動方式來制備一個微生物樣本的懸浮液，同時可通過控制器和濁度計來提供一個盛有懸浮介質(zhì)的懸浮液試管，其含有的微生物數(shù)量始終能滿足(并且可重現(xiàn))正確的微生物分析的要求。
[0033]在本發(fā)明所涉及的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法的一個實施例中，控制器的配置也使在取樣工具的振蕩時間內(nèi)另外進行以下步驟:使用濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度。在取樣工具振蕩的這段時間內(nèi)，濁度計的配置可向控制器提供指示所測量的濁度的一個在線測量值。通過這種方式，可以非常快速地自動測定懸浮液中的微生物含量。特別是如果在振蕩時間內(nèi)，濁度的在線測量值小于等于第一臨界值并大于等于第二臨界值，控制器可控制轉(zhuǎn)移裝置的移動，使取樣工具上升至等待位置，并且控制器還能進一步提供一個信號，使盛有懸浮液的懸浮液試管能夠從懸浮液試管支架內(nèi)取出，以便進一步處理。通過這種方式，可在懸浮介質(zhì)含有足夠量的微生物時，停止取樣工具的振蕩，因此該方法可以非常高的時間效率實現(xiàn)。
[0034]取樣工具和濁度計傳感器之間的相互配置使得在取樣工具振蕩過程中，取樣工具不會阻擋濁度計的通道。
[0035]在本發(fā)明所涉及的一種自動制備微生物樣本的懸浮液的方法的另一個實施例中，控制器的配置也使在取樣工具浸入懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)內(nèi)之前就開始進行以下步驟:使用濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度。通過這種方式，可以檢查所用的初始懸浮液是否污染。此外，這樣還能指示濁度計的起始值，這對于測定最終測量值是很有用的。
[0036]在本發(fā)明所涉及的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法的另一個實施例中，該方法進一步包含以下步驟:如同為支撐懸浮液試管而提供懸浮液試管支架一樣，提供一個可旋轉(zhuǎn)的懸浮液試管支架，從而可以旋轉(zhuǎn)固定在旋轉(zhuǎn)式懸浮液試管支架中的懸浮液試管；控制器的配置令其可與控制懸浮液試管支架旋轉(zhuǎn)的可旋轉(zhuǎn)懸浮液試管支架實現(xiàn)通訊連接；以及將控制器設(shè)置為懸浮液試管可在測量懸浮液試管中盛有的懸浮介質(zhì)的濁度時旋轉(zhuǎn)。懸浮液試管的這種旋轉(zhuǎn)可確保濁度的測量可在懸浮液試管內(nèi)的多個位置進行，這些位置在轉(zhuǎn)動過程中彼此間隔，從而使懸浮液濁度的最終測量更準(zhǔn)確。這種旋轉(zhuǎn)并非從取樣工具上釋放樣本的必要條件，取樣工具在垂直方向的直線振蕩足以釋放樣本。
[0037]雖然可以采用一個與第一取樣工具不同的另一個取樣工具，此方法可以以一種經(jīng)濟的方式進行，即在步驟d)中，可以將第一取樣工具用做另一個取樣工具；而將所述另一個取樣工具的放置于定位裝置的所述取樣工具支架的步驟可通過在控制器控制之下的轉(zhuǎn)移裝置來實現(xiàn)。
[0038]在本發(fā)明所涉及的自動制備一個微生物樣本的懸浮液的方法的又一個實施例中，懸浮介質(zhì)的額外添加量是通過控制器，在懸浮介質(zhì)初始用量、最終測量值和第一和/或第二臨界值的基礎(chǔ)上確定的。這樣就能使用恰好足夠的額外懸浮介質(zhì)，而在此實施例中，即可以盡量減小懸浮介質(zhì)的用量。
[0039]由于按照本發(fā)明所涉及的自動制備微生物樣本懸浮液的方法，取樣工具相對于懸浮液試管做垂直方向的直線振蕩，懸浮液試管的尺寸可以相對較小。這樣就可以在本發(fā)明所涉及的一種方法的一個實施例中將控制器設(shè)置為可將懸浮介質(zhì)自動分配器控制在使提供的初始用量約為0.5-2毫升，最好為I毫升。這一相對較小的懸浮介質(zhì)用量足以為微生物樣本制備合適的懸浮液。在這樣一種自動為一個微生物樣本制備懸浮液的方法中，可以使用一個截面基本呈圓形，直徑約6至12毫米左右，最好為10毫米左右的試管來作為懸浮液試管，和直徑16毫米左右的傳統(tǒng)試管相比尺寸較小。通過這樣一種相對較小的懸浮液試管，可用取樣工具進行正確的樣本釋放，此時控制器設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具在5赫茲左右到120赫茲左右的頻率之間振蕩，30赫茲左右到90赫茲左右更好，50赫茲左右為最佳。控制器應(yīng)優(yōu)先設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具以0.5毫米左右到4毫米左右的振幅振蕩，最好為2毫米左右到3毫米左右，這樣可以使取樣工具實現(xiàn)最佳的樣本釋放。如果控制器的設(shè)置可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具的振蕩時間為3秒左右到10秒左右，最好為6秒左右，樣本幾乎在所有情況下都可以從取樣工具上完全釋放。
[0040]頻率、振幅和持續(xù)時間的值取決于具體微生物的性質(zhì)，以及微生物和取樣工具的附著情況等。通過成像檢驗并借助上述優(yōu)先值，至少可判斷出大部分樣本是否已從取樣工具上釋放。如果取樣工具上仍殘留一些材料，則垂直振蕩會以不同的值，在給定范圍內(nèi)重復(fù)進行。
[0041]本發(fā)明所涉及的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法可通過進一步包含提供培養(yǎng)皿自動放置和取下的步驟來實現(xiàn)，從而可將包含所述微生物的培養(yǎng)皿自動放置在平臺上并從平臺上取下。在這種情況下，控制器的設(shè)置使其與培養(yǎng)皿自動放置和取下裝置通訊連接，以控制培養(yǎng)皿自動放置和取下裝置的運行。通過這種方式，將一個包含所述微生物的培養(yǎng)皿放置在平臺上的操作可在控制器的控制下自動進行。通過提供一個懸浮液試管自動放置和取下裝置，從而可將懸浮液試管自動放置于懸浮液試管支架中，并自動從懸浮液試管支架中取出，可進一步實現(xiàn)自動化。在這種情況下，控制器的設(shè)置可使其與懸浮液試管自動放置和取下裝置通訊連接，以控制懸浮液試管自動放置和取下裝置的運行，使懸浮液試管在懸浮液試管支架中的放置可在控制器的控制下自動進行。這樣做的好處是，可通過控制器的設(shè)置，保證只有在表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理的信號發(fā)出的情況下，才允許培養(yǎng)皿自動放置和取下裝置將一個培養(yǎng)皿從平臺上自動取下。此外，控制器的設(shè)置最好保證只有在表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理的信號發(fā)出的情況下，才允許懸浮液試管自動放置和取下裝置將一個懸浮液試管從懸浮液試管支架內(nèi)自動取出。
[0042]在本發(fā)明所涉方法的另一個實施例中，該方法包含以下步驟:為懸浮液試管提供識別標(biāo)記；以及將所述懸浮液試管的該識別標(biāo)記連同懸浮液的性質(zhì)(與從中獲得選定微生物菌落的培養(yǎng)皿標(biāo)識相關(guān))保存在所述中央控制電腦的內(nèi)存中。這種方法不僅可以極高的效率自動運行，還能提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性并加快處理的速度。
[0043]在本發(fā)明所涉方法的又一個實施例中，其對于選定微生物菌落的處理指令要求將從所述選定微生物菌落中獲得的所述樣本直接放置在所述靶板上，該方法包含以下自動步驟:提供一個第一取樣工具和一個配備支撐取樣工具的取樣工具支架的定位裝置，所述定位裝置的配置可將一個取樣工具定位在一個高于為選定微生物菌落在培養(yǎng)皿上所確定的位置的起始位置，從而可將一個取樣工具自動向培養(yǎng)皿下降和從培養(yǎng)皿上升起并定位在一個轉(zhuǎn)移位置上；將所述第一取樣工具放置在所述定位裝置的取樣工具支架內(nèi)；通過用所述定位裝置將第一取樣工具定位在高于為培養(yǎng)皿上選定菌落所獲得位置的起始位置，自動使第一取樣工具向著培養(yǎng)皿下降，直至與微生物接觸并選取所述微生物的一個樣本，然后自動使第一取樣工具連同所述樣本從培養(yǎng)皿上升至轉(zhuǎn)移位置；提供一個可固定一個靶板的靶板支架，所述靶板有多個沉積點；將一個靶板放置在靶板支架內(nèi)；提供一個轉(zhuǎn)移裝置，以將取樣工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置自動轉(zhuǎn)移至一個在靶板上其中一個沉積點上方的位置，并使該取樣工具下降至微生物菌落的樣本與靶板接觸，并將該轉(zhuǎn)移工具在一個與靶板平行的平面內(nèi)移動，從而使微生物菌落的樣本沉積到沉積點上，特別是最多只能覆蓋所述靶板上其中一個沉積點的一半；將所述取樣工具從靶板上升起。通過自動進行樣本的沉積，能以比樣本手動沉積更準(zhǔn)確、更具可重現(xiàn)性的方式將樣本沉積到沉積點上。此外，可以看出，在樣本覆蓋所述靶板上其中一個沉積點最多一半時，用MALDI儀器對起初沒有覆蓋樣本的那一部分沉積點進行分析時所獲得的分析結(jié)果的準(zhǔn)確性令人吃驚地大大高于用MALDI儀器對起初覆蓋樣本的那一部分沉積點進行分析時所獲得的分析結(jié)果。雖然發(fā)明人無意受特定理論的束縛，但可以認為:在將一滴基料覆蓋在覆蓋部分沉積點的樣本后發(fā)生的結(jié)晶過程可保證沒有覆蓋樣本材料的那部分沉積點也含有一定量的樣本材料，并且其含量非常適合得出極好的分析結(jié)果。在本發(fā)明所涉方法的另一個實施例中，如果其對于選定微生物菌落的處理指令要求從所述樣本懸浮液中取一滴并轉(zhuǎn)移到所述靶板上，該方法包含以下自動步驟:在所述取樣工具中配備一個移液工具，并提供一個配備支撐所述移液工具的移液工具支架的定位裝置，所述定位裝置的配置可將所述移液工具定位在懸浮液試管上方的起始位置，從而可將移液工具自動向下浸入懸浮液和從懸浮液中升起并將移液工具定位在一個轉(zhuǎn)移位置上；將所述移液工具放置在所述定位裝置的移液工具支架內(nèi)；通過所述定位裝置，將移液工具定位在懸浮液試管上方的起始位置，將移液工具向下浸入所述懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中，操作移液工具，使其取出一定量的懸浮液，使移液工具連同所述一定量的懸浮液一起升起至轉(zhuǎn)移位置；所述移液工具包含一個可加壓的空腔，由一個控制閥來關(guān)閉，以便容納一定量的懸浮介質(zhì)；提供一個可固定一個靶板的靶板支架，所述靶板有多個沉積點；將一個靶板放置在靶板支架內(nèi)；提供一個轉(zhuǎn)移裝置，以將移液工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置自動轉(zhuǎn)移至一個在靶板上其中一個沉積點上方的位置，并使該移液工具下降至靶板上方預(yù)先設(shè)定的距離，并使空腔加壓至0.5巴至1.1巴的壓力范圍，然后使閥開啟一定的時間，從而使一滴體積為0.5至3.0微升的懸浮液沉積在沉積點上，特別是最多只能覆蓋所述靶板上其中一個沉積點的一半；將所述移液工具從靶板上升起?？筛鶕?jù)特定微生物的性質(zhì)，例如粘性等，對壓力值和開啟時間進行調(diào)整，從而可利用自動過程，可重復(fù)地獲得一小滴懸浮液并將其準(zhǔn)確地沉積到靶板上。
[0044]為避免在本發(fā)明所涉方法的一個優(yōu)先實施例中發(fā)生交叉污染，移液工具的形狀，特別是其分配頭的形狀可保證懸浮液滴能以無飛濺的方式沉積到靶板上。目前看來，除了根據(jù)所用的微生物的種類，特別是其粘性，選擇上述范圍中的合適壓力以及合適的閥的開啟時間之外，還應(yīng)通過將移液工具設(shè)計成合適的形狀來保證以無飛濺的方式實現(xiàn)懸浮液滴的沉積。
