一種高效抑制禽源彎曲桿菌的唾液乳酸桿菌的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株具有高效抑制禽源彎曲桿菌的唾液乳酸桿菌Lactobacillus?salivarius?Scgz-11，其保藏編號為CCTCC?NO：M2014080，具有較好的耐酸、耐膽鹽能力，其分泌上清液對禽空場彎曲桿菌具有很強的抑制作用，能有效抑制禽空場彎曲桿菌對細(xì)胞的黏附及入侵作用，且本發(fā)明菌株自身擁有良好的黏附能力，并可以顯著提高禽類體重?？蓱?yīng)用于制備防治禽類空場彎曲桿菌感染的藥劑，或者應(yīng)用于制備改善禽類腸道菌群生態(tài)平衡的藥劑。
【專利說明】一種高效抑制禽源彎曲桿菌的唾液乳酸桿菌
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一株新菌種及其在環(huán)境工程中的應(yīng)用，具體涉及一種高效抑制禽源彎曲桿菌的唾液乳酸桿菌及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]益生菌(Probiotics)被動物攝入一定的數(shù)量后,產(chǎn)生有利于宿主健康作用的一類微生物活體，其中乳酸菌是最為常見的一類益生菌，主要包括乳桿菌、鏈球菌和雙歧桿菌等屬，具有調(diào)節(jié)胃腸道失衡，增強機體免疫能力，促進(jìn)消化等功能，能夠抑制腸道病原菌生長，治療病原菌引發(fā)的疾病，如腹瀉和腸炎等。目前，已有許多研究將益生菌的有益功效應(yīng)用于預(yù)防和治療胃腸道病原菌感染引起的疾病，例如用于Helicobacter pylori, Escherichiacoli, Salmonell等病原菌引起的感染。[0003]目前，乳酸桿菌制品在調(diào)節(jié)免疫性疾病，降低膽固醇，預(yù)防癌癥等各方面都有一定療效。乳酸桿菌制品臨床上用于預(yù)防感染性疾病有一個很好的基礎(chǔ)理論，而且安全性能高，但僅少部分乳酸桿菌制品在臨床應(yīng)用中發(fā)揮作用，因此，仍需繼續(xù)尋找抑菌效果更好的菌株。
[0004]彎曲桿菌是一類在微需氧條件下生長的革蘭氏染色陰性菌，呈逗點狀或S形。彎曲桿菌屬主要有胎兒彎桿菌、糞彎桿菌以及痰液彎桿菌3種，其中的空腸彎曲桿菌(C.jejuni)和結(jié)腸彎曲桿菌被認(rèn)為是造成動物和人腹瀉的主要致病菌之一。彎曲桿菌可引起火雞的肝炎和藍(lán)冠病，雛雞的壞死性肝炎，犢牛、仔豬的腹瀉等多種疾?。灰灿袌蟮婪Q彎曲桿菌能夠引起牛、綿羊等反芻動物的流產(chǎn)。同時，彎曲桿菌被認(rèn)為是引起人腸炎的主要病原菌。人感染彎曲桿菌后，可能出現(xiàn)血便和腹痛的癥狀，此外，空腸彎曲桿菌感染還可能會導(dǎo)致嚴(yán)重的繼發(fā)病——格林一巴利綜合癥(GBS)，該病屬于脫髓鞘障礙導(dǎo)致急性神經(jīng)肌肉麻痹。因此，十分有必要發(fā)展新的方法來預(yù)防和降低C.jejuni感染，進(jìn)一步保障食品安全和人類健康，隨著生物學(xué)研究領(lǐng)域的興起，利用具有抑制病原菌功效的益生菌來預(yù)防C.jejuni感染逐漸成為研究的熱點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一株新菌種:唾液乳酸桿菌Zac tobaciIlus sali variusScgz-11。
[0006]本發(fā)明的另一目的在于提供唾液乳酸桿菌Lactobacillus salivarius Scgz-1I在制備防治禽類空場彎曲桿菌感染的藥劑中的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:
