玉米事件dp-004114-3及其檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了涉及轉(zhuǎn)基因抗昆蟲性玉米植物的DNA組合物。也提供了基于插入玉米基因組中的重組構(gòu)建體的DNA序列和在插入位點側(cè)翼的DNA序列檢測玉米DP-004114-3事件的存在的測定法。提供了在實施所述測定法中有用的試劑盒和條件。PTA-1150620101124
【專利說明】玉米事件DP-004114-3及其檢測方法
[0001] 交叉引用
[0002] 本發(fā)明申請要求2012年3月30日提交的美國臨時申請No. 61/617990的權(quán)益，所 述臨時申請全文以引用方式并入本文。
[0003] 對以電子方式提交的序列表的引用
[0004] 通過EFS-Web以電子方式將序列列表的正式文本作為ASCII格式的序列列表提 交，該文件名稱為"5251_PCT_sequence_listing. txt"，創(chuàng)建日期為2013年3月8日，文件 大小為51千字節(jié)，并且該文件與本說明書同時提交。該ASCII格式文檔中所含的序列表是 本說明書的一部分，并且全文以引用的方式并入本文。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0005] 本發(fā)明的實施例涉及植物分子生物學領(lǐng)域，本發(fā)明的實施例具體地涉及用于向 植物賦予昆蟲抗性的DNA構(gòu)建體。本發(fā)明的實施例更具體地涉及抗昆蟲性玉米植物事件 DP-004114-3并且涉及用于檢測樣品及其組合物中玉米事件DP-004114-3的存在的測定 法。

【背景技術(shù)】
[0006] 本發(fā)明的實施例涉及抗昆蟲性玉米（玉蜀黍（Zea mays))植物DP-004114-3,也 稱作"玉米系DP-004114-3"、"玉米事件DP-004114-3"和"4114玉米"，并且涉及玉米植物 DP-004114-3的DNA植物表達構(gòu)建體和在玉米植物DP-004114-3及其子代中檢測轉(zhuǎn)基因/ 側(cè)翼插入?yún)^(qū)域。
[0007] 玉米是一種重要作物并且是世界許多地區(qū)的主要食物來源。盡管采用了諸如化 學殺蟲劑之類的保護性措施，然而由害蟲造成的損害仍是世界范圍玉米作物損耗的主要 因素。有鑒于此，已經(jīng)將抗昆蟲性基因工程化至作物如玉米中，以控制昆蟲損害并降低對 傳統(tǒng)化學殺蟲劑的需要。已經(jīng)用于產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因抗昆蟲性作物的一組基因是來自蘇云金芽 孢桿菌（Bacillus thuringiensis)(Bt)的δ-內(nèi)毒素類。δ-內(nèi)毒素已經(jīng)成功地表達 于農(nóng)作植物如棉屬植物、馬鈴薯、稻、向日葵以及玉米中，并且已經(jīng)證明提供了優(yōu)異的病害 昆蟲控制作用。（Perlak，F(xiàn).J et al.(1990)Bio/Technology 8:939_943(Perlak，F(xiàn).J 等 人，1990 年，《生物技術(shù)》，第 8 卷，第 939-943 H);Perlak，F(xiàn).J.etal.(1993)PlantMol. Bioh 22 :313-321 (Perlak，R 等人，1993年，《植物分子生物學》，第22卷，第313-321 頁）；Fujimoto，H.et al. (1993)Bio/Technology 11 :1151-1155 (Fujimoto，H.等人，1993 年，《生物技術(shù)》，第 11 卷，第 1151-1155 頁）；Tu et al. (2000) Nature Biotechnology 18 :1101-1104(Tu等人，2000年，《自然生物技術(shù)》，第18卷，第1101-1104頁）；PCT公 開 WO 01/13731;以及 Bing，J.W.et al. (2000)Efficacy of CrylF Transgenic Maize， HthBiennial International Plant Resistance to Insects Workshop, Fort Collins, C0(Bing，J.W.等人，2000年，《CrylF轉(zhuǎn)基因玉米的功效》，第14屆兩年一度的國際植物昆 蟲抗性研討會，科羅拉多州科林斯堡））。