[0045]在本發(fā)明所涉方法的另一個實施例中，該方法包含以下步驟:在靶板上提供識別標(biāo)記，選擇性地在所述靶板的沉積點上提供識別標(biāo)記；以及將所述靶板和沉積點的識別標(biāo)記連同懸浮液的性質(zhì)(與從中獲得選定微生物菌落的培養(yǎng)皿標(biāo)識相關(guān))保存在所述中央控制電腦的內(nèi)存中的步驟，以及，與獲得選定微生物菌落的培養(yǎng)皿標(biāo)識的聯(lián)系一同保存在所述控制電腦的內(nèi)存中。這種方法不僅可以極高的效率自動運行，還能提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性并加快處理的速度。
[0046]本發(fā)明進一步與一種自動制備微生物樣本的方法有關(guān)，所述方法包括以下幾個步驟:
[0047]-為一個包含所述微生物的培養(yǎng)皿提供一個平臺；
[0048]-將一個包含所述微生物的培養(yǎng)皿放置在平臺上；
[0049]-提供一個第一取樣工具，并且提供一個定位裝置，配備用于支撐取樣工具的取樣工具支架，所述定位裝置的設(shè)置是為了分別進行以下操作:將一個取樣工具定位在一個高于為培養(yǎng)皿上選定微生物菌落所獲得位置的起始位置，自動降低或升高往返于培養(yǎng)皿的取樣工具，以及將一個取樣工具定位在轉(zhuǎn)移位置；
[0050]-將所述第一取樣工具定位在所述定位裝置的取樣工具支架中；
[0051]-通過用所述定位裝置將第一取樣工具定位在培養(yǎng)皿上方的起始位置，自動使第一取樣工具向著培養(yǎng)皿下降，直至與微生物接觸并選取所述微生物的一個樣本，然后自動使第一取樣工具連同所述樣本從培養(yǎng)皿上向著轉(zhuǎn)移位置升起；
[0052]-提供一個懸浮液試管支架，用于支撐懸浮液試管；
[0053]-將一個懸浮液試管放置在懸浮液試管支架中；
[0054]-提供一個懸浮介質(zhì)自動分配器，以將一種懸浮介質(zhì)自動分配到一個放置于懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管中；
[0055]-通過該自動分配器，將一個初始量的懸浮介質(zhì)自動分配到放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中；
[0056]-提供一個轉(zhuǎn)移裝置，以分別自動將一個取樣工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到高于一個放置于懸浮液試管支架的懸浮液試管的位置，并使一個取樣工具下降至一個懸浮液試管中盛放的一種懸浮介質(zhì)中或使其從懸浮介質(zhì)中升起，以及將一個取樣工具定位在一個高于一個放置于懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管的等待位置；
[0057]-通過所述轉(zhuǎn)移裝置自動將所述第一取樣工具連同微生物樣本一起從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移至一個高于懸浮液試管支架中的懸浮液試管的位置，將所述第一取樣工具連同微生物樣本一起下降至懸浮液試管內(nèi)所盛的懸浮介質(zhì)內(nèi)；通過轉(zhuǎn)移裝置，在第一取樣工具連同所述微生物的樣本已經(jīng)一起浸入懸浮介質(zhì)中的情況下使第一取樣工具在垂直方向沿直線振蕩一段時間；并在所述一段時間結(jié)束后將第一取樣工具從盛于懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中升起至等待位置；
[0058]-提供一個濁度計，以測量盛于一個放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中的懸浮介質(zhì)的濁度；
[0059]-至少在取樣工具的振蕩時間結(jié)束后，用該濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度，并提供指示所測量的濁度的最終測量值；
[0060]-提供一個與定位裝置通訊連接的控制器、轉(zhuǎn)移裝置、自動懸浮介質(zhì)分配器和濁度計，以分別自動控制定位裝置的移動、轉(zhuǎn)移裝置的移動、自動懸浮介質(zhì)分配器的運行和濁度計的運行；
[0061]-通過所述控制器:
[0062]a)確定最終的測量值是否高于預(yù)先保存在控制器內(nèi)存中的一個第一臨界值，如果是，進行步驟b);或最終的測量值是否小于等于該第一臨界值并大于等于預(yù)先保存在控制器內(nèi)存中的一個第二臨界值，所述第一臨界值大于等于所述第二臨界值，如果是，進行步驟c);或最終測量值是否小于該第二臨界值，如果是，進行步驟d)；
[0063]b)控制自動懸浮介質(zhì)分配器在懸浮液試管中加入更多的懸浮介質(zhì)；
[0064]c)提供一個信號,表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理；或
[0065]d)提供另一個取樣工具；將所述另一個取樣工具放置于定位裝置的所述取樣工具支架中；用所述定位裝置將另一個取樣工具放置于培養(yǎng)皿上方的起始位置，自動使另一個取樣工具降至培養(yǎng)皿內(nèi)，與微生物接觸并取出所述微生物的另一個樣本，自動使另一個取樣工具連同所述微生物樣本從培養(yǎng)皿升至轉(zhuǎn)移位置；通過所述轉(zhuǎn)移裝置自動將所述另一個取樣工具連同另一個微生物樣本一起從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到一個高于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管的位置，將所述另一個取樣工具連同另一個微生物樣本一起降至懸浮液試管內(nèi)所盛的懸浮介質(zhì)中；在另一個取樣工具連同所述微生物的另一個樣本已經(jīng)一起浸入懸浮介質(zhì)中的情況下，通過轉(zhuǎn)移工具使另一個取樣工具在垂直方向沿直線振蕩一段時間；并在所述一段時間結(jié)束后將另一個取樣工具從盛于懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中升起至等待位置；在至少另一個取樣工具的振蕩時間完成后，通過濁度計來測量放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濃度，從而給出另一個可顯示所測量的濁度的另一個最終測量值；并進行步驟a)。通過這種方式，可以以一種先進的自動自動方式來制備一個微生物樣本的懸浮液，同時可通過控制器和濁度計來提供一個盛有懸浮介質(zhì)的懸浮液試管，其含有的微生物數(shù)量始終能滿足(并且可重現(xiàn))正確的微生物分析的要求。
[0066]在本發(fā)明所涉及的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法的一個實施例中，控制器的配置也使在取樣工具的振蕩時間內(nèi)另外進行以下步驟:使用濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度。在取樣工具振蕩的這段時間內(nèi)，濁度計的配置可向控制器提供指示所測量的濁度的一個在線測量值。通過這種方式，可以非?？焖俚販y定懸浮液中的微生物含量。特別是如果在振蕩時間內(nèi)，濁度的在線測量值小于等于第一臨界值并大于等于第二臨界值，控制器可控制轉(zhuǎn)移裝置的移動，使取樣工具上升至等待位置，并且控制器還能進一步提供一個信號，使盛有懸浮液的懸浮液試管能夠從懸浮液試管支架內(nèi)取出，以便進一步處理。
[0067]在本發(fā)明所涉及的一種自動制備微生物樣本的懸浮液的方法的另一個實施例中，控制器的配置可使用濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度的步驟在取樣工具浸入懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)內(nèi)之前開始。通過這種方式，可以檢查所用的初始懸浮液是否污染。這可以通過對一個懸浮液試管進行濁度測量并將獲得的值與表明懸浮液沒有受污染的預(yù)定值相比較來實現(xiàn)。如果兩個值的差超過臨界值，可以通過發(fā)出警告信號的方式來表明懸浮液已被污染。
[0068]在本發(fā)明所涉及的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法的另一個實施例中，該方法進一步包含以下步驟:如同為支撐懸浮液試管而提供懸浮液試管支架一樣，提供一個可旋轉(zhuǎn)的懸浮液試管支架，從而可以旋轉(zhuǎn)固定在旋轉(zhuǎn)式懸浮液試管支架中的懸浮液試管；控制器的配置令其可與控制懸浮液試管支架旋轉(zhuǎn)的可旋轉(zhuǎn)懸浮液試管支架實現(xiàn)通訊連接，以及將控制器設(shè)置為懸浮液試管可在測量懸浮液試管中盛有的懸浮介質(zhì)的濁度時旋轉(zhuǎn)。懸浮液試管的這種旋轉(zhuǎn)可確保濁度的測量可在懸浮液試管內(nèi)的多個外置進行，這些位置在轉(zhuǎn)動過程中彼此間隔，從而使懸浮液濁度的最終測量更準(zhǔn)確。這種旋轉(zhuǎn)在從取樣工具上釋放樣本時不是必要的，取樣工具在垂直方向的直線振蕩足以釋放樣本。
[0069]雖然可以采用一個與第一取樣工具不同的另一個取樣工具，此方法可以以一種經(jīng)濟的方式進行，即在步驟d)中，可以將第一取樣工具用做另一個取樣工具；而將所述另一個取樣工具的放置于定位裝置的所述取樣工具支架的步驟可通過在控制器控制之下的轉(zhuǎn)移裝置來實現(xiàn)。
[0070]在本發(fā)明所涉及的自動制備一個微生物樣本的懸浮液的方法的另一個實施例中，懸浮介質(zhì)的額外添加量是通過控制器，在懸浮介質(zhì)初始用量、最終測量值和第一和/或第二臨界值的基礎(chǔ)上確定的。這樣就能使用恰好足夠的額外懸浮介質(zhì)，而在此實施例中，即可以盡量減小懸浮介質(zhì)的用量。如果測量的值表明微生物的量過低，則控制系統(tǒng)會控制取樣工具從同一選定菌落中獲得額外的樣本，并重復(fù)該過程。
[0071]由于按照本發(fā)明所涉及的自動制備微生物樣本懸浮液的方法，取樣工具只做垂直方向的直線振蕩，懸浮液試管的尺寸可以相對較小。這樣就可以在本發(fā)明所涉及的一種方法的一個施例中將控制器設(shè)置為可將懸浮介質(zhì)自動分配器控制在使提供的初始用量約為0.5-2毫升，最好為I毫升。這一相對較小的懸浮介質(zhì)用量足以為微生物樣本制備合適的懸浮液。在這樣一種自動為一個微生物樣本制備懸浮液的方法中，可以使用一個截面基本呈圓形，直徑約6至12毫米左右，最好為10毫米左右的試管來作為懸浮液試管，和直徑16毫米左右的傳統(tǒng)試管相比尺寸較小。通過這樣一種相對較小的懸浮液試管，可用取樣工具進行正確的樣本釋放，此時控制器設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具在5赫茲左右到120赫茲左右的頻率之間振湯，30赫茲左右到90赫茲左右更好，50赫茲左右為最佳?？刂破鲬?yīng)優(yōu)先設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具以0.5毫米左右到4毫米左右的振幅振蕩，最好為2毫米左右到3毫米左右，這樣可以使取樣工具實現(xiàn)最佳的樣本釋放。如果控制器的設(shè)置可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具的振蕩時間為3秒左右到10秒左右，最好為6秒左右，樣本幾乎在所有情況下都可以從取樣工具上完全釋放。
[0072]本發(fā)明還與一種用于自動制備微生物樣本懸浮液的儀器相關(guān)，可用于實施一種用于在培養(yǎng)皿上定位與選擇一個微生物菌落，并用MALDI技術(shù)鑒定所述選定菌落的方法，或?qū)嵤┌凑毡景l(fā)明的方法自動制備微生物樣本懸浮液的方法中的一個步驟，所述儀器包含:
