一種凝血塊中提取白細(xì)胞的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種凝血塊中提取白細(xì)胞的方法，其包括下列步驟：將100目過濾網(wǎng)覆蓋在燒杯或平皿上；將凝血塊剝離并轉(zhuǎn)移至所述過濾網(wǎng)上；玻璃注射器內(nèi)芯研磨凝血塊，同時滴加生理鹽水沖洗；收集穿過過濾網(wǎng)匯集于燒杯或平皿內(nèi)的血細(xì)胞；溶血素裂解血細(xì)胞中的紅細(xì)胞，獲取白細(xì)胞；或者淋巴細(xì)胞分層液分離血細(xì)胞獲取外周血單個核細(xì)胞。本發(fā)明適用于對同一份血標(biāo)本，既需要血清，也需要白細(xì)胞的科學(xué)實(shí)驗或臨床檢驗領(lǐng)域。
【專利說明】—種凝血塊中提取白細(xì)胞的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種凝血塊中提取白細(xì)胞的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]科學(xué)實(shí)驗和臨床檢驗中常常遇到對同一個血液標(biāo)本既需要血清，也需要白細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗或檢測的情況。而目前從凝固血液分離得到血清后，凝血塊中禁錮的白細(xì)胞便不能再繼續(xù)利用，為此當(dāng)既需要血清又需要白細(xì)胞時，臨床和科研往往都需要加大血液采集量，將所得血液分成兩份，一份凝固血液用于分離血清，另一份抗凝血用于提取白細(xì)胞、核酸或者細(xì)胞蛋白。
[0003]動物相關(guān)免疫學(xué)科研中，免疫動物血液的獲得量常常不能滿足科研需要，尤其是在周期性采集小鼠、大鼠等實(shí)驗動物的血液檢測免疫狀態(tài)時，常常采集不到足夠多的血液，以便部分凝固后提取血清，檢測抗體效價、細(xì)胞因子的含量，另一部分抗凝后分離白細(xì)胞，進(jìn)行中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞以及NK細(xì)胞等的相關(guān)免疫功能檢測。
[0004]臨床檢驗也面臨血液凝固、血塊收縮獲得血清后，不能再對此血樣本進(jìn)行白細(xì)胞相關(guān)檢測的問題。比如檢測乙肝五項和肝功能等需要血清，而這份血中的白細(xì)胞禁錮在凝血塊纖維網(wǎng)絡(luò)中不能再進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測其免疫細(xì)胞亞群及功能狀態(tài)，甚至細(xì)胞核酸的提取也常常需要多采集一份患者的血液。而新生兒患者和嬰幼兒患者血管纖細(xì)，加之發(fā)熱、腹瀉等疾病狀態(tài)使機(jī)體脫水，血管充盈不足，加劇了血液采集的困難，即使是多采集Iml血液，在這些患兒都較為困難。
[0005]如果能將采集完血清的凝血塊中的白細(xì)胞釋放出來，并保持其功能和活性，則采集很少量的一份血液就可以既滿足對血清`檢測的需要也滿足對白細(xì)胞檢測的需要，這樣不僅可以提高科研成功的機(jī)會，也可以減少患者的痛苦，寬慰患兒的父母和家人，同時也減輕了采血人員的工作負(fù)擔(dān)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)存的無法從凝血塊中提取白細(xì)胞的技術(shù)問題，提供一種凝血塊中提取白細(xì)胞的方法。
[0007]為了解決上述問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
一種凝血塊中提取白細(xì)胞的方法，其包括下列步驟:
1)將100目過濾網(wǎng)覆蓋在燒杯或平皿口上；
2)剝離并轉(zhuǎn)移凝血塊于過濾網(wǎng)上；
3)用玻璃注射器內(nèi)芯研磨凝血塊，同時不斷滴加生理鹽水濕潤并沖洗凝血塊以及接觸凝血塊的玻璃注射器內(nèi)芯，使血細(xì)胞穿過過濾網(wǎng)匯集于燒杯或平皿內(nèi)，不需要的凝血纖維留在過濾網(wǎng)上；
4)轉(zhuǎn)移血細(xì)胞于離心管中，1000rpm離心8min，棄上清，收集血細(xì)胞；
5)加入溶血素裂解收集的血細(xì)胞中的紅細(xì)胞得到白細(xì)胞；或者將所收集到的血細(xì)胞用生理鹽水稀釋至原血液體積的2倍，再用常規(guī)淋巴細(xì)胞分層液分離獲取外周血單個核細(xì)胞。
[0008]采用流式細(xì)胞術(shù)檢測本發(fā)明從凝血塊提取白細(xì)胞的數(shù)量以及CD4+和CD8+T細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分比，并與同一供者的等量抗凝血所得白細(xì)胞的相應(yīng)檢測結(jié)果進(jìn)行比較，經(jīng)配對t檢驗統(tǒng)計分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞數(shù)量無差別0° > 0.05)，⑶4+及⑶8+T細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分比也無差別0° > 0.05)，詳見表1和表2，表1是對5位健康供者血液的檢測結(jié)果比較，表2是對5只小鼠血液的檢測結(jié)果比較。說明本發(fā)明的方法既不影響白細(xì)胞的得量，也不破壞白細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)。
[0009]表1人抗凝血與凝血塊提取白細(xì)胞數(shù)量以及⑶4+和⑶8+T細(xì)胞百分比比較表
【權(quán)利要求】
1.一種凝血塊中提取白細(xì)胞的方法，其特征在于，包括下列步驟: 1)將100目過濾網(wǎng)覆蓋在燒杯或平皿口上； 2)剝離并轉(zhuǎn)移凝血塊于過濾網(wǎng)上； 3)用玻璃注射器內(nèi)芯研磨凝血塊，同時不斷滴加生理鹽水濕潤并沖洗凝血塊以及接觸凝血塊的玻璃注射器內(nèi)芯，使血細(xì)胞穿過過濾網(wǎng)匯集于燒杯或平皿內(nèi)，不需要的凝血纖維留在過濾網(wǎng)上； 4)轉(zhuǎn)移血細(xì)胞于離心管中，1000rpm離心8min，棄上清，收集血細(xì)胞； 5)加入溶血素裂解收集的血細(xì)胞中的紅細(xì)胞得到白細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種凝血塊中提取白細(xì)胞的方法，其特征在于:將所收集到的血細(xì)胞用生理鹽水稀釋至原血液體積的2倍，再用常規(guī)淋巴細(xì)胞分層液分離獲取外周血單個核 細(xì)胞。
【文檔編號】C12N5/078GK103820388SQ201410070727
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年2月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月28日
【發(fā)明者】樊衛(wèi)平, 覃艷紅, 李靜 申請人:山西醫(yī)科大學(xué)