利用紅冬孢酵母生物降解棒曲霉素的方法【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用紅冬孢酵母生物降解棒曲霉素的方法，將Rhodosporidium?paludigenum?Fell&Tallman的菌懸液放入被棒曲霉素污染的液態(tài)物中，直至Rhodosporidium?paludigenum?Fell&Tallman的終濃度為0.9～1.1×105CFU/mL，在150～250rpm的搖床中于24～26℃降解處理2～4天；從而實現(xiàn)棒曲霉素的降解。采用該方法降解棒曲霉素，具有成本低、降解效果好、安全性好、無二次污染的特點?！緦＠f明】利用紅冬孢酵母生物降解棒曲霉素的方法【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本發(fā)明屬于微生物菌劑領(lǐng)域，具體地，涉及一種利用安全的海洋酵母降解真菌毒素棒曲霉素的方法?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]棒曲霉素(patulin,4-hydroxy-4H-furo[3,2_c]pyran_2(6H)-one)是一種水溶性的大環(huán)內(nèi)酯，存在于一些腐爛的水果(如蘋果、柑橘、石榴、梨等)及其制品中。棒曲霉素可由不少真菌產(chǎn)生，主要包括曲霉屬真菌(Aspergillus),青霉屬真菌(Penicillium)以及擬青霉屬真菌(Paeci1myces),其中青霉屬真菌是自然界中棒曲霉素的主要生產(chǎn)者。[0003]棒曲霉素是一種對人畜有毒性的真菌毒素。目前報道中已知的急性毒性包括惡心、潰瘍；慢性毒性包括神經(jīng)毒性、免疫毒性、基因毒性、抑制免疫系統(tǒng)、致癌致畸致突變等。另外，在分子生物學(xué)層面，棒曲霉素可抑制DNA合成、蛋白質(zhì)的交聯(lián)、與谷胱甘肽發(fā)生反應(yīng)等。各國科學(xué)家對本國所產(chǎn)的蘋果制品和柑橘類制品(主要是蘋果汁)中的棒曲霉素進行檢測，發(fā)現(xiàn)歐洲部分國家、韓國和日本，對食品中棒曲霉素的控制較好，而一些地方如西班牙、意大利、南非、印度和中國等，食品中棒曲霉素的檢出率較高，而且部分樣品超標(biāo)很嚴重。比如研究人員最近從中國東北的超市里抽取蘋果制品進行棒曲霉素的檢測，發(fā)現(xiàn)16%的產(chǎn)品棒曲霉素含量超標(biāo)(最高可達97.7ppb，而國標(biāo)規(guī)定是低于50ppb)，只有12.6%的樣本其棒曲霉素含量低于檢測限。[0004]棒曲霉素是擴展青霉產(chǎn)生的二次代謝產(chǎn)物。雖然現(xiàn)在人們已擁有很多果蔬保鮮齊U、殺菌劑以及保鮮手段(如低溫儲運、氣調(diào)等)，但抑制真菌生長和降低真菌毒素的分泌兩者之間并不一定相關(guān)?，F(xiàn)行的不少用于果蔬保鮮的物質(zhì)或者手段(如低溫、氣調(diào)等)雖然能有效降低果蔬病害的發(fā)生，但它們對相應(yīng)的真菌毒素的控制并無效果，相反，有一些保鮮產(chǎn)品或者保鮮手段反而促使真菌產(chǎn)生更多的毒素。這是因為不少真菌在不利于生長的逆境中，會分泌更多的真菌毒素等二次代謝產(chǎn)物，來增強自身的競爭能力。實例來說，據(jù)報道，體外實驗中，在培養(yǎng)擴展青霉的培養(yǎng)基中加入克菌丹(Captan)、多菌靈(Carbendazim)、乙喃酹磺酸酯(Bupirimate)等殺菌劑時,可以誘導(dǎo)擴展青霉產(chǎn)生更多的棒曲霉素。另有研究表明，經(jīng)過生物制劑處理的有機蘋果中的棒曲霉素含量高于經(jīng)過傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)(采用殺菌劑)栽培的蘋果，對這個現(xiàn)象的解釋還未形成定論。課題組對氣調(diào)儲藏的蘋果進行研究，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過不同的氣調(diào)處理的蘋果雖然在發(fā)病率上有顯著差異，但在棒曲霉素的含量上卻無差異，說明在此處理下，病斑的大小和棒曲霉素的含量并不相關(guān)?？偠灾ｕr劑和保鮮手段雖然能控制真菌的生長，但并不能減少真菌分泌棒曲霉素的量。[0005]由于棒曲霉素在酸性環(huán)境下很穩(wěn)定，因此一旦存在(被棒曲霉素污染的水果及其制品多為酸性環(huán)境)，便很難通過常規(guī)方法去除。目前有報道利用臭氧、放射性元素、熱處理、大孔樹脂吸附等物理化學(xué)方法，對棒曲霉素進行去除。但這些方法有的成本較高，有的對環(huán)境或人體有負面影響，有的降解效果欠佳，因此并不很理想。相比較而言，生物方法更加安全、低成本。