[0073]-一個用于包含所述微生物的培養(yǎng)皿的平臺；
[0074]-一個第一取樣工具和另一個取樣工具，和一個配備支撐取樣工具的取樣工具支架的定位裝置，所述定位裝置的配置可將一個取樣工具定位在高于培養(yǎng)皿的起始位置，從而可將一個取樣工具自動向培養(yǎng)皿下降和從培養(yǎng)皿上升起并定位在一個轉(zhuǎn)移位置上；
[0075]-一個懸浮液試管支架，用于支撐懸浮液試管；
[0076]-一個濁度計，以測量盛于一個放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中的懸浮介質(zhì)的濁度；
[0077]-一個轉(zhuǎn)移裝置，以分別自動將一個取樣工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到高于一個放置于懸浮液試管支架的懸浮液試管的位置，并使一個取樣工具下降至一個懸浮液試管中盛放的一種懸浮介質(zhì)中或使其從懸浮介質(zhì)中升起，以及將一個取樣工具定位在一個高于一個放置于懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管的等待位置，所述轉(zhuǎn)移裝置進一步設(shè)置為可使一個取樣工具在垂直方向直線振蕩一段時間；
[0078]-一個濁度計，以測量盛于一個放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中的懸浮介質(zhì)的濁度，并可提供可表明所測量的濁度的最終測量值；
[0079]-—個與定位裝置通訊連接的控制器、轉(zhuǎn)移裝置、自動懸浮介質(zhì)分配器和濁度計，以分別自動控制定位裝置的移動、轉(zhuǎn)移裝置的移動、自動懸浮介質(zhì)分配器的運行和濁度計的運行；
[0080]-所述控制器的配置可:
[0081]a)確定最終的測量值是否高于預(yù)先保存在控制器內(nèi)存中的一個第一臨界值，如果是，所述控制器的配置可用于實施步驟b);或最終的測量值是否小于等于該第一臨界值并大于等于預(yù)先保存在控制器內(nèi)存中的一個第二臨界值，所述第一臨界值大于等于所述第二臨界值，如果是，所述控制器的配置可用于實施步驟c);或最終測量值是否小于該第二臨界值，如果是，所述控制器的配置可用于實施步驟d)；
[0082]b)控制自動懸浮介質(zhì)分配器在懸浮液試管中加入更多的懸浮介質(zhì)；
[0083]c)提供一個信號,表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理；或
[0084]d)將所述另一個取樣工具放置于定位裝置的所述取樣工具支架中；用所述定位裝置將另一個取樣工具放置于培養(yǎng)皿上方的起始位置，自動使另一個取樣工具降至培養(yǎng)皿內(nèi)，與微生物接觸并取出所述微生物的另一個樣本，自動使另一個取樣工具連同所述微生物樣本從培養(yǎng)皿升至轉(zhuǎn)移位置；通過所述轉(zhuǎn)移裝置自動將所述另一個取樣工具連同另一個微生物樣本一起從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到一個高于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管的位置，將所述另一個取樣工具連同另一個微生物樣本一起降至懸浮液試管內(nèi)所盛的懸浮介質(zhì)中；在另一個取樣工具連同所述微生物的另一個樣本已經(jīng)一起浸入懸浮介質(zhì)中的情況下，通過轉(zhuǎn)移工具使另一個取樣工具在垂直方向沿直線振蕩一段時間；并在所述一段時間結(jié)束后將另一個取樣工具從盛于懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中升起至等待位置；在至少另一個取樣工具的振蕩時間完成后，通過濁度計來測量放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濃度，從而給出另一個可顯示所測量的濁度的另一個最終測量值；并進行步驟a)。
[0085]在本發(fā)明所涉及的一種儀器的另一個實施例中，控制器的配置可控制濁度計，以使測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度的步驟在取樣工具浸入懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)內(nèi)之前開始。
[0086]在本發(fā)明所涉及的儀器的另一個實施例中，支撐懸浮液試管的懸浮液試管支架是一個可旋轉(zhuǎn)的懸浮液試管支架，從而可以旋轉(zhuǎn)固定在旋轉(zhuǎn)式懸浮液試管支架中的懸浮液試管；控制器的配置令其可與控制懸浮液試管支架旋轉(zhuǎn)的可旋轉(zhuǎn)懸浮液試管支架實現(xiàn)通訊連接，以及將控制器設(shè)置為懸浮液試管可在測量懸浮液試管中盛有的懸浮介質(zhì)的濁度時旋轉(zhuǎn)。
[0087]在本發(fā)明所涉及的一種儀器的優(yōu)先實施例中，在步驟d)中，可以將第一取樣工具用做另一個取樣工具；而所述控制器的設(shè)置可控制轉(zhuǎn)移裝置，將所述另一個取樣工具放置于定位裝置的所述取樣工具支架中。
[0088]最好對控制器進行設(shè)置，使懸浮介質(zhì)的額外添加量在懸浮介質(zhì)初始用量、最終測量值和第一和/或第二臨界值的基礎(chǔ)上確定。具體而言，將控制器設(shè)置為可將懸浮介質(zhì)自動分配器控制在使提供的初始用量約為0.5-2毫升，最好為I毫升。在本發(fā)明所涉及的一種儀器的另一個實施例中，控制器設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具在5赫茲左右到120赫茲左右的頻率之間振湯，30赫茲左右到90赫茲左右更好，50赫茲左右為最佳。此外，控制器可設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具以0.5毫米左右到4毫米左右的振幅振蕩，最好為2毫米左右到3毫米左右，并可對轉(zhuǎn)移裝置的振蕩進行控制，使取樣工具的正當(dāng)時間為3秒左右至10秒左右，最好為6秒左右。
[0089]在這樣一種自動為一個微生物樣本制備懸浮液而發(fā)明的裝置中，懸浮液試管的截面可基本呈圓形，直徑約6至12毫米左右，最好為10毫米左右。
[0090]對于本發(fā)明所涉及的一種全自動裝置，如果該儀器包含一個用于將包含所述微生物的培養(yǎng)皿自動放置到平臺上并從平臺上取下的培養(yǎng)皿自動放置與取下裝置，所述控制器設(shè)置為與培養(yǎng)皿自動放置與取下裝置通信連接，以控制培養(yǎng)皿自動放置與取下裝置的運行，從而將含有所述微生物的培養(yǎng)皿自動放置到平臺上，如果該儀器包含一個用于將懸浮液試管自動放置到懸浮液試管支架內(nèi)并從懸浮液試管支架內(nèi)取出的懸浮液試管自動放置與取出裝置，所述控制器設(shè)置為與懸浮液試管自動放置與取出裝置通信連接，以控制懸浮液試管自動放置與取出裝置的運行，從而將懸浮液試管自動放置到懸浮液試管支架內(nèi)。這種情況下，最好通過控制器的設(shè)置，保證只有在表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理的信號發(fā)出的情況下，才允許培養(yǎng)皿自動放置和取下裝置將一個培養(yǎng)皿從平臺上自動取下。此外，控制器的設(shè)置最好保證只有在表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中取出，以進行進一步的處理的信號發(fā)出的情況下，才允許懸浮液試管自動放置和取出裝置將一個懸浮液試管從懸浮液試管支架內(nèi)自動取出。
[0091]本發(fā)明還進一步與一種可將一個微生物菌落的樣本自動沉積到用于MALDI鑒定的靶板上的沉積點上的方法有關(guān)，該方法包含將微生物菌落的樣本沉積到沉積點上的步驟，從而使樣本最多只覆蓋靶板上所述其中一個沉積點的一半?？梢钥闯觯跇颖靖采w所述靶板上其中一個沉積點最多一半時，用MALDI儀器對起初沒有覆蓋樣本的那一部分沉積點進行分析時所獲得的分析結(jié)果的準(zhǔn)確性令人吃驚地大大高于用MALDI儀器對起初覆蓋樣本的那一部分沉積點進行分析時所獲得的分析結(jié)果?？梢哉J為:在將一滴基料覆蓋在覆蓋部分沉積點的樣本后發(fā)生的結(jié)晶過程可保證沒有覆蓋樣本材料的那部分沉積點也含有一定量的樣本材料，并且其含量非常適合得出極好的分析結(jié)果。關(guān)于這種效果的物理或化學(xué)過程目前還不清楚，但或許在了解了 MALDI技術(shù)背后的基本過程后會更清楚一些。在這樣一種方法的一個實施例中，微生物菌落的樣本以懸浮液的形式存在，而這種懸浮液樣本是以液滴的形式沉積在一個沉積點上，液滴的體積在0.5至3.0微升左右的范圍內(nèi)。
[0092]本發(fā)明還進一步與一種可將一滴含有一個微生物菌落的樣本的懸浮液自動沉積到用于MALDI鑒定的靶板上的沉積點上的方法有關(guān)，該方法包含以下自動步驟:
[0093]-在一個取樣工具中配備一個移液工具，并提供一個配備支撐所述移液工具的移液工具支架的定位裝置，所述定位裝置的配置可將所述移液工具定位在一個盛有含微生物菌落樣本的懸浮液的懸浮液試管上方的起始位置，從而可將移液工具自動向下浸入懸浮液和從懸浮液中升起并將移液工具定位在一個轉(zhuǎn)移位置上；
[0094]-將所述移液工具放置在所述定位裝置的移液工具支架內(nèi)；
[0095]-通過所述定位裝置，將移液工具定位在懸浮液試管上方的起始位置，將移液工具向下浸入所述懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中，操作移液工具，使其取出一定量的懸浮液，使移液工具連同所述一定量的懸浮液一起升起至轉(zhuǎn)移位置；所述移液工具包含一個可加壓的空腔，由一個控制閥來關(guān)閉，以便容納一定量的懸浮介質(zhì)；
[0096]-提供一個可固定靶板的靶板支架，所述靶板有多個沉積點；
[0097]-將靶板放置在靶板支架內(nèi)；
[0098]-提供一個轉(zhuǎn)移裝置，以將移液工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置自動轉(zhuǎn)移至一個在靶板上其中一個沉積點上方的位置，并使該移液工具下降至靶板上方預(yù)先設(shè)定的距離，并使空腔加壓至0.5巴至1.1巴的壓力范圍內(nèi)，然后使閥開啟一定的時間，從而使一滴體積為0.5至3.0微升的懸浮液沉積在沉積點上，特別是最多只能覆蓋所述靶板上其中一個沉積點的一半；
[0099]-將所述移液工具從靶板上升起。-移液工具的形狀最好能保證懸浮液滴能以無飛濺的方式沉積到靶板上。-具體而言，該方法包括將空腔加壓至0.5巴至1.1巴的壓力范圍內(nèi)，然后使閥開啟一定的時間，從而使一滴體積為0.5至3微升的懸浮液沉積在沉積點上，最多只能覆蓋所述靶板上其中一個沉積點的一半；可以看出，在樣本覆蓋所述靶板上其中一個沉積點最多一半時，用MALDI儀器對起初沒有覆蓋樣本的那一部分沉積點進行分析時所獲得的分析結(jié)果的準(zhǔn)確性令人吃驚地大大高于用MALDI儀器對起初覆蓋樣本的那一部分沉積點進行分析時所獲得的分析結(jié)果?？梢哉J為:在將一滴基料覆蓋在覆蓋部分沉積點的樣本后發(fā)生的結(jié)晶過程可保證沒有覆蓋樣本材料的那部分沉積點也含有一定量的樣本材料，并且其含量非常適合得出極好的分析結(jié)果。關(guān)于這種效果的物理或化學(xué)過程目前還不清楚，但或許在了解了 MALDI技術(shù)背后的基本過程后會更清楚一些。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0100]本發(fā)明可用圖1來進一步說明，圖中所示為本發(fā)明涉及的一種儀器的非限制性示例性實施例，圖1還可用于對符合本發(fā)明的方法的示例性實施例進行說明。示例性實施例的詳細描述
