一種制備扇貝裙邊活性肽的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，包括清洗勻漿、中性蛋白酶和堿性蛋白酶復(fù)合酶解、高溫瞬時加熱滅酶、脈沖電場純化、超濾、混合床脫鹽、色譜分離、真空濃縮、真空冷凍干燥和載物、壓片步驟。本發(fā)明的有益效果為：本方法通過對海洋貝類資源廢棄物下腳料扇貝裙邊的綜合開發(fā)，變廢為寶，可提高貝類產(chǎn)品的經(jīng)濟價值；通過本方法，扇貝裙邊酶解效率顯著提高、短肽獲得率能夠達到80%以上，操作簡便，所得產(chǎn)品口感得到顯著的改善，口服時生物活性能夠得以保持。
【專利說明】一種制備扇貝裙邊活性肽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食品加工領(lǐng)域，特別是涉及一種制備扇貝裙邊活性肽的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]扇貝(Scallop)是一種海產(chǎn)貝類，最傳統(tǒng)的加工方式為干制，俗稱干貝，富含?；撬岬榷喾N氨基酸、高度不飽和脂肪酸、微量元素和維生素。從古到今它都是一種深受歡迎的營養(yǎng)保健品，具有滋陰補腎調(diào)中的功效。扇貝經(jīng)干制后其余的軟體部分俗稱為扇貝裙邊，通常由于扇貝裙邊感官性狀差，加工利用程度較低，一般作飼料處理甚至被廢棄。此種方式不僅使產(chǎn)品綜合利用率低而且嚴(yán)重污染環(huán)境。
[0003]扇貝裙邊含有豐富的蛋白質(zhì)、碳水化合物、核黃素等多種營養(yǎng)成分和鈣、鐵、鋅、硒、銅等微量元素，其營養(yǎng)價值毫不遜色于扇貝柱。山東省作為海洋大省，扇貝年產(chǎn)量上百萬噸，尤其青島扇貝向來聞名，其加工后的廢棄物扇貝裙邊也有幾十萬噸。如何充分合理地利用扇貝裙邊是扇貝加工業(yè)急待解決的問題。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)扇貝裙邊含有大量的生理活性物質(zhì)，具有降血脂、抗腫瘤、抗病毒、抗衰老等多種生物功能。
[0004]現(xiàn)有生產(chǎn)方法通常采用單一的酶來酶解蛋白，如中性蛋白酶Neutrase、堿性蛋白酶Alcalase2.4L、復(fù)合蛋白酶Promatex、風(fēng)味蛋白酶Flavourzyme、木瓜蛋白酶Papain或膜蛋白酶TryPsin，因單酶作用位點有限，故大大降低了酶解效率和短肽得率。
[0005]蛋白酶解過程中，為了使蛋白酶處于最適pH范圍內(nèi)，盡量維持其水解速度，必須不斷加入一些堿或酸來調(diào)節(jié)水解體系的PH值，因此最后得到的蛋白水解物中含有一定量的鹽分，這部分鹽分可能會影響到產(chǎn)品的純度和適用范圍并對其功能活性帶來負面影響，進而限制其在食品領(lǐng)域的應(yīng)用，因此需要對短肽進行脫鹽處理。傳統(tǒng)的脫鹽方法包括離子交換樹脂脫鹽法和大孔樹脂法。離子交換樹脂脫法要分別通過陰陽離子交換樹脂，使得脫鹽過程較為繁瑣，且肽回收率較低。大孔樹脂法則要經(jīng)過吸附和洗脫過程，不僅操作繁瑣，肽得率較低，而且洗脫時要使用有機溶劑，使得該法不易產(chǎn)業(yè)化操作。
[0006]國內(nèi)肽類產(chǎn)品大多純度有限，且由于其特殊的理化性質(zhì)，最容易在人體胃腸體系降解，因胃酸的PH值為I~3，肽類在這種環(huán)境中的生物活性幾乎完全喪失。同時，由于胃腸道中酶的降解作用，絕大多數(shù)的功能性肽類在胃腸道中被降解為由氨基酸或由2~6個氨基酸組成的小分子肽，故其口服活性無法在藥物及食品體系保持。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，以克服目前現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足。
[0008]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):
一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，包括以下步驟:
Cl)勻漿:
將經(jīng)驗收合格的扇貝裙邊清洗后打漿，之后放入勻漿機進行勻漿；(2)復(fù)合酶解:
先用中性蛋白酶對步驟(1)得到的原料進行水解，水解完成后再調(diào)節(jié)PH值用堿性蛋白酶水解；
(3)滅酶:
水解結(jié)束后，過濾，將濾液高溫瞬時加熱滅酶；
(4)脈沖電場純化:
將步驟(3)得到的原料放入強脈沖電場中進行純化；
(5)超濾: 將步驟(4)得到的原料進行超濾；
(6)混合床脫鹽:
將步驟(5)得到的超濾酶解液進行混合床脫鹽；
(7)色譜分離:
將步驟(6)得到的原料進行色譜分離純化；
(8)真空濃縮:
將步驟(7)得到的色譜分離物在8(T90°C下進行真空濃縮；
(9)真空冷凍干燥:
將步驟(8)得到的真空濃縮物進行真空冷凍干燥；
(10)載物、壓片:
取經(jīng)純化、冷凍干燥后的殼聚糖和殼聚糖/明膠水凝膠，與步驟(8)得到的真空冷凍干燥物充分混勻，用壓片機制成成品。
[0009]優(yōu)選的，所述步驟(1)中的勻漿操作后勻漿液顆粒粒度小于3um。
[0010]優(yōu)選的，所述步驟(2)中的中性蛋白酶為N120P、堿性蛋白酶為Alcalase。
[0011]優(yōu)選的，所述步驟(3)中的高溫瞬時加熱條件為95~100°C，加熱時間2分鐘。
[0012]優(yōu)選的，所述步驟(4)中的脈沖電場強度為5~15KV/cm，脈沖頻率為2500-3500Ηζ，處理時間為20(T400us。
[0013]優(yōu)選的，所述步驟(5)中選用MWCO為IKD的超濾膜。
[0014]優(yōu)選的，所述步驟(6)中混合床脫鹽技術(shù)條件為陰離子:陽離子=3:2，過柱速度:5倍柱體積Λ，水解液pH值4.5。
[0015]優(yōu)選的，所述步驟(7)中色譜分離條件為:色譜柱，PheedaClS柱；上樣量:lmL ；流速:4mL/min ;檢測波長:280nm 和 220nm ;洗脫條件:(T3min，100%A ;3~50min，0%~50%B ；50~52min，50%~100%B ;52~58min，100%B ;58~60min，100%B~100%A，所述 A 為 5% 乙腈和 0.05%三氟乙酸，所述B為80%乙腈和0.05%三氟乙酸。
[0016]優(yōu)選的，所述步驟(8)中真空濃縮溫度為80~90°C。
[0017]優(yōu)選的，所述步驟(9)中真空冷凍干燥溫度為_30°C。
[0018]本發(fā)明的有益效果為:本方法通過對海洋貝類資源廢棄物下腳料扇貝裙邊的綜合開發(fā)，變廢為寶，可提高貝類產(chǎn)品的經(jīng)濟價值；通過本方法，扇貝裙邊酶解效率顯著提高、短肽獲得率能夠達到80%以上，操作簡便，所得產(chǎn)品口感得到顯著的改善，口服時生物活性能夠得以保持。【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]下面根據(jù)附圖對本發(fā)明作進一步詳細說明。
[0020]圖1是現(xiàn)有技術(shù)中扇貝裙邊活性肽制取方法流程圖；
圖2是本發(fā)明實施例所述的扇貝裙邊活性肽制取方法流程圖。
【具體實施方式】
[0021]實施例1
如圖1-2所示，本發(fā)明實施例所述的一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，將經(jīng)驗收合格的扇貝裙邊清洗后打漿，之后放入勻漿機進行勻漿，控制勻漿液的顆粒粒度小于3um ;然后用中性蛋白酶N120P在40°C，PH7.0，酶-底物濃度比(W/W)為5%的條件下水解勻漿液2小時，水解完成后用0.5%的NaOH溶液調(diào)節(jié)PH至8.8，溫度升至55°C，加入堿性蛋白酶(Alcalase)水解2 h，此條件下肽得率在80%以上；之后，過濾酶解液，棄去殘渣，將濾液用高溫瞬時加熱法加熱，溫度為95°C，加熱2 min后迅速冷卻至室溫；將滅酶液放入脈沖電場強度為5Kv/cm，脈沖頻率為3500Hz，處理時間400us ;選用MWCO為IKD的超濾膜，采用Millipore杯式超濾器，對純化酶解液進行超濾處理；將超濾酶解液在陰離子:陽離子=3:2，過柱速度:5倍柱體積/h，水解液pH值4.5的條件下進行混合床脫鹽；將脫鹽酶解液在HPLC系統(tǒng)進行分離純化。