一種富含納豆激酶和Monaclin K的豆豉的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種富含納豆激酶和Monaclin?K的豆豉的制備方法，具體如下：1）制備發(fā)芽黃豆，滅菌后得到發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基；2）制備功能紅曲種子；3）將紅曲種子，無(wú)菌水，0.2%的無(wú)菌冰醋酸溶液混合后制成曲種漿接種于發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基，發(fā)酵后加入葡萄糖；4）將納豆芽孢桿菌接種于步驟3）中獲得的基質(zhì)發(fā)酵；5）通風(fēng)干燥。本發(fā)明采用發(fā)芽黃豆為原料，發(fā)芽黃豆富積大量的γ-氨基丁酸，有利于緩解心腦血管疾??；利用紅曲分泌紅曲霉紅素以及酯化酶，增強(qiáng)了產(chǎn)品的色、香味；紅曲菌代謝產(chǎn)生的Monaclin?K以及納豆菌產(chǎn)生的納豆激酶，使該產(chǎn)品具有富含活性物質(zhì)，有利于減緩解血栓疾病和心腦血管病的發(fā)病率。
【專利說(shuō)明】—種富含納豆激酶和Monacl in K的豆豉的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及發(fā)酵領(lǐng)域,具體涉及一種富含納豆激酶和Monaclin K的功能型豆豉的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]血栓性疾病可導(dǎo)致心肌梗塞、腦血栓中風(fēng)、急性肺原性心臟病等相關(guān)性疾病，因其發(fā)病率高，復(fù)病率高，而且難以根治，已成為威脅人類健康的主要疾病。因此，近幾年來(lái)就如何有效的治愈血栓性疾病，引起了醫(yī)學(xué)界、科技界高度重視。1987年日本須見(jiàn)洋行博士發(fā)現(xiàn)納豆中的強(qiáng)纖溶物質(zhì)納豆激酶(Nattokinase，NK)，并證明具有高效的溶栓作用。它不僅可通過(guò)口服直接溶解血栓，而且還能激活體內(nèi)的纖溶酶原進(jìn)而增加內(nèi)源性纖溶酶的活性。相比臨床上的溶栓藥物(尿激酶(SK)、蚓激酶和組織型纖溶酶原激活劑)，納豆激酶具有高效的溶纖活性、安全性好、生產(chǎn)成本低、無(wú)毒副作用、半衰期長(zhǎng)、在胃腸的穩(wěn)定性好等諸多優(yōu)點(diǎn)。
[0003]莫納可林K (Monaclin K)是紅曲中的重要活性物質(zhì)，是人體膽固醇生物合成的關(guān)鍵酶HMG.CoA還原酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，可有效降低人體內(nèi)有害膽固醇低密度膽固醇的水平，是用于治療心血管疾病的最重要的藥物之一。Monacolin K也是目前世界醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的降低人膽固醇的理想藥物，具有高效、低毒的特點(diǎn)。Y-氨基丁酸(GABA)是一種非蛋白質(zhì)氨基酸，為哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，有降血壓、促進(jìn)腦機(jī)能、促進(jìn)長(zhǎng)期記憶和生長(zhǎng)激素的分泌等功能。
[0004]隨著我國(guó)人口老齡化的加劇，以及由肥胖帶來(lái)的日益增多的高血壓，高血脂，高膽固醇病人，開(kāi)發(fā)同時(shí)具有降血栓，降血脂，降膽固醇的保健食品具有重要的意義。
[0005]通過(guò)這兩種菌珠的混合發(fā)酵制備富含納豆激酶和Monaclin K的新型豆豉產(chǎn)品，不但可以緩解血栓、降低血脂和降低膽固醇，而且色澤鮮美、具有特殊的風(fēng)味。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種富含納豆激酶和Monaclin K的豆豉的制備方法，方法簡(jiǎn)單，易行適于大規(guī)模生產(chǎn)，利用本發(fā)明的方法制備的豆豉，不但可以緩解血栓、降低血脂和降低膽固醇，而且色澤鮮美、具有特殊的風(fēng)味。利用本發(fā)明所述方法制得的豆豉，納豆激酶的含量為 3420— 3750IU/g，Monaclin K 的含量在 1.2-1.7mg/g。
[0007]一種富含納豆激酶和Monaclin K的豆豉的制備方法，具體如下:
[0008](I)按照常規(guī)方法制備發(fā)芽黃豆，并滅菌，得到發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基，其含水量為35% ?45% (w/w)；