[0101]在本發(fā)明中，采用了 MALDI或MALD1-T0F-MS技術(shù)進行微生物鑒定。在MALDI TOFMS技術(shù)的一種運行方式中，微生物菌落的一個樣本被放置或沉積到一個靶板上，靶板被固定在MALDI儀器內(nèi)的一個固定位置。這樣的靶板上有多個沉積點(例如單個靶板上有24到384個沉積點)，并且這些沉積點相對于靶板邊緣的方向是固定的。靶板放置在一個X-Y定位平臺上，這樣就能把從微生物菌落中采集的樣本沉積在選定的沉積點上，而特定樣本沉積的位置可通過X-Y參數(shù)來顯示并保存在一臺中央控制電腦的內(nèi)存中。
[0102]雖然在圖1中沒有展示出細節(jié)，靶板設(shè)置在轉(zhuǎn)移道18下方，其位置用B表示。樣本可從一個培養(yǎng)皿3和/或一個懸浮液試管11，沿轉(zhuǎn)移軌道18轉(zhuǎn)移到靶板上方的位置B，樣本從此位置下降并沉積到靶板上的一個沉積點上。
[0103]盡管對于本發(fā)明如何制備含有樣本的懸浮液，以及如何將一滴所述懸浮液沉積到靶板上的一個沉積點上，以下會進行詳細說明，但本發(fā)明還涉及將從一個培養(yǎng)皿上獲得(選取)的一個樣本直接沉積到靶板上的一個沉積點上。
[0104]一般而言，后一種方法中的微生物菌落在培養(yǎng)皿上的定位與檢測是自動進行的。所述選定微生物菌落的樣本是以自動方式取得的，例如可將一個取樣工具與菌落接觸。所述選定微生物菌落的所述樣本的至少一部分是以自動方式直接沉積到一個靶板上的，其方法是使該取樣工具下降至取樣工具上的微生物菌落的樣本與靶板接觸，并將該轉(zhuǎn)移工具在一個與靶板平行的平面內(nèi)移動，從而使微生物菌落的樣本沉積到沉積點上，特別是最多只能覆蓋所述靶板上其中一個沉積點的一半；然后，靶板連同所述樣本被自動轉(zhuǎn)移到一個MALDI鑒定儀內(nèi)，以對所述選定微生物菌落的所述樣本進行鑒定。
[0105]該方法可用下列自動步驟來詳細描述:
[0106]-提供一個第一取樣工具，并且提供一個定位裝置，配備用于支撐取樣工具的取樣工具支架，所述定位裝置的設(shè)置是為了分別進行以下操作:將一個取樣工具定位在一個高于為培養(yǎng)皿上選定微生物菌落所獲得位置的起始位置，自動降低或升高往返于培養(yǎng)皿的取樣工具，以及將一個取樣工具定位在轉(zhuǎn)移位置；
[0107]-將所述第一取樣工具定位在所述定位裝置的取樣工具支架中；
[0108]-通過用所述定位裝置將第一取樣工具定位在高于為培養(yǎng)皿上選定菌落所獲得位置的起始位置，自動使第一取樣工具向著培養(yǎng)皿下降，直至與微生物接觸并選取所述微生物的一個樣本，然后自動使第一取樣工具連同所述樣本從培養(yǎng)皿上向著轉(zhuǎn)移位置升起；
[0109]-提供一個可固定一個靶板的靶板支架，所述靶板有多個沉積點；
[0110]-將一個靶板放置在靶板支架內(nèi)；
[0111]提供一個轉(zhuǎn)移裝置，以將取樣工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置自動轉(zhuǎn)移至一個在靶板上其中一個沉積點上方的位置，并使該取樣工具下降至微生物菌落的樣本與靶板接觸，并將該轉(zhuǎn)移工具在一個與靶板平行的平面內(nèi)移動，從而使微生物菌落的樣本沉積到沉積點上，特別是最多只能覆蓋所述靶板上其中一個沉積點的一半；將所述取樣工具從靶板上升起。然后，把一滴MALDI基液自動覆蓋在沉積到靶板上那部分樣本上。
[0112]如果要對同一個微生物菌落進行另一項分析或試驗，例如，但不僅限于抗生素敏感性試驗(AST)，可以用于第一次采樣類似的方法從選定微生物菌落中采集第二個樣本。由于該微生物菌落在培養(yǎng)皿上的位置已經(jīng)選定，因此中央控制電腦“已經(jīng)知道”，可以很容易地從相同的菌落內(nèi)重復(fù)采集第二個樣本。然后，將所述選定微生物菌落的第二個樣本中的至少一部分轉(zhuǎn)移并沉積到一個試驗培養(yǎng)皿上，并可將其自動放置到轉(zhuǎn)移軌道18下方的另一個位置。然后，所述試驗培養(yǎng)皿被自動轉(zhuǎn)移到用于敏感性試驗或其他分析的儀器上。
[0113]由于為了進行微生物的定性與鑒定，通常需要在一個培養(yǎng)皿上培養(yǎng)多個菌落，并且要采用多個不同的培養(yǎng)皿，本發(fā)明可對每個培養(yǎng)皿分別標(biāo)示，例如通過條碼，以及為一個培養(yǎng)皿上的每個相關(guān)菌落選擇并提供一個識別標(biāo)記。在從一個培養(yǎng)皿上定位和選擇一個微生物菌落的自動步驟之前，本發(fā)明所涉及的該方法首先獲得所述包含多個微生物菌落的培養(yǎng)皿的初始圖像，然后將所述包含多個微生物菌落的培養(yǎng)皿的所述初始圖像進行顯示，然后至少選擇一個微生物菌落的初始圖像。通過這一方法，研究員或分析員可根據(jù)所受的教育和掌握的知識來選擇相關(guān)的菌落。由于為每個培養(yǎng)皿提供了具體的標(biāo)識來識別所述培養(yǎng)皿，例如條碼等，所述培養(yǎng)皿的初始圖像包括所有保存的菌落，與所述至少一個選擇的微生物菌落相關(guān)的信息被保存(最好有(電子)初始圖像包含的鏈接)，并且培養(yǎng)皿的所有所述信息和標(biāo)識均保存在一臺中央控制電腦的內(nèi)存中，以便進行進一步的精確處理。通過這種方式，唯一的手動操作是選擇相關(guān)菌落的操作，而所有相關(guān)數(shù)據(jù)的處理都以自動方式進行。研究員或分析員也可以選擇手動輸入關(guān)于所述培養(yǎng)皿的選定微生物菌落的將要進行的處理的處理指令，所述處理指令保存在所述中央控制電腦的內(nèi)存中，以便以后使用。在進行這一步手動操作后，所有后續(xù)步驟都以全自動的方式進行，可靠而高效。對于這種自動化的進一步處理，培養(yǎng)皿被自動放置在一個用于放置培養(yǎng)皿的平臺上，并配備有包含成像裝置的取樣工具。為放置于所述取樣工具內(nèi)的所述培養(yǎng)皿生成一幅圖像、為所述培養(yǎng)皿生成標(biāo)識，再加上所述培養(yǎng)皿的標(biāo)識，可將通過所述取樣工具裝置獲得的此圖像與保存的所述培養(yǎng)皿的初始圖像進行比較，因而獲得與選定微生物菌落的位置相關(guān)的信息，或選擇性地獲得有關(guān)所述選定微生物菌落將要進行的處理的處理指令。通過將培養(yǎng)皿在放置于取樣工具裝置上時的所成的圖像與初始圖像進行比較，可以自動獲得選定菌落的位置，例如可通過計算機化的圖像比較來實現(xiàn)。此外，每個靶板均提供了一個識別標(biāo)記，并且可選擇為所述靶板的每個沉積點均提供一個識別標(biāo)記或位置標(biāo)識，從而在將所述靶板和沉積點的識別標(biāo)記連同懸浮液的性質(zhì)(與從中獲得選定微生物菌落的培養(yǎng)皿標(biāo)識相關(guān))保存在所述中央控制電腦的內(nèi)存中之后，能以準(zhǔn)確而自動的方式與特定微生物菌落的MALDI鑒定結(jié)果聯(lián)系起來。
[0114]現(xiàn)在將把本發(fā)明的一個方法的一個有關(guān)從培養(yǎng)皿中選擇的樣本中制備懸浮液的實施例與實施這種方法的儀器相關(guān)的一個實施例一起描述。
[0115]圖1是本發(fā)明所涉及的自動制備微生物樣本懸浮液的儀器I的一個實施例的示意圖。所述儀器I包含一個用于放置培養(yǎng)皿3的平臺2，所述培養(yǎng)皿在營養(yǎng)層5，如一層瓊脂凝膠上包含一種微生物4。
[0116]儀器I還包含一個第一取樣工具6和另一個取樣工具7。一個定位裝置，包含一個取樣工具支架9，在所示實施例中，用于以可釋放的方式固定一個取樣工具，在圖1所示的實施例中，該取樣工具支架9用于支撐第一取樣工具6。定位裝置8的配置可將第一個定位工具6放置在培養(yǎng)皿3上方的起始位置(如圖1中的實線所示)，其配置還能使第一取樣工具6自動向培養(yǎng)皿3下降并從培養(yǎng)皿3上升起，從而使第一取樣工具6能放置在與微生物4接觸的位置(如虛線6’所示)，并取得所述微生物的一個樣本。在第一取樣工具6取得一個樣本后，定位裝置8升起，并將第一取樣工具6放置在一個轉(zhuǎn)移位置，在如圖1所示的實施例中，轉(zhuǎn)移位置與起始位置相同。在其他實施例中，起始位置和轉(zhuǎn)移位置可能并不相同。
[0117]本發(fā)明涉及的裝置I還包含一個懸浮液試管支架10，用于支撐一個懸浮液試管11，該試管內(nèi)可能包含通過一個懸浮介質(zhì)自動分配器12分配的一種懸浮液，在所示的實施例總，該分配器包括一個用于將一種懸浮介質(zhì)14自動分配到固定在所述懸浮液試管10中的所述懸浮液試管11中的分配噴嘴13。在本實施例中，懸浮液試管支架10是一個可旋轉(zhuǎn)的懸浮液試管支架，用于使懸浮液試管11繞垂直軸A旋轉(zhuǎn)。
[0118]在發(fā)明的儀器I中包含一個轉(zhuǎn)移裝置15，可自動將一個取樣工具從定位裝置8的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到位于懸浮液試管支架10內(nèi)的懸浮液試管11上方的一個位置。在所示的實施例中，該轉(zhuǎn)移裝置15包含一個轉(zhuǎn)移支架16，該轉(zhuǎn)移支架配備一個夾緊裝置17，可以以可釋放的方式固定一個取樣工具。按照已知的方式，該轉(zhuǎn)移裝置15本身安裝在一個轉(zhuǎn)移軌道18上，例如一根導(dǎo)軌上，以便能以箭頭方向直線移動。通過這種方式，該轉(zhuǎn)移裝置15可以移動到定位裝置8的位置，從而使夾緊裝置17從定位裝置8上接過該轉(zhuǎn)移工具，其轉(zhuǎn)移工具支架9在夾緊裝飾17夾緊取樣工具之后再釋放取樣工具。在如圖1所示的實施例中，之前已取得微生物4的一個樣本19的第二個，或另一個取樣工具7通過轉(zhuǎn)移裝置15被定位在懸浮液試管11的上方的一個起始位置，如實線所示。轉(zhuǎn)移裝置15的配置是為了使第二取樣工具7浸入盛于懸浮液試管11中的懸浮介質(zhì)14中，在此位置下，圖1中用虛線表示浸入懸浮介質(zhì)14中的第二取樣工具7’和樣本19。在此位置下，轉(zhuǎn)移工具15啟動振蕩功能，使第二取樣工具7在垂直方向上發(fā)生直線振蕩，振蕩的時間足以使樣本19從第二取樣工具7上釋放。然后，轉(zhuǎn)移裝置15將第二取樣工具7定位在懸浮液試管11的上方的一個等待位置，在圖1所示的實施例中，該等待位置與起始位置相同。在其他實施例中，等待位置和起始位置可能并不相同。
[0119]發(fā)明的儀器I進一步提供了一個濁度計20，以測量盛于一個放置于懸浮液試管支架10中的懸浮液試管11中的懸浮介質(zhì)14的濁度。如本領(lǐng)域內(nèi)所公認的那樣，濁度計所提供的測量值可用于衡量材料的濃度，在本例中指懸浮在懸浮介質(zhì)中的微生物的濃度。在如圖1所示的實施例中，濁度計20包含一個激光器21，該激光器發(fā)出的激光在穿透懸浮介質(zhì)后，由一個傳感器22來檢測透過懸浮介質(zhì)的激光的量。此外還有一個傳感器(在圖中未顯示)，該傳感器可設(shè)置得與激光的通路垂直，從而可檢測被懸浮液散射的激光的量。
[0120]本發(fā)明涉及的裝置的運轉(zhuǎn)由一個控制器23來控制，該控制器可包含一個與定位裝置8通訊連接的微處理器(如信號線所示)、轉(zhuǎn)移裝置15、自動懸浮介質(zhì)分配器12和濁度計20，以分別自動控制定位裝置8的移動、轉(zhuǎn)移裝置15的移動、自動懸浮介質(zhì)分配器12的運行和濁度計20的運行。此外，該控制器23還可以直接與該儀器的其他部件通信連接，例如取樣工具支架9、轉(zhuǎn)移支架16、激光器21和傳感器22。
[0121]在如圖1所示的實施例中，控制器23的配置可控制濁度計20，使懸浮介質(zhì)14的濁度測量在第二取樣工具7浸入懸浮介質(zhì)14之前開始。此外，控制器23還可控制可旋轉(zhuǎn)的懸浮液試管支架10，以在第二取樣工具7浸入懸浮介質(zhì)14之前，使放置于支架10內(nèi)的懸浮液試管11開始旋轉(zhuǎn)，并使懸浮液試管11在懸浮介質(zhì)14的濁度測量過程中一直保持旋轉(zhuǎn)。在圖示的實施例中，控制器23可控制濁度計20，使懸浮介質(zhì)14的濁度測量在第二個工具7在整個振蕩時間內(nèi)一直進行。通過這種方式，濁度計20可向控制器23提供在線的測量值，該測量值可體現(xiàn)在第二取樣工具在振蕩過程中微生物的濁度測量值及其濃度值。
