一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法
【專利摘要】一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法，涉及食醋。以紅曲酒為碳源富集福建紅曲醋專用醋酸菌；初篩福建紅曲醋專用醋酸菌菌株；復(fù)篩福建紅曲醋專用醋酸菌菌株，比較不同初篩菌株的產(chǎn)酸能力，能在高于4%乙醇的培養(yǎng)基中快速產(chǎn)酸的菌株即為福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株。所述菌株為Y5052和Y5072。經(jīng)鑒定，Y5052和Y5072均為木糖葡糖酸醋桿菌。采用兩個關(guān)鍵技術(shù)。一是采用添加紅曲酒富集醋母中目標(biāo)菌株，二是采用高濃度乙醇培養(yǎng)基平板，使醋酸菌菌株可以在平板上形成水解透明圈，增加篩選的成功率。采用的在醋母中添加紅曲酒的富集方法和在平板中添加高濃度乙醇的篩選方法，可簡化篩選過程，提高篩選效率。
【專利說明】一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食醋，尤其是涉及一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]食醋是我國傳統(tǒng)的釀造調(diào)味品，能增進(jìn)食欲、抑制病菌、幫助消化，在人們飲食生活中不可缺少。食醋是用糧食(糧谷類、薯類等)等淀粉質(zhì)為原料，經(jīng)不同種類微生物完成糖化、酒精發(fā)酵、醋酸發(fā)酵等階段釀制而成。食醋的主要成分為醋酸(3%~5%)，還含有各種氨基酸、有機(jī)酸、糖類、維生素、醇和酯等營養(yǎng)成分及風(fēng)味成分，具有獨(dú)特的色、香、味。
[0003]食醋的生產(chǎn)工藝可分為固態(tài)發(fā)酵、液態(tài)發(fā)酵兩大類。民間傳統(tǒng)食醋采用固態(tài)發(fā)酵工藝，中、小型企業(yè)也有采用液態(tài)發(fā)酵工藝，這些工藝一般只能生產(chǎn)普通型的食醋。隨著社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展和人們生活水平提高，市場需要高檔型食醋調(diào)味品。福建紅曲醋是我國四大傳統(tǒng)名醋之一，具有獨(dú)特的風(fēng)味和保健效果。傳統(tǒng)特色高檔食醋一般都具有工藝獨(dú)特、產(chǎn)量較低等特點(diǎn)，無法實(shí)現(xiàn)工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)，不能滿足市場的需求。需要采用現(xiàn)代生物工程技術(shù)改造傳統(tǒng)工藝，提高產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)量，滿足社會需要。
[0004]傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵工藝?yán)米匀唤臃N的多菌株醋酸菌生產(chǎn)食醋，現(xiàn)代液態(tài)發(fā)酵工藝采用單一純菌接種發(fā)酵，但風(fēng)味較差。福建紅曲醋也為液態(tài)發(fā)酵，但采用多年醋母作為接種劑，產(chǎn)品風(fēng)味獨(dú)特，顯然在這種醋母中存在一些特定的醋酸菌菌株。已有很多關(guān)于分離醋酸菌的研究，一般廣泛取樣，包括醋母、醋樣、食醋生產(chǎn)環(huán)境的土樣，等等。自然環(huán)境中微生物的種類繁多，每一種微生物種類所占比例很低。欲分離某特定菌種，研究者需要先采取富集措施，以增加該菌種在樣品微生物總數(shù)量的比例，因此在分離純化之前采用適當(dāng)?shù)母患夹g(shù)將是成功獲得目的菌種的關(guān)鍵。在分離醋酸菌菌種的工作中研究者多是采取添加葡萄糖、或者乙醇以富集醋酸菌。福建紅曲醋的釀造采用了獨(dú)特的保存多年的醋母，該醋母含酸量達(dá)6%~8%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于一般食醋中醋酸3%~5%的含量，在這種環(huán)境中原來占優(yōu)勢的醋酸菌本身也受到抑制，數(shù)量大幅度下降；若是采取這種醋母作為樣品，直接采用稀釋平板法分離醋酸菌很難獲得成功。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法。