[0008] 已知外來基因在植物中的表達受它們在植物基因組中的位置影響，這可能歸因于 染色質(zhì)結(jié)構(gòu)（例如，異染色質(zhì)）或轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件（例如，增強子）接近整合位點的接近度 (Weising et al. (1988)Ann. Rev. Genet. 22 :421-477 (Weising 等人，1988 年，《遺傳學年 鑒》，第22卷，第421-477頁））。與此同時，轉(zhuǎn)基因在基因組中不同位置處的存在將以不同 方式影響植物的總體表型。出于這個原因，經(jīng)常需要篩選大量事件，以鑒定出以導入的目的 基因的最佳表達為特征的事件。例如，已經(jīng)在植物及在其他生物體中觀察到，在事件之間可 能存在導入基因的表達水平的巨大差異。在表達的空間或時刻模式方面也可以存在差異， 例如，轉(zhuǎn)基因在多種植物組織中相對表達方面的差異，這可能不對應于從存在于導入的基 因構(gòu)建體中的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件所預期的模式。出于這個原因，常見的是產(chǎn)生數(shù)百至數(shù)千個不 同事件，并從這些事件中篩選出具有合乎需要的轉(zhuǎn)基因表達水平和用于商業(yè)目的模式的單 一事件。利用常規(guī)育種方法，具有合乎需要的轉(zhuǎn)基因表達水平或模式的事件可用于將轉(zhuǎn)基 因通過有性遠交漸摻至其他遺傳背景中。此類雜交的子代維持原始轉(zhuǎn)化體的轉(zhuǎn)基因表達特 征。使用這種策略以在充分適應于局部生長條件的眾多品種中確?？煽康幕虮磉_。
[0009] 如能夠檢測特定事件的存在以確定有性雜交體的子代是否含目的轉(zhuǎn)基因，將是有 利的。此外，用于檢測特定事件的方法將有助于例如符合要求銷售前批準和標注源自重組 作物植物的食品的法規(guī)，或用于環(huán)境監(jiān)測、在田間監(jiān)測作物的性狀、或監(jiān)測源自作物收獲物 的產(chǎn)品、以及用于確保各方主體遵守法規(guī)條款或合同條款。
[0010] 可以通過本領(lǐng)域已知的任何核酸檢測方法，包括、但不限于聚合酶鏈反應（PCR) 或使用核酸探針的DNA雜交法，來檢測轉(zhuǎn)基因的存在。這些檢測方法通常集中于頻繁使用 的遺傳元件，如啟動子、終止子、標記基因等，因為對于許多DNA構(gòu)建體而言，編碼區(qū)是可互 換的。因此，此類方法可能無法用于區(qū)分不同的事件，尤其是使用相同DNA構(gòu)建體或十分相 似的構(gòu)建體所產(chǎn)生的那些事件，除非已知與插入的異源DNA相鄰的側(cè)翼DNA的DNA序列。例 如，美國專利No 6, 395, 485中描述了一種用于檢測原種事件GAT-ZMl的事件特異性PCR測 定法。因此，期望擁有一種用于鑒定事件DP-004114-3的簡單而又有甄別性的方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明的實施例涉及用于產(chǎn)生和選擇抗昆蟲性單子葉農(nóng)作植物的方法。更具體 地，提供了一種在植物細胞和植物中表達時賦予抗昆蟲性的DNA構(gòu)建體。根據(jù)本發(fā)明的一 個方面，提供了一種能夠?qū)胨拗骷毎胁⑶以谄渲袕椭频腄NA構(gòu)建體，所述DNA構(gòu)建體在 植物細胞和植物中表達時賦予所述植物細胞和植物抗昆蟲性。玉米事件DP-004114-3由農(nóng) 桿菌介導的質(zhì)粒PHP27118轉(zhuǎn)化產(chǎn)生。該事件含有crylF、cry34Abl、cry35Abl和pat基因 盒，它們賦予針對某些鱗翅目（Iepidopteran)和鞘翅目（coleopteran)害蟲的抵抗性以及 對膦絲菌素（phosphinothricin)耐受性。
