一種制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的方法，其在非水反應體系中將海產(chǎn)原料中提取的磷脂與醇類在酶的催化下發(fā)生反應，再經(jīng)分離純化，獲得富含n-3多不飽和脂肪酸的磷脂產(chǎn)物。本發(fā)明提供的酶促醇解制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的方法，利用了酶在催化醇解反應過程中對脂肪酸的選擇性，反應效率高，反應速度快。
【專利說明】一種制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及海洋生物【技術領域】，尤其涉及一種制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的方法。
【背景技術】
[0002]磷脂是一種廣泛存在于動植物體內的含磷復合脂質，是細胞膜的主要成分，也是生命活動的物質基礎。磷脂具有延緩衰老、調節(jié)脂質代謝等重要的生理功能，而海產(chǎn)動植物磷脂中因含有二十碳五烯酸(C20:5，EPA)和二十二碳六烯酸(C22:6，DHA)等n_3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)而具有n-3PUFA和磷脂的復合作用。
[0003]獲得富含n_3PUFA磷脂的途徑主要有提取法和酶促轉化法。提取法受原料限制，所得產(chǎn)品中EPA和DHA含量一般不超過50%。目前已有的富含n_3PUFA磷脂的酶促轉化方法主要是酸解法和合成法，其中酸解法是在酶的作用下使H-3PUFA與大豆磷脂反應，置換出大豆磷脂甘油骨架中飽和脂肪酸或低不飽和度脂肪酸的方法，該方法往往效率很低，同樣很難獲得EPA和DHA含量在50%以上的磷脂產(chǎn)品；合成法則是用酶催化n_3PUFA與甘油磷酰膽堿或溶血磷脂的酯合成反應，從而獲得富含n-3PUFA磷脂的方法，該法可以獲得EPA和DHA含量很高的磷脂產(chǎn)品,但所需反應時間過長(72h以上)。
【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明提供了一種制備富含n-3PUFA磷脂的方法，以解決上述技術問題，其在非水反應體系中將海產(chǎn)原料中提取的磷脂與醇類在酶制劑的催化下發(fā)生反應，再經(jīng)分離純化，獲得富含n-3PUFA的磷脂產(chǎn)物。
[0005]進一步，所述方法包括:
[0006]第一步，從海產(chǎn)動植物組織中提取磷脂；
[0007]第二步，將第一步提取產(chǎn)物溶于有機溶劑，加入醇類和酶制劑，加熱至一定溫度攪拌反應；
[0008]第三步，將第二步反應后混合物過濾或離心，回收酶制劑；
[0009]第四步，將第三步過濾或離心后的產(chǎn)物減壓蒸餾脫除有機溶劑和未反應的醇類；
[0010]第五步，將第四步獲得的產(chǎn)物脫除醇解反應產(chǎn)生的脂肪酸醇酯，獲得富含n-3PUFA的磷脂產(chǎn)品。
[0011]所述第二步中，反應溫度為20~60°C，反應時間為0.5~24h，所述醇類的添加量為海產(chǎn)動植物磷脂質量的5%~1000%,所述酶制劑的添加量為磷脂質量的0.1%~100%。
[0012]所述有機溶劑可為烴類(或鹵代烴類)、醚類和酯類，優(yōu)選對酶制劑活力影響較小的氯仿、正己烷、石油醚、乙醚和乙酸乙酯。
[0013]所述醇類指脂肪烴、脂環(huán)烴或芳香烴側鏈中的氫原子被羥基取代而成的化合物，優(yōu)選甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇，進一步優(yōu)選乙醇。[0014]在第二步中，所述醇類的加入方式可以為一次性加入，也可以在攪拌過程中分批加入。