申請人:將菌株保藏在位于武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏中心于2014年3月12日收到 申請人:提供的菌株。保藏中心給予該培養(yǎng)物的保藏號為CCTCC NO:M2014080，提議的分類命名為Zacio如salivarius Scgz-11，已于 2014年3月17日鑒定保藏的菌株是存活的。[0008]Lactobacillus salivarius Scgz-11在制備防治禽類空場彎曲桿菌感染的藥劑中的應(yīng)用。
[0009]Lactobacillus salivarius Scgz-11在制備改善禽類腸道菌群生態(tài)平衡藥劑中的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明的有益效果是:
I)本發(fā)明唾液乳酸桿菌salivarius Scgz-1l是一種具有高效抑制空場彎曲桿菌的益生菌，預(yù)防和降低空場彎曲桿菌對家禽的感染，對保障食品安全和人類健康具有重要意思。
[0011]2)本發(fā)明菌株是從健康動物分離出來的菌株，安全可靠，并且通過多重檢查篩選方法，證明其的可靠穩(wěn)定。
[0012]3)本發(fā)明菌株是以針對治療空場彎曲桿菌而開發(fā)的菌株，對空場彎曲桿菌具有針對性，并且效果良好。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1為唾液乳酸桿菌Scgz-1l的電子顯微鏡圖；
圖2為唾液乳酸桿菌Scgz-1l的生長曲線；
圖3為唾液乳酸桿菌Scgz-1l對彎曲桿菌的抑制現(xiàn)象；
圖4為不同處理組雞苗的體重。
【具體實施方式】
[0014]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但并不局限于此。
[0015]實施例1
一、唾液乳酸桿菌Scgz-1l的來源
該唾液乳酸桿菌為本發(fā)明人于2013年中從廣東養(yǎng)殖場的健康雞群中分離得到，現(xiàn)由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院禽病研究室保存和提供。
[0016]二、唾液乳酸桿菌Scgz-1l的鑒定和分類
經(jīng)過本發(fā)明人實驗室系統(tǒng)鑒定表明該株為唾液乳酸桿菌。
[0017](I)生化鑒定
根據(jù)《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》，做如下生化試驗:過氧化氫酶試驗、硝酸鹽還原試驗、明膠液化試驗、吲哚試驗、硫化氫試驗、V-P試驗和動力試驗。該七項生化試驗均為陰性。判定所篩選出的ScgZ-1l菌株屬于乳酸菌(Lactobacillus)屬。
[0018](2) 16S rRNA 基因測序
設(shè)計引物序列:fDl:5p-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3p，rDl: 5p_AAGGAGGTGATCC AGCC_3p，PCR反應(yīng)參照寶生物公司rTaq DNA聚合酶的使用說明書進(jìn)行，PCR反應(yīng)體系(50μυ為:ddH20 21PL、rTaq (Premix Taq) 25μL、引物 fDl (20Mmol/L) ?μL、引物 rDl (20Mmol/L) ?μL,模板 DNA 2μL0 PCR 反應(yīng)條件為:94°C預(yù)變性 5min ;94°C，45s，55°C，45s，72°C，90s，35 個循環(huán)；72°C延伸lOmin。