一種厭氧菌的簡便快速培養(yǎng)計數(shù)法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種厭氧菌的簡便快速培養(yǎng)計數(shù)法，根據(jù)高層半固體培養(yǎng)基具有良好厭氧性能的原理，我們設(shè)計出一種適用于不產(chǎn)氣厭氧菌的進行簡單快速菌落計數(shù)的方法。此法把稀釋和計數(shù)集中在同一支試管內(nèi)，以不易透氧、裝有高層半固體培養(yǎng)基的試管代替常規(guī)的培養(yǎng)皿平板進行菌落計數(shù)，從而使活菌計數(shù)操作簡化成“樣品分散，逐級稀釋+常規(guī)培養(yǎng)，菌落計數(shù)”3步，該方法具有有簡化的操作步驟的優(yōu)點，還有省略專用厭氧培養(yǎng)裝置，縮短培養(yǎng)時間及節(jié)約試劑和材料等優(yōu)點。
【專利說明】一種厭氧菌的簡便快速培養(yǎng)計數(shù)法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種厭氧菌的簡便快速培養(yǎng)計數(shù)法。
【背景技術(shù)】
[0002]厭氧菌的培養(yǎng)和活菌計數(shù)方法很多，通常都需要提供較復(fù)雜的裝備和采取繁瑣的操作，例如常用的厭氧罐技術(shù)，亨蓋特滾管技術(shù)或厭氧手套技術(shù)等，故令一般實驗室的工作人員難以操作?，F(xiàn)有技術(shù)中一般需“樣品分散，逐級稀釋，涂布或澆注平板，厭氧培養(yǎng)，菌落計數(shù)”5步，操作繁瑣。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明的目的在于克服上述技術(shù)存在的缺陷，提供一種厭氧菌的簡便快速培養(yǎng)計數(shù)法，該方法具有有簡化的操作步驟的優(yōu)點，還有省略專用厭氧培養(yǎng)裝置，縮短培養(yǎng)時間及節(jié)約試劑和材料等優(yōu)點。其具體技術(shù)方案為:
[0004]一種厭氧菌的簡便快速培養(yǎng)計數(shù)法，包括以下步驟:
[0005](I);準(zhǔn)備樣品:取斜面菌苔(純種)溶于IOml生理鹽水中，充分搖勻后備用。
[0006](2);制高層試管:將半固體培養(yǎng)基加熱，融化,冷卻至50°C,用IOml吸管在每支無菌試管中灌9ml，然后放在45°C水浴中保溫待用。
[0007](3);按常規(guī)方法用無菌吸管(Iml)吸取Iml含菌樣品至9ml半固體培養(yǎng)基試管中，再用另一支吸管上下輕攪動4-6次使充分混勻(不可產(chǎn)生氣泡)，然后吸Iml至下一支試管中，如此逐級稀釋直至10_5至10_7為止(可依據(jù)樣品的含菌量而定)。
[0008](4);恒溫培養(yǎng):待稀釋均勻后，各稀釋度的試管垂直放置于試管架上，置37°C恒溫培養(yǎng)24h左右。
[0009](5):觀察與計數(shù):各稀釋度的高層半固體培養(yǎng)基試管內(nèi)形成許多透鏡狀或近球狀的菌落，數(shù)出各試管中試管形成的菌落數(shù)目。
[0010]進一步優(yōu)選，一般一個樣品可選3個稀釋度，每一個稀釋度做3個重復(fù)。
[0011]凡是每管菌落數(shù)在30-300個的試管，均作為統(tǒng)計對象。
[0012]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:厭氧菌的種類很多，它們與醫(yī)藥、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)境保護和基礎(chǔ)理論研究有著密切的關(guān)系。厭氧菌的培養(yǎng)和計數(shù)方法很多，通常需要提供較復(fù)雜的裝備和采取繁瑣的操作，令一般實驗室的工作人員難以下手。本發(fā)明根據(jù)高層半固體培養(yǎng)基具有良好厭氧性能的原理，我們設(shè)計出一種適用于不產(chǎn)氣厭氧菌的進行簡單快速菌落計數(shù)的方法。此法把稀釋(在半固體培養(yǎng)基凝固前)和計數(shù)(在半固體培養(yǎng)基凝固后)集中在同一支試管內(nèi)，以不易透氧、裝有高層半固體培養(yǎng)基的試管代替常規(guī)的培養(yǎng)皿平板進行菌落計數(shù)，從而使活菌計數(shù)操作簡化成“樣品分散，逐級稀釋+常規(guī)培養(yǎng)，菌落計數(shù)”3步，該方法具有有簡化的操作步驟的優(yōu)點，還有省略專用厭氧培養(yǎng)裝置，縮短培養(yǎng)時間及節(jié)約試劑和材料等優(yōu)點?！揪唧w實施方式】