[0015]所述酶制劑包括脂肪酶、磷脂酶Al和磷脂酶A2，其來源很廣，可以通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)，也可以從動物組織中提取，其形式可以為固定化酶，也可以為非固定化的酶粉和酶溶液，優(yōu)選的酶制劑為來源于酵母菌、霉菌或者動物組織的固定化或非固定化的脂肪酶。
[0016]本發(fā)明還提供了一種制備富含n-3PUFA磷脂的方法，其包括:
[0017]第一步，從海產(chǎn)動植物組織中提取磷脂；
[0018]第二步，將第一步提取產(chǎn)物溶于有機溶劑，加入醇類和酶制劑，加熱至20~60°C攪拌反應0.5~24h，所述醇類的添加量為海產(chǎn)動植物磷脂質量的5%~1000%，所述酶制劑的添加量為磷脂質量的0.1%~100%，所述醇類的加入方式可以為一次性加入，也可以在攪拌過程中分批加入。
[0019]第三步，將第二步反應后混合物過濾或離心，回收酶制劑；
[0020]第四步，將第三步過濾 或離心后的產(chǎn)物減壓蒸餾脫除有機溶劑和未反應的醇類；
[0021]第五步，將第四步獲得的產(chǎn)物脫除醇解反應產(chǎn)生的脂肪酸醇酯，獲得富含n-3PUFA的磷脂產(chǎn)品。
[0022]本發(fā)明還提供一種富含n-3PUFA的磷脂，其是通過如下方法制備而成的:
[0023]第一步，從海產(chǎn)動植物組織中提取磷脂；
[0024]第二步，將第一步提取產(chǎn)物溶于有機溶劑，加入醇類和酶制劑，加熱至一定溫度攪拌反應；
[0025]第三步，將第二步反應后混合物過濾或離心，回收酶制劑；
[0026]第四步，將第三步過濾或離心后的產(chǎn)物減壓蒸餾脫除有機溶劑和未反應的醇類；
[0027]第五步，將第四步獲得的產(chǎn)物脫除醇解反應產(chǎn)生的脂肪酸醇酯，獲得富含n-3PUFA的磷脂產(chǎn)品。
[0028]本發(fā)明還提供了上述的制備富含n-3PUFA磷脂的方法在制備保健產(chǎn)品中的應用。
[0029]本發(fā)明還提供了一種保健產(chǎn)品，其包括上述方法制備而成的富含n-3PUFA的磷脂產(chǎn)物。
[0030]有益效果
[0031]本發(fā)明提供了一種制備富含n-3PUFA磷脂的方法，其通過酶促醇解海產(chǎn)動植物磷脂獲得富含n-3PUFA的磷脂產(chǎn)品，該法反應條件溫和，反應速度快、效率高。
【具體實施方式】
[0032]本發(fā)明提供了一種制備富含n-3PUFA磷脂的方法，其在非水反應體系中將海產(chǎn)原料中提取的磷脂與醇類在酶制劑的催化下發(fā)生反應，再經(jīng)分離純化，獲得富含n-3PUFA的磷脂產(chǎn)物。
[0033]進一步,所述方法包括:
[0034]第一步，從海產(chǎn)動植物組織中提取磷脂；
[0035]第二步，將第一步提取產(chǎn)物溶于有機溶劑，加入醇類和酶制劑，加熱至一定溫度攪拌反應；
[0036]第三步，將第二步反應后混合物過濾或離心，回收酶制劑；[0037]第四步，將第三步過濾或離心后的產(chǎn)物減壓蒸餾脫除有機溶劑和未反應的醇類；
[0038]第五步，將第四步獲得的產(chǎn)物脫除醇解反應產(chǎn)生的脂肪酸醇酯，獲得富含n-3PUFA的磷脂產(chǎn)品。
[0039]所述第二步中，反應溫度為20~60°C，反應時間為0.5~24h，所述醇類的添加量為海產(chǎn)動植物磷脂質量的5%~1000%,所述酶制劑的添加量為磷脂質量的0.1%~100%。
[0040]所述有機溶劑可為烴類(或鹵代烴類)、醚類和酯類，優(yōu)選對酶制劑活力影響較小的氯仿、正己烷、石油醚、乙醚和乙酸乙酯。
[0041]所述醇類指脂肪烴、脂環(huán)烴或芳香烴側鏈中的氫原子被羥基取代而成的化合物，優(yōu)選甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇，進一步優(yōu)選乙醇。
[0042]在第二步中，所述醇類的加入方式可以為一次性加入，也可以在攪拌過程中分批加入。
