分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒及其測(cè)試方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種安全有效、操作方便、測(cè)試時(shí)間短、測(cè)試藥物范圍廣的分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒及其測(cè)試方法。本發(fā)明所述分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒包括盒體（1），在所述盒體（1）內(nèi)包括有若干藥敏培養(yǎng)基（2）、藥敏測(cè)試板（3）、無(wú)菌吸嘴（4）、無(wú)菌稀釋液（5）、雜菌抑制劑（6）、說(shuō)明書和報(bào)告簽，所述藥敏培養(yǎng)基（2）由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、促生長(zhǎng)劑和抑菌劑組成，所述藥敏測(cè)試板（3）上設(shè)置有陰性對(duì)照孔（31）、陽(yáng)性對(duì)照孔（32）和若干個(gè)呈矩陣排列的且包被有不同抗結(jié)核藥物的含藥孔（33）。本發(fā)明可應(yīng)用于結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)領(lǐng)域。
【專利說(shuō)明】分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒及其測(cè)試方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種體外診斷試劑，具體涉及一種分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒及其測(cè)試方法。
【背景技術(shù)】 [0002]結(jié)核病是當(dāng)今世界上傳染病中主要?dú)⑹?，已?duì)國(guó)際公共衛(wèi)生構(gòu)成嚴(yán)重挑戰(zhàn)。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)告，目前全球已有20億人感染結(jié)核菌，每年約有300萬(wàn)死于結(jié)核病，2006年全球新發(fā)患者數(shù)高達(dá)920萬(wàn)例，死亡170萬(wàn)例，即每天超過(guò)4600人死于結(jié)核病，每年死于結(jié)核病的成年人多于艾滋病、瘧疾和熱帶病死亡人數(shù)的總和。耐藥結(jié)核菌、尤其是耐多藥(MDR)和嚴(yán)重耐多藥(XDR)結(jié)核菌的出現(xiàn)是結(jié)核病死灰復(fù)燃的主要原因之一。MDR結(jié)核菌對(duì)異煙肼和利福平這兩種目前最主要的抗結(jié)核藥物耐藥，XDR結(jié)核菌除對(duì)異煙肼和利福平耐藥外，還對(duì)二線抗結(jié)核藥物耐藥。WHO監(jiān)測(cè)顯示，全球已有100多個(gè)國(guó)家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)MDR結(jié)核菌感染，45個(gè)國(guó)家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)XDR結(jié)核菌感染。我國(guó)也被列為耐藥結(jié)核菌感染“需引起警示的熱點(diǎn)地區(qū)”之一，總耐藥率達(dá)27.8%，MDR結(jié)核菌感染達(dá)10.7%，遠(yuǎn)高于世界平均水平。更嚴(yán)重的是，我國(guó)個(gè)別地區(qū)已發(fā)現(xiàn)XDR結(jié)核菌感染，上海、北京、山東等地區(qū)MDR結(jié)核病患者中6%~20%為XDR結(jié)核菌感染。耐藥結(jié)核病不僅治療周期長(zhǎng)、使用一線藥物副作用大，而且治愈率低、患者死亡率高(XDR結(jié)核病患者死亡率高達(dá)30%~98%)，為結(jié)核病控制帶來(lái)了新的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。高耐藥率不僅對(duì)結(jié)核患者的治療帶來(lái)很大困難，而且將加劇結(jié)核病的流行，對(duì)人群的傳播、發(fā)病和死亡造成極大的威脅，因此耐多藥結(jié)核病的診斷與治療成為控制結(jié)核病的關(guān)鍵。