色譜條件:色譜柱，PheedaC18柱；上樣量:lmL ;流速:4mL/min ;檢測波長:280nm 和 220nm ;洗脫條件:0~3min，100%A ;3~50min，0%~50%B ;50~52min，50%~100%B ;52~58min，100%B ;58~60min，100%B~100%A ；所述 A 為 5% 乙腈和 0.05% 三氟乙酸；B為80%乙腈和0.05%三氟乙酸；將色譜分離物在80°C下進行真空濃縮；將真空濃縮物于-30°C下冷凍干燥24h ;取經(jīng)純化、冷凍干燥后的殼聚糖和殼聚糖/明膠水凝膠，與真空冷凍干燥物充分混勻，用壓片機制成成品。
[0022]實施例2
本發(fā)明實施例所述的一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，將經(jīng)驗收合格的扇貝裙邊清洗后打漿，之后放入勻漿機進行勻漿，控制勻漿液的顆粒粒度小于3um ;然后用中性蛋白酶N120P在40°C，PH7.0，酶-底物濃度比(W/W)為5%的條件下水解勻漿液2小時，水解完成后用0.5%的NaOH溶液調(diào)節(jié)PH至8.8，溫度升至55°C，加入堿性蛋白酶(Alcalase)水解2 h，此條件下肽得率在80%以上；之后，過濾酶解液，棄去殘渣，將濾液加熱，一來，可以加熱滅菌，二來可以使酶失去活性，本項目采用高溫瞬時加熱法，即97°C，加熱2 min后迅速冷卻至室溫；將滅酶液放入脈沖電場強度為lOKv/cm，脈沖頻率為3000Hz，處理時間300us ;選用MWCO為IKD的超濾膜，采用Millipore杯式超濾器，對純化酶解液進行超濾處理；將超濾酶解液在陰離子:陽離子=3:2，過柱速度:5倍柱體積/h，水解液pH值4.5的條件下進行混合床脫鹽；將脫鹽酶解液在HPLC系統(tǒng)進行分離純化。色譜條件:色譜柱，PheedaClS柱；上樣量:lmL ;流速:4mT,/miη ;檢測波長:280nm 和 220nm ;洗脫條件:0~3min, 100%A ;3~50min,0%~50%B ;5(T52min，50%~100%B ;52~58min，100%B ;58~60min，100%B~100%A ;所述 A 為 5% 乙腈和0.05%三氟乙酸；B為80%乙腈和0.05%三氟乙酸；將色譜分離物在85°C下進行真空濃縮；將真空濃縮物于_30°C下冷凍干燥24h ;取經(jīng)純化、冷凍干燥后的殼聚糖和殼聚糖/明膠水凝膠，與真空冷凍干燥物充分混勻，用壓片機制成成品。
[0023]實施例3本發(fā)明實施例所述的一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，將經(jīng)驗收合格的扇貝裙邊清洗后打漿，之后放入勻漿機進行勻漿，控制勻漿液的顆粒粒度小于3um ;然后用中性蛋白酶N120P在40°C，PH7.0，酶-底物濃度比(W/W)為5%的條件下水解勻漿液2小時，水解完成后用0.5%的NaOH溶液調(diào)節(jié)PH至8.8，溫度升至55°C，加入堿性蛋白酶(Alcalase)水解2 h，此條件下肽得率在80%以上；之后，過濾酶解液，棄去殘渣，將濾液加熱，一來，可以加熱滅菌，二來可以使酶失去活性，本項目采用高溫瞬時加熱法，即100°C，加熱2 min后迅速冷卻至室溫；將滅酶液放入脈沖電場強度為15Kv/cm，脈沖頻率為2500Hz，處理時間200us ;選用MWCO為IKD的超濾膜，采用Millipore杯式超濾器，對純化酶解液進行超濾處理；將超濾酶解液在陰離子:陽離子=3:2，過柱速度:5倍柱體積/h，水解液pH值4.5的條件下進行混合床脫鹽；將脫鹽酶解液在HPLC系統(tǒng)進行分離純化。色譜條件:色譜柱，PheedaClS柱；上樣量:lmL ;流速:4mT,/miη ;檢測波長:280nm 和 220nm ;洗脫條件:0~3min, 100%A ;3~50min,0%~50%B ;5(T52min，50%~100%B ;52~58min，100%B ;58~60min，100%B~100%A ;所述 A 為 5% 乙腈和0.05%三氟乙酸；B為80%乙腈和0.05%三氟乙酸；將色譜分離物在90°C下進行真空濃縮；將真空濃縮物于_30°C下冷凍干燥24h ;取經(jīng)純化、冷凍干燥后的殼聚糖和殼聚糖/明膠水凝膠，與真空冷凍干燥物充分混勻，用壓片機制成成品。