[0009](2)將功能紅曲經(jīng)麥芽汁培養(yǎng)基活化后，接種于麥芽汁斜面培養(yǎng)基上，30°C培養(yǎng)6天，用0.2% (v/v)無(wú)菌冰醋酸溶液洗脫斜面孢子，功能紅曲孢子懸液濃度> IO8個(gè)/mL，按體積質(zhì)量比以10%接種在已滅菌的萌芽米中，置于30°C的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)8?9d，在40?45°C下進(jìn)行烘干，水分降到12%以下，不低于7%，獲得功能紅曲種子；[0010](3)將紅曲種子,無(wú)菌水,0.2% (v/v)的無(wú)菌冰醋酸溶液按照6:1:3 (w:v:v)的比例進(jìn)行混合，浸泡2h，然后磨漿，即為曲種漿。將曲種漿按照質(zhì)量比為8-10%接種于發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基，拌合均勻。采取變溫發(fā)酵，前期30°C，恒溫培養(yǎng)5-7d，后期轉(zhuǎn)入23°C -26 °C恒溫培養(yǎng)15-20d，發(fā)酵完成后按照葡萄糖與發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基的質(zhì)量比為2%加入葡萄糖，得到固體基質(zhì)；
[0011](4)將培養(yǎng)至生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的納豆芽孢桿菌種子液以6-8% (v/w)的接種量接種于步驟(3)制得的固體基質(zhì)進(jìn)行混合發(fā)酵培養(yǎng)，33-37°C恒溫培養(yǎng)24-48h，并加入3% (w/w)的鹽，于4°C后熟24h，終止發(fā)酵；
[0012](5)通風(fēng)干燥:40°C下通風(fēng)干燥，水分含量在25%_30%，即得到了豆豉。
[0013]所述的納豆芽孢桿菌種子液是將納豆芽孢桿菌經(jīng)LB平板活化后，接種LB液體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)8-12h即得，OD660值為0.8-1.2。
[0014]優(yōu)選的，所述的納豆芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌(BaciIIus subtilis)BN-05,CCTCCNO:M2013530，保藏單位:中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:中國(guó)武漢武漢大學(xué)；保藏日期:2013年11月3日。
[0015]優(yōu)選的，發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基的含水量為40%;
[0016]優(yōu)選的，納豆芽孢桿菌接種量為8% ；
[0017]優(yōu)選的，接種納豆芽孢桿菌后，培養(yǎng)的最佳溫度是35°C ；
[0018]優(yōu)選的，接種納豆芽孢桿菌后，培養(yǎng)的最佳時(shí)間為24h。
[0019]優(yōu)選的，麥芽汁培養(yǎng)基中麥芽汁的波美度為5.5-6.0 (25°C)。
[0020]優(yōu)選的，發(fā)芽黃豆的芽長(zhǎng)為l_2mm。
[0021]優(yōu)選的，采用本發(fā)明所述的方法進(jìn)行發(fā)芽黃豆的制備，具體步驟如下:
[0022]精選黃豆，去除無(wú)胚粒、未成熟顆粒及雜質(zhì)，用自來(lái)水沖洗三遍，洗去表面的灰塵，然后用0.05% (w/v)NaC10溶液浸泡20_30min，再用純凈水沖洗3_5min去除表面的NaClO,浙干水分后，再加入蒸餾水在20-25°C下浸種，浸泡6?8h。浸泡完成后，浙干水分，將黃豆均勻地?cái)傇诘撞坑行】椎慕?jīng)過(guò)消毒的培養(yǎng)籃中，蓋上已消毒的紗布，在紗布上面噴灑適量的純凈水，移入23°C的恒溫培養(yǎng)箱中，每隔2h噴灑適量的純凈水以保持黃豆的濕度，每隔8h用純凈水沖洗黃豆以免被霉菌污染，整個(gè)發(fā)芽過(guò)程，濕度控制在80-95%，發(fā)芽時(shí)間為26-30h,芽長(zhǎng)為l-2mm即可，把發(fā)芽黃豆置于高壓鍋中115°C蒸煮30min，冷卻至20?30°C。以上所述菌株或原料，如未特別說(shuō)明，從市場(chǎng)上購(gòu)得的均能完成本發(fā)明。
[0023]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0024]1.采用發(fā)芽黃豆為原料，發(fā)芽黃豆富積大量的Y-氨基丁酸，有利于緩解心腦血管疾??；
[0025]2.利用紅曲分泌紅曲霉紅素以及酯化酶，增強(qiáng)了產(chǎn)品的色、香味；