[0003]傳統(tǒng)的結(jié)核藥敏實(shí)驗(yàn)主要是基于羅氏固體培養(yǎng)基的絕對(duì)濃度法和比例法，由于分枝桿菌生長(zhǎng)緩慢，其藥敏檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)需要4周才能報(bào)告藥敏結(jié)果。無(wú)法及時(shí)有效的指導(dǎo)臨床用藥，耽誤病人的病情。世界衛(wèi)生組織大力提倡采用液體培養(yǎng)基的藥敏測(cè)定技術(shù)，但是目前臨床上可以使用的基于液體的藥敏測(cè)定試劑，需要昂貴的儀器設(shè)備，且檢測(cè)成本較高，限制了其推廣應(yīng)用。同時(shí)國(guó)內(nèi)對(duì)基于液體的分枝桿菌微量藥敏的檢測(cè)方法有大量的文獻(xiàn)資料，但是目前國(guó)內(nèi)可用于臨床的市場(chǎng)化商品盒還沒(méi)有。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種安全有效、操作方便、測(cè)試時(shí)間短、測(cè)試藥物范圍廣的分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒及其測(cè)試方法。
[0005]本發(fā)明所述分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒所采用的技術(shù)方案是:所述試劑盒包括盒體，在所述盒體內(nèi)包括有若干藥敏培養(yǎng)基、藥敏測(cè)試板、無(wú)菌吸嘴、無(wú)菌稀釋液和雜菌抑制齊?，所述藥敏培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、促生長(zhǎng)劑和抑菌劑組成，所述藥敏測(cè)試板上設(shè)置有陰性對(duì)照孔、陽(yáng)性對(duì)照孔和若干個(gè)呈矩陣排列的且包被有不同抗結(jié)核藥物的含藥孔。
[0006]所述無(wú)菌稀釋液為鉀鹽和鈉鹽無(wú)菌溶液。
[0007]所述雜菌抑制劑為多粘菌素B、兩性霉素B、萘啶酸、阿洛西林和甲氧芐啶的凍干制劑。
[0008]在所述含藥孔內(nèi)包被的抗結(jié)核藥物包括利福平、異煙肼、鏈霉素、乙胺丁醇、氧氟沙星、左氧氟沙星、阿米卡星、卷曲霉素、莫西沙星、卡那霉素、對(duì)氨基水楊酸、利福噴丁、利福布丁、克拉霉素、氯法齊明、亞胺培南或利奈唑胺。
[0009]所述藥敏測(cè)試板為26孔、48孔或96孔板。
[0010]所述藥敏測(cè)試板上的陰性對(duì)照孔、陽(yáng)性對(duì)照孔和含藥孔為直徑為6~10mm，深度為8~12mm的圓底形微孔，通過(guò)貼膜或外蓋進(jìn)行密封。
[0011]所述雜菌抑制劑為通過(guò)真空冷凍干燥制得的凍干雜菌抑制劑。
[0012]采用上述分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒進(jìn)行分枝桿菌檢測(cè)的方法包括以下步驟:
(I)取出凍干雜菌抑制劑，旋開(kāi)瓶蓋，將無(wú)菌稀釋液全部加入后充分搖勻；
(2 )取出藥敏培養(yǎng)基及藥敏測(cè)試板，使它們?cè)诮臃N標(biāo)本前接近室溫；吸取混合均勻的雜菌抑制劑加入藥敏培養(yǎng)基，充分混合均勻；
(3)用無(wú)菌吸嘴吸取經(jīng)過(guò)步驟(2)處理過(guò)的藥敏培養(yǎng)基加入到陰性對(duì)照孔；
(4)將分枝桿菌培養(yǎng)菌株磨菌比池至lmg/ml,加入一支新的藥敏培養(yǎng)基中混勻；在所述藥敏測(cè)試板上的含藥孔內(nèi)接種含有菌液的藥敏培養(yǎng)基，貼膜或蓋好外蓋置37°C溫箱培養(yǎng);
(5)7-10天后觀察結(jié)果，孔底出現(xiàn)白色菌體沉淀的為陽(yáng)性，則表示在該孔有細(xì)菌生長(zhǎng)，根據(jù)各含藥孔、對(duì)照孔的生長(zhǎng)結(jié)果判斷藥物敏感性。