反應(yīng)結(jié)束后取6μL PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠(0.5Pg/mL EB)電泳檢測。將目的產(chǎn)物送上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進(jìn)行DNA雙向測序。將測序結(jié)果與Genbank數(shù)據(jù)庫中不同菌株16S rRNA基因序列進(jìn)行同源性比較，比較結(jié)果顯示所篩選出的Scgz-1l菌株與唾液乳酸桿菌成員相似度最高，說明其為唾液乳酸桿菌。
[0019]三、唾液乳酸桿菌Scgz-1l的主要特性 I)生物學(xué)形態(tài)特征
菌體形態(tài)特征:菌體呈桿狀，一般呈單個、成對或短鏈狀存在，如圖1所示。
[0020]菌落形態(tài)特征:在MRS瓊脂培養(yǎng)基上能形成均勻明顯的菌落:其菌落呈圓形，邊緣整齊，乳白色，不透明，不形成芽孢。
[0021]2)生長特征:兼性厭氧菌生長，生長溫度范圍32~42°C (最適37°C )，生長pH范圍為pH 6~8 (最適pH6.5)。
[0022]3)生長曲線
選取唾液乳酸桿菌將其復(fù)壯后，通過MRS瓊脂培養(yǎng)基兩次傳代培養(yǎng)，再將菌株接種于MRS肉湯，37°C培養(yǎng)12h左右作為種子液。再將種子液按培養(yǎng)基總體積的1%接種于事先準(zhǔn)備好的含等量MRS肉湯的離心管中，于37°C靜置培養(yǎng)。其間每隔2h取出一支，用分光光度計測定肉湯的(》6_?值，計算菌體濃度，將實驗結(jié)果繪制成Scgz-1l的生長曲線，如下圖2所示:
結(jié)果表明，唾液乳酸桿菌從第9h到第19h為對數(shù)增長期，20h候進(jìn)入平臺期，細(xì)菌幾乎停止生長，活菌數(shù)量和凋亡的細(xì)菌量處于一個平衡時期。
[0023]益生菌的一個重要性質(zhì)是對病原菌的抑菌活力，當(dāng)益生菌在動物腸道內(nèi)達(dá)到一定數(shù)量時，可以抑制腸道中及自然界中某些有害微生物的生長，測定益生菌的抑菌活力可用牛津杯法(也叫管碟法)，此方法是國內(nèi)外測定抗生素效價通用方法，也是各國藥典規(guī)定的方法。
[0024]四、唾液乳酸桿菌Scgz-1l對體內(nèi)彎曲桿菌的抑制作用
I)牛津杯試驗
根據(jù)牛津杯定量擴散法(王昌祿，胡王旬，何艷貞.1999.一株新型乳酸菌素產(chǎn)生菌的分離及其鑒定.天津輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報)，取100 PL已培養(yǎng)36h的彎曲桿菌MH肉湯菌液，用無菌棉簽蘸取菌液均勻涂于改良mCCD培養(yǎng)基表面，放于37°C培養(yǎng)箱10 min，待培養(yǎng)基表面水分蒸發(fā)完全。用鑷子夾取牛津杯放置于平皿中，然后每個牛津杯中加入200 PL發(fā)酵上清液，然后將培養(yǎng)基平皿置于微需氧環(huán)境下42°C培養(yǎng)36~48 h，觀察牛津杯周圍抑菌圈，并測量其直徑；同時分別設(shè)置陽性對照和陰性對照實驗，陽性對照選用植物乳酸桿菌aCCC11095(購于廣東西微生物菌種保藏中心)的發(fā)酵上清液，陰性對照選用無菌水。
[0025]上述發(fā)酵上清液為將Scgz-1l保藏菌種以2%接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，于37°C靜置培養(yǎng)18~24 h，傳代三次后，離心(8000 r/min, 20 min，4°C )，分別收集上清液及菌體，上清液經(jīng)0.22 ym無菌微孔濾膜過濾后，4°C保存，即為發(fā)酵上清液。