不少文獻報道表明，利用微生物對棒曲霉素進行降解，不僅非常的有效，而且成本低廉，安全性高，其降解產(chǎn)物的毒性也比棒曲霉素本身要小。目前已報道的可降解棒曲霉素的微生物包括氧化葡萄糖酸桿菌(Gluconobacteroxydans)、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae，需要在無氧環(huán)境下)、瘤胃中的微生物群、紅酵母(Rhodosporidiumkratochvi1vae)以及畢赤酵母(Pichiamembranifaciens及Pichiacaribbica)等。[0006]紅冬抱酵母(RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman)是一株從海洋中分離出來的安全的生防酵母。據(jù)研究，該酵母能適應(yīng)高滲透壓的環(huán)境，并且對小番茄、冬棗以及柑橘的釆后病害控制非常有效。但目前并沒有研究表明，紅冬孢對棒曲霉素本身有降解作用。[0007]該紅冬抱酵母(RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman)亦名該海洋酵母(RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman)被保藏于英國國際真菌研究所國際農(nóng)業(yè)與生物中心基因資源保藏中心(InternationalMycologicalInstitute,CABIGeneticResourceCollection)，保藏地址:英國TW209TY薩里郡艾格鎮(zhèn)貝克漢姆路國際農(nóng)業(yè)與生物中心英國中心，保藏日期:2006.4.19，保藏編號:IMI394084o[0008]上述海洋酵母細胞懸浮液已被用于生產(chǎn)生物保鮮劑，該專利的申請?zhí)枮?00610155209.0。[0009]上文中涉及的參考文獻具體如下:[0010]BaertjK.，DeMeulanaerjB.，KamalajA.，KasasejC.，&Devlieghere,F.(2006).0ccurrenceofpatulininorganic,conventionalandhandcraftedapplejuicesmarketedinBelgium.JournalofFoodProtection，69，1371-1378(BaertjK.,DeMeulanaer,B.，KamalajA.，KasasejC.，&Devlieghere，F(xiàn).(2006).棒曲霉素在有機、傳統(tǒng)及手工藝制造的比利時蘋果汁中的存在現(xiàn)狀。食品保護。69,1371-1378);[0011]BurghardtRCjBarhoumiRjLewisEHjBaileyRH,PyleKAjClementBA，PhillipsT(1992).Patulin-1nducedcellulartoxicity:avitalfluorescencestudy.ToxicologyandAppliedPharmacology，112(2)，235-244(BurghardtRC，BarhoumiRjLewisEHjBaileyRH,PyleKA，ClementBA,PhillipsT(1992).棒曲霉素誘發(fā)的細胞毒性:一種重要的熒光研究。112(2)，235-244)；[0012]Cao，J.，H.Zhang，etal.(2013).EfficacyofPichiacaribbicaincontrollingbluemoldrotandpatulindegradationinapples.1nternationalJournalofFoodMicrobiology,162(2):167-173(Cao,J.,H.Zhang,etal.(2013).Pichiacaribbica酵母控制蘋果青霉害和降解棒曲霉素的效果。國際食品微生物。162(2):167-173)；[0013]CastoriajR.，ManninajL.，Duran-Palron5R.，Maffei，F(xiàn).，Sobolev,A.P.，DeFelice,D.V.，Pinedo-RivillajC.，Wright,S.A.1.(2011).ConversionofthemycotoxinpatulintothelesstoxicdesoxypatulinicacidbythebiocontrolyeastRhodosporidiumkratochvilovaestrainLSll.JournalofAgriculturalandFoodChemistry,59(21)，11571-11578(Castoria，R.，ManninajL.，Duran-Patron,R.,Maffei,F.，Sobolev,A.P.，DeFelice,D.V.，Pinedo-Rivilla，C.,Wright,S.A.1.(2011).