[0006]本發(fā)明的另一目的在于提供一種福建紅曲醋中專用醋酸菌。
[0007]所述篩選福建紅曲 醋中專用醋酸菌菌株的方法，包括以下步驟:
[0008]1)以紅曲酒為碳源富集福建紅曲醋專用醋酸菌:
[0009]將糯米加第一次水浸泡，淘洗，浙干，蒸汽加熱，攤涼后裝入壇中，加入紅曲和第二次水，攪勻后扎壇口，控制溫度低于34°C，維持40~45天，中間攪拌4~5次，即制得紅曲酒酒釀；再經(jīng)過濾，加熱后，即制得紅曲酒；在紅曲酒中加入紅曲醋醋母，保持溫度低于34°C，時間5~35天，即制得富集福建紅曲醋專用醋酸菌菌株的富集培養(yǎng)物；
[0010]2)初篩福建紅曲醋專用醋酸菌菌株:[0011]先制備醋酸菌選擇性培養(yǎng)基，再制備醋酸菌選擇性培養(yǎng)基平板；稀釋步驟I)制得的富集福建紅曲醋專用醋酸菌菌株的富集培養(yǎng)物，稀釋的濃度依次為:10^10-2…、…至10_8，分別取各濃度稀釋液100 μ L涂在醋酸菌選擇性培養(yǎng)基平板上，倒置培養(yǎng)，挑選醋酸菌選擇性培養(yǎng)基平板上周圍出現(xiàn)的透明水解圈的菌落，在醋酸菌選擇性培養(yǎng)基平板上劃線純化，然后接種于醋酸菌選擇性培養(yǎng)基斜面上，即得到初篩的福建紅曲醋專用醋酸菌菌株；
[0012]3)復(fù)篩福建紅曲醋專用醋酸菌菌株:
[0013]制備產(chǎn)酸培養(yǎng)基，將步驟2)初篩的福建紅曲醋專用醋酸菌菌株接種于盛有IOOmL產(chǎn)酸培養(yǎng)基的三角瓶中，第一次搖床培養(yǎng)，即得初篩菌株種子液；再取IOOmL產(chǎn)酸培養(yǎng)基至三角瓶中，接入ImL初篩菌株種子液，第二次搖床培養(yǎng)，即得初篩菌株菌液，然后測定初篩菌株菌液的產(chǎn)酸能力，具體方法為:吸取初篩菌株菌液200 μ L，加1.8mL無菌水稀釋10倍，滴加I~2滴0.1%的酒精酚酞溶液，用0.lmol/L NaOH溶液滴定至微粉色，記錄下消耗的
0.lmol/L NaOH溶液的體積，初 篩菌株產(chǎn)酸量為:
[0014]X (g/L)=VNaOHXCNaOHX0.060X100/V
[0015]其中，VNa0H——測定用試樣消耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)液體積，mL ；
[0016]C_——NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L ；
[0017]0.060-與 1.0mL NaOH 標(biāo)準(zhǔn)溶液[C(NaOH)=L 000mol/L]相當(dāng)乙酸的質(zhì)量，g ；
[0018]V-試樣體積，mL ；
[0019]產(chǎn)酸量X——試樣中總酸含量(以乙酸計)，g/L ；
[0020]比較不同初篩菌株的產(chǎn)酸能力，能在高于4%乙醇的培養(yǎng)基中快速產(chǎn)酸的菌株即為福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株。
[0021]在步驟I)中，所述糯米、第一次水、紅曲、第二次水、紅曲醋醋母與紅曲酒的質(zhì)量比可為20: 40: (I~2): (30~40): (20~40): (10~20);所述浸泡的時間可為15~18h ;所述淘洗可采用清水淘洗3~4遍；所述蒸汽加熱的時間可為15~25min ;所述攤涼可攤涼至40~45°C ;所述紅曲可采用市售紅曲；所述扎壇口可采用報紙扎壇口 ；所述過濾可采用布袋壓榨過濾；所述加熱的條件可在80~95°C下加熱5~20min。
