一株谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶高產(chǎn)菌及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一株谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶高產(chǎn)菌及其應(yīng)用，分類(lèi)命名為一種吸水鏈霉菌（streptomyceshygroscopicus）NYU-70，已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC，保藏編號(hào)為CCTCCM2014121。以吸水鏈霉菌（streptomyceshygroscopicus）NY-1為出發(fā)菌株，進(jìn)行低能離子注入誘變，誘變后菌株經(jīng)酪蛋白凝膠法比較、比色法進(jìn)一步測(cè)定酶活性，篩選出產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶活性較高的突變株，作為下一輪誘變的出發(fā)菌，重復(fù)上述步驟篩選得到。該菌株發(fā)酵產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶活性高，遺傳穩(wěn)定性好。利用該突變株進(jìn)行液體搖瓶發(fā)酵可得谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶，酶活為16.9U/mL。
【專利說(shuō)明】一株谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶高產(chǎn)菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一株谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶高產(chǎn)菌及其應(yīng)用，屬于微生物發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶(蛋白質(zhì)一谷氨酸一谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶，Transglutaminase,簡(jiǎn)稱TG, EC2.3.2.13)，又稱轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶，是一種催化蛋白質(zhì)或多肽中谷氨酰胺殘基的酰基轉(zhuǎn)移反應(yīng)的轉(zhuǎn)移酶。由于能催化許多蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)交聯(lián)聚合，改善各種蛋白質(zhì)的功能特性，在食品工業(yè)、紡織工業(yè)和醫(yī)藥工業(yè)上具有廣泛的應(yīng)用前景及優(yōu)勢(shì)，被認(rèn)為是用于生產(chǎn)新型蛋白食品的最重要酶種之一，引起了國(guó)內(nèi)外研究者的高度重視和興趣。谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶在食品工業(yè)加工過(guò)程中的主要功能包括:(I)對(duì)各種食品蛋白質(zhì)進(jìn)行改性，保護(hù)賴氨酸不發(fā)生各種化學(xué)反應(yīng)，包封類(lèi)脂質(zhì)和脂溶性物質(zhì)；(2)形成抗熱和抗水薄膜，膠凝蛋白質(zhì)時(shí)避免進(jìn)行熱處理；(3)提高彈性和持水能力；(4)改變可溶性和各種功能性質(zhì)，從而生產(chǎn)出營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高并含有人體所必需氨基酸的食品蛋白。
[0003]近年來(lái)，國(guó)外對(duì)TG的研究較多也較為深入，報(bào)道的生產(chǎn)方法主要有從動(dòng)植物組織中提取和微生物發(fā)酵法生產(chǎn)。鑒于從動(dòng)植物提取TG的回收得率低，成
本過(guò)于昂貴等原因，人們開(kāi)始轉(zhuǎn)向用發(fā)酵法生產(chǎn)微生物谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶(MTG)。
[0004]較之其他來(lái)源的TG酶，從微生物中提取的TG酶(MTG)具有較高的熱穩(wěn)定性，在pH值5-9范圍內(nèi)都能保持較高的活性。并且其酶活性完全不依賴于Ca2+的存在。這些優(yōu)勢(shì)使其更易被加工處理，因而在食品等領(lǐng)域的應(yīng)用更加廣泛。
[0005]1989年日本味之素公司的科研人員首先報(bào)告了利用鏈輪絲菌(Streptoverticillium)直接發(fā)酵生產(chǎn)MTG,酶的分離提純、酶的基本結(jié)構(gòu)分析、酶基因本身和化學(xué)合成基因的克隆表達(dá)、以及酶在各種食品加工中的廣泛應(yīng)用成果，并已獲得了巨大經(jīng)濟(jì)效益，引起了國(guó)內(nèi)外高度關(guān)注。目前，我國(guó)國(guó)內(nèi)也有一些關(guān)于實(shí)驗(yàn)室水平發(fā)酵生產(chǎn)該酶及其應(yīng)用的研究報(bào)道，但總體上說(shuō)現(xiàn)在還處于研究的起步階段，目前所知的發(fā)酵法產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶中酶活最高的為專利CN200910223521.2中所述菌株CCTCC203062，其發(fā)酵產(chǎn)酶活為的6.47U/ml。而國(guó)外產(chǎn)品正準(zhǔn)備大批量打入國(guó)內(nèi)市場(chǎng)。因此，盡快強(qiáng)化對(duì)MTG的研究開(kāi)發(fā)工作十分必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是為了獲得一株高產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的菌株及其應(yīng)用，使其發(fā)酵產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶(MTG)的酶活大幅度提高。