酵母RhodosporidiumkratochvilovaeLSll降解棒曲霉素為低毒的desoxypatulinicacid。農(nóng)業(yè)與食品科學(xué)。59(21)，11571-11578);[0014]CoelhojA.R.，CellijM.G.，OnojΕ.Y.S.，WosiackijG.，Hoffmann,F.L.,PagnoccajF.C.,HirookajΕ.Y.(2007).Penicilliumexpansumversusantagonistyeastsandpatulindegradationinvitr0.BrazilianArchivesofBiologyandTechnology,50(4)，725-733(Coelho，A.R.，Celli，M.G.，Ono，E.Y.S.，WosiackijG.，Hoffmann,F.L，PagnoccajF.C.，HirookajE.Y.(2007).擴展青霉在體外對拮抗酵母及棒曲霉素的拮抗作用。巴西生物技術(shù)檔案。50(4)，725-733);[0015]CoorayR，KiesslingKHjLindahl-KiesslingK(1982).Theeffectsofpatulinandpatulin-cysteinemixturesonDNAsynthesisandthefrequencyofsister-chromatidexchangesinhumanlymphocytes.FoodandChemicalToxicology,20(6),893-898(CoorayR，KiesslingKHjLindahl-KiesslingK(1982).棒曲霉素及棒曲霉素-半胱氨酸復(fù)合物對人類淋巴球細胞的DNA合成及姊妹單染色體互換的影響。食品及化學(xué)物質(zhì)毒理學(xué)。20(6)，893-898);[0016]G.Wichmann，0.Herbarth，1.Lehmann(2002).Themycotoxinscitrinin,gliotoxin,andpatulinaffectinterferon-yratherthaninterIeukin_4productiοninhumanbloodcells.EnvironmentalToxicology,17(3)，211-218(G.Wichmannj0.Herbarthj1.Lehmann(2002).真菌毒素橘霉素，木霉素及棒曲霉素對人類血細胞內(nèi)干擾素-Y合成的影響大于白介素-4的合成。環(huán)境毒理學(xué)。17(3)，211-218);[0017]GlaserjN.andH.Stopper(2012).Patulin:Mechanismofgenotoxicity.FoodandChemicalToxicology50(5):1796-1801(Glaser,N.andH.Stopper(2012).棒曲霉素:基因毒性的機理。食品和化學(xué)物質(zhì)毒理學(xué)。50(5):1796-1801);[0018]KWalker,BPWiesner(1944).Patulinand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體培養(yǎng)的紅冬孢酵母，是為了獲得具有較佳活性的菌體。[0047]本發(fā)明是以菌株RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman的懸浮液為有效成份，將其放入到被棒曲霉素污染的液態(tài)物中，從而達到生物降解棒曲霉素的效果。[0048]在本發(fā)明中，酵母RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman,即為紅冬抱酵母，分類命名為Rhodosporidiumpaludigenum,菌株編號為Fell&Tallman,被保藏于英國國際真菌研究所國際農(nóng)業(yè)與生物中心基因資源保藏中心(InternationalMycologicalInstitute,CABIGeneticResourceCollection),保藏編號:IMI394084,詳見www.cab1.0rgo棒曲霉素，為標(biāo)品，購自生工生物工程(上海)股份有限公司。[0049]在本發(fā)明中，通過血球計數(shù)板計數(shù)的方法，控制調(diào)節(jié)RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液的菌體的量。[0050]研究表明RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液能有效降解棒曲霉素，經(jīng)過進一步試驗證實，其主要機理為生物降解(酶反應(yīng))。