[0022]在步驟2)中，所述醋酸菌選擇性培養(yǎng)基的組成按質(zhì)量百分比可為:葡萄糖5%~10%,蛋白胨0.5%，酵母粉1%，CaC03l%,瓊脂1.5%~2%，無水乙醇1.5%~8%，余量為水；所述醋酸菌選擇性培養(yǎng)基的制備方法可為:葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、CaCO3、瓊脂和水混合，121°C滅菌20min，滅菌后冷卻至45~55°C，再加無水乙醇，即得醋酸菌選擇性培養(yǎng)基；所述稀釋可采用十倍稀釋法；所述倒置培養(yǎng)的條件可在25~32°C倒置培養(yǎng)3~7天。
[0023]在步驟3)中，所述產(chǎn)酸培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比的組成可為:葡萄糖1%~4%，酵母粉1%，無水乙醇1%~8%，余量為水，pH5.5~7.5 ;所述第一次搖床培養(yǎng)的條件可為在25~320CUOO~180r/min的搖床中培養(yǎng)24h ;所述第二次搖床培養(yǎng)的條件可為在25~32°C、100~180r/min的搖床中培養(yǎng)48~120h。
[0024]在步驟3)中，所述0.lmol/L NaOH溶液的制備方法可為:稱取0.4g NaOH固體，用純水溶解后用容量瓶定容至IOOmL ;所述0.1%的酒精酚酞溶液的制備方法可為:稱取
0.025g酚酞粉末溶于無水乙醇中，用容量瓶定容至25mL。
[0025]所述福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株為:
[0026]1.(Gluconacetobacter swingsii)Y5052,所述(Gluconacetobacter swingsii)Y5052已于2013年11月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼100101，保藏中心登記入冊編號為CGMCC N0.8494。
[0027]2.(Gluconacetobacter swingsii)Y5072,所述(Gluconacetobacter swingsii)Y5072已于2013年11月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼100101，保藏中心登記入冊編號為CGMCC N0.8495。
[0028]經(jīng)鑒定，(Gluconacetobacterswingsii) Y5052 和(Gluconacetobacterswingsii) Y5072均為木糖葡糖酸醋桿菌。生理生化學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，(Gluconacetobacterswingsii)Y5052 的發(fā)酵產(chǎn)酸速度較慢，(Gluconacetobacter swingsii)Y5072 的發(fā)酵產(chǎn)酸速度較快。
[0029]本發(fā)明采用兩個關(guān)鍵技術(shù)。一是采用添加紅曲酒富集醋母中目標(biāo)菌株，二是采用高濃度乙醇培養(yǎng)基平板，使醋酸菌菌株可以在平板上形成水解透明圈，增加篩選的成功率。本發(fā)明采用的在醋母中添加紅曲酒的富集方法和在平板中添加高濃度乙醇的篩選方法，可簡化篩選過程，提高篩選效率。
【具體實(shí)施方式】 [0030]以下實(shí)施例將對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0031]實(shí)施例1:
[0032]菌株的篩選，具體操作步驟如下:
[0033]1.以紅曲酒為碳源富集福建紅曲醋專用醋酸菌
[0034]1.1.制備紅曲酒酒釀
[0035]取糯米20kg,清水淘洗,加水40kg浸泡18h ;清水淘洗4遍、浙干；在蒸鍋中將糯米蒸汽加熱20min，攤涼至42°C ;將蒸煮后的糯米飯移至壇中，加入市售紅曲1.5kg，水30kg，攪勻；用報紙扎壇口，控制溫度低于32°C，維持45天，中間攪拌4~5次，即制得紅曲酒酒釀。
[0036]1.2.制備紅曲酒
[0037]將前述紅曲酒酒釀經(jīng)布袋壓榨過濾，85°C加熱lOmin，即制得紅曲酒。