[0043]所述酶制劑包括脂肪酶、磷脂酶Al和磷脂酶A2，其來源很廣，可以通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)，也可以從動物組織中提取，其形式可以為固定化酶，也可以為非固定化的酶粉和酶溶液，優(yōu)選的酶制劑為來源于酵母菌、霉菌或者動物組織的固定化或非固定化的脂肪酶。
[0044]所述第四步中的減壓蒸餾條件為常規(guī)技術，其采用常規(guī)條件即可，優(yōu)選為減壓蒸餾溫度為40~90°C，真空度為-0.070Mpa~-0.095Mpa。
[0045]本發(fā)明還提供了一種制備富含n-3PUFA磷脂的方法，其包括:
[0046]第一步，從海產(chǎn)動植物組織中提取磷脂；
[0047]第二步，將第一步提取產(chǎn)物溶于有機溶劑，加入醇類和酶制劑，加熱至20~60°C攪拌反應0.5~24h，所述醇類的添加量為海產(chǎn)動植物磷脂質量的5%~1000%，所述酶制劑的添加量為磷脂質量的0.1%~100%，所述醇類的加入方式可以為一次性加入，也可以在攪拌過程中分批加入。
[0048]第三步，將第二步反應后混合物過濾或離心，回收酶制劑；
[0049]第四步，將第三步過濾或離心后的產(chǎn)物減壓蒸餾脫除有機溶劑和未反應的醇類；
[0050]第五步，將第四步獲得的產(chǎn)物脫除醇解反應產(chǎn)生的脂肪酸醇酯，獲得富含n-3PUFA的磷脂產(chǎn)品。
[0051]本發(fā)明還提供一種富含n-3PUFA的磷脂，其是通過如下方法制備而成的:
[0052]第一步，從海產(chǎn)動植物組織中提取磷脂；
[0053]第二步，將第一步提取產(chǎn)物溶于有機溶劑，加入醇類和酶制劑，加熱至一定溫度攪拌反應；
[0054]第三步，將第二步反應后混合物過濾或離心，回收酶制劑；
[0055]第四步，將第三步過濾或離心后的產(chǎn)物減壓蒸餾脫除有機溶劑和未反應的醇類；
[0056]第五步，將第四步獲得的產(chǎn)物脫除醇解反應產(chǎn)生的脂肪酸醇酯，獲得富含n-3PUFA的磷脂產(chǎn)品。
[0057]所述第二步中，反應溫度為20~60°C，反應時間為0.5~24h，所述醇類的添加量為海產(chǎn)動植物磷脂質量的5%~1000%,所述酶制劑的添加量為磷脂質量的0.1%~100%。
[0058]所述有機溶劑可為烴類(或鹵代烴類)、醚類和酯類，優(yōu)選對酶制劑活力影響較小的氯仿、正己烷、石油醚、乙醚和乙酸乙酯。
[0059]所述醇類指脂肪烴、脂環(huán)烴或芳香烴側鏈中的氫原子被羥基取代而成的化合物，優(yōu)選甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇，進一步優(yōu)選乙醇。
[0060]在第二步中，所述醇類的加入方式可以為一次性加入，也可以在攪拌過程中分批加入。
[0061]所述酶制劑包括脂肪酶、磷脂酶Al和磷脂酶A2，其來源很廣，可以通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)，也可以從動物組織中提取，其形式可以為固定化酶，也可以為非固定化的酶粉和酶溶液，優(yōu)選的酶制劑為來源于酵母菌、霉菌或者動物組織的固定化或非固定化的脂肪酶。
[0062]本發(fā)明以酶制劑為催化劑，反應條件溫和；由于酶制劑在催化磷脂與醇類的醇解反應過程中對脂肪酸的選擇性，飽和脂肪酸及低不飽和度的脂肪酸優(yōu)先與醇類發(fā)生反應，而n-3PUFA在磷脂的甘油骨架上得以保留，從而使磷脂中的EPA和DHA得到相對富集，該反應利用了酶在催化醇解反應過程中對脂肪酸的選擇性，反應條件溫和，反應效率高、速度快。
[0063]以下采用實施例來詳細說明本發(fā)明的實施方式，借此對本發(fā)明如何應用技術手段來解決技術問題，并達成技術效果的實現(xiàn)過程能充分理解并據(jù)以實施。
[0064]實施例1
[0065]南極磷蝦粉中加入95%乙醇提取4h，過濾得到南極磷蝦脂質的乙醇溶液，減壓蒸餾脫除乙醇獲得南極 磷蝦脂質，加入丙酮充分攪拌，收集丙酮不溶物，再經(jīng)丙酮洗滌后，獲得南極磷蝦磷脂。