隨著人們對食品安全的高度重視，利用安全、有效的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman降解棒曲霉素的方法有著廣闊的實際應(yīng)用前景和研究價值。[0051]本發(fā)明具有如下優(yōu)點:[0052]I)、降解效率高，應(yīng)用效果好:[0053]本發(fā)明米用RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman生物降解棒曲霉素，能在較短時間內(nèi)有效降解被棒曲霉素污染的液態(tài)物(例如果汁)，降解效率高；而棒曲霉素被降解后產(chǎn)物的毒性遠遠低于棒曲霉素本身的毒性，不造成二次污染。同時，利用紅冬孢酵母降解棒曲霉素的生物方法相比起一些物理、化學(xué)方法，具有安全、無污染、高效等優(yōu)勢。因此，本發(fā)明的方法可大范圍推廣使用。[0054]2)、成本低廉，易獲得:[0055]RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman是從海洋分離得到的天然、安全酵母菌株，存在于大自然中，來源廣泛，易于獲取。RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman對生長環(huán)境要求不苛刻，且耐高滲透壓，易于培養(yǎng)，成本低廉，因此可大量培養(yǎng)，應(yīng)用于實際。[0056]3)、使用方便，操作簡單。[0057]本發(fā)明米用的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌株易于培養(yǎng),只需通過最基礎(chǔ)的微生物接種、培養(yǎng)操作，即可獲得具有高降解活性的菌體懸浮液。[0058]本發(fā)明的實際用法和用量如下:[0059]在被污染了棒曲霉素的液態(tài)物(棒曲霉素的濃度<200ppm即可，較佳為棒曲霉素的濃度<30ppm)中加入已活化的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌體制成的菌懸液，直至菌體的最終濃度為0.9?1.1X105CFU/mL(最佳為IX105CFU/mL)?！緦＠綀D】【附圖說明】[0060]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步詳細說明。[0061]圖1為本發(fā)明的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液在NYDB中降解棒曲霉素的效果圖。[0062]圖2為本發(fā)明的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液在蘋果汁中降解棒曲霉素的應(yīng)用效果圖。[0063]圖3為棒曲霉素對大腸桿菌的毒性圖。[0064]圖4為本發(fā)明的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液在NYDB中降解棒曲霉素后，降解產(chǎn)物對大腸桿菌的毒性圖。【具體實施方式】[0065]下面通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明。[0066]實施例1、紅冬孢酵母生物降解NYDB中的棒曲霉素，依次進行如下步驟:[0067]I)、菌懸液的制備:[0068]從NYDA培養(yǎng)基斜面中挑取RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman的單菌落接種于裝有50mL的NYDB的250mL錐形瓶中，于25°C，180rpm的條件下進行活化，活化過程包括在NYDB中第一代培養(yǎng)24h，第二代培養(yǎng)36h;目卩，在25°C、180rpm轉(zhuǎn)速的搖床中培養(yǎng)24小時；然后在無菌條件下吸取ImL菌體懸浮液于新鮮滅菌的裝有50mL的NYDB的250mL錐形瓶中，于25°C、180rpm的搖床中培養(yǎng)36小時。[0069]然后調(diào)節(jié)至每ml的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液中含有5XIO6CFU的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌體。[0070]NYDA:10g葡萄糖+Sg牛肉浸膏+5g酵母浸出粉+20g瓊脂+IL蒸餾水，然后進行常規(guī)的高壓滅菌。[0071]NYDB:10g葡萄糖+8g牛肉浸膏+5g酵母浸出粉+IOg氯化鈉+IL蒸餾水，調(diào)節(jié)pH值至6.0，然后進行常規(guī)的高壓滅菌。