[0024]按照本發(fā)明實施例所述的方法生產(chǎn)的扇貝裙邊活性肽純度高、安全性好、無毒副作用、人體吸收快、可控釋。
[0025]以下為按照本發(fā)明實施例所述方法生產(chǎn)的扇貝裙邊活性肽的感官和理化檢測效果:
感官效果:
【權(quán)利要求】
1.一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)勻漿: 將經(jīng)驗收合格的扇貝裙邊清洗后打漿，之后放入勻漿機進行勻漿； (2)復(fù)合酶解: 先用中性蛋白酶對步驟(1)得到的原料進行水解，水解完成后再調(diào)節(jié)PH值用堿性蛋白酶水解； (3)滅酶: 水解結(jié)束后，過濾，將濾液高溫瞬時加熱滅酶； (4)脈沖電場純化: 將步驟(3)得到的原料放入強脈沖電場中進行純化； (5)超濾: 將步驟(4)得到的原料進行超濾； (6)混合床脫鹽: 將步驟(5)得到的超濾酶解液進行混合床脫鹽； (7)色譜分離: 將步驟(6)得到的原料進行色譜分離純化； (8)真空濃縮: 將步驟(7)得到的色譜分離物在8(T90°C下進行真空濃縮； (9)真空冷凍干燥: 將步驟(8)得到的真空濃縮物進行真空冷凍干燥； (10)載物、壓片: 取經(jīng)純化、冷凍干燥后的殼聚糖和殼聚糖/明膠水凝膠，與步驟(8)得到的真空冷凍干燥物充分混勻，用壓片機制成成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，其特征在于:所述步驟(1)中的勻漿操作后勻漿液顆粒粒度小于3um。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，其特征在于:所述步驟(2)中的中性蛋白酶為N120P、堿性蛋白酶為Alcalase。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，其特征在于:所述步驟(3)中的高溫瞬時加熱條件為95~100°C，加熱時間2分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，其特征在于:所述步驟(4)中的脈沖電場強度為5~15Kv/cm，脈沖頻率為2500-3500ΗZ，處理時間為20(T400us。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，其特征在于:所述步驟(5)中選用MWCO為IKD的超濾膜。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，其特征在于:所述步驟(6)中混合床脫鹽技術(shù)條件為陰離子:陽離子=3:2，過柱速度:5倍柱體積/小時，水解液pH值4.5。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，其特征在于:所述步驟(7)中色譜分離條件為:色譜柱，PheedaC18柱；上樣量:lmL ;流速:4mL/min ;檢測波長:280nm和 220nm ;洗脫條件:0~3min，100%A ;3~50min，0%~50%B ;50~52min，50%~100%B ;52~58 分鐘，100%B ;58~60分鐘，100%B~100%A，所述A為5%乙腈和0.05%三氟乙酸，所述B為80%乙腈和0.05%三氟乙酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，其特征在于:所述步驟(8)中真空濃縮溫度為80~90°C。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所 述的一種制備扇貝裙邊活性肽的方法，其特征在于:所述步驟(9)中真空冷凍干燥溫度為_30°C。
【文檔編號】C12P21/06GK103911416SQ201410145196
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2014年4月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月11日
【發(fā)明者】王清光 申請人:青島老三東食品股份有限公司