[0007]為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
一株谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶高產(chǎn)菌，其分類(lèi)命名為吸水鏈霉菌(streptomyceshygroscopicus)NYU-70，已于2014年4月9日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCCJi址:中國(guó)武漢武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為CCTCC M 2014121。
[0008]本發(fā)明所述的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶高產(chǎn)菌株-吸水鏈霉菌(streptomyceshygroscopicus) NYU-70 的篩選方法如下:以吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus)NY-1為出發(fā)菌株，進(jìn)行低能離子注入誘變，誘變后菌株經(jīng)酪蛋白凝膠法比較篩選出具有一定活性的菌株，后經(jīng)比色法進(jìn)一步測(cè)定酶活性，篩選出產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶活性較高的突變株，作為下一輪誘變的出發(fā)菌。重復(fù)上述步驟直至篩選到目標(biāo)菌株吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus) NYU-70,其形態(tài)學(xué)及生理生化學(xué)特征如下:
菌落顏色:白色 菌落大小:2mm~5mm 菌落形態(tài):表面干燥、突起，不規(guī)則 氣生菌絲:初期為白色，后期菌落中心顯灰色 基內(nèi)菌絲:灰色 色素:無(wú)
鏡檢形態(tài):氣生菌絲直、分枝多、生長(zhǎng)較旺盛、基絲無(wú)橫隔、不斷裂、孢子圓形、表面光滑、孢子絲為緊密螺旋需氧方式:好氧營(yíng)養(yǎng)方式:化能異養(yǎng)適宜生長(zhǎng)溫度:30~40°C。
[0009]本發(fā)明所提供 的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶高產(chǎn)菌的誘變選育方法，具體步驟如下:
(a)單孢懸液制備:用無(wú)菌的生理鹽水洗下產(chǎn)孢固體培養(yǎng)基平板上的孢子，倒入裝有玻璃珠的無(wú)菌三角瓶中，振蕩20min，用脫脂棉過(guò)濾，4000rpm離心10min后棄上清，取沉淀洗滌，制得孢子懸浮液。用血球計(jì)數(shù)板直接記數(shù)，調(diào)整孢子濃度為約IO6個(gè)/mL，備用。
[0010](b)低能氮離子注入誘變:取0.1mL的步驟(a)中的菌懸液均勻涂布于無(wú)菌平皿上，以無(wú)菌風(fēng)吹干，在注入能量為20 KeV，注入劑量為2X1015ionS/cm2下對(duì)其進(jìn)行氮離子注入。離子注入完畢后，取出平皿，在無(wú)菌環(huán)境下用ImL無(wú)菌水洗脫，涂布到平板培養(yǎng)基上，在32°C下倒置培養(yǎng)7d。
[0011](c)搖瓶發(fā)酵:將步驟(b)篩選到的生長(zhǎng)良好的菌株接種至斜面培養(yǎng)基，在32°C下培養(yǎng)5d，取斜面培養(yǎng)物接種至種液培養(yǎng)基，250ml三角瓶中裝液量為30ml，于30°C恒溫?fù)u床，轉(zhuǎn)速為200rpm培養(yǎng)24小時(shí)，后以1/3的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，250ml三角瓶中裝液量為30ml，于30°C恒溫?fù)u床，轉(zhuǎn)速為200rpm培養(yǎng)72小時(shí)。
[0012](d)酶活初測(cè):Ig酪蛋白用少量NaOH濕潤(rùn)后，加入磷酸緩沖液(0.lmol/L，pH=6.5)使酪蛋白濃度達(dá)到12%。酪蛋白溶液與發(fā)酵上清液按一定比例混合均勻，于37°C反應(yīng)3h后，置于4攝氏度冰箱中過(guò)夜觀察，根據(jù)有無(wú)凝膠現(xiàn)象確定上清液有無(wú)酶活。選取有凝膠現(xiàn)象的菌株用比色法進(jìn)一步酶活測(cè)定。