[0072]2)、NYDB中棒曲霉素的降解:[0073]往無菌的50mL離心管中加入NYDB以及棒曲霉素溶液，再加入RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液；使菌體的最終濃度達到IX105CFU/mL，用滅菌的8層紗布包裹管口，放置于25°C搖床中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為180rpm。[0074]具體如下:[0075]將5mg的棒曲霉素標(biāo)品溶解于20mL乙酸乙酯中，吸取5mL于氮吹儀中吹干，溶解于2.5mLNYDB中，制成棒曲霉素溶液。向4.8mL的NYDB中加入100μL棒曲霉素溶液(即50μg棒曲霉素，其最終濃度為IOppm)以及100μL濃度為5X106CFU/mL的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液,混合均勻，從而使菌體的最終濃度達到IX105CFU/mL。以不加RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液的處理為空白對照。每個處理及空白對照各設(shè)三個平行。檢測的時間點分別為I天、2天、3天、4天。[0076]棒曲霉素的檢測方法如下:[0077]I)樣品處理:吸取5mL培養(yǎng)后所得物入50mL離心管中，向每管中加入5mL乙酸乙酯，蓋上匹配的管蓋，于250rpm小搖床中振蕩10分鐘，再于3000rpm的離心機中離心3分鐘。吸取3mL上清液,氮氣吹干,溶于ImL去離子水中(用乙酸調(diào)節(jié)pH值至4.0),用2.5μm的濾膜過濾后放置，進行HPLC檢測。[0078]2)HPLC檢測:檢測方法如下，[0079]流動相為10%乙腈+90%水(為體積％)，流速為0.75mL/min,檢測波長為276nm，柱溫35°C，進樣量50yL。所選取的柱子為250mmX4.6mm(內(nèi)徑)，粒徑5μm的C18柱。實驗中棒曲霉素的出峰時間為IImin。[0080]以上實驗重復(fù)3次。[0081]實驗結(jié)果如圖1。經(jīng)過4天的降解實驗，處理組中棒曲霉素的含量隨著時間不斷下降。經(jīng)過I天的培養(yǎng)，有29.79%的棒曲霉素被降解(即，經(jīng)檢測棒曲霉素含量僅為35.1yg);到了第二天，棒曲霉素幾乎完全被降解(降解率達到98.55%，即，經(jīng)檢測棒曲霉素含量僅為0.725yg);第4天已經(jīng)檢測不到棒曲霉素的存在。同時，棒曲霉素在空白對照中的含量保持相對穩(wěn)定。[0082]通過上述實驗,我們可以得到以下結(jié)論:本發(fā)明的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液能夠有效的降解NYDB中的棒曲霉素。[0083]實施例2、RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液降解蘋果汁(pH為2.9?3.3)中的棒曲霉素，依次進行如下步驟:[0084]I)、菌懸液的制備:[0085]同實施例1。[0086]2)、蘋果汁中棒曲霉素的降解:[0087]往無菌的50mL離心管中加入市購的蘋果汁(pH為2.9?3.3)4.9ml，已事先測得該蘋果汁內(nèi)含有120μg/L的棒曲霉素；再加入RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液0.1ml;使菌體的最終濃度達到IX105CFU/mL，用滅菌的8層紗布包裹管口，放置于25°C搖床中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為180rpm。[0088]其余內(nèi)容等同于實施例1的步驟2)。[0089]實驗結(jié)果如圖2所示。經(jīng)過三天的降解，蘋果汁中棒曲霉素的含量隨著時間不斷下降。經(jīng)過一天的培養(yǎng)，有31.08%的棒曲霉素被降解；到了第二天，一半以上的棒曲霉素被降解(降解率達到65.49%);第三天已經(jīng)檢測不到棒曲霉素的存在。同時，棒曲霉素在空白對照中的含量保持相對穩(wěn)定。[0090]通過上述實驗,我們可以得到以下結(jié)論:本發(fā)明的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液能夠有效的降解蘋果汁中的棒曲霉素。[0091]說明:本發(fā)明的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液能夠有效應(yīng)用于被棒曲霉素污染的蘋果汁中，從而可進行實際推廣應(yīng)用。[0092]對比例1、調(diào)整實施例1中的降解溫度，降解溫度由25°C下降為15°C，檢測時間點為24h，其余等同于實施例1。[0093]對比例2、調(diào)整實施例1中的降解溫度，降解溫度由25°C上升為35°C，檢測時間點為24h，其余等同于實施例1。