[0026]實驗結(jié)果如圖3所示，從中可以看出在裝有Scgz-1l菌株發(fā)酵上清液的牛津杯周圍出現(xiàn)了明顯的抑菌圈，抑菌圈直徑為22mm左右，比陽性對照植物乳酸桿菌accc11095的抑菌圈還大，說明該唾液乳酸桿菌Scgz-1l對彎曲桿菌的生長具有很好的抑制作用。
[0027]2)模擬胃液的耐受試驗
益生菌 在動物體內(nèi)發(fā)揮益生作用，首先必須能夠以活菌狀態(tài)通過胃才能進(jìn)入腸道，胃液有強酸性，PH在1.5-3之間，可以殺死進(jìn)入胃部的細(xì)菌，因此益生菌必須具有一定的耐酸性。進(jìn)入腸道后，益生菌會面臨腸液中各種酶和膽汁酸的不良環(huán)境，益生菌對于膽鹽的抗性是其在腸道存活、生長以及發(fā)揮功效的重要條件。因此對胃液和膽鹽的耐受能力是篩選潛在益生菌應(yīng)考察的重要指標(biāo)。目前大多通過測定益生菌在模擬胃腸道環(huán)境中的生長狀況來評價其耐受真實胃液和膽汁的能力，為益生菌能否在胃腸道中發(fā)揮健康益生作用提供依據(jù)。
[0028]1.耐酸性實驗
將上述牛津杯試驗中具用抑菌作用的Scgz-1l菌株用MRS肉湯進(jìn)行增殖培養(yǎng)，制備IO8CFU/mL濃度的菌液，再按2% (v/v)的量分別接種于pH值為2和3的10 mL MRS液體培養(yǎng)基中，置于37°C恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)4 h后吸取100 PL菌液進(jìn)行梯度稀釋，選擇合適稀釋倍數(shù)作平板活菌計數(shù)，其中PH值為2的培養(yǎng)基中Scgz-1l菌株存活率為26.5%，pH值為3的存活率為33.3%。說明本發(fā)明菌株在酸性環(huán)境中可以很好地生存。
[0029]2.耐膽鹽試驗
同耐酸性實驗的操作過程， 制備IO8 CFU/mL濃度的菌液，再按2% (v/v)的量接種于膽鹽濃度為2g/L的MRS液體培養(yǎng)基中，置于37°C恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)4 h后吸取100 μL菌液進(jìn)行梯度稀釋，選擇合適稀釋倍數(shù)作平板活菌計數(shù)(苗玉和，劉巖，聞艷麗，等.2011.豬源乳酸桿菌的分離鑒定及生物學(xué)特性分析.中國獸藥雜志)，其存活菌的濃度為4Χ 105cfu/ml，存活率為20%。
[0030]3)唾液乳酸桿菌Scgz-1l的黏附性
乳酸菌的黏附性具有菌株特異性和宿主特異性，黏附性強的乳酸菌能延長與宿主細(xì)胞的相互作用時間，從而更好地增強機體的免疫應(yīng)答；乳酸菌與腸上皮細(xì)胞黏附使其發(fā)揮最佳的益生功能；乳酸菌對腸道上皮細(xì)胞的黏附作用有助于其在腸道定植、增強乳酸菌與腸道細(xì)胞之間的信號交流、抑制病原菌在腸道的定植和提高機體的免疫力，調(diào)節(jié)粘膜免疫系統(tǒng)，保護宿主腸道健康，乳酸菌的黏附性是決定其免疫調(diào)節(jié)活性的重要因素，因而乳酸菌的黏附性是評價其作為益生菌的重要標(biāo)準(zhǔn)。
[0031]1.對Hela細(xì)胞間的黏附作用
將培養(yǎng)好的Hela細(xì)胞消化后，按每孔Iml接種于24孔(濃度lX105/ml)細(xì)胞培養(yǎng)板，18h長成單層(每孔約3 X IO5個細(xì)胞)；Hank液洗滌，各組每孔分別加入0.9ml DMEM培養(yǎng)液(含1%胎牛血清)、0.1ml PBS(含2 X 107CFU/mL唾液乳酸桿菌Scgz-1I )，37°C孵育2h ;吸去菌液，PBS漂洗三次；各孔加入1ml含0.01% TritonX-1OO的PBS裂解單層細(xì)胞；吸出各孔懸液，混勻，經(jīng)1: 100稀釋后各取100 μL涂布于Mrs培養(yǎng)基，培養(yǎng)36h計數(shù)菌落，黏附力用黏附細(xì)菌數(shù)lQg 1Q cfu/mL值表示。