[0013]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明所述試劑盒提供完整的配套試劑及指導(dǎo)說(shuō)明，臨床用戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇不同規(guī)格的微孔板對(duì)臨床結(jié)核病人的藥物敏感度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)用藥，減少耐藥菌株的產(chǎn)生。采用本發(fā)明的分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒及測(cè)試方法7~10 d既可提供簡(jiǎn)單明了的藥敏判斷結(jié)果，又可以獲得菌型結(jié)果，比羅氏的藥敏檢測(cè)時(shí)間大大縮短，且僅需肉眼判讀結(jié)果，不需要昂貴的儀器設(shè)備，具有準(zhǔn)確、快速、低成本和操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)，是一種安全有效、操作方便、測(cè)試時(shí)間短、測(cè)試藥物范圍廣的分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1是本發(fā)明試劑盒的簡(jiǎn)易結(jié)構(gòu)示意圖；
圖2是實(shí)施例一中所述藥敏測(cè)試板的簡(jiǎn)易結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015]本發(fā)明所述試劑盒包括盒體I,在所述盒體I內(nèi)包括有若干藥敏培養(yǎng)基2、藥敏測(cè)試板3、無(wú)菌吸嘴4、無(wú)菌稀釋液5、雜菌抑制劑6、說(shuō)明書和報(bào)告簽，所述藥敏培養(yǎng)基2由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、促生長(zhǎng)劑和抑菌劑組成，所述藥敏測(cè)試板3上設(shè)置有陰性對(duì)照孔31、陽(yáng)性對(duì)照孔32和若干個(gè)呈矩陣排列的且包被有不同抗結(jié)核藥物的含藥孔33。下面就具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步闡述:
實(shí)施例一:
在本實(shí)施例中，本發(fā)明包括以下部分:
1、分枝桿菌藥敏培養(yǎng)基由棕色玻璃螺口瓶灌裝為IOml/支，共20支/盒。
[0016]2、分枝桿菌藥敏測(cè)試板為26孔微孔板，共20條，每條由無(wú)菌三邊封鋁箔袋密封，其中同時(shí)密封I個(gè)無(wú)菌吸嘴方便客戶使用。26孔微孔板示意圖如圖2所示。
[0017]3、無(wú)菌稀釋液為3ml/支的鉀鹽和鈉鹽無(wú)菌溶液，用防盜滴瓶灌裝。
[0018]4、雜菌抑制劑為多粘菌素B、兩性霉素B、萘啶酸、阿洛西林、甲氧芐啶的凍干制劑，將多粘菌素B、兩性霉素B、萘啶酸、阿洛西林、甲氧芐啶的混合藥液通過(guò)真空冷凍干燥工藝制得。
[0019]5、采用分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒進(jìn)行分枝桿菌的藥敏測(cè)試:
(I)取出凍干雜菌抑制劑，旋開(kāi)瓶蓋，將無(wú)菌稀釋液全部加入瓶?jī)?nèi)后充分搖勻。
[0020](2)取出藥敏培養(yǎng)基及藥敏測(cè)試板，使其在接種標(biāo)本前接近室溫，吸取IOOul混合均勻的雜菌抑制劑加入藥敏培養(yǎng)基，充分混合均勻。
[0021](3)用無(wú)菌吸嘴吸取200ul上述藥敏培養(yǎng)基加入到兩個(gè)陰性對(duì)照孔。
[0022](4)將培養(yǎng)菌株磨菌比濁至lmg/ml，取IOOul加入到一支新的藥敏培養(yǎng)基中，混勻。每孔加200ul含有菌液的藥敏培養(yǎng)基(除上述2孔)，貼膜后置37°C溫箱培養(yǎng)。
[0023](5)7-10天后觀察結(jié)果，孔底出現(xiàn)白色菌體沉淀的為陽(yáng)性，則表示在該孔有細(xì)菌生長(zhǎng)，根據(jù)各含藥孔、對(duì)照孔的生長(zhǎng)結(jié)果判斷藥物敏感性。陰性對(duì)照孔C一第I列:上下孔中無(wú)任何變化；陽(yáng)性對(duì)照孔C+第2列:兩孔孔底有白色菌體沉淀生成，說(shuō)明該孔有細(xì)菌生長(zhǎng)為陽(yáng)性；菌型PNB鑒定孔第3列:上下孔中無(wú)任何變化，說(shuō)明為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群感染；藥敏區(qū)鏈霉素SM兩孔孔底有白色菌體沉淀生成，說(shuō)明對(duì)鏈霉素SM耐藥；異煙肼INH兩孔孔底有白色菌體沉淀生成，說(shuō)明對(duì)異煙肼INH耐藥；利福平RFP、乙胺丁醇EMB、氧氟沙星0FLX、左氧氟沙星LVFX、莫西沙星Μ0Χ、阿米卡星AMK、卡那霉素ΚΑΝ、卷曲霉素CPM上下孔中無(wú)任何變化，說(shuō)明對(duì)這些藥敏感。
