麥長管蚜特異性ss-coi引物對、試劑盒及其檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于分子生物學【技術領域】，提供了一種麥長管蚜特異性SS-COI引物對、試劑盒及其檢測方法。麥長管蚜特異性SS-COI引物對如SEQ?ID?No.1和2所示，所述檢測方法包括使用所述引物對進行PCR擴增的步驟，如出現(xiàn)258bp擴增條帶，如SEQ?ID?NO.3所示，則判定為麥長管蚜的樣本。該檢測方法操作簡單、快速、高效，一般可在5個小時內完成檢測，克服了傳統(tǒng)的研究捕食性天敵對害蟲捕食效應的觀察法和生化手段研究捕食者與獵物關系的復雜性、費用高、缺乏對靶標的特異性等問題，適于基層推廣應用。
【專利說明】麥長管蚜特異性SS-COI引物對、試劑盒及其檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于分子生物學【技術領域】，具體地說，涉及一種麥長管蚜特異性ss-coi引物對、試劑盒及其檢測方法。
【背景技術】
[0002]麥長管姆Macrosiphum avenae (Fabricius),屬同翅目，Φ牙科。分布在中國各產(chǎn)麥區(qū)。寄主于小麥、大麥、燕麥，南方偶害水稻、玉米、甘蔗、獲草等。前期集中在葉正面或背面，后期集中在穗上刺吸汁液，致受害株生長緩慢，分蘗減少，千粒重下降，是麥類作物重要害蟲。也是麥蚜中的優(yōu)勢種。麥長管蚜在田間有多種捕食性天敵(如瓢蟲、草蛉、蜘蛛等)，天敵的保護和利用是麥長管蚜防治的重要措施。如何對田間不同種類天敵的控制作用進行合理評估，進而選擇出繁殖力高、捕食能力和尋找寄主能力強、控害作用明顯的天敵資源，是進行天敵保護合理保護與利用的基礎與核心。
[0003]Species-Specific-COI PCR檢測技術是在mtDNA COI技術基礎上發(fā)展起來的特異序列擴增區(qū)域標記，是利用特異性的引物，根據(jù)預期DNA條帶的有無來判斷檢測結果，無需測序和序列比對，具有靈敏度高、特異性強、快速、簡便且重現(xiàn)性和穩(wěn)定性強等優(yōu)點，為準確評價天敵對獵物的捕食作用開辟了新途徑。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的第一個目的是提供一對能特異性鑒別麥長管蚜的PCR引物，包括正向引物:5 ' -TTGGATCAT CACTTAGAATTC-3 '(如 SEQ ID N0.1 所示)和反向引物:5' -TATTATTAATGATGGTGGTAATAG-3'(如 SEQ ID N0.2 所示)。
[0005]本發(fā)明的第二個目的是提供一種用于檢測麥長管蚜的試劑盒，其特征在于，包括PCR反應試劑和上述引物對，優(yōu)選的試劑盒，還包括標準陽性模板。
[0006]本發(fā)明的第三個目的是提供一種麥長管蚜的特異性檢測方法，包括使用上述引物對進行PCR擴增的步驟，如出現(xiàn)258bp擴增條帶，如SEQ ID N0.3所示，則判定為麥長管蚜的樣本。
[0007]優(yōu)選的，所述PCR擴增的步驟中PCR反應體系以20 μ I計為:
[0008]
【權利要求】
1.一種麥長管蚜特異性SS-COI引物對，其特征在于，包括正向引物:5' -TTGGATCATCACTTAGAATTC-3'和反向引物:5' -TATTATTAATGATGGTGGTAATAG-3'。
2.一種用于檢測麥長管蚜的試劑盒，其特征在于，包括PCR反應試劑和權利要求1所述的引物對。
3.根據(jù)權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，還包括標準陽性模板。
4.一種麥長管蚜的特異性檢測方法，其特征在于，所述方法包括使用權利要求1所述引物對進行PCR擴增的步驟，如出現(xiàn)258bp擴增條帶，如SEQ ID N0.3所示，則判定為麥長管蚜的樣本。
5.根據(jù)權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述PCR擴增的步驟中PCR反應體系以20 μ I計為:模板 DNAΙ.ΟμΙ2.5mM dNTPs0.4μ1 ΙΟμΜ正向引物0.4μ1ΙΟμΜ反向引物0.4μ1SU/μΙ Easy Taq DNA聚合酶0.2μΙIOxEasy 緩沖液2.0μΙddH20補足。
6.根據(jù)權利要求4或5所述的檢測方法，其特征在于，所述PCR擴增的步驟中，PCR反應條件為:94°C 4分鐘；94°C 30秒，56°C 30秒，72°C 30秒，共45個循環(huán)；72°C I秒。
7.根據(jù)權利要求2或3所述試劑盒在檢測麥長管蚜中的應用。
【文檔編號】C12Q1/68GK103740841SQ201410033243
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月23日 優(yōu)先權日:2014年1月23日
【發(fā)明者】王倩, 楊帆, 陸宴輝, 楊益眾 申請人:中國農業(yè)科學院植物保護研究所