[0012] 具體而言，第一盒含有截短形式的來自蘇云金芽孢桿菌鲇澤變種（Bacillus thuringiensis var.aizawai)的crylF基因。crylF基因的插入賦予針對鱗翅目害蟲損 害的抗性。CrylF蛋白（SEQ ID NO :1)由605個氨基酸組成并且具有大約68kDa的分子 量。crylF基因的表達受玉米多聚遍在蛋白啟動子控制（Christensen et al. (1992)Plant Mol. Biol. 118 (4) :675-89 (Christensen 等人，1992 年，《植物分子生物學》，第 118 卷，第 4 期，第675-689頁）），從而提供CrylF蛋白在玉米中的組成型表達。該區(qū)域還包括與天然多 聚遍在蛋白啟動子相關(guān)聯(lián)的5'非翻譯區(qū)（UTR)和內(nèi)含子。crylF基因的終止子是來自根癌 農(nóng)桿菌（Agrobacterium tumefaciens)Ti 質(zhì)粒 pTil5955 的開放讀框 25(0RF 25)的聚（A) 添加信號（Barker et al. (1983) Plant Mol. Biol. 2 :335-350 (Barker 等人，1983 年，《植物 分子生物學》，第2卷，第335-350頁））。
[0013] 第二盒含有從蘇云金芽孢桿菌菌株P(guān)S149B1分離的cry34Abl基因（美國專利 No. 6, 127, 180、No. 6, 624, 145 和 No. 6, 340, 593)。Cry34Abl 蛋白（SEQ ID NO :2)的長度 是123個氨基酸殘基并且具有大約HkDa的分子量。cry34Abl基因的表達受帶有5' UTR 和內(nèi)含子的玉米多聚遍在蛋白啟動子的第二拷貝控制（Christensen等人，1992年，出處同 上hcrySAAbl 基因的終止子是pinll 終止子（Keil et al. (1986)Nucleic Acids Res.14: 5641-5650 (Keil 等人，1986 年，《核酸研究》，第 14 卷，第 5641-5650 頁）；An et al. (1989) Plant Cell l:115-22(An等人，1989年，《植物細胞》，第1卷，第115-122頁））。
[0014] 第三基因盒含有也從蘇云金芽孢桿菌菌株P(guān)S149B1分離的cry35Abl基因（美國 專利 No. 6, 083, 499、No. 6, 548, 291 和 No. 6, 340, 593)。Cry35Abl 蛋白（SEQ ID NO :3)具 有383個氨基酸的長度和大約44kDa的分子量。Cry34Abl和Cry35Abl蛋白在植物中的同 時表達賦予對鞘翅目昆蟲的抗性。cry35Abl基因的表達受普通小麥（Triticum aestivum) (小麥）過氧化物酶啟動子和前導序列控制（Hertig et al.(1991)Plant Mol. Biol. 16: 171-174 (Hertig等人，1991年，《植物分子生物學》，第16卷，第171-174頁））。cry35Abl 基因的終止子是PinII終止子的第二拷貝（Keil等人，1986年，出處同上；An等人，1989年， 出處同上）。
[0015] 第四也是最后的基因盒含有來自綠色產(chǎn)色鏈霉菌（Streptomyces viridochromogenes)的膦絲菌素乙?；D(zhuǎn)移酶基因（pat)的已經(jīng)針對在玉米中的表達進 行了優(yōu)化的形式。pat基因表達賦予膦絲菌素耐受性的膦絲菌素乙?；D(zhuǎn)移酶（PAT)。PAT 蛋白（SEQ ID NO :4)的長度是183個氨基酸殘基并且具有大約21kDa的分子量。pat基 因的表達受來自CaMV 35S轉(zhuǎn)錄物的啟動子區(qū)和終止子區(qū)控制（Franck et al. (1980)Cell 21 :285-294 (Franck 等人，1980 年，《細胞》，第 21 卷，第 285-294 頁）；0dell et al. (1985) Nature313 :810-812 (Odell 等人，1985 年，《自然》，第 313 卷，第 810-812 頁）；Pietrzak，et al. (1986)Nucleic Acids Res.l4(14) :5857-5868(Pietrzak等人，1986年，《核酸研究》，第 14卷，第14期，第5857-5868頁））。還提供了含有所述DNA構(gòu)建體的植物。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，提供了用于鑒定命名為DP-004114-3的新玉米植物 的組合物和方法。所述方法基于特異性識別DP-004114-3的Y和/或：V側(cè)翼序列的引 物或探針。提供了包含以下引物序列的DNA分子，其中在PCR反應中使用時，所述引物序列 將產(chǎn)生對轉(zhuǎn)基因事件DP-004114-3為獨特的擴增子。包含這些分子的玉米植物和種子是本 發(fā)明的一個實施例。另外，提供了使用這些引物序列以鑒定DP-004114-3事件的試劑盒。