[0032]計算結(jié)果為:唾液乳酸桿菌Scgz-1l與Hela細(xì)胞間的黏附力為6.041，具有統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果說明唾液乳酸桿菌Scgz-1l與乳桿菌與上皮黏膜細(xì)胞間具有很好的粘附結(jié)合作用。
[0033]4) Scgz-1l抑制空場彎曲桿菌對HeLa細(xì)胞的黏附作用
1.競爭實驗
將培養(yǎng)好的Hela細(xì)胞消化后，按每孔Iml接種于24孔(濃度lX105/ml)細(xì)胞培養(yǎng)板，18h長成單層(每孔約3 X IO5個細(xì)胞)；Hank液洗滌，分為兩組，A組每孔分別加入0.8mlDMEM培養(yǎng)液(含1%胎牛血清)、0.Iml PBS (含2 X 107cfu/ ml空場彎曲桿菌)和0.1ml菌株Scgz-1l上清液，B組每孔分別加入0.9ml DMEM培養(yǎng)液(含1%胎牛血清)、0.Iml PBS (含2X107cfu/ ml空場彎曲桿菌)；37°C孵育2h ;吸去菌液，PBS漂洗三次；各孔加入1ml含
0.01% TritonX-1OO的PBS裂解單層細(xì)胞；吸出各孔懸液，混勻，經(jīng)1: 100稀釋后各取100 PL涂布于改良C⑶培養(yǎng)基，48h計數(shù)菌落，黏附力用黏附細(xì)菌數(shù)IQgltl cfu/ml值表示，至少3次生物學(xué)重復(fù)。。
[0034]計數(shù)結(jié)果表示空場彎曲桿菌對照組的黏附力為3.3，而同時加入菌株Scgz-1l的空場彎曲桿菌的黏附力為2.69，這一結(jié)果說明競爭實驗中，唾液乳酸桿菌Scgz-1l對空場彎曲桿菌粘附HeLa細(xì)胞具有明顯抑制作用0° < 0.05)。
[0035]2.置換實驗
將培養(yǎng)好的Hela細(xì)胞消化后，按每孔Iml接種于24孔(濃度I X IO5個/ml)細(xì)胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)18h長成單層(每孔約3 X IO5個細(xì)胞)；Hank液洗滌，各組每孔分別加入0.9mlDMEM培養(yǎng)液(含1%胎牛血清)、0.1ml PBS (含2 X 107cfu/ ml空場彎曲桿菌懸液)；37°C孵育2h，吸去菌液，PBS漂洗三次，將其分為兩組，A組每孔加入各組每孔分別加入0.9ml DMEM培養(yǎng)液(含1%胎牛血清)和0.1ml PBS (含2 X IO7Cfu/ ml菌株Scgz-11), B組每孔加入各組每孔分別加入0.9ml DMEM培養(yǎng)液(含1%胎牛血清)和0.1ml PBS ;37°C孵育2h ;吸去菌液，PBS漂洗三次；各孔加入1ml含0.01% TritonX-1OO的PBS裂解單層細(xì)胞；吸出各孔懸液，混勻，經(jīng)1: 100稀釋后各取100 PL涂布于改良C⑶培養(yǎng)基，48h計數(shù)菌落，黏附力用黏附細(xì)菌數(shù)lQg 10 cfu/ml值表示，至少3次生物學(xué)重復(fù)。
[0036]計數(shù)結(jié)果表示在不加入菌株Scgz-1l的B組中，空場彎曲桿菌黏附力為3.3，而在后續(xù)加入菌株Scgz-1l 的A組中，空場彎曲桿菌的黏附力為2.93，這一結(jié)果說明置換實驗中，唾液乳酸桿菌Scgz-1 I對空場彎曲桿菌粘附HeLa細(xì)胞具有明顯抑制作用0°<0.05)。
