成團(tuán)泛菌新菌株xm2及其菌懸液的制備方法和對(duì)梨黑斑病的防治方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株成團(tuán)泛菌（Pantoea?agglomeran）新菌株XM2，于2014年2月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC?No.8822。本發(fā)明詳細(xì)描述了成團(tuán)泛菌新菌株XM2的形態(tài)特征、生理生化指標(biāo)及16SrDNA序列測定結(jié)果等。本發(fā)明新菌株XM2菌懸液的制備方法，包括種子液制備、發(fā)酵液制備和菌懸液制備三步驟完成。用本發(fā)明新菌株XM2菌懸液防治梨黑斑病的方法包括梨果采收前防治、梨果采收后立即防治和梨果預(yù)冷后防治三種，防治效果分別達(dá)到90%以上、82%以上和70%以上。防治機(jī)會(huì)多，生防效果好。如果將不同時(shí)期結(jié)合防治效果更好。
【專利說明】成團(tuán)泛菌新菌株XM2及其菌懸液的制備方法和對(duì)梨黑斑病的防治方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域,具體地說是涉及一種成團(tuán)泛菌agglomeran)if菌株XM2及其對(duì)梨黑斑病的防治方法。
【背景技術(shù)】
[0002]梨黑斑病是一種危害嚴(yán)重的世界性氣傳真菌病害，由鏈格孢(JBeraariaalternata')引起，在梨果米前和米后均有發(fā)生。我國是梨種植和出口大國，米后病原微生物的侵染造成采后腐爛損失嚴(yán)重，直接影響梨果貯運(yùn)生產(chǎn)，梨黑斑病的有效防治成為梨產(chǎn)業(yè)中急待解決的問題。使用化學(xué)殺菌劑控制水果的采后病害一直被認(rèn)為是最有效的控制方法。然而，隨著病原菌抗藥性的逐漸增加，及人們對(duì)水果質(zhì)量要求的提高和環(huán)保意識(shí)的加強(qiáng)，果蔬采后生物防治方法作為一種控制采后病害的新途徑，逐漸為人們所認(rèn)可，并成為研究熱點(diǎn)。近年有不少關(guān)于梨黑斑病生物防治的研究報(bào)道。齊東梅等篩選了一株枯草芽孢桿菌H110，其發(fā)酵液對(duì)梨采后黑斑病的防治率達(dá)到86.6%。謝莉從土壤中分離到金色鏈霉菌iStreptomyces aureus)'Q-lQh,其發(fā)酵液對(duì)梨黑斑病的抑制率67.4%ο Benbow等研究了隱球酵母屬的Cryptococcus informominiatus和紅酵母屬的 Rhodo torula glut in is 對(duì)梨病害的抑菌效果，Cryp tococcus informomini a tus 和Rhodotorula glutinis\ d對(duì)梨進(jìn)行處理,能有效地控制梨的采后黑斑病。宋聰?shù)确蛛x到一株枯草芽孢桿菌{Bacillus subtil is) J18,梨果在菌懸液中浸果30 s,晾干后噴施接種鏈格孢菌，梨黑斑病的發(fā)病率僅為16.57%，且菌株能在梨果上很好地定殖。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一株成團(tuán)泛菌iPantoea agglomeran)新菌株XM2及其對(duì)梨黑斑病的防治方法。
[0004]本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
[0005]一株成團(tuán)泛菌<3^7o?6?ra/7)新菌株XM2,于2014年2月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC N0.8822，地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所。
[0006]所述的成團(tuán)泛菌新菌株XM2是從山西省太原市金灘村西梅果實(shí)表面分離并純化得到。在溶菌肉湯(LB)培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h-72 h。成團(tuán)泛菌
新菌株XM2呈革蘭氏陰性菌,短桿狀,大小為(0.5~0.9) μ mX ( 1.0~
2.5)μ m，有鞭毛，具有運(yùn)動(dòng)性(見圖1)。在LB培養(yǎng)基平板上好氧培養(yǎng)24 h~48 h后，產(chǎn)生表面光滑、凸起、半透明、邊緣整齊、直徑為2.0 mm ^ 3.0 mm的黃色菌落。菌株XM2為兼性厭氧菌，生長pH范圍為5.7~7.5，生長溫度范圍為4°C~40°C，NaCl濃度范圍0%~7%。其它生理生化指標(biāo)如表1所示:
表1菌株XM2生理生化特征
【權(quán)利要求】
1.一株成團(tuán)泛菌新菌株XM2，其特征是已于2014年2月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC N0.8822。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的成團(tuán)泛菌新菌株XM2，其特征是:所述的成團(tuán)泛菌新菌株XM2是從山西省太原市金灘村西梅果實(shí)表面分離并純化得到，在溶菌肉湯培養(yǎng)基上培養(yǎng)48 h^72 h，成團(tuán)泛菌新菌株XM2呈革蘭氏陰性菌，短桿狀，大小為0.5μπι~0.9 μπιΧΙ.Ομπι~2.5 μ m，有鞭毛；在溶菌肉湯培養(yǎng)基平板上好氧培養(yǎng)24 h~48 h后，產(chǎn)生表面光滑、凸起、半透明、邊緣整齊、直徑為2.0 mm~3.0 mm的黃色菌落；成團(tuán)泛菌新菌株XM2為兼性厭氧菌，生長pH范圍為5.7~7.5，生長溫度范圍為4°C~40°C，NaCl濃度范圍0%~7%;其他生理生化指標(biāo)如下表所示: 菌株XM2生理生化特征
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的成團(tuán)泛菌新菌株XM2，其特征是:所述的溶菌肉湯培養(yǎng)基是由下列質(zhì)量/體積份的成分組成:酵母粉5份，蛋白胨10份，NaCl5份，瓊脂粉18份，蒸餾水1000份；pH 7.4~7.6。
4.成團(tuán)泛菌新菌株XM2菌懸液的制備方法，包括如下步驟: (I)種子液制備從試管斜面上用接種針挑取一環(huán)新鮮成團(tuán)泛菌XM2單菌落，接種于溶菌肉湯培養(yǎng)液中，28°C、160 rpm/min震蕩恒溫培養(yǎng)24 h，制得成團(tuán)泛菌XM2的種子液；(2)發(fā)酵液制備將成團(tuán)泛菌XM2的種子液按照1%的比例接入溶菌肉湯培養(yǎng)液中，280C 160 rpm/min震蕩恒溫培養(yǎng)72 h，制得成團(tuán)泛菌XM2的發(fā)酵液； (3)菌懸液制備將成團(tuán)泛菌XM2的發(fā)酵液經(jīng)10000rpm/min離心10 min，棄上清液；向沉淀中加入滅菌水，再次經(jīng)10000 rpm/min離心10 min,棄上清液；再次向沉淀中加入無菌水，混勻，獲得成團(tuán)泛菌XM2的菌懸液。
5.用成團(tuán)泛菌新菌株XM2的菌懸液防治梨黑斑病的方法，其特征是: 在梨果采收前3飛(1用噴霧器在果實(shí)表面噴施濃度為1父106(^11/111171\108(^11/1^的成團(tuán)泛菌XM2的菌懸液，要選擇天氣晴朗、日照充足的時(shí)間段實(shí)施防治； 或
將成團(tuán)泛菌新菌株XM2菌懸液配置成濃度為IX IO6 cfu/mL^l X IO8 cfu/mL的成團(tuán)泛菌XM2的菌懸液，梨果采摘后立即用該菌懸液浸泡2 I min，置于塑料周轉(zhuǎn)箱，待果實(shí)自然晾干后再入保鮮庫預(yù)冷、貯藏；注意在自然晾干過程中，避免將梨果與土壤等其他可能攜帶病原菌的物質(zhì)接觸； 或 將成團(tuán)泛菌新菌株XM2菌懸液配置成濃度為I X IO6 cfu/mL~I X IO8 cfu/mL的成團(tuán)泛菌XM2的菌懸液，當(dāng)梨果在保鮮庫預(yù)冷24 h后，將沒有機(jī)械傷的梨果用該菌懸液浸泡2 Imin，置于塑料周轉(zhuǎn)箱，待果實(shí)自然晾干后再進(jìn)行梨果的裝箱工作；注意整個(gè)浸泡和晾干過程均需要在保鮮庫中進(jìn)行，防治梨果溫度升高，出現(xiàn)冷凝水。
【文檔編號(hào)】C12R1/01GK103952338SQ201410143195
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2014年4月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月11日
【發(fā)明者】張曉宇, 張姝, 王春生, 張澤宇, 張則君, 韓巨才, 劉慧平, 張永杰 申請(qǐng)人:山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品貯藏保鮮研究所