[0017] 本發(fā)明的另外一個實施例涉及本文所述的DP-004114-3的特定側(cè)翼序列，所述 特定側(cè)翼序列可以用來開發(fā)針對生物學樣品中DP-004114-3的特異性鑒定方法。更具體 地，本發(fā)明涉及可以用于開發(fā)特異性引物和探針的DP-004114-3的5'和/或3'側(cè)翼 區(qū)。本發(fā)明的又一個實施例涉及用于基于使用此類特異性引物或探針鑒定生物學樣品中 DP-004114-3的存在的方法。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，提供了檢測樣品中對應玉米事件DP-004114-3的 DNA的存在的方法。此類方法包括：（a)使包含DNA的樣品與DNA引物組接觸，當用于具有從 玉米事件DP-004114-3提取的基因組DNA的核酸擴增反應中時，所述DNA引物組產(chǎn)生判定 玉米事件DP-004114-3的擴增子；(b)進行核酸擴增反應，從而產(chǎn)生所述擴增子；以及（c) 檢測所述擴增子。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，提供了檢測樣品中對應DP-004114-3事件的DNA分 子的存在的方法，此類方法包括：（a)使包含從玉米植物提取的DNA的樣品與DNA探針分 子接觸，所述DNA探針分子在嚴格雜交條件下與從玉米事件DP-004114-3提取的DNA雜 交并且在所述嚴格雜交條件下不與對照玉米植物DNA雜交；(b)使樣品和探針經(jīng)歷嚴格 雜交條件；和（c)檢測所述探針與所述DNA的雜交。更具體地，提供了檢測樣品中對應 DP-004114-3事件的DNA分子的存在的方法，此類方法由以下步驟組成：(a)使包含從玉 米植物提取的DNA的樣品與DNA探針分子接觸，所述DNA探針分子由對于所述事件為獨特 的序列（例如連接序列）組成，其中所述DNA探針分子在嚴格雜交條件下與從玉米事件 DP-004114-3提取的DNA雜交并且在所述嚴格雜交條件下不與對照玉米植物DNA雜交；(b) 使樣品和探針經(jīng)歷嚴格雜交條件；和（c)檢測所述探針與所述DNA的雜交。
[0020] 此外，提供了用于鑒定生物學樣品中的事件DP-004114-3的試劑盒和方法，其檢 出DP-004114-3的特異性區(qū)域。
[0021] 提供了包含DP-004114-3的至少一個連接序列的DNA分子；其中連接序列跨越插 入基因組中的異源DNA與來自玉米細胞的分布在插入位點側(cè)翼的DNA (即側(cè)翼DNA)之間的 接點并且用于判定DP-004114-3事件。
[0022] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，提供了產(chǎn)生抗昆蟲性玉米植物的方法，所述方法包 括以下步驟：(a)將包含賦予抗昆蟲性的本發(fā)明表達盒的第一親本玉米系和缺少抗昆蟲性 的第二親本玉米系有性雜交，從而產(chǎn)生多個子代植物；以及（b)選擇抗昆蟲的子代植物。此 類方法可以任選地包括又一步驟：將所述子代植物與第二親本玉米系回交以產(chǎn)生抗昆蟲的 純種玉米植物。
[0023] 本發(fā)明的又一個實施例提供了產(chǎn)生抵抗昆蟲的玉米植物的方法，所述方法包括用 DNA構(gòu)建體PHP27118轉(zhuǎn)化玉米細胞，將轉(zhuǎn)化的玉米細胞培育成玉米植物，選擇顯示抗昆蟲 性的玉米植物，以及進一步將所述玉米植物培育成能育玉米植物。所述能育玉米植物可以 自我授粉或與相容性玉米品種雜交以產(chǎn)生抗昆蟲性子代。
[0024] 本發(fā)明的另一個實施例還涉及用于鑒定生物學樣品中玉米事件DP-004114-3的 DNA檢測試劑盒。所述試劑盒包括用于PCR鑒定方案中的第一引物和第二引物，所述第一引 物特異性識別DP-004114-3的Y或:V側(cè)翼區(qū)，所述第二引物特異性識別在DP-004114-3 的外來DNA內(nèi)部或在所述側(cè)翼DNA內(nèi)部的序列。本發(fā)明的又一個實施例涉及用于鑒定生物 學樣品中事件DP-004114-3的試劑盒，所述試劑盒包括具有對應下述序列或與下述序列互 補的序列的特異性探針，所述序列與事件DP-004114-3的特定區(qū)域具有80%至100%的序 列同一性。所述探針的序列對應包含事件DP-004114-3的部分5'或3'側(cè)翼區(qū)的特定區(qū) 域。