[0037]3.排除實驗
將培養(yǎng)好的Hela細(xì)胞消化后，按每孔Iml接種于24孔(濃度lX105/ml)細(xì)胞培養(yǎng)板，18h長成單層(每孔約3 X IO5個細(xì)胞)；Hank液洗滌，分為兩組，A組每孔分別加入0.9mlDMEM培養(yǎng)液(含1%胎牛血清)、0.1ml PBS (含2 X 107cfu/ ml空場彎曲桿菌)，37°C孵育2h ;B組每孔分別加入0.8ml DMEM培養(yǎng)液(含1%胎牛血清)、0.1ml PBS (含菌株2 X IO7Cfu/ml Scgz-11)，37°C孵育 Ih 后，再加入 0.1ml PBS (含 2 X 107cfu/ ml 空場彎曲桿菌)，37°C孵育lh，吸去兩組的菌液，PBS漂洗三次；各孔加入1ml含0.01% TritonX-1OO的PBS裂解單層細(xì)胞；吸出各孔懸液，混勻，經(jīng)1: 100稀釋后各取100 μL涂布于改良CXD培養(yǎng)基，48h計數(shù)菌落，黏附力用黏附細(xì)菌數(shù)IQgltl cfu/ml值表示，至少3次生物學(xué)重復(fù)。
[0038]計數(shù)結(jié)果表示在只有空場彎曲桿菌的情況下，空場彎曲桿菌黏附力為3.31，而在加入菌株Scgz-1l培養(yǎng)后，后續(xù)再加入空場彎曲桿菌，空場彎曲桿菌的黏附力為2.08，這一結(jié)果說明在排除實驗中，唾液乳酸桿菌Scgz-1l對空場彎曲桿菌粘附HeLa細(xì)胞具有明顯抑制作用0° <0.05)。
[0039]綜上所述，在上述競爭、置換、排除3種作用方式中，無論以哪種作用方式，唾液乳酸桿菌Scgz-1l對空場彎曲桿菌粘附HeLa細(xì)胞均具有明顯的抑制作用iP < 0.05)。
[0040]5)動物體內(nèi)實驗
購入一日齡SPF雞苗60只，隨機分為A、B、C三組，每組20只，A組從一日齡開始口服唾液乳酸桿菌Scgz-1 I懸液(2 X 107cfu/ml) 200ul/只，一天一次，B、C組從一日齡開始口服同體體的生理鹽水，其他處理一樣，直到第7天為止；第八日齡給A、B兩組口服空場彎曲桿菌懸液(2 X 107cfu/ml )200ul/只，一天一次，C組口服同體積的生理鹽水，其他處理一樣。每日觀察并記錄雞的精神狀況，食欲，飲水，糞便等情況。在投喂唾液乳酸桿菌Scgz-1l第0d、8d、lld、17d、21d稱量其體重，繪制曲線圖如圖4所示。
[0041]從圖4中可以看出，口服唾液乳酸桿菌Scgz-1l的A組雞苗體重在12天后開始明顯高于口服空場彎曲桿菌的B組體重，并且這種體重差隨著培養(yǎng)時間的延長越來越明顯，另外，在培養(yǎng)18天后，A組雞苗體重開始明顯重于C組對照組體重。
[0042]另外，根據(jù)對各實驗組雞苗其他方面的觀察，口服唾液乳酸桿菌Scgz-1lA組雞食欲旺盛，肛門周圍絨毛潔凈無糞便，肌肉豐滿有彈性，羽毛皮膚整齊，有光澤?？诜請鰪澢鷹U菌B組中部分雞出現(xiàn)肛門周圍絨毛帶毛帶有白色稀糞或有絨毛被糞便粘連的情況，羽毛無光澤。
[0043]上述結(jié)果說明，本發(fā)明的唾液乳酸桿菌Scgz-1l不僅可以有效抑制空場彎曲桿菌對禽類的傷害作用，可能還起到強健禽類腸胃的抵抗、吸收能力，促進(jìn)禽類健康、快速地生長。
[0044]綜上所述，所述的唾液乳酸桿菌Scgz-1l具有以下特性:
O抑制空場彎曲桿菌生長；
2)具有耐酸性，在pHl.5^3的環(huán)境生存良好；
3)具有耐膽 鹽能力，能耐受:膽鹽水平是0.2wt% ；
4)對細(xì)胞有較好的黏附能力；
5)抑制空場彎曲桿菌黏附細(xì)胞；
6)抑制空場彎曲桿菌對雞的影響，提高雞的體重。