[0013](e)酶活復(fù)測(cè):底物試劑中各物質(zhì)的濃度分別是，鹽酸羥胺0.1 mol/ L，CBZ-Gln-Gly 30 mmo I/ L, Tris-乙酸緩沖液 0.2 mo I/ L( pH6.0)，還原型谷胱甘肽10 mmol/ L, I mL底物試劑與0.4 mL上清液37°C預(yù)熱5 min后，混合、反應(yīng)10 min,迅速加入0.4 mL氯化鐵-三氯乙酸試劑(5% FeCl3: 12%CC13 C00H: 3,mol/ L H Cl=I:1:1)終止反應(yīng)，4000 r/ min離心,棄去沉淀，測(cè)上清夜在500 nm下的吸光度。37°〇每!^11催化形成I Lmol氧肟酸所需的酶量定義為I個(gè)酶活單位，以r-單異氧肟酸作標(biāo)準(zhǔn)曲線。將測(cè)定出酶活最高的菌株作為下一輪誘變選育的出發(fā)菌，重復(fù)以上步驟，直至篩選到目標(biāo)菌株。
[0014]在上述篩選方法中:步驟(a)、步驟(b)和步驟(C)所采用的平板培養(yǎng)基和斜面培養(yǎng)基包含如下質(zhì)量組分(g/L):碳源30~50、氮源10~30、無(wú)機(jī)鹽2~8，中和劑5，瓊脂18，其余為水，初始pH7.2 ;其中所述碳源為葡萄糖、麥芽汁和甘油中的一種或兩種的混合；所述氮源為魚(yú)粉蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一種或幾種的混合，所述無(wú)機(jī)鹽為鉀鹽、鎂鹽和磷酸鹽中的一種或幾種的混合；所述中和劑為輕質(zhì)碳酸鈣。
[0015]在上述篩選方法中:步驟(C)所采用的種液培養(yǎng)基和搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基包含如下組分(g/L):碳源20~40、氮源20~40、無(wú)機(jī)鹽2~8，中和劑5，其余為水，初始pH7.2 ;其中所述碳源為葡萄糖、麥芽汁和甘油中的一種或兩種的混合；所述氮源為魚(yú)粉蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一種或幾種的混合，所述無(wú)機(jī)鹽為鉀鹽、鎂鹽和磷酸鹽中的一種或幾種的混合；所述中和劑為輕質(zhì)碳酸鈣。
[0016]吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus) NYU-70在發(fā)酵產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶中的應(yīng)用，包括以下步驟:
I)平板培養(yǎng):將吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus) NYU-70接種至平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30~40°C，培養(yǎng)時(shí)間為7d。
[0017]2)斜面培養(yǎng):將步驟I)平板培養(yǎng)的吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus)NYU-70接種至斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30~40°C，培養(yǎng)時(shí)間為5d。 [0018]3)種液培養(yǎng):將步驟 2)中吸水鏈霉(streptomyces hygroscopicus)NYU_70 的斜面培養(yǎng)物接種至種液培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30~40°C，搖床轉(zhuǎn)速為200rpm，恒溫培養(yǎng)24h。
[0019]4)發(fā)酵培養(yǎng):將步驟 3)中吸水鏈霉(streptomyces hygroscopicus) NYU-70 的種液接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30~40°C，搖床轉(zhuǎn)速為200rpm攪拌速度為220rpm，恒溫培養(yǎng)72h。
[0020]步驟I)和步驟2)中所采用的平板培養(yǎng)基和斜面培養(yǎng)基包含如下組分(g/L):碳源30~50、氮源10~30、無(wú)機(jī)鹽2~8，中和劑5，瓊脂18，其余為水，初始pH7.2 ;其中所述碳源為葡萄糖、麥芽汁和甘油中的一種或兩種的混合；所述氮源為魚(yú)粉蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一種或幾種的混合，所述無(wú)機(jī)鹽為鉀鹽、鎂鹽和磷酸鹽中的一種或幾種的混合；所述中和劑為輕質(zhì)碳酸鈣。
[0021]步驟3)和步驟4)中所采用的種液培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基包含如下組分(g/L):碳源20~40、氮源20~40、無(wú)機(jī)鹽2~8，中和劑5，其余為水，初始pH7.2 ;其中所述碳源為葡萄糖、麥芽汁和甘油中的一種或兩種的混合；所述氮源為魚(yú)粉蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一種或幾種的混合，所述無(wú)機(jī)鹽為鉀鹽、鎂鹽和磷酸鹽中的一種或幾種的混合；所述中和劑為輕質(zhì)碳酸1丐或氫氧化鈉。
[0022]有益效果:
本發(fā)明提供的吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus) NYU-70產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶活性高。在5L發(fā)酵罐中，最終產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶酶活達(dá)到16.9U/ml,比原始出發(fā)菌株產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶酶活提高了 8.04倍，也超過(guò)現(xiàn)有菌株的發(fā)酵水平。本發(fā)明中菌株遺傳穩(wěn)定性好，具有應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)的前景。有著重大的社會(huì)意義及經(jīng)濟(jì)價(jià)值?！揪唧w實(shí)施方式】