[0025] 由本發(fā)明實施例涵蓋的方法和試劑盒可以用于不同目的，如，但不限于以下目的： 鑒定植物、植物材料中或產(chǎn)品（如但不限于包含或源自植物材料的（新鮮或加工）食品或 飼料產(chǎn)品）中的事件DP-004114-3 ;額外地或備選地，出于分離轉(zhuǎn)基因材料和非轉(zhuǎn)基因材料 的目的，所述方法和試劑盒可以用來鑒定轉(zhuǎn)基因植物材料；額外地或備選地，所述方法和試 劑盒可以用來確定包含玉米事件DP-004114-3的植物材料的品質(zhì)。所述試劑盒也可以含有 為執(zhí)行所述檢測方法所必需的試劑和材料。
[0026] 本發(fā)明的又一個實施例涉及DP-004114-3玉米植物或其部分，包括、但不限于玉 米植物DP-004114-3及源自其的子代的花粉、胚珠、營養(yǎng)細胞、花粉細胞的核和卵細胞的 核。DNA引物分子從中提供特定擴增子產(chǎn)物的DP-004114-3玉米植物和種子是本發(fā)明的一 個實施例。
[0027] 本發(fā)明的前述和其他方面將會因以下詳細描述和附圖變得更顯而易見。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0028] 圖1.帶有所示遺傳元件和Hind III限制性酶位點的質(zhì)粒PHP27118的示意圖。質(zhì) 粒大小是549IObp (堿基對）。
[0029] 圖2.顯示crylF、cry34Abl、cry35Abl和pat基因（箭頭）連同它們的相應調(diào)節(jié) 元件的T-DNA的示意圖。顯示了 T-DNA內(nèi)部的Hind III限制性酶位點。T-DNA的大小是 11978bp。
[0030] 圖3. DP-004114-3的轉(zhuǎn)化和發(fā)育的示意圖。
[0031] 圖4.在相同遺傳背景（DP-004114-3玉米，等位基因系作為陰性對照）下，在使用 玉米雜種籽苗的亞致死性籽苗測定法中，西方玉米根蟲（WCRW)幼蟲發(fā)育作用。結(jié)果基于三 次重復。各直方圖顯示在卵孵化17日處于三個齡期中每一齡期的幼蟲的百分數(shù)。向齡期 3偏移表示功效下降。
[0032] 圖5. 4114玉米中經(jīng)測序的插入?yún)^(qū)和基因組邊界區(qū)的示意圖。該圖顯示從4114玉 米基因組DNA產(chǎn)生的經(jīng)克隆和測序的PCR片段：片段A至F。垂直的虛線代表基因組邊界/ 插入接點。片段G和H分別代表5'和3'基因組邊界區(qū)。圖未按比例繪制。
[0033] 發(fā)明詳述
[0034] 提供以下定義和方法以更好地限定本發(fā)明并引導本領(lǐng)域普通技術(shù)人員實施本發(fā) 明。除非另外說明，否則術(shù)語將根據(jù)相關(guān)領(lǐng)域普通技術(shù)人員的常規(guī)用法進行理解。分子 生物學中常見術(shù)語的定義也可以在Rieger et al·，Glossary of Genetics !Classical and Molecular，5thedition，Springer-Verlag ;New York，1991 (Rieger 等人，《經(jīng)典遺傳學 和分子遺傳學詞匯》，第5版，施普林格出版社，紐約，1991年）；和Lewin，GenesV，Oxford University Press :New York，1994 (Lewin，《基因 V》，牛津大學出版社，紐約，1994年）中找 至IJ。使用如在37 CFR § 1，822處所述的DNA堿基命名。
[0035] 下表描述本文件通篇范圍內(nèi)和尤其是實例部分中所用的縮寫。
[0036] 縮寫表
[0037]

【權(quán)利要求】
1. 一種擴增子，其包含選自SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :35及其全長互補序列的核酸序 列。