[0045]根據(jù)上述實驗結(jié)果,本發(fā)明的salivarius Scgz-1l菌株可應(yīng)用于制備防治禽類空場彎曲桿菌感染的藥劑，或者應(yīng)用于制備改善禽類腸道菌群生態(tài)平衡的藥劑。
[0046]人體口服益生菌到達(dá)腸道對益生菌來說是一種艱難的考驗。其中益生菌的數(shù)量和保護技術(shù)至關(guān)重要。經(jīng)過胃液的低pH，腸道中的各種消化酶和膽汁作用，益生菌才能到達(dá)腸道的特定位置。當(dāng)積累到足夠的數(shù)量時，益生菌粘附在腸細(xì)胞上，發(fā)揮其生理功能。在這一過程中菌種的存活率和活性都受到很大的影響。多種研究表明，益生菌在酸奶以及發(fā)酵食品中很難生存。益生菌制品中的益菌的數(shù)量至少達(dá)到IO6個/mL，益生菌才能在腸道內(nèi)發(fā)揮其作用，而發(fā)酵乳制品中的益生菌的生物活性較低。其中雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌在酸性和膽鹽的環(huán)境中存活量較低。
[0047]目前很多學(xué)者都把提高益生菌的數(shù)量和存活率作為研究的重點。在乳制品提高益生菌的數(shù)量和存活率的方法有很多:選擇耐受性的菌種；在牛奶中增加膳食微營養(yǎng)物質(zhì)，如氨基酸和多肽類物質(zhì)；添加益生元；提高酸奶對pH的緩沖能力。然而，這些方法與微膠囊技術(shù)相比都有一定的局限性。微膠囊技術(shù)是利用天然的或者合成的高分子材料，將目標(biāo)物包裹起成微小膠粒的一種技術(shù)。它使目標(biāo)物與外界環(huán)境相隔絕，起到一種保護作用，保持目標(biāo)物最大限度的活性。通常這種膠粒的半徑為5~250um。制備個微膠囊的過程稱為微膠囊化技術(shù)。利用微膠囊技術(shù)制備的益生菌微膠囊，要能耐低PH環(huán)境、膽汁及各種酶的作用，并能在腸道的特定位點中快速的釋放，以免排除體外。
[0048]因此可以進(jìn)一步'療冷Lactobacillus salivarius Scgz-11菌株的防治禽類空場彎曲桿菌感染或者改善禽類腸道菌群生態(tài)平衡的藥劑制備成微膠囊制劑，應(yīng)用到臨床生產(chǎn)上。微膠囊制劑制備過程中可以通過包埋技術(shù)和凍干技術(shù)，讓菌株做成粉末狀態(tài)，以方便運輸和保存；通過微膠囊技術(shù)可以提高細(xì)菌耐受胃酸膽鹽的能力，提高細(xì)菌定植于機體腸道的數(shù)量 。
【權(quán)利要求】
1.一株唾液乳酸桿菌，其分類命名為to如&77心salivarius Scgz-11，已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC，保藏編號為CCTCC NO:M2014080。
2.權(quán)利要求1所述的如^77心salivariusScgz-1l在制備防治禽類空場彎曲桿菌感染的藥劑中的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求1所述的salivariusScgz-1l在制備改善禽類腸道菌群生態(tài)平衡藥劑中的 應(yīng)用。
【文檔編號】C12N1/20GK103952357SQ201410183250
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年4月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月30日
【發(fā)明者】羅開健, 黃永興 申請人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)