米曲霉tjtsw001及其在中藥淡豆豉發(fā)酵中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種米曲霉TJTSW001及其在中藥淡豆豉發(fā)酵中的應用，該米曲霉于2014年3月20日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?NO.8945。該米曲霉菌種為從淡豆豉中分離，經(jīng)60Co和紫外誘變篩選得到。該菌種具有很強的產(chǎn)生糖苷酶活性的能力，可將大豆異黃酮水解為大豆苷元和糖類。本發(fā)明的菌株在中藥淡豆豉發(fā)酵生產(chǎn)中能夠發(fā)揮重要作用，可以獲得高含大豆苷元的淡豆豉，從而可以增加其功效性，具有廣泛的應用前景。
【專利說明】米曲霉TJTSW001及其在中藥淡豆豉發(fā)酵中的應用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及米曲霉，尤其是涉及一種米曲霉TJTSW001及其在中藥淡豆豉發(fā)酵中的應用。

【背景技術(shù)】
[0002]淡豆豉是一味常用的傳統(tǒng)中藥，始載于《名醫(yī)別錄》，歷代本草都有記載，它是常用中成藥“銀翹解毒片”處方的主要藥味之一，也是歷代《中國藥典》的收錄品種。本品為豆科植物大豆的成熟種子的發(fā)酵加工品，除黑色種皮品系的大豆為主要原料外，還用桑葉、青蒿等藥材配以其中進行發(fā)酵。中醫(yī)傳統(tǒng)應用本品于臨床的功效主治為:解表、除煩、宣發(fā)郁熱。用于感冒、寒熱頭痛、煩躁胸悶、虛煩不眠等。
[0003]大豆異黃酮是大豆的主要生理活性成分，現(xiàn)代研究表明其具有如下功用:
[0004](I)防癌、腫瘤及抗癌腫瘤作用。
[0005](2)預防骨質(zhì)疏松。
[0006](3)降膽固醇和心臟保護作用。
[0007](4)神經(jīng)保護及抗神經(jīng)退行性疾病等等。
[0008]大豆異黃酮在大豆中，主要有兩種存在形式，一種為游離型苷元，包括染料木素(又稱大豆苷元，金雀異黃素)和黃豆苷，另一種為結(jié)合型的糖苷。糖苷主要以丙二酰染料木素，丙二酰大豆苷，染料木苷，大豆苷的形式存在。大豆中主要以結(jié)合型的糖苷為主，游離的苷元占比相當少，約占總量的2-3%。需要指出的是，苷元的活性要遠高于糖苷。結(jié)合型的糖苷需要水解成苷元才能發(fā)揮作用。因此，如果能將糖苷水解成苷元的形式，將獲得更高的生理活性。郭文勇通過實驗發(fā)現(xiàn)(中藥淡豆豉的質(zhì)量評價方法及其“解表除煩”作用機制研究，碩士學位論文，2004年)淡豆豉中的異黃酮與其“解表除煩“的功效存在一定聯(lián)系。因此，獲得更高活性的大豆異黃酮苷元，對提高淡豆豉的藥效有十分顯著的現(xiàn)實意義。
[0009]中藥淡豆豉發(fā)酵用的微生物，絕大多數(shù)均記載為自然發(fā)酵的方式，如《中華人民共和國藥典》2010版，關(guān)于淡豆豉的記載“用煎過的桑葉、青蒿渣覆蓋，悶使發(fā)酵至黃衣上遍時，取出，除去藥渣。洗凈，置容器內(nèi)再悶15-20天，至充分發(fā)酵，香氣溢出時，取出，略蒸，干燥，即得?！贝送猓瑯拥谋硎鲈凇逗鲜≈兴幣谥埔?guī)范》1983版，《上海市中藥炮制規(guī)范》2008版中等均出現(xiàn)過。毋庸置疑，上述發(fā)酵的過程中存在眾多微生物的共同作用。但從長“黃衣”，以及相關(guān)研究可以明確，米曲霉在其發(fā)酵的過程中占據(jù)著十分優(yōu)勢的地位。《浙江省中藥炮制規(guī)范》2005版則十分明確的表述了接種米曲霉孢子進行發(fā)酵。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明的目的就是為了解決上述問題，提供一種米曲霉TJTSW001，該米曲霉菌株可高產(chǎn)糖苷酶，可以高效的將結(jié)合型的大豆異黃酮水解成苷元和糖。
[0011]本發(fā)明的另一目的是應用米曲霉菌株TJTSW001發(fā)酵生產(chǎn)中藥淡豆豉，獲得高含苷元的中藥淡豆豉。
[0012]本發(fā)明提供的米曲霉菌株是(Aspergillus oryzae)TJTSW001,該菌株已于2014年3月20日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏編號為CGMCC N0.8945，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所。
[0013]該菌株是經(jīng)過60Co和紫外復合誘變獲得。該菌株具有很高的產(chǎn)糖苷酶活性，利用該菌株生產(chǎn)中藥淡豆豉可以獲得高含苷元的，大幅高于目前文獻報道淡豆豉中苷元含量。
[0014]本發(fā)明所提供的米曲霉菌株，是通過6tlCo和紫外誘變復合誘變獲得的。
[0015]首先，將生長好的米曲霉孢子用無菌水洗下，制成孢子懸液，然后將該孢子懸液置于輻照劑量為20ky的6tlCo照射下，進行誘變。誘變結(jié)束的孢子懸液，倒入平皿上，在紫外燈的照射下，進行二次誘變。誘變完成后，在黑暗的環(huán)境中靜止片刻，以防止光復活。
[0016]然后，在篩選培養(yǎng)基上進行篩選培養(yǎng)，篩選培養(yǎng)基以大豆異黃酮為惟一碳源，以(NH4)2SO4S氮源，以在篩選培養(yǎng)基上形成單個菌落為合適稀釋度。以菌落大小為挑選依據(jù)，選擇出目標菌。
[0017]本發(fā)明所獲得的米曲霉(Aspergillus oryzae)TJTSW001,可以在以大豆異黃酮為惟一碳源，以(NH4)2SO4為氮源的培養(yǎng)基上生長良好，培養(yǎng)三天，其菌落直徑可達3厘米。進一步利用其發(fā)酵淡豆豉，測定其糖苷酶。
[0018]本發(fā)明具有如下有益效果:
[0019]本發(fā)明所獲得米曲霉(Aspergillus oryzae)TJTSW001,將其運用在中藥淡豆豉的生產(chǎn)上，可以獲得高含大豆苷元的淡豆豉，從而可以增加其功效性，具有廣泛的前景。