`[0024]實(shí)施例二:
在本實(shí)施例中，本發(fā)明包括以下部分:
1、分枝桿菌藥敏培養(yǎng)基由棕色玻璃螺口瓶灌裝為20ml/支，共10支/盒。
[0025]2、分枝桿菌藥敏測(cè)試板為96孔微孔板，共10條，每條由無(wú)菌三邊封鋁箔袋密封，其中同時(shí)密封I個(gè)無(wú)菌吸嘴方便客戶使用。
[0026]96孔微孔板藥物濃度分布表
【權(quán)利要求】
1.一種分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒，其特征在于:它包括盒體(1)，在所述盒體(1)內(nèi)包括有若干藥敏培養(yǎng)基(2)、藥敏測(cè)試板(3)、無(wú)菌吸嘴(4)、無(wú)菌稀釋液(5)和雜菌抑制劑(6)，所述藥敏培養(yǎng)基(2)由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、促生長(zhǎng)劑和抑菌劑組成，所述藥敏測(cè)試板(3)上設(shè)置有陰性對(duì)照孔(31)、陽(yáng)性對(duì)照孔(32)和若干個(gè)呈矩陣排列的且包被有不同抗結(jié)核藥物的含藥孔(33)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述無(wú)菌稀釋液(5)為鉀鹽和鈉鹽無(wú)菌溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述雜菌抑制劑(6)為多粘菌素B、兩性霉素B、萘啶酸、阿洛西林和甲氧芐啶的凍干制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒，其特征在于:在所述含藥孔(33)內(nèi)包被的抗結(jié)核藥物包括利福平、異煙肼、鏈霉素、乙胺丁醇、氧氟沙星、左氧氟沙星、阿米卡星、卷曲霉素、莫西沙星、卡那霉素、對(duì)氨基水楊酸、利福噴丁、利福布丁、克拉霉素、氯法齊明、亞胺培南或利奈唑胺。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述藥敏測(cè)試板(3)為26孔、48孔或96孔板。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述藥敏測(cè)試板(3)上的陰性對(duì)照孔(31)、陽(yáng)性對(duì)照孔(32)和含藥孔(33)為直徑為6~10mm，深度為8~12mm的圓底形微孔，通過(guò)貼膜或外蓋進(jìn)行密封。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的分枝桿菌藥敏檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述雜菌抑制劑為通過(guò)真空冷凍干燥制得的凍干雜菌抑制劑。
8.—種如權(quán)利要求1所述的分枝桿菌藥敏檢`測(cè)試劑盒對(duì)分枝桿菌進(jìn)行藥敏測(cè)試的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)取出凍干雜菌抑制劑，旋開(kāi)瓶蓋，將無(wú)菌稀釋液全部加入后充分搖勻； (2)取出藥敏培養(yǎng)基及藥敏測(cè)試板，使它們?cè)诮臃N標(biāo)本前接近室溫，吸取混合均勻的雜菌抑制劑加入藥敏培養(yǎng)基，充分混合均勻； (3)用無(wú)菌吸嘴吸取經(jīng)過(guò)步驟(2)處理過(guò)的藥敏培養(yǎng)基加入到陰性對(duì)照孔； (4)將分枝桿菌培養(yǎng)菌株磨菌比池至lmg/ml,加入一支新的藥敏培養(yǎng)基中混勻；在所述藥敏測(cè)試板上的含藥孔內(nèi)接種含有菌液的藥敏培養(yǎng)基，貼膜或蓋好外蓋置37°C溫箱培養(yǎng); (5)7-10天后觀察結(jié)果，孔底出現(xiàn)白色菌體沉淀的為陽(yáng)性，則表示在該孔有細(xì)菌生長(zhǎng)，根據(jù)各含藥孔、對(duì)照孔的生長(zhǎng)結(jié)果判斷藥物敏感性。
【文檔編號(hào)】C12Q1/18GK103740802SQ201410019031
【公開(kāi)日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月15日
【發(fā)明者】孫宜峰, 王珍, 曾冰冰 申請(qǐng)人:珠海市銀科醫(yī)學(xué)工程有限公司