[0122]控制器23包含一個存儲器，其中保存有第一和第二臨界值，所述第一臨界值大于等于第二臨界值。如果濁度計提供的濁度測量值小于等于第一臨界值并大于等于第二臨界值，則懸浮介質(zhì)中的微生物的濃度/量足以將盛有懸浮液的懸浮液試管進行進一步處理。在這種情況下，控制器將發(fā)出一個信號，表明可對懸浮液試管進行進一步處理。此外，在這種情況下可以不需要第二取樣工具7，例如可將轉(zhuǎn)移裝置轉(zhuǎn)移至位置C，從而啟動夾緊裝置17而釋放第二取樣工具7。
[0123]如果濁度計的最終測量值高于之前存放在控制器的一個存儲器中的第一臨界值，則微生物的濃度過高，無法對懸浮液試管進行進一步處理。在這種情況下，控制器23會控制自動懸浮介質(zhì)分配器12在懸浮液試管中11中加入更多的懸浮介質(zhì)。添加的懸浮介質(zhì)的量在懸浮介質(zhì)初始添加量、最終測量值和第一和/或第二臨界值的基礎(chǔ)上確定，從而在懸浮液試管11中已經(jīng)盛有的懸浮介質(zhì)中添加額外的懸浮介質(zhì)后，使懸浮介質(zhì)中的微生物濃度滿足進一步處理的要求，此濃度可通過濁度計21的追加測量或進一步測量來確認。
[0124]如果濁度計20的最終測量值低于第二臨界值，即懸浮介質(zhì)中的微生物濃度太低，控制器23將控制儀器1，使第一取樣工具6再取一次樣本(也可以用第二個或另一個取樣工具來取第二次樣本)。因此，在此情況下，控制器可控制轉(zhuǎn)移裝置15的定位，從而放棄使用第二取樣工具7，如上所述。然后(或同時)，位于定位裝置8的取樣工具支架9內(nèi)的第一取樣工具6從培養(yǎng)皿3上方的起始位置向著培養(yǎng)皿下降，直至與微生物4接觸并再次取得所述微生物的一個樣本。然后，第一取樣工具6連同微生物的另一個樣本自動從培養(yǎng)皿上升至轉(zhuǎn)移位置。然后，所述轉(zhuǎn)移裝置可自動將第一取樣工具連同添加的樣本從定位裝置8的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到懸浮液試管11上方的一個位置。第一取樣工具6連同添加的微生物樣本一起浸入懸浮介質(zhì)14中并通過轉(zhuǎn)移裝置15，在垂直方向進行一段時間的直線振蕩，以將添加的所述微生物樣本釋放到懸浮介質(zhì)中。在振蕩過程中再次進行濁度測量，并將測量的值與保存在控制器23的內(nèi)存中的第一和第二臨界值比較。在此情況下，可通過控制器23的設(shè)置來控制轉(zhuǎn)移裝置15的移動，從而在濁度計所測量的濁度的在線測量值小于等于第一臨界值并大于等于第二臨界值時，第一取樣工具6上升至等待位置。
[0125]對于所發(fā)明的儀器而言，特別適合采用截面基本呈圓形，直徑約6至12毫米左右，最好為10毫米左右的懸浮液試管。采用這種相對較小的懸浮液試管，控制器23可控制懸浮介質(zhì)自動分配器12，使提供的初始用量約為0.5-2毫升，最好為I毫升左右。
[0126]轉(zhuǎn)移裝置15在控制器23的控制下，取樣工具在5赫茲左右到120赫茲左右的頻率之間振湯，30赫茲左右到90赫茲左右更好，50赫茲左右為最佳，其振幅為約0.5暈米至約4毫米，最好為2毫米左右至3毫米左右?？刂破骺蛇M一步設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置15的振蕩控制為使取樣工具的振蕩時間為3秒左右到10秒左右，最好為6秒左右。
[0127]所發(fā)明的儀器I還包含一個傳送器24，其端部位置可形成放置培養(yǎng)皿的平臺2，或者如圖1所示，傳送器24和平臺2的相互位置可保證通過傳送器24的合適運轉(zhuǎn)，將培養(yǎng)皿輸送到平臺上或從平臺上取下。傳送器24由控制器23控制，從而可將盛有所述微生物的培養(yǎng)皿自動放置在平臺上或從平臺上取下。請注意，其他沒有顯示的實施例可采用不同的方式實現(xiàn)將盛有所述微生物的培養(yǎng)皿放置在平臺上或從平臺上取下的自動過程。具體而言，可通過控制器23的設(shè)置，保證只有在表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理的信號發(fā)出的情況下，才允許培養(yǎng)皿自動放置和取下裝置將一個培養(yǎng)皿從平臺上自動取下。這樣可以確保在必要情況下，始終可以取得額外的樣本。
[0128]如圖1所示，所發(fā)明的儀器I還包含一個懸浮液試管自動放置和取出裝置25，從而可將懸浮液試管自動放置于懸浮液試管支架中，并自動從懸浮液試管支架中取出。在圖示的實施例中，懸浮液試管自動放置和取出裝置25包含夾緊裝置26，能以可釋放的方式夾緊懸浮液試管11’。同樣，控制器23的設(shè)置可使其與懸浮液試管自動放置和取下裝置25和26通訊連接，以控制懸浮液試管自動放置和取出裝置的運行，使懸浮液試管在懸浮液試管支架中的放置自動進行。具體而言，控制器23的設(shè)置可保證只有在表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中取出，以進行進一步的處理的信號發(fā)出的情況下，才允許懸浮液試管自動放置和取出裝置25和26將一個懸浮液試管從懸浮液試管支架內(nèi)自動取出。在圖示的實施例中，懸浮液試管自動放置與取出裝置25可沿導(dǎo)軌18移動，其移動與轉(zhuǎn)移裝置15的移動相互獨立。在圖示的C位置，空的懸浮液試管可以被取回，而盛有足夠濃度的微生物的懸浮液試管可轉(zhuǎn)移至處理設(shè)備，如溫浴器等，以進行進一步處理。請注意，位置C可以由一個多任務(wù)系統(tǒng)形成，從而可將懸浮液試管的放置與取出裝置25，以及轉(zhuǎn)移裝置15引導(dǎo)到不同的位置，提供不同的部件或進行不同的處理。
[0129]已制備的樣本懸浮液可用于借助MALDI技術(shù)的微生物定性或鑒定，也可以選擇其他分析，如AST等。為了用MALDI技術(shù)進行微生物的鑒定，取一滴所述樣本懸浮液，并將這一滴懸浮液轉(zhuǎn)移到所述靶板上。可以用由夾緊裝置17固定的另一個取樣工具來獲得一滴樣本并自動浸入懸浮液中。在該取樣工具從懸浮液中升起時，會在取樣工具的端部沾有一滴懸浮液，這滴懸浮液和可沿軌道轉(zhuǎn)移到位置B，在這里使沾有液滴的取樣工具下降至與靶板上的沉積點接觸，而在取樣工具脫離靶板升起后，至少有一部分液滴會留在沉積點上。也可以采用如下文所述的一個移液工具來從懸浮液試管中取出一定量的懸浮液，并將這部分懸浮液轉(zhuǎn)移至位置B，并使一滴懸浮液沉積在靶板上。在將一滴懸浮液沉積到靶板上以后，特別是在這滴懸浮液已經(jīng)干燥后，一滴MALDI基液會自動覆蓋到沉積在靶板上的樣本上。為了進行其他試驗或另一種分析，可以以類似的方式取第二滴所述樣本懸浮液，并可將這一滴樣本自動轉(zhuǎn)移并沉積到一個試驗培養(yǎng)皿上，并可進一步以自動方式轉(zhuǎn)移，以進行一種敏感性試驗或另一次分析。
[0130]每個懸浮液試管均包含一個唯一的識別標(biāo)記，該識別標(biāo)記連同懸浮液的性質(zhì)(與從中猶得選定微生物囷落的培養(yǎng)皿標(biāo)識相關(guān))保存在所述中央控制電腦的內(nèi)存中，以便能以準(zhǔn)確而快速的方式將分析結(jié)果與所述結(jié)果相關(guān)的培養(yǎng)皿和菌落聯(lián)系起來。
[0131]盡管在圖1中沒有顯示，可通過移液工具的方式從懸浮液試管中取走一定量的懸浮液，該移液工具可通過夾緊裝置(用作移液工具的支架)17和轉(zhuǎn)移或定位裝置15，以和定位工具相同的方式固定和定位。定位裝置15置可將所述移液工具定位在懸浮液試管上方的起始位置，從而可將移液工具自動向下浸入懸浮液和從懸浮液中升起并將移液工具定位在一個轉(zhuǎn)移位置上；在移液工具浸入所述懸浮液試管時，移液工具以本身已知的方式(例如，通過負壓)運行，取出一定量的懸浮液。然后，盛有一定量懸浮液的移液工具被升至轉(zhuǎn)移位置。為了容納一定的量，該移液工具包含一個可加壓的空腔，并通過一個控制閥關(guān)閉。移液工具可通過轉(zhuǎn)移裝置15，被自動定位至靶板上其中一個沉積點上方的位置B。在此位置，移液工具被降至靶板上方的一個預(yù)定的距離，然后空腔被加壓至0.5巴至1.1巴的壓力范圍。然后，此閥會開啟一定的時間，從而使一滴體積為0.5至3.0微升的懸浮液沉積在沉積點上，特別是最多只能覆蓋所述靶板上其中一個沉積點的一半；在液滴沉積后，移液工具會從靶板上升起并轉(zhuǎn)移到位置C，然后不再使用或清潔后再次使用。
【權(quán)利要求】
1.一種用于在培養(yǎng)皿上定位與選擇一個微生物菌落，并用嫩101技術(shù)鑒定所述選定菌落的方法，所述方法包含以下自動步驟: -在培養(yǎng)皿上定位與選擇一個微生物菌落； -取得所述選定微生物菌落的一份樣本； -將所述選定的微生物菌落的所述樣本的至少一部分沉積到一個靶板上； -將所述靶板連同所述樣本轉(zhuǎn)移到一個嫩101鑒定儀內(nèi)，以對所述選定微生物菌落的所述樣本進行鑒定。
2.如權(quán)利要求1所述的一種方法，其中將所述選擇的微生物菌落中的所述樣本的至少一部分沉積到一個靶板上的步驟是通過將所述選擇的微生物菌落中所述已制得的樣本直接放置在所述靶板上實現(xiàn)的。
3.如權(quán)利要求1所述的一種方法，其中將所述選擇的微生物菌落中的所述樣本的至少一部分沉積到一個靶板上的步驟是通過以下自動步驟實現(xiàn)的: -將所述制得的樣本轉(zhuǎn)移至一個盛有一定量的懸浮介質(zhì)的懸浮液試管中； -通過將所述制得的樣本的至少一部分轉(zhuǎn)移至所述懸浮介質(zhì)中，制備一份樣本懸浮液； -一滴所述樣本懸浮液； -將所述一滴樣本懸浮液轉(zhuǎn)移至所述靶板上。
4.如權(quán)利要求2所述的一種方法，其方法進一步包含以下自動步驟: -取得所述選定微生物菌落的第二份樣本； -將所述選定的微生物菌落的第二份樣本轉(zhuǎn)移并將所述選定的微生物菌落的第二份樣本的至少一部分放入一個試驗培養(yǎng)皿中； -將所述試驗培養(yǎng)皿被自動轉(zhuǎn)移到用于敏感性試驗或其他分析的儀器上。
5.如權(quán)利要求3所述的一種方法，其方法進一步包含以下自動步驟: -取第二滴所述樣本懸浮液； -將所述第二滴樣本懸浮液放入一個試驗培養(yǎng)皿中； -將所述試驗培養(yǎng)皿被自動轉(zhuǎn)移到用于敏感性試驗或其他分析的儀器上。
6.如權(quán)利要求2所述的一種方法，該方法進一步包含能夠?qū)岩坏文?)1基液覆蓋在沉積到靶板上那部分樣本上的過程自動化的步驟。
7.如權(quán)利要求3所述的一種方法，該方法進一步包含能夠?qū)岩坏文?01基液覆蓋在沉積到靶板上的所述樣本懸浮液滴上的過程自動化的步驟。
8.如權(quán)利要求7所述的一種方法，其中在覆蓋所述嫩0)1基液滴之前，先使所述沉積在靶板上的一滴樣本懸浮液干燥。
9.如權(quán)利要求1所述的一種方法，在培養(yǎng)皿上定位和選擇一個微生物菌落的自動步驟之前，該方法包含提供一個包含多個微生物菌落的步驟，首先獲得所述包含所有微生物菌落的培養(yǎng)皿的初始圖像，然后將所述包含所有微生物菌落的培養(yǎng)皿的所述初始圖像進行顯示，然后至少手動選擇一個微生物菌落的初始圖像。
10.如權(quán)利要求9所述的一種方法，為所述培養(yǎng)皿提供了具體的標(biāo)識來識別所述培養(yǎng)皿，例如條碼等，并且該方法包含存儲所述包含所有菌落的培養(yǎng)皿的所述初始圖像的步驟，所述至少一個手動選擇的微生物菌落相關(guān)的信息的保存，以及如何將所述培養(yǎng)皿的所述標(biāo)識保存到一臺中央控制電腦的內(nèi)存中。
11.如權(quán)利要求10所述的一種方法，該方法包含手動輸入關(guān)于所述培養(yǎng)皿的選定微生物菌落的將要進行的處理的處理指令的步驟，并將所述處理指令保存在所述中央控制電腦的內(nèi)存中。