[0026]3.紅曲菌代謝產(chǎn)生的Monaclin K以及納豆菌產(chǎn)生的納豆激酶，使該產(chǎn)品具有富含活性物質(zhì)，有利于減緩解血栓疾病和心腦血管病的發(fā)病率。
[0027]4.該方法工藝操作簡(jiǎn)單，成本低廉。
【具體實(shí)施方式】
[0028]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，但不限定本發(fā)明。所有的設(shè)備和原料等均可從市場(chǎng)購(gòu)得或是本行業(yè)常用的。本發(fā)明所述實(shí)驗(yàn)方法或表述方式，如未特別說(shuō)明，均為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。
[0029]實(shí)施例1:
[0030]一種發(fā)芽黃豆的制備方法，具體如下:
[0031]精選黃豆，去除無(wú)胚粒、未成熟顆粒及雜質(zhì)，用自來(lái)水沖洗三遍，洗去表面的灰塵，然后用0.05% (w/v)NaC10溶液浸泡30min，再用純凈水沖洗5min去除表面的NaCIO，浙干水分后，再加入蒸餾水在25°C下浸種，浸泡6h。浸泡完成后，浙干水分，將黃豆均勻地?cái)傇诘撞坑行】椎慕?jīng)過(guò)消毒的培養(yǎng)籃中，蓋上已消毒的紗布，在紗布上面噴灑適量的純凈水，移A 230C的恒溫培養(yǎng)箱中，每隔2h噴灑適量的純凈水以保持黃豆的濕度，每隔8h用純凈水沖洗黃豆以免被霉菌污染，整個(gè)發(fā)芽過(guò)程，濕度控制在80-95%，發(fā)芽時(shí)間為28h，芽長(zhǎng)為l-2mm即可。把發(fā)芽黃豆置于高壓鍋中115°C蒸煮30min，冷卻至20°C，既得發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基，根據(jù)不同含水量的要求，浙水，稱重。
[0032]實(shí)施例2:
[0033]一種富含納豆激酶和Monaclin K的豆豉的制備方法，具體如下:
[0034](I)功能紅曲純種發(fā)酵培養(yǎng):將功能紅曲經(jīng)麥芽汁培養(yǎng)基活化后,接種于麥芽汁斜面培養(yǎng)基上，30°C培養(yǎng)6天，用0.2% (v/v)無(wú)菌冰醋酸溶液洗脫斜面孢子，紅曲孢子懸液濃度6X IO8個(gè)/mL，按體積質(zhì)量比以10%接種在已滅菌的萌芽米中，置于30°C的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)8d，在45°C下進(jìn)行烘干，水分為10%。然后用干凈塑料袋裝好，放在陰涼出保存。
[0035]所述的麥芽汁培養(yǎng)基的配方為:波美度為6的麥芽汁,2.5%瓊脂，pH自然。
[0036]所述的功能紅曲為紫色紅曲CICC5046 ；
[0037]將紅曲種子，無(wú)菌水，0.2%的無(wú)菌冰醋酸溶液按6:l:3(w:v:v)的比例混合后，浸泡2h，然后磨漿，即為曲種漿。將曲種漿按8%的接種量添加于實(shí)施例1中制備的已滅菌的發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基(含水量為35%)上，拌合均勻。采取變溫發(fā)酵，前期30°C，恒溫培養(yǎng)5d，后期轉(zhuǎn)入26°C恒溫培養(yǎng)15d，再按照葡萄糖與發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基的質(zhì)量比為2%加入葡萄糖；。
[0038](2)將生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的枯草芽孢桿菌種子液(CCTCC NO:M2013530)以6%的接種量(與發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基的體積質(zhì)量比)接種于紅曲純種發(fā)酵的黃豆上進(jìn)行混合發(fā)酵培養(yǎng)，33°C恒溫培養(yǎng)24h，并加入3%的細(xì)鹽，于4°C后熟24h，終止發(fā)酵。
[0039](3)通風(fēng)干燥:40°C下通風(fēng)干燥，水分含量為28%，即得豆豉。
[0040]所述的枯草芽孢桿菌種子液是將納豆芽孢桿菌經(jīng)LB平板活化后，接種于50mL LB液體種子培養(yǎng)基中于35°C，180r/min的條件下培養(yǎng)10h，OD660值為1.2。
[0041]測(cè)得豆豉中納豆激酶的含量為3479.74IU/g，Monaclin K的含量在1.28mg/g。
[0042]實(shí)施例3:
[0043]一種富含納豆激酶和Monaclin K的豆豉的制備方法，具體如下:
[0044](I)紅曲純種發(fā)酵培養(yǎng):步驟與實(shí)施例2相同。