[0023]根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書(shū)中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。
[0024]實(shí)施例1
本實(shí)施例說(shuō)明吸水鏈霉菌NYU-70的誘變選育方法。
[0025]具體步驟如下:
(a)菌懸液制備:取32°C恒溫培養(yǎng)5d的吸水鏈霉菌NY-1，用無(wú)菌的生理鹽水洗下產(chǎn)孢固體培養(yǎng)基平板上的孢子，倒入裝有玻璃珠的無(wú)菌三角瓶中，振蕩20min，用脫脂棉過(guò)濾，4000rpm離心10min后棄上清，取沉淀洗滌，制得孢子懸浮液。用血球計(jì)數(shù)板直接記數(shù)，調(diào)整孢子濃度為約IO6個(gè)/mL，取0.1ml菌懸液均勻涂布于IOOcm培養(yǎng)皿。
[0026](b)低能氮離子注入誘變:取0.1mL步驟(a)中菌懸液均勻涂布于無(wú)菌平皿上，鏡檢無(wú)細(xì)胞重疊者進(jìn)行低能氮離子注入。本實(shí)驗(yàn)低能氮離子注入機(jī)為離子束生物工程中心裝置。在20KeV的能量下對(duì)吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus)進(jìn)行離子注入。注入劑量為2X1015ionS/cm2，靶室真空度為10_3Pa，以20S脈沖式注入，間隔15s，靶室內(nèi)放置不接受注入的對(duì)照 樣。離子注入完畢后，取出平皿，在無(wú)菌環(huán)境下用ImL無(wú)菌水洗脫，涂布到平板培養(yǎng)基上，在32°C下倒置培養(yǎng)7d。
[0027](c)搖瓶發(fā)酵:將步驟(b)篩選到的生長(zhǎng)良好的菌株接種至斜面培養(yǎng)基，在32°C下培養(yǎng)5d，取斜面培養(yǎng)物接種至種液培養(yǎng)基，250ml三角瓶中裝液量為30ml，于30°C恒溫?fù)u床，轉(zhuǎn)速為200rpm培養(yǎng)24小時(shí)，后以1/3的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，250ml三角瓶中裝液量為30ml，于30°C恒溫?fù)u床，轉(zhuǎn)速為200rpm培養(yǎng)72小時(shí)。
[0028](d)酶活初測(cè):Ig酪蛋白用少量NaOH濕潤(rùn)后，加入磷酸緩沖液(0.lmol/L，pH=6.5)使酪蛋白濃度達(dá)到12%。酪蛋白溶液與發(fā)酵上清液按體積比(1:1)的比例混合均勻，于37°C反應(yīng)3h后，置于4°C冰箱中過(guò)夜觀察，根據(jù)有無(wú)凝膠現(xiàn)象確定上清液有無(wú)酶活。選取有凝膠現(xiàn)象的菌株用比色法進(jìn)一步測(cè)定酶活。
[0029](e)酶活復(fù)測(cè):底物試劑中各物質(zhì)的濃度分別是，鹽酸羥胺0.1 mol/ L，CBZ-Gln-Gly 30 mmo I/ L, Tris-乙酸緩沖液 0.2 mo I/ L( pH6.0)，還原型谷胱甘肽10 mmol/ L, I mL底物試劑與0.4 mL上清液37°C預(yù)熱5 min后，混合、反應(yīng)10 min,迅速加入0.4 mL氯化鐵-三氯乙酸試劑(5% FeCl3: 12% Cl3 C00H: 3mol/ L H Cl=
I:1:1)終止反應(yīng)，4000 r/ min離心,棄去沉淀，測(cè)上清夜在500 nm下的吸光度。37°〇每!^11催化形成I Lmol氧肟酸所需的酶量定義為I個(gè)酶活單位，以r-單異氧肟酸作標(biāo)準(zhǔn)曲線。將測(cè)定出酶活最高的菌株作為下一輪誘變選育的出發(fā)菌，重復(fù)以上步驟，直至篩選到目標(biāo)菌株。
[0030]其中，所使用的培養(yǎng)基配方(g/L)
步驟(b)和步驟(c)中所采用的平板培養(yǎng)基和斜面培養(yǎng)基為(g/L):麥芽汁50、酵母膏10、磷酸氫二鉀2，碳酸鈣5，瓊脂18，其余為水，初始pH7.2 ；
步驟(c)中所采用的種液培養(yǎng)基為:甘油15，葡萄糖10，魚(yú)粉蛋白胨20，酵母膏5，無(wú)水硫酸鎂2，磷酸氫二鉀2，磷酸二氫鉀2，輕質(zhì)碳酸鈣5，pH7.2
步驟(c)中所采用的發(fā)酵培養(yǎng)基為:甘油20，葡萄糖15，魚(yú)粉蛋白胨25，酵母膏5，無(wú)水硫酸鎂2，磷酸氫二鉀2，磷酸二氫鉀2，輕質(zhì)碳酸鈣5，pH7.2
實(shí)施例2本實(shí)施例說(shuō)明吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus)NYU_70的生化特征及其遺傳穩(wěn)定性
吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus) NYU-70形態(tài)學(xué)及生理生化學(xué)特征為:菌落顏色:白色；菌落大小:2mm~5_ ;菌落形態(tài):表面干燥、突起，不規(guī)則；氣生菌絲:初期為白色，后期菌落中心顯灰色；基內(nèi)菌絲:灰色；色素:無(wú)；鏡檢形態(tài):氣生菌絲直、分枝多、生長(zhǎng)較旺盛、基絲無(wú)橫隔、不斷裂、孢子圓形、表面光滑、孢子絲為緊密螺旋；需氧方式:好氧；營(yíng)養(yǎng)方式:化能異養(yǎng)；適宜生長(zhǎng)溫度:30~40°C。