12.如權(quán)利要求10或11所述的一種方法，其中從一個培養(yǎng)皿上定位和選擇一個微生物菌落的自動步驟包含以下自動步驟:在一個包含一個成像裝置的取樣工具的培養(yǎng)皿平臺上放置所述培養(yǎng)皿、為放置于所述取樣工具裝置內(nèi)的所述培養(yǎng)皿生成一幅圖像、為所述培養(yǎng)皿獲得標(biāo)識、將通過所述取樣工具裝置獲得的圖像與保存的所述培養(yǎng)皿的初始圖像進行比較，以獲得與選定微生物菌落的位置相關(guān)的信息，或選擇性地獲得有關(guān)所述選定微生物菌落將要進行的處理的處理指令。
13.如權(quán)利要求3和12所述的一種方法，在選定微生物菌落的處理指令要求為所述微生物菌落的樣本制備一份懸浮液時，其方法包含為微生物樣本自動制備懸浮液的過程，包括以下自動步驟: -提供一個第一取樣工具，并且提供一個定位裝置，配備用于支撐取樣工具的取樣工具支架，所述定位裝置的設(shè)置是為了分別進行以下操作:將一個取樣工具定位在一個高于為培養(yǎng)皿上選定微生物菌落所獲得位置的起始位置，自動降低或升高往返于培養(yǎng)皿的取樣工具，以及將一個取樣工具定位在轉(zhuǎn)移位置； -將所述第一取樣工具定位在所述定位裝置的取樣工具支架中； -通過用所述定位裝置將第一取樣工具定位在高于為培養(yǎng)皿上選定菌落所獲得位置的起始位置，自動使第一取樣工具向著培養(yǎng)皿下降，直至與微生物接觸并選取所述微生物的一個樣本，然后自動使第一取樣工具連同所述樣本從培養(yǎng)皿上向著轉(zhuǎn)移位置升起； -提供一個懸浮液試管支架，用于支撐懸浮液試管； -將一個懸浮液試管放置在懸浮液試管支架中； -提供一個懸浮介質(zhì)自動分配器，以將一種懸浮介質(zhì)自動分配到一個放置于懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管中； -通過該自動分配器，將一個初始量的懸浮介質(zhì)自動分配到放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中； -提供一個轉(zhuǎn)移裝置，以分別自動將一個取樣工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到高于一個放置于懸浮液試管支架的懸浮液試管的位置，并使一個取樣工具下降至一個懸浮液試管中盛放的一種懸浮介質(zhì)中或使其從懸浮介質(zhì)中升起，以及將一個取樣工具定位在一個高于一個放置于懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管的等待位置； -通過所述轉(zhuǎn)移裝置自動將所述第一取樣工具連同微生物樣本一起從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移至一個高于懸浮液試管支架中的懸浮液試管的位置，將所述第一取樣工具連同微生物樣本一起下降至懸浮液試管內(nèi)所盛的懸浮介質(zhì)內(nèi)；通過轉(zhuǎn)移裝置，在第一取樣工具連同所述微生物的樣本已經(jīng)一起浸入懸浮介質(zhì)中的情況下使第一取樣工具在垂直方向沿直線振蕩一段時間；并在所述一段時間結(jié)束后將第一取樣工具從盛于懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中升起至等待位置； -提供一個濁度計，以測量盛于一個放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中的懸浮介質(zhì)的濁度； -至少在取樣工具的振蕩時間結(jié)束后，用該濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度，并提供指示所測量的濁度的最終測量值； -提供一個與定位裝置通訊連接的控制器、轉(zhuǎn)移裝置、自動懸浮介質(zhì)分配器和濁度計，以分別自動控制定位裝置的移動、轉(zhuǎn)移裝置的移動、自動懸浮介質(zhì)分配器的運行和濁度計的運行； -通過所述控制器:
確定最終的測量值是否高于預(yù)先保存在控制器內(nèi)存中的一個第一臨界值，如果是，進行步驟幻；或最終的測量值是否小于等于該第一臨界值并大于等于預(yù)先保存在控制器內(nèi)存中的一個第二臨界值，所述第一臨界值大于等于所述第二臨界值，如果是，進行步驟0)；或最終測量值是否小于該第二臨界值，如果是，進行步驟(1)； 幻控制自動懸浮介質(zhì)分配器在懸浮液試管中加入更多的懸浮介質(zhì)； 0)提供一個信號，表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理；或 (1)提供另一個取樣工具；將所述另一個取樣工具放置于定位裝置的所述取樣工具支架中；用所述定位裝置將另一個取樣工具放置于培養(yǎng)皿上方的起始位置，自動使另一個取樣工具降至培養(yǎng)皿內(nèi)，與微生物接觸并取出所述微生物的另一個樣本，自動使另一個取樣工具連同所述微生物樣本從培養(yǎng)皿升至轉(zhuǎn)移位置；通過所述轉(zhuǎn)移裝置自動將所述另一個取樣工具連同另一個微生物樣本一起從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到一個高于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管的位置，將所述另一個取樣工具連同另一個微生物樣本一起降至懸浮液試管內(nèi)所盛的懸浮介質(zhì)中；在另一個取樣工具連同所述微生物的另一個樣本已經(jīng)一起浸入懸浮介質(zhì)中的情況下，通過轉(zhuǎn)移工具使另一個取樣工具在垂直方向沿直線振蕩一段時間；并在所述一段時間結(jié)束后將另一個取樣工具從盛于懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中升起至等待位置；在至少另一個取樣工具的振蕩時間完成后，通過濁度計來測量放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濃度，從而給出另一個可顯示所測量的濁度的另一個最終測量值；并進行步驟^0。
14.如權(quán)利要求13所述的一種方法，其中控制器的配置也使在取樣工具的振蕩時間內(nèi)另外進行以下步驟:使用濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度。在取樣工具振蕩的這段時間內(nèi)，濁度計的配置可向控制器提供指示所測量的濁度的一個在線測量值。
15.如權(quán)利要求14所述的一種方法，如果在振蕩時間內(nèi)，濁度的在線測量值小于等于第一臨界值并大于等于第二臨界值，控制器可控制轉(zhuǎn)移裝置的移動，使取樣工具上升至等待位置，并且控制器還能進一步提供一個信號，使盛有懸浮液的懸浮液試管能夠從懸浮液試管支架內(nèi)取出，以便進一步處理。
16.如權(quán)利要求14或15所述的一種方法，其中控制器的配置可使用濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度的步驟在取樣工具浸入懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)內(nèi)之前開始。
17.如權(quán)利要求13所述的一種方法，該方法進一步包含以下步驟:如同為支撐懸浮液試管而提供懸浮液試管支架一樣，提供一個可旋轉(zhuǎn)的懸浮液試管支架，從而可以旋轉(zhuǎn)固定在旋轉(zhuǎn)式懸浮液試管支架中的懸浮液試管:控制器的配置令其可與控制懸浮液試管支架旋轉(zhuǎn)的可旋轉(zhuǎn)懸浮液試管支架實現(xiàn)通訊連接；以及將控制器設(shè)置為懸浮液試管可在測量懸浮液試管中盛有的懸浮介質(zhì)的濁度時旋轉(zhuǎn)。
18.如權(quán)利要求13所述的一種方法，其中在步驟(1)中，可以將第一取樣工具用做另一個取樣工具；而將所述另一個取樣工具的放置于定位裝置的所述取樣工具支架的步驟可通過在控制器控制之下的轉(zhuǎn)移裝置來實現(xiàn)。
19.如權(quán)利要求13所述的一種方法，其中懸浮介質(zhì)的額外添加量是通過控制器，在懸浮介質(zhì)初始用量、最終測量值和第一和/或第二臨界值的基礎(chǔ)上確定。
20.如權(quán)利要求13所述的一種方法，其中控制器設(shè)置為可將懸浮介質(zhì)自動分配器控制在使提供的初始用量約為0.5-2毫升，最好為1毫升左右。
21.如權(quán)利要求13所述的一種方法，其中控制器設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具在5赫茲左右到120赫茲左右的頻率之間振蕩，30赫茲左右到90赫茲左右更好，50赫茲左右為最佳。
22.如權(quán)利要求13所述的一種方法，其中控制器設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具以0.5毫米左右到4毫米左右的振幅振蕩，最好為2毫米左右到3毫米左右。
23.如權(quán)利要求13所述的一種方法，其中控制器設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具的振蕩時間為3秒左右到10秒左右，最好為6秒左右。
24.如權(quán)利要求13所述的一種方法，該方法包含一個可提供一個截面基本呈圓形，直徑約6至12毫米左右，最好為10毫米左右的試管來作為懸浮液試管的步驟。
25.如權(quán)利要求13所述的一種方法，該方法包含一個用于將包含所述微生物的培養(yǎng)皿自動放置到平臺上并從平臺上取下的培養(yǎng)皿自動放置與取下的裝置，設(shè)置控制器的步驟，使其與培養(yǎng)皿自動放置與取下裝置通信連接，以控制培養(yǎng)皿自動放置與取下裝置的運行，其中將一個放有所述微生物的培養(yǎng)皿放置于平臺上的步驟是在控制器的控制下自動進行的。
26.如權(quán)利要求25所述的一種方法，其中控制器的設(shè)置可保證只有在表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理的信號發(fā)出的情況下，才允許培養(yǎng)皿自動放置和取下裝置將一個培養(yǎng)皿從平臺上自動取下。
27.如權(quán)利要求13所述的一種方法，該方法包含一個用于將懸浮液試管自動放置到懸浮液試管支架內(nèi)，以及從懸浮液試管支架內(nèi)取出的懸浮液試管放置與取出裝置，配置控制器的步驟，使其與懸浮液試管自動放置與取出裝置通信連接，以控制懸浮液試管自動放置與取出裝置的運行，其中將一個懸浮液試管放置于懸浮液試管支架內(nèi)的步驟是在控制器的控制下自動進行的。
28.如權(quán)利要求27所述的一種方法，其中控制器的設(shè)置可保證只有在表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理的信號發(fā)出的情況下，才允許懸浮液試管自動放置和取下裝置將一個懸浮液試管從懸浮液試管支架內(nèi)自動取出。
29.如權(quán)利要求13所述的一種方法，該方法包含以下步驟:為懸浮液試管提供識別標(biāo)記；以及將所述懸浮液試管的該識別標(biāo)記連同懸浮液的性質(zhì)(與從中獲得選定微生物菌落的培養(yǎng)皿標(biāo)識相關(guān))保存在所述中央控制電腦的內(nèi)存中。