【具體實施方式】
[0020]為了使本發(fā)明實現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。
[0021]本發(fā)明所提供的米曲霉菌株，是通過6tlCo和紫外誘變復合誘變獲得的。制備過程如下:
[0022]首先，將生長好的米曲霉孢子用無菌水洗下，制成孢子懸液，然后將該孢子懸液置于輻照劑量為20ky的6tlCo照射下，進行誘變。誘變結(jié)束的孢子懸液，倒入平皿上，在紫外燈的照射下，進行二次誘變。誘變完成后，在黑暗的環(huán)境中靜止片刻，以防止光復活。
[0023]然后，在篩選培養(yǎng)基上進行篩選培養(yǎng)，篩選培養(yǎng)基以大豆異黃酮為惟一碳源，以(NH4)2SO4S氮源，以在篩選培養(yǎng)基上形成單個菌落為合適稀釋度。以菌落大小為挑選依據(jù)，選擇出目標菌。
[0024]本發(fā)明所獲得的米曲霉(Aspergillus oryzae)TJTSW001,可以在以大豆異黃酮為惟一碳源，以(NH4)2SO4為氮源的培養(yǎng)基上生長良好，培養(yǎng)三天，其菌落直徑可達3厘米。進一步利用其發(fā)酵淡豆豉，測定其糖苷酶。
[0025]實施例1:
[0026]米曲霉(Aspergillus oryzae)TJTSffOOl與其出發(fā)菌株在篩選培養(yǎng)基上生長情況比較。
[0027]將米曲霉(Aspergillus oryzae)TJTSW001和其出發(fā)菌株同時接種在篩選培養(yǎng)基上(大豆異黃酮為惟一碳源，(NH4)2SO4為惟一氮源)，置于35°C的霉菌培養(yǎng)基上培養(yǎng),觀察其菌落大小(參見表1)。
[0028]表1
[0029]

【權(quán)利要求】
1.米曲霉TJTSW001,該米曲霉(Aspergillusoryzae)于2014年3月20日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC N0.8945。
2.權(quán)利要求1所述的米曲霉(Aspergillusoryzae)TJTSW001在中藥淡豆豉發(fā)酵中的應用。
【文檔編號】C12N1/14GK104073444SQ201410166284
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年4月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月22日
【發(fā)明者】陳小林, 趙敏, 邵麗芳, 王瑞 申請人:杭州桐君堂生物科技有限公司