2. -種源自玉米事件DP-004114-3植物、組織或種子的生物學樣品，其中所述樣品包 含核苷酸序列，所述核苷酸序列為選自SEQ ID N0:32和SEQ ID N0:35的序列或與選自SEQ ID NO :32和SEQ ID NO :35的序列互補，其中所述核苷酸序列是使用核酸擴增或核酸雜交 方法在所述樣品中可檢測的，其中所述玉米事件DP-004114-3種子的代表性樣品已經(jīng)以登 錄號PTA-11506存放于美國典型培養(yǎng)物保藏中心（ATCC)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的生物學樣品，其中所述生物學樣品包含轉(zhuǎn)基因玉米事件 DP-004114-3的植物、組織或種子。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的生物學樣品，其中所述生物學樣品是從所述轉(zhuǎn)基因玉米植物 事件DP-004114-3提取的DNA樣品，并且其中所述DNA樣品包含選自SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :35及其互補序列的核苷酸序列中的一個或多個。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的生物學樣品，其中所述生物學樣品選自玉米粉、玉米柏、玉米 漿、玉米油、玉米淀粉及經(jīng)完全或部分地加工以含有玉米副產(chǎn)物的谷類物。
6. -種提取物，其源自玉米事件DP-004114-3植物、組織或種子并且包含核苷酸序列， 所述核苷酸序列為選自SEQ ID NO :32和SEQ ID NO :35的序列或與選自SEQ ID NO :32和 SEQ ID NO :35的序列互補，其中所述玉米事件DP-004114-3種子的代表性樣品已經(jīng)以登錄 號PTA-11506存放于美國典型培養(yǎng)物保藏中心（ATCC)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的提取物，其中所述核苷酸序列是使用核酸擴增或核酸雜交方 法在所述提取物中可檢測的。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的提取物，其中所述提取物包含轉(zhuǎn)基因玉米植物事件 DP-004114-3的植物、組織或種子。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的提取物，還包含選自玉米粉、玉米柏、玉米漿、玉米油、玉米淀 粉和經(jīng)完全或部分地加工以含有玉米副產(chǎn)物的谷類物的組合物，其中所述組合物包含可檢 測量的所述核苷酸序列。
10. -種確定生物學樣品中包含玉米事件DP-004114-3的玉米植物的DNA接合性的方 法，所述方法包括： (a) 使所述樣品與選自SEQ ID NO :29和30的引物對、或選自SEQ ID NO :33和34的 引物對接觸，使得 (1) 當在包含玉米事件DP-004114-3 DNA的核酸擴增反應中使用時，產(chǎn)生判定玉米事 件DP-004114-3的第一擴增子，并且 (2) 當在包含除DP-004114-3 DNA之外的玉米基因組DNA的核酸擴增反應中使用時，產(chǎn) 生判定除DP-004114-3 DNA之外的玉米基因組DNA的第二擴增子； (b) 進行核酸擴增反應；以及 (c) 檢測如此產(chǎn)生的所述擴增子，其中檢測到兩種擴增子的存在指示所述樣品是對玉 米事件DP-004114-3 DNA雜合的，其中僅檢測到所述第一擴增子指示所述樣品是對玉米事 件 DP-004114-3DNA 純合的。
11. 一對多核苷酸引物，其包含第一多核苷酸引物和第二多核苷酸引物，其中所述第一 多核苷酸引物包含SEQ ID NO :29的所述核苷酸序列及其互補序列；并且所述第二多核苷 酸引物包含SEQ ID NO :30的所述核苷酸序列及其互補序列，所述多核苷酸引物在樣品中存 在DP-004114-3 DNA模板的情況下一起發(fā)揮作用以產(chǎn)生判定事件DP-004114-3的擴增子。
12. -種試劑盒，其用于檢測對于事件DP-004114-3為獨特的核酸，所述試劑盒包含由 SEQ ID N0:29和30、或SEQ ID N0:33和34、及其互補序列組成的引物對，所述序列在核酸 檢測方法中充當引物對，并且在擴增或雜交于樣品中的靶核酸序列接著檢測所述靶序列的 擴增子或與所述靶序列的雜交時，判定所述樣品中對于事件DP-004114-3為獨特的核酸序 列的存在。
【文檔編號】C12Q1/68GK104411828SQ201380028463
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2013年3月28日 優(yōu)先權(quán)日:2012年3月30日
【發(fā)明者】C.M.阿拉孔, M.C.哈蒙, M.A.帕斯夸爾, J.C.雷吉斯特三世, C.J.塞隆格, J.K.楊, C.X.鐘 申請人:先鋒國際良種公司, 納幕爾杜邦公司