30.如權(quán)利要求2和12所述的一種方法，如果對于選定微生物菌落的處理指令要求將從所述選定微生物菌落中獲得的所述樣本直接放置在所述靶板上，該方法包含以下自動步驟: -提供一個第一取樣工具，并且提供一個定位裝置，配備用于支撐取樣工具的取樣工具支架，所述定位裝置的設(shè)置是為了分別進行以下操作:將一個取樣工具定位在一個高于為培養(yǎng)皿上選定微生物菌落所獲得位置的起始位置，自動降低或升高往返于培養(yǎng)皿的取樣工具，以及將一個取樣工具定位在轉(zhuǎn)移位置； -將所述第一取樣工具定位在所述定位裝置的取樣工具支架中； -通過用所述定位裝置將第一取樣工具定位在高于為培養(yǎng)皿上選定菌落所獲得位置的起始位置，自動使第一取樣工具向著培養(yǎng)皿下降，直至與微生物接觸并選取所述微生物的一個樣本，然后自動使第一取樣工具連同所述樣本從培養(yǎng)皿上向著轉(zhuǎn)移位置升起； -提供一個可固定一個靶板的靶板支架，所述靶板有多個沉積點； -將一個革巴板放置在革巴板支架內(nèi)； -提供一個轉(zhuǎn)移裝置，以將取樣工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置自動轉(zhuǎn)移至一個在靶板上其中一個沉積點上方的位置，并使該取樣工具下降至微生物菌落的樣本與靶板接觸，并將該轉(zhuǎn)移工具在一個與靶板平行的平面內(nèi)移動，從而使微生物菌落的樣本沉積到沉積點上，特別是最多只能覆蓋所述靶板上其中一個沉積點的一半； -所述取樣工具從靶板上升起。
31.如權(quán)利要求13所述的一種方法，如果其對于選定微生物菌落的處理指令要求從所述樣本懸浮液中取一滴并轉(zhuǎn)移到所述靶板上，該方法包含以下自動步驟: -在所述取樣工具中配備一個移液工具，并提供一個配備支撐所述移液工具的移液工具支架的定位裝置，所述定位裝置的配置可將所述移液工具定位在懸浮液試管上方的起始位置，從而可將移液工具自動向下浸入懸浮液和從懸浮液中升起并將移液工具定位在一個轉(zhuǎn)移位置上； -將所述移液工具放置在所述定位裝置的移液工具支架內(nèi)； -通過所述定位裝置，將移液工具定位在懸浮液試管上方的起始位置，將移液工具向下浸入所述懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中，操作移液工具，使其取出一定量的懸浮液，使移液工具連同所述一定量的懸浮液一起升起至轉(zhuǎn)移位置；所述移液工具包含一個可加壓的空腔，由一個控制閥來關(guān)閉，以便容納一定量的懸浮介質(zhì)； -提供一個可固定一個靶板的靶板支架，所述靶板有多個沉積點； -將一個革巴板放置在革巴板支架內(nèi)； 提供一個轉(zhuǎn)移裝置，以將移液工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置自動轉(zhuǎn)移至一個在靶板上其中一個沉積點上方的位置，并使該移液工具下降至靶板上方預(yù)先設(shè)定的距離，并使空腔加壓至0.5巴至1.1巴的壓力范圍，然后使閥開啟一定的時間，從而使一滴體積為0.5至3.0微升的懸浮液沉積在沉積點上，特別是最多只能覆蓋所述靶板上其中一個沉積點的一半； -將所述移液工具從靶板上升起。
32.如權(quán)利要求31所述的一種方法，其移液工具的形狀能保證懸浮液滴能以無飛濺的方式沉積到靶板上。
33.如權(quán)利要求30、31或32所述的一種方法，該方法包含以下步驟:在靶板上提供識別標(biāo)記，選擇性地在所述靶板的沉積點上提供識別標(biāo)記；以及將所述靶板和沉積點上的識別標(biāo)記連同懸浮液的性質(zhì)(與從中獲得選定微生物菌落的培養(yǎng)皿標(biāo)識相關(guān))保存在所述中央控制電腦的內(nèi)存中。
34.一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，所述方法包括以下幾個步驟: -為一個包含所述微生物的培養(yǎng)皿提供一個平臺； -將一個包含所述微生物的培養(yǎng)皿放置在平臺上； -提供一個第一取樣工具，并且提供一個定位裝置，配備用于支撐取樣工具的取樣工具支架，所述定位裝置的設(shè)置是為了分別進行以下操作:將一個取樣工具定位在一個高于為培養(yǎng)皿上選定微生物菌落所獲得位置的起始位置，自動降低或升高往返于培養(yǎng)皿的取樣工具，以及將一個取樣工具定位在轉(zhuǎn)移位置； -將所述第一取樣工具定位在所述定位裝置的取樣工具支架中； 通過用所述定位裝置將第一取樣工具定位在培養(yǎng)皿上方的起始位置，自動使第一取樣工具向著培養(yǎng)皿下降，直至與微生物接觸并選取所述微生物的一個樣本，然后自動使第一取樣工具連同所述樣本從培養(yǎng)皿上向著轉(zhuǎn)移位置升起； -提供一個懸浮液試管支架，用于支撐懸浮液試管； -將一個懸浮液試管放置在懸浮液試管支架中； -提供一個懸浮介質(zhì)自動分配器，以將一種懸浮介質(zhì)自動分配到一個放置于懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管中； -通過該自動分配器，將一個初始量的懸浮介質(zhì)自動分配到放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中； -提供一個轉(zhuǎn)移裝置，以分別自動將一個取樣工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到高于一個放置于懸浮液試管支架的懸浮液試管的位置，并使一個取樣工具下降至一個懸浮液試管中盛放的一種懸浮介質(zhì)中或使其從懸浮介質(zhì)中升起，以及將一個取樣工具定位在一個高于一個放置于懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管的等待位置； -通過所述轉(zhuǎn)移裝置自動將所述第一取樣工具連同微生物樣本一起從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移至一個高于懸浮液試管支架中的懸浮液試管的位置，將所述第一取樣工具連同微生物樣本一起下降至懸浮液試管內(nèi)所盛的懸浮介質(zhì)內(nèi)；通過轉(zhuǎn)移裝置，在第一取樣工具連同所述微生物的樣本已經(jīng)一起浸入懸浮介質(zhì)中的情況下使第一取樣工具在垂直方向沿直線振蕩一段時間；并在所述一段時間結(jié)束后將第一取樣工具從盛于懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中升起至等待位置； -提供一個濁度計，以測量盛于一個放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中的懸浮介質(zhì)的濁度； -至少在取樣工具的振蕩時間結(jié)束后，用該濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度，并提供指示所測量的濁度的最終測量值； -提供一個與定位裝置通訊連接的控制器、轉(zhuǎn)移裝置、自動懸浮介質(zhì)分配器和濁度計，以分別自動控制定位裝置的移動、轉(zhuǎn)移裝置的移動、自動懸浮介質(zhì)分配器的運行和濁度計的運行； -通過所述控制器:確定最終的測量值是否高于預(yù)先保存在控制器內(nèi)存中的一個第一臨界值，如果是，進行步驟幻；或最終的測量值是否小于等于該第一臨界值并大于等于預(yù)先保存在控制器內(nèi)存中的一個第二臨界值，所述第一臨界值大于等于所述第二臨界值，如果是，進行步驟0)；或最終測量值是否小于該第二臨界值，如果是，進行步驟(1)； 幻控制自動懸浮介質(zhì)分配器在懸浮液試管中加入更多的懸浮介質(zhì)； 0)提供一個信號，表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理；或 (1)提供另一個取樣工具；將所述另一個取樣工具放置于定位裝置的所述取樣工具支架中；用所述定位裝置將另一個取樣工具放置于培養(yǎng)皿上方的起始位置，自動使另一個取樣工具降至培養(yǎng)皿內(nèi)，與微生物接觸并取出所述微生物的另一個樣本，自動使另一個取樣工具連同所述微生物樣本從培養(yǎng)皿升至轉(zhuǎn)移位置；通過所述轉(zhuǎn)移裝置自動將所述另一個取樣工具連同另一個微生物樣本一起從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到一個高于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管的位置，將所述另一個取樣工具連同另一個微生物樣本一起降至懸浮液試管內(nèi)所盛的懸浮介質(zhì)中；在另一個取樣工具連同所述微生物的另一個樣本已經(jīng)一起浸入懸浮介質(zhì)中的情況下，通過轉(zhuǎn)移工具使另一個取樣工具在垂直方向沿直線振蕩一段時間；并在所述一段時間結(jié)束后將另一個取樣工具從盛于懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中升起至等待位置；在至少另一個取樣工具的振蕩時間完成后，通過濁度計來測量放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濃度，從而給出另一個可顯示所測量的濁度的另一個最終測量值；并進行步驟^0。
35.一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，所述方法包括以下幾個步驟: 將一個初始量的懸浮介質(zhì)分配到一個放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中； 通過將取樣工具浸入懸浮液中，將一個第一取樣工具連同一份微生物樣本轉(zhuǎn)移到懸浮液試管內(nèi)； 使第一取樣工具在垂直方向上沿直線振蕩一段時間； 在取樣工具的振蕩時間結(jié)束后，測量盛于懸浮液試管中的懸浮介質(zhì)的濁度； 根據(jù)測量的濁度，或者在懸浮液試管中添加一些懸浮介質(zhì)，或用所述取樣工具再次獲得所述微生物的一份樣本，增加的樣本可通過取樣工具的垂直振動釋放到懸浮介質(zhì)中，或指示懸浮液已準(zhǔn)備好進一步使用。
36.如權(quán)利要求34或35所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法,其中控制器的配置也使在取樣工具的振蕩時間內(nèi)另外進行以下步驟:使用濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度。在取樣工具振蕩的這段時間內(nèi)，濁度計的配置可向控制器提供指示所測量的濁度的一個在線測量值。
37.如權(quán)利要求34或35所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，如果在振蕩時間內(nèi)，濁度的在線測量值小于等于第一臨界值并大于等于第二臨界值，控制器可控制轉(zhuǎn)移裝置的移動，使取樣工具上升至等待位置，并且控制器還能進一步提供一個信號，使盛有懸浮液的懸浮液試管能夠從懸浮液試管支架內(nèi)取出，以便進一步處理。
38.如權(quán)利要求34、35或36所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，其中控制器的配置可使用濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度的步驟在取樣工具浸入懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)內(nèi)之前開始。
39.依據(jù)權(quán)利要求34-38中任何一項所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，該方法進一步包含以下步驟:如同為支撐懸浮液試管而提供懸浮液試管支架一樣，提供一個可旋轉(zhuǎn)的懸浮液試管支架，從而可以旋轉(zhuǎn)固定在旋轉(zhuǎn)式懸浮液試管支架中的懸浮液試管；控制器的配置令其可與控制懸浮液試管支架旋轉(zhuǎn)的可旋轉(zhuǎn)懸浮液試管支架實現(xiàn)通訊連接；以及將控制器設(shè)置為懸浮液試管可在測量懸浮液試管中盛有的懸浮介質(zhì)的濁度時旋轉(zhuǎn)。
40.如權(quán)利要求34-39中任何一項所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，其中在步驟(1)中，可以將第一取樣工具用做另一個取樣工具；而將所述另一個取樣工具的放置于定位裝置的所述取樣工具支架的步驟可通過在控制器控制之下的轉(zhuǎn)移裝置來實現(xiàn)。