[0013]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步詳細地說明。
[0014]一種厭氧菌的簡便快速培養(yǎng)計數(shù)法，包括以下步驟:
[0015](I);準(zhǔn)備樣品:取斜面菌苔(純種)溶于IOml生理鹽水中，充分搖勻后備用。
[0016](2);制高層試管:將半固體培養(yǎng)基加熱，融化,冷卻至50°C,用IOml吸管在每支無菌試管中灌9ml，然后放在45°C水浴中保溫待用。
[0017](3);按常規(guī)方法用無菌吸管(Iml)吸取Iml含菌樣品至9ml半固體培養(yǎng)基試管中，再用另一支吸管上下輕攪動4-6次使充分混勻(不可產(chǎn)生氣泡)，然后吸Iml至下一支試管中，如此逐級稀釋直至10_5至10_7為止為止(可依據(jù)樣品的含菌量而定)。
[0018](4);恒溫培養(yǎng):待稀釋均勻后，各稀釋度的試管垂直放置于試管架上，置37°C恒溫培養(yǎng)24h左右。
[0019](5):觀察與計數(shù):各稀釋度的高層半固體培養(yǎng)基試管內(nèi)形成許多透鏡狀或近球狀的菌落，數(shù)出各試管中試管形成的菌落數(shù)目。
[0020]—般一個樣品可選3個稀釋度,每一個稀釋度做3個重復(fù)。
[0021]凡是每管菌落數(shù)在30-300個的試管，均作為統(tǒng)計對象。
[0022]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，本發(fā)明的保護范圍不限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，可顯而易見地得到的技術(shù)方案的簡單變化或等效替換均落入本發(fā)明的`保護范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種厭氧菌的簡便快速培養(yǎng)計數(shù)法，其特征在于，包括以下步驟: (1);準(zhǔn)備樣品:取斜面菌苔溶于IOml生理鹽水中，充分搖勻后備用； (2);制高層試管:將半固體培養(yǎng)基加熱，融化，冷卻至50°C，用IOml吸管在每支無菌試管中灌9ml，然后放在45°C水浴中保溫待用； (3);按常規(guī)方法用無菌吸管吸取Iml含菌樣品至9ml半固體培養(yǎng)基試管中，再用另一支吸管上下輕攪動4-6次使充分混勻，然后吸Iml至下一支試管中，如此逐級稀釋直至10_5至10〃為止； (4);恒溫培養(yǎng):待稀釋均勻后，各稀釋度的試管垂直放置于試管架上，置37°C恒溫培養(yǎng) 24h ； (5):觀察與計數(shù) :各稀釋度的高層半固體培養(yǎng)基試管內(nèi)形成許多透鏡狀或近球狀的菌落，數(shù)出各試管中試管形成的菌落數(shù)目。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的厭氧菌的簡便快速培養(yǎng)計數(shù)法，其特征在于，一個樣品選3個稀釋度，每一個稀釋度做3個重復(fù)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的厭氧菌的簡便快速培養(yǎng)計數(shù)法，其特征在于，每管菌落數(shù)在30-300個的試管，均作為統(tǒng)計對象。
【文檔編號】C12Q1/06GK103805676SQ201410053271
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年2月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月14日
【發(fā)明者】溫建新, 單虎 申請人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)