[0045]將曲種漿按10%的接種量漿添加于實(shí)施例1中制備的已滅菌的發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基(含水量為40%)中，拌合均勻。采取變溫發(fā)酵，前期30°C，恒溫培養(yǎng)5d，后期轉(zhuǎn)入23°C恒溫培養(yǎng)20d，再按照葡萄糖與發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基的質(zhì)量比為2%加入葡萄糖；
[0046](2)將生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的枯草芽孢桿菌種子液(CCTCC NO:M2013530, OD值為1.2)以8%的接種量(與發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基的體積質(zhì)量比)接種于紅曲純種發(fā)酵的黃豆上進(jìn)行混合發(fā)酵培養(yǎng)，35°C恒溫培養(yǎng)24h，并加入3%的細(xì)鹽，于4°C后熟24h，終止發(fā)酵。
[0047](3)通風(fēng)干燥:40°C下通風(fēng)干燥，即得到了豆豉。
[0048]所述的枯草芽孢桿菌種子液是將納豆芽孢桿菌經(jīng)LB平板活化后，接種于50mL LB液體種子培養(yǎng)基中于35°C，180r/min的條件下培養(yǎng)10h，OD660值為1.2。
[0049]測(cè)得豆豉中納豆激酶的含量為3742.45IU/g，Monaclin K的含量在1.66mg/g。
【權(quán)利要求】
1.一種富含納豆激酶和Monaclin K的豆豉的制備方法，具體如下: (1)按照常規(guī)方法制備發(fā)芽黃豆，并滅菌，得到發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基，其含水量為35%"45% ； (2)將功能紅曲經(jīng)麥芽汁培養(yǎng)基活化后，接種于麥芽汁斜面培養(yǎng)基上，30°C培養(yǎng)6天，用0.2 %體積比的無(wú)菌冰醋酸溶液洗脫斜面孢子，紅曲孢子懸液濃度> IO8個(gè)/mL，按體積質(zhì)量比以10%接種在已滅菌的萌芽米中，置于30°C的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)8?9d，在40?45°C下進(jìn)行烘干，水分降到12%以下，不低于7%，獲得功能紅曲種子； (3)將紅曲種子,無(wú)菌水,0.2%的無(wú)菌冰醋酸溶液按照6:1:3,w:v:v的比例混合,浸泡2h，然后磨漿，將曲種漿按照質(zhì)量比為8-10%接種于發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基，拌合均勻； 采取變溫發(fā)酵，前期30°C，恒溫培養(yǎng)5-7d，后期轉(zhuǎn)入23°C -26°C恒溫培養(yǎng)15_20d，發(fā)酵完成后按照葡萄糖與發(fā)芽黃豆固體培養(yǎng)基的質(zhì)量比為2%加入葡萄糖，得到固體基質(zhì)； (4)將培養(yǎng)至生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的納豆芽孢桿菌種子液以6-8%的接種量接種于步驟(3)制得的固體基質(zhì)進(jìn)行混合發(fā)酵培養(yǎng)，33-37°C恒溫培養(yǎng)24-48h，并加入3%的鹽，于4°C后熟24h，終止發(fā)酵； (5)通風(fēng)干燥:40°C下通風(fēng)干燥，水分含量在25%-30%，即得到了豆豉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的納豆芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis) BN-05, CCTCC NO:M2013530。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的麥芽汁培養(yǎng)基中的麥芽汁的波美度為5.5-6。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，發(fā)芽黃豆芽長(zhǎng)為l_2mm。
【文檔編號(hào)】A23L1/23GK103766781SQ201410009321
【公開(kāi)日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2014年1月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月9日
【發(fā)明者】高冰, 高澤鑫, 王常蘇 申請(qǐng)人:湖北工業(yè)大學(xué)