[0038]1.3.富集福建紅曲醋專用醋酸菌
[0039]取傳統(tǒng)紅曲醋醋母30kg，添加所制得的紅曲酒15kg，保持溫度低于30°C，時間15天，制得富集福建紅曲醋專用醋酸菌菌株的富集培養(yǎng)物。
[0040]2.篩選福建紅曲醋專用醋酸菌菌株
[0041]2.1.制備醋酸菌選擇性培養(yǎng)基
[0042]選擇性培養(yǎng)基配方:葡萄糖7%，蛋白胨0.5%，酵母粉1%，CaC03l%,瓊脂1.5%7，121°C滅菌20min，滅菌后冷卻至50°C，加6%無水乙醇，制得醋酸菌選擇性培養(yǎng)基，制備醋酸菌選擇性培養(yǎng)基平板備用。
[0043]2.2.初篩過程
[0044]采用十倍稀釋法，稀釋上述富集福建紅曲醋專用醋酸菌的富集培養(yǎng)物，稀釋的濃度依次為:10_\10_2...、…至10_8，分別取各濃度稀釋液100 μ L涂在選擇性培養(yǎng)基平板上，32°C倒置培養(yǎng)7天；挑選選擇性培養(yǎng)基平板上周圍出現(xiàn)透明水解圈的菌落，在選擇性培養(yǎng)基平板上劃線純化，然后接種于選擇性培養(yǎng)基斜面上，得到12株福建紅曲醋專用醋酸菌初篩菌株。
[0045]3.復(fù)篩福建紅曲醋專用醋酸菌優(yōu)良菌株
[0046]3.1.產(chǎn)酸培養(yǎng)基
[0047]產(chǎn)酸培養(yǎng)基配方如下:葡萄糖1%~4%,酵母粉1%,無水乙醇6%, pH6.0。
[0048]3.2.制備種子液
[0049]從初篩菌株的選擇性培養(yǎng)基斜面上挑取少量待測菌株接種于盛有IOOmL產(chǎn)酸培養(yǎng)基的150mL三角瓶；在32°C、150r/min的搖床中培養(yǎng)24h，即制得初篩菌株種子液。[0050]3.3.制備菌液
[0051]取IOOmL產(chǎn)酸培養(yǎng)基至150mL三角瓶，接入ImL初篩菌株種子液，在30°C、150r/min的搖床中培養(yǎng)72h，即制得初篩菌株菌液。
[0052]3.4.測定初篩菌株的產(chǎn)酸能力
[0053]采用常規(guī)的測定總酸的方法測定初篩菌株的產(chǎn)酸能力。
[0054]制備0.lmol/L NaOH溶液:稱取0.4g NaOH固體，用純水溶解后用容量瓶定容至IOOmL0制備0.1%酒精酚酞:稱取0.025g酚酞粉末溶于無水乙醇中，用容量瓶定容至25mL。
[0055]吸取初篩菌株菌液0.2mL,加1.8mL無菌水稀釋10倍，滴加I~2滴0.1%的酒精酚酞溶液，用0.lmol/L NaOH溶液滴定至微粉色，記錄下消耗的0.lmol/L NaOH溶液的體積。
[0056]初篩菌株產(chǎn)酸量X (g/L)=V_XC_X0.060X100/V
[0057]V_——測定消耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)液體積，mL
[0058]C_——NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L
[0059]0.060-與 1.0mT, NaOH 標(biāo)準(zhǔn)溶液[C(NaOH)=L 000mol/L]相當(dāng)乙酸的質(zhì)量，g
[0060]V——初篩菌株菌液體積，mL
[0061]產(chǎn)酸量X——試樣中總酸含量(以乙酸計)，g/L
[0062]得到12株初篩菌株的產(chǎn)酸量，比較12株初篩菌株的產(chǎn)酸量，發(fā)現(xiàn)其中一株編號為Y5052菌株培養(yǎng)6天產(chǎn)酸量大于10g/L，耐乙醇濃度達(dá)6%，耐酸；Y5052菌株即為福建紅曲醋專用醋酸菌。經(jīng)鑒定Υ5052菌株為木糖葡糖酸醋桿菌(Gluconacetobacter swingsii)。
[0063]實(shí)施例2:
[0064]具體操作步驟如下:
[0065]1.以紅曲酒為碳源富集福建紅曲醋專用醋酸菌
[0066]1.1.制備紅曲酒酒釀
[0067]同上，略。
[0068]1.2.制備紅曲酒
[0069]同上，略。
[0070]1.3.富集福建紅曲醋專用醋酸菌
[0071]同上，略，但25天結(jié)束富集過程。