[0066]稱取南極磷蝦磷脂1.0g (EPA和DHA含量分別為27.15%和14.33% )溶于1mL正己燒中，再加入0.2g無水乙醇和固定化南極假絲酵母脂肪酶Lipozyme435 (Novozymes公司提供)0.05g，加熱至40°C并攪拌反應12h，反應結束后將反應混合物過濾，所得液體混合物經(jīng)減壓蒸餾(70°C、_0.088MPa的條件下)脫除正己烷和未反應的乙醇，再加入丙酮洗滌，所得丙酮不溶物即為富含n-3PUFA的磷脂產(chǎn)品，測得其EPA和DHA的含量分別為30.44%和42.17%。
[0067]實施例2
[0068]魷魚卵粉中加入95%乙醇提取6h，過濾得到魷魚卵脂質的乙醇溶液，減壓蒸餾脫除乙醇獲得魷魚卵脂質，加入丙酮充分攪拌，收集丙酮不溶物，再經(jīng)丙酮洗滌后，獲得魷魚卵磷脂。
[0069]稱取魷魚卵磷脂5.0g (EPA和DHA含量分別為11.72%和33.54% )溶于1mL石油醚中，再加入1.6g無水乙醇和固定化南極假絲酵母脂肪酶Lipozyme435 (Novozymes公司提供)0.5g，加熱至37°C并攪拌反應4h，反應結束后將反應混合物過濾，所得液體混合物經(jīng)減壓蒸餾(70°C、-0.088MPa的條件下)脫除石油醚和未反應的乙醇，再加入丙酮洗滌，所得丙酮不溶物即為富含n-3PUFA的磷脂產(chǎn)品，測得其EPA和DHA的含量分別為17.86%和55.52%。
[0070]所有上述的首要實施這一知識產(chǎn)權，并沒有設定限制其它形式的實施這種新產(chǎn)品和/或新方法。本領域技術人員將利用這一重要信息，上述內容修改，以實現(xiàn)類似的執(zhí)行情況。但是，所有修改或改造基于本發(fā)明新產(chǎn)品屬于保留的權利。
[0071]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術人員可能利用上述揭示的技術內容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術方案內容，依據(jù)本發(fā)明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等 同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術方案的保護范圍。
【權利要求】
1.一種制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的方法，其特征在于:通過提取海產(chǎn)動植物組織中的磷脂，在有機溶劑體系中用酶制劑催化其與醇類的醇解反應，反應完畢后去除有機溶劑、未反應的醇類和反應副產(chǎn)物，獲得富含n-3多不飽和脂肪酸的磷脂產(chǎn)物。
2.如權利要求1所述的制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的方法，其特征在于，包括: 第一步，從海產(chǎn)動植物組織中提取磷脂； 第二步，將第一步提取產(chǎn)物溶于有機溶劑，加入醇類和酶制劑，加熱至一定溫度攪拌反應； 第三步，將第二步反應后混合物過濾或離心，回收酶制劑； 第四步，將第三步過濾或離心后的產(chǎn)物減壓蒸餾脫除有機溶劑和未反應的醇類； 第五步，將第四步獲得的產(chǎn)物脫除醇解反應產(chǎn)生的脂肪酸醇酯，獲得富含n-3多不飽和脂肪酸的磷脂產(chǎn)品。
3.如權利要求1或2所述的制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的方法，其特征在于:所述第二步中，反應溫度為20~60°C，反應時間為0.5~24h，所述醇類的添加量為海產(chǎn)動植物磷脂質量的5%~1000%,所述酶制劑的添加量為磷脂質量的0.1%~100%。
4.如權利要求1至3所述的有機溶劑可為烴類(或鹵代烴類)、醚類和酯類，優(yōu)選對酶制劑活力影響較小的氯仿、正己烷