[0094]對比例3、僅將實施例1步驟2)中所用的NYDB培養(yǎng)基的pH值由6.0上升為8.0，檢測時間點為24h，其余等同于實施例1。[0095]備注說明:步驟I)中的NYDB培養(yǎng)基不作更改，其pH值仍為6.0。[0096]對比例4、調(diào)整實施例1中的棒曲霉素初始濃度，由IOppm上升為30ppm，檢測時間點為24h，其余等同于實施例1。[0097]對比例5、調(diào)整實施例1中的棒曲霉素初始濃度，由IOppm下降為Ippm,檢測時間點為24h，其余等同于實施例1。[0098]對比例6、將實施例1中的用于降解的菌體由RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman改成【
背景技術(shù)：
】中告知的紅酵母，菌體的最終濃度不變，即仍為IX105CFU/mL；其余等同于實施例1。[0099]對比例7、將實施例1中的用于降解的菌體由RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman改成【
背景技術(shù)：
】中告知的畢赤酵母，菌體的最終濃度不變，即仍為IXlO5CFU/mL;其余等同于實施例1。[0100]對比例8、[0101]僅僅將實施例1的步驟I)菌懸液的制備過程中所用的NYDB改成常規(guī)的NYDB培養(yǎng)基，即，[0102]常規(guī)NYDB:IOg葡萄糖+Sg牛肉浸膏+5g酵母浸出粉+IL蒸餾水，然后進行常規(guī)的聞壓滅菌。[0103]所得的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液稱為菌懸液I,每ml該菌懸液I中含有5XIO6CFU的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌體。[0104]以該菌懸液I進行步驟2)所述的NYDB中棒曲霉素的降解，同樣使菌體的最終濃度達到IX105CFU/mL。備注說明:步驟2)中所用的NYDB同實施例1的步驟2)。[0105]其余內(nèi)容同實施例1。[0106]將上述所有對比例按照實施例1中所述的方法進行棒曲霉素降解率的檢測試驗，所得結(jié)果如下表1所示。[0107]表1、不同處理的棒曲霉素降解率[0108]【權(quán)利要求】1.利用紅冬孢酵母生物降解棒曲霉素的方法，其特征是:將RhodosporidiumpaludigenumFell&TalIman的菌懸液放入被棒曲霉素污染的液態(tài)物中，直至RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman的終濃度為0.9?1.1X105CFU/mL,在150?250rpm的搖床中于24?26°C降解處理2?4天；從而實現(xiàn)棒曲霉素的降解。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用紅冬孢酵母生物降解棒曲霉素的方法，其特征是:所述被棒曲霉素污染的液態(tài)物的pH<7。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用紅冬孢酵母生物降解棒曲霉素的方法，其特征是:所述RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman的菌懸液的制備方法為:從NYDA培養(yǎng)基斜面中挑取RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman的菌落接種于NYDB培養(yǎng)液中，于24?26°C、150?250rpm的條件下進行活化；然后調(diào)節(jié)至每ml的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌懸液中含有4?6XIO6CFU的RhodosporidiumpaludigenumFell&Tallman菌體；NYDA培養(yǎng)基的配方為:10g葡萄糖+8g牛肉浸膏+5g酵母浸出粉+20g瓊脂+IL蒸餾水；NYDB培養(yǎng)液的配方為:IOg葡萄糖+Sg牛肉浸膏+5g酵母浸出粉+IOg氯化鈉+IL蒸餾水；調(diào)節(jié)PH值至6.0。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用紅冬孢酵母生物降解棒曲霉素的方法，其特征是:所述活化包括在NYDB培養(yǎng)液中第一代培養(yǎng)24h，第二代培養(yǎng)36h?！疚臋n編號】A23L1/015GK103931965SQ201410058749【公開日】2014年7月23日申請日期:2014年2月20日優(yōu)先權(quán)日:2014年2月20日【發(fā)明者】鄭曉冬,朱瑞瑜,余挺,郭峻,郭雙歡申請人:浙江大學(xué)