[0072]2.篩選福建紅曲醋專用醋酸菌菌株
[0073]2.1制備選擇性培養(yǎng)基[0074]配方同上，略；加入5%乙醇，制備平板備用。
[0075]2.2.初篩過程
[0076]配方同上，略。得14株醋酸菌初篩菌株
[0077]3.復(fù)篩
[0078]3.1.產(chǎn)酸培養(yǎng)基
[0079]配方同上,但無水乙醇7%, ρΗ5.5。
[0080]3.2.制備種子液[0081]過程同上，略。
[0082]3.3.制備菌液
[0083]取IOOmL產(chǎn)酸培養(yǎng)基至150mL三角瓶，接入ImL初篩菌株種子液，在32°C、180r/min的搖床中培養(yǎng)96h,即制得初篩菌株菌液。
[0084]3.4.測定初篩菌株的產(chǎn)酸能力
[0085]測定14株初篩菌株的產(chǎn)酸量，發(fā)現(xiàn)其中編號Y5072菌株培養(yǎng)6天產(chǎn)酸量大于24g/L，耐乙醇濃度大于6%，耐酸，Y5072菌株即為福建紅曲醋專用醋酸菌。經(jīng)鑒定Y5072菌株為木糖葡糖酸醋桿菌(Gluconacetobacter swingsii)。
【權(quán)利要求】
1.一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法，其特征在于包括以下步驟: 1)以紅曲酒為碳源富集福建紅曲醋專用醋酸菌: 將糯米加第一次水浸泡，淘洗，浙干，蒸汽加熱，攤涼后裝入壇中，加入紅曲和第二次水，攪勻后扎壇口，控制溫度低于34°C，維持40~45天，中間攪拌4~5次，即制得紅曲酒酒釀；再經(jīng)過濾，加熱后，即制得紅曲酒；在紅曲酒中加入紅曲醋醋母，保持溫度低于34°C，時間5~35天，即制得富集福建紅曲醋專用醋酸菌菌株的富集培養(yǎng)物； 2)初篩福建紅曲醋專用醋酸菌菌株: 先制備醋酸菌選擇性培養(yǎng)基，再制備醋酸菌選擇性培養(yǎng)基平板；稀釋步驟I)制得的富集福建紅曲醋專用醋酸菌菌株的富集培養(yǎng)物，稀釋的濃度依次為dO'lO—2...、…至10_8，分別取各濃度稀釋液100 μ L涂在醋酸菌選擇性培養(yǎng)基平板上，倒置培養(yǎng)，挑選醋酸菌選擇性培養(yǎng)基平板上周圍出現(xiàn)的透明水解圈的菌落，在醋酸菌選擇性培養(yǎng)基平板上劃線純化，然后接種于醋酸菌選擇性培養(yǎng)基斜面上，即得到初篩的福建紅曲醋專用醋酸菌菌株； 3)復(fù)篩福建紅曲醋專用醋Ife囷囷株: 制備產(chǎn)酸培養(yǎng)基，將步驟2)初篩的福建紅曲醋專用醋酸菌菌株接種于盛有IOOmL產(chǎn)酸培養(yǎng)基的三角瓶中，第一次搖床培養(yǎng)，即得初篩菌株種子液；再取IOOmL產(chǎn)酸培養(yǎng)基至三角瓶中，接入ImL初篩菌株種子液，第二次搖床培養(yǎng)，即得初篩菌株菌液，然后測定初篩菌株菌液的產(chǎn)酸能力，具體方法為:吸取初篩菌株菌液200 μ L，加1.8mL無菌水稀釋10倍，滴加I~2滴0.1%的酒精酚酞溶液，用0.lmol/L NaOH溶液滴定至微粉色，記錄下消耗的 0.lmol/L NaOH溶液的體積，初篩菌株產(chǎn)酸量為:
X (g/L) =V臟 X CNa0H X 0.060 X 100/V 其中，VNa(B——測定用試樣消耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)液體積，mL ； CNa0H——NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L ； 0.060——與1.0mL NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液[C(NaOH)=L 000mol/L]相當(dāng)乙酸的質(zhì)量，g ； V-試樣體積，mL ； 產(chǎn)酸量X——試樣中總酸含量，以乙酸計，g/L ； 比較不同初篩菌株的產(chǎn)酸能力，能在高于4%乙醇的培養(yǎng)基中快速產(chǎn)酸的菌株即為福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株。