[0031 ] 傳代發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果如表1所示
表1吸水鏈霉菌NYU-70的遺傳穩(wěn)定性
【權(quán)利要求】
1.一株谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶高產(chǎn)菌，其分類(lèi)命名為吸水鏈霉菌(streptomyceshygroscopicus)NYU-70,已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC，保藏編號(hào)為CCTCC M2014121。
2.權(quán)利要求1所述谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶高產(chǎn)菌在發(fā)酵產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶中的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求2所述谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶高產(chǎn)菌在發(fā)酵產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶中的應(yīng)用，其特征在于:包括以下步驟: 平板培養(yǎng):將吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus) NYU-70接種至平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30~40°C，培養(yǎng)時(shí)間為7d ； 斜面培養(yǎng):將步驟I)平板培養(yǎng)的吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus) NYU-70接種至斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30~40°C，培養(yǎng)時(shí)間為5d ； 種液培養(yǎng):將步驟2)中吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus) NYU-70的斜面培養(yǎng)物接種至種液培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30~40°C，搖床轉(zhuǎn)速為200rpm，恒溫培養(yǎng)24h ；
發(fā)酵培養(yǎng):將步驟3)中吸水鏈霉菌(streptomyces hygroscopicus) NYU-70的種液接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30~40°C，搖床轉(zhuǎn)速為200rpm攪拌速度為220rpm，恒溫培養(yǎng)72h。
4.權(quán)利要求3所述谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶高產(chǎn)菌在發(fā)酵產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶中的應(yīng)用，其特征在于:步驟I)的平板培養(yǎng)基和步驟2)的斜面培養(yǎng)基包含如下組分:碳源30~50 g/L、氮源10~30 g/L、無(wú)機(jī)鹽2~8 g/L,中和劑5 g/L,瓊脂18 g/L,其余為水，初始ρΗ7.2 ;其中所述碳源為葡萄糖、麥芽汁和甘油中的一種或兩種的混合；所述氮源為魚(yú)粉蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一種或幾種的混合，所述無(wú)機(jī)鹽為鉀鹽、鎂鹽和磷酸鹽中的一種或幾種的混合；所述中和劑為輕質(zhì)碳酸鈣。
5.權(quán)利要求3所述谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶高產(chǎn)菌在發(fā)酵產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶中的應(yīng)用，其特征在于:步驟3)的種液培養(yǎng)基和步驟4)的發(fā)酵培養(yǎng)基包含如下組分:碳源30~50 g/L、氮源10~30 g/L、無(wú)機(jī)鹽2~8 g/L，中和劑5 g/L，其余為水，初始pH7.2 ;其中所述碳源為葡萄糖、麥芽汁和甘油中的一種或兩種的混合；所述氮源為魚(yú)粉蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一種或幾種的混合，所述無(wú)機(jī)鹽為鉀鹽、鎂鹽和磷酸鹽中的一種或幾種的混合；所述中和劑為輕質(zhì)碳酸1丐或氫氧化鈉。
【文檔編號(hào)】C12R1/55GK103981130SQ201410193436
【公開(kāi)日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年5月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月9日
【發(fā)明者】虞龍, 李玉燕, 李市場(chǎng), 劉媛, 黃思思 申請(qǐng)人:虞龍