41.如權(quán)利要求34-40中任何一項所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，其中懸浮介質(zhì)的額外添加量是通過控制器，在懸浮介質(zhì)初始用量、最終測量值和第一和/或第二臨界值的基礎(chǔ)上確定的。
42.如權(quán)利要求34-41中任何一項所述的一種自動制備微生物懸浮液的方法，其中控制器設(shè)置為可將懸浮介質(zhì)自動分配器控制在使提供的初始用量約為0.5-2毫升，最好為1毫升左右。
43.如權(quán)利要求34-42中任何一項所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，其中控制器設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具在5赫茲左右到120赫茲左右的頻率之間振湯，30赫茲左右到90赫茲左右更好，50赫茲左右為最佳。
44.如權(quán)利要求34-43中任何一項所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，其中控制器設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具以0.5毫米左右到4毫米左右的振幅振蕩，最好為2毫米左右到3毫米左右。
45.如權(quán)利要求34-44中任何一項所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，其中控制器設(shè)置為可將轉(zhuǎn)移裝置的振蕩控制為使取樣工具的振蕩時間為3秒左右到10秒左右，最好為6秒左右。
46.如權(quán)利要求34-45中任何一項所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，該方法包含一個可提供一個截面基本呈圓形，直徑約6至12毫米左右，最好為10毫米左右的試管來作為懸浮液試管的步驟。
47.如權(quán)利要求12，34-46中任何一項所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，該方法包含一個用于將包含所述微生物的培養(yǎng)皿自動放置到平臺上并從平臺上取下的培養(yǎng)皿自動放置與取下的裝置，設(shè)置控制器的步驟，使其與培養(yǎng)皿自動放置與取下裝置通信連接，以控制培養(yǎng)皿自動放置與取下裝置的運行，其中將一個放有所述微生物的培養(yǎng)皿放置于平臺上的步驟是在控制器的控制下自動進行的。
48.如權(quán)利要求47所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，其中控制器的設(shè)置可保證只有在表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理的信號發(fā)出的情況下，才允許培養(yǎng)皿自動放置和取下裝置將一個培養(yǎng)皿從平臺上自動取下。
49.如權(quán)利要求13、34-48中任何一項所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，該方法包含一個用于將懸浮液試管自動放置到懸浮液試管支架內(nèi)，以及從懸浮液試管支架內(nèi)取出的懸浮液試管放置與取出裝置，配置控制器的步驟，使其與懸浮液試管自動放置與取出裝置通信連接，以控制懸浮液試管自動放置與取出裝置的運行，其中將一個懸浮液試管放置于懸浮液試管支架內(nèi)的步驟是在控制器的控制下自動進行的。
50.如權(quán)利要求49所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的方法，其中控制器的設(shè)置可保證只有在表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理的信號發(fā)出的情況下，才允許懸浮液試管自動放置和取下裝置將一個懸浮液試管從懸浮液試管支架內(nèi)自動取出。
51.如權(quán)利要求13-29或34-50中任何一項所述的一種用于自動制備微生物懸浮液的儀器，可實施一種用于自動制備微生物樣本懸浮液的方法，或一種方法中的一個步驟，所述儀器包含: -一個用于包含所述微生物的培養(yǎng)皿的平臺； -一個第一取樣工具和另一個取樣工具，和一個配備支撐取樣工具的取樣工具支架的定位裝置，所述定位裝置的配置可將一個取樣工具定位在高于培養(yǎng)皿的起始位置，從而可將一個取樣工具自動向培養(yǎng)皿下降和從培養(yǎng)皿上升起并定位在一個轉(zhuǎn)移位置上； -一個懸浮液試管支架，用于支撐懸浮液試管； -一個濁度計，以測量盛于一個放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中的懸浮介質(zhì)的濁度； -一個轉(zhuǎn)移裝置，以分別自動將一個取樣工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到高于一個放置于懸浮液試管支架的懸浮液試管的位置，并使一個取樣工具下降至一個懸浮液試管中盛放的一種懸浮介質(zhì)中或使其從懸浮介質(zhì)中升起，以及將一個取樣工具定位在一個高于一個放置于懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管的等待位置，所述轉(zhuǎn)移裝置進一步設(shè)置為可使一個取樣工具在垂直方向直線振蕩一段時間； -一個濁度計，以測量盛于一個放置于懸浮液試管支架中的懸浮液試管中的懸浮介質(zhì)的濁度，并可提供可表明所測量的濁度的最終測量值； -一個與定位裝置通訊連接的控制器、轉(zhuǎn)移裝置、自動懸浮介質(zhì)分配器和濁度計，以分別自動控制定位裝置的移動、轉(zhuǎn)移裝置的移動、自動懸浮介質(zhì)分配器的運行和濁度計的運行； -所述控制器的配置可: 確定最終的測量值是否高于預(yù)先保存在控制器內(nèi)存中的一個第一臨界值，如果是，所述控制器的配置可用于實施步驟幻；或最終的測量值是否小于等于該第一臨界值并大于等于預(yù)先保存在控制器內(nèi)存中的一個第二臨界值，所述第一臨界值大于等于所述第二臨界值，如果是，所述控制器的配置可用于實施步驟0)；或最終測量值是否小于該第二臨界值，如果是，所述控制器的配置可用于實施步驟(1)； 幻控制自動懸浮介質(zhì)分配器在懸浮液試管中加入更多的懸浮介質(zhì)； 0)提供一個信號，表明可將盛有懸浮液的懸浮液試管從懸浮液試管支架中移出，以進行進一步的處理；或 (1)將所述另一個取樣工具放置于定位裝置的所述取樣工具支架中；用所述定位裝置將另一個取樣工具放置于培養(yǎng)皿上方的起始位置，自動使另一個取樣工具降至培養(yǎng)皿內(nèi)，與微生物接觸并取出所述微生物的另一個樣本，自動使另一個取樣工具連同所述微生物樣本從培養(yǎng)皿升至轉(zhuǎn)移位置；通過所述轉(zhuǎn)移裝置自動將所述另一個取樣工具連同另一個微生物樣本一起從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置轉(zhuǎn)移到一個高于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管的位置，將所述另一個取樣工具連同另一個微生物樣本一起降至懸浮液試管內(nèi)所盛的懸浮介質(zhì)中；在另一個取樣工具連同所述微生物的另一個樣本已經(jīng)一起浸入懸浮介質(zhì)中的情況下，通過轉(zhuǎn)移工具使另一個取樣工具在垂直方向沿直線振蕩一段時間；并在所述一段時間結(jié)束后將另一個取樣工具從盛于懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中升起至等待位置；在至少另一個取樣工具的振蕩時間完成后，通過濁度計來測量放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濃度，從而給出另一個可顯示所測量的濁度的另一個最終測量值；并進行步驟^0。
52.如權(quán)利要求51所述的一種用于自動制備微生物樣本懸浮液的儀器，其控制器的配置也使在取樣工具的振蕩時間內(nèi)另外進行以下步驟:使用濁度計測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)的濁度。在取樣工具振蕩的這段時間內(nèi)，濁度計的配置可向控制器提供指示所測量的濁度的一個在線測量值。
53.如權(quán)利要求52所述的一種用于自動制備微生物樣本懸浮液的儀器,其控制器的設(shè)置可對轉(zhuǎn)移裝置的移動進行以下控制:如果在振蕩時間內(nèi)，濁度的在線測量值小于等于第一臨界值并大于等于第二臨界值，一個取樣工具將上升至等待位置，并可提供一個信號，使盛有懸浮液的懸浮液試管能夠從懸浮液試管支架中取出，以便進一步處理。
54.如權(quán)利要求52或53所述的一種自動制備微生物樣本懸浮液的儀器，其控制器的設(shè)置可將濁度計控制得使測量盛于放置在懸浮液試管支架內(nèi)的懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)濁度的步驟在取樣工具浸入懸浮液試管內(nèi)的懸浮介質(zhì)內(nèi)之前開始。
55.一種可將一個微生物菌落的樣本自動沉積到用于嫩0)1鑒定的靶板上的沉積點上的方法，該方法包含將微生物菌落的樣本沉積到沉積點上的步驟，從而使樣本最多只覆蓋靶板上所述其中一個沉積點的一半。
56.如權(quán)利要求55所述的一種方法，其中一個微生物菌落的樣本以懸濁液的形式存在。
57.如權(quán)利要求56所述的一種方法，其中懸浮液樣本是以液滴的形式沉積在靶板的一個沉積點上，液滴的體積在0.5至3.0微升左右的范圍內(nèi)。
58.一種可將一滴含有一個微生物菌落的樣本的懸浮液自動沉積到用于嫩0)1鑒定的靶板上的沉積點上的方法，該方法包含以下自動步驟: -在一個取樣工具中配備一個移液工具，并提供一個配備支撐所述移液工具的移液工具支架的定位裝置，所述定位裝置的配置可將所述移液工具定位在一個盛有含微生物菌落樣本的懸浮液的懸浮液試管上方的起始位置，從而可將移液工具自動向下浸入懸浮液和從懸浮液中升起并將移液工具定位在一個轉(zhuǎn)移位置上； -將所述移液工具放置在所述定位裝置的移液工具支架內(nèi)； -通過所述定位裝置，將移液工具定位在懸浮液試管上方的起始位置，將移液工具向下浸入所述懸浮液試管內(nèi)的懸浮液中，操作移液工具，使其取出一定量的懸浮液，使移液工具連同所述一定量的懸浮液一起升起至轉(zhuǎn)移位置；所述移液工具包含一個可加壓的空腔，由一個控制閥來關(guān)閉，以便容納一定量的懸浮介質(zhì)； -提供一個可固定靶板的靶板支架，所述靶板有多個沉積點； -將靶板放置在靶板支架內(nèi)； -提供一個轉(zhuǎn)移裝置，以將移液工具從定位裝置的轉(zhuǎn)移位置自動轉(zhuǎn)移至一個在靶板上其中一個沉積點上方的位置，并使該移液工具下降至靶板上方預(yù)先設(shè)定的距離，并使空腔加壓至0.5巴至1.1巴的壓力范圍內(nèi)，然后使閥開啟一定的時間，從而使一滴體積為0.5至3.0微升的懸浮液沉積在沉積點上，特別是最多只能覆蓋所述靶板上其中一個沉積點的一半； -將所述移液工具從靶板上升起。
59.如權(quán)利要求58所述的一種方法，其移液工具的形狀能保證懸浮液滴能以無飛濺的方式沉積到靶板上。
60.如權(quán)利要求58或59所述的一種方法,該方法包括將空腔加壓至0.5巴至1.1巴的壓力范圍內(nèi)，然后使閥開啟一定的時間，從而使一滴體積為0.5至3微升的懸浮液沉積在沉積點上，最多只能覆蓋所述靶板上其中一個沉積點的一半。
【文檔編號】C12M1/36GK104364659SQ201380027317
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2013年4月2日 優(yōu)先權(quán)日:2012年3月30日
【發(fā)明者】杰茲.波特曼, 馬特杰.克里福斯特, 蒂諾沃爾特.范德蘇 申請人:Bd科斯特公司