2.如權(quán)利要求1所述一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法，其特征在于在步驟I)中，所述糯米、第一次水、紅曲、第二次水、紅曲醋醋母與紅曲酒的質(zhì)量比為20: 40:(I ~2): (30 ~40): (20 ~40): (10 ~20)。
3.如權(quán)利要求1所述一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法，其特征在于在步驟I)中，所述浸泡的時間為15~18h ;所述淘洗可采用清水淘洗3~4遍；所述蒸汽加熱的時間可為15~25min ;所述攤涼可攤涼至40~45°C ;所述紅曲可采用市售紅曲；所述扎壇口可采用報 紙扎壇口 ；所述過濾可采用布袋壓榨過濾；所述加熱的條件可在80~95°C下加熱5~20min。
4.如權(quán)利要求1所述一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法，其特征在于在步驟2)中，所述醋酸菌選擇性培養(yǎng)基的組成按質(zhì)量百分比為:葡萄糖5%~10%，蛋白胨0.5%，酵母粉1%，CaC03l%，瓊脂1.5%~2%，無水乙醇1.5%~8%，余量為水。
5.如權(quán)利要求1所述一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法，其特征在于在步驟2)中，所述醋酸菌選擇性培養(yǎng)基的制備方法為:葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、CaCO3、瓊脂和水混合，121°C滅菌20min，滅菌后冷卻至45~55°C，再加無水乙醇，即得醋酸菌選擇性培養(yǎng)基。
6.如權(quán)利要求1所述一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法，其特征在于在步驟2)中，所述稀釋采用十倍稀釋法；所述倒置培養(yǎng)的條件可在25~32°C倒置培養(yǎng)3~7天。
7.如權(quán)利要求1所述一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法，其特征在于在步驟3)中，所述產(chǎn)酸培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比的組成為:葡萄糖1%~4%，酵母粉1%，無水乙醇1%~8%，余量為水，pH5.5~7.5 ;所述第一次搖床培養(yǎng)的條件可為在25~32°C、100~180r/min的搖床中培養(yǎng)24h ;所述第二次搖床培養(yǎng)的條件可為在25~32°C、100~180r/min的搖床中培養(yǎng)48~120h。
8.如權(quán)利要求1所述一種篩選福建紅曲醋中專用醋酸菌菌株的方法，其特征在于在步驟3)中，所述0.lmol/L NaOH溶液的制備方法為:稱取0.4g NaOH固體，用純水溶解后用容量瓶定容至IOOmL ;所述0.1%的酒精酚酞溶液的制備方法可為:稱取0.025g酚酞粉末溶于無水乙醇中，用容量 瓶定容至25mL。
9.(Gluconacetobacter swingsii)Y5052,已于 2013 年 11 月 21 日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏中心登記入冊編號為CGMCC N0.8494。
10.(Gluconacetobacter swingsii) Y5072,已于 2013 年 11 月 21 日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏中心登記入冊編號為CGMCC N0.8495。
【文檔編號】C12R1/01GK103834598SQ201410089140
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月12日
【發(fā)明者】董志剛, 周素珊, 何云龍 申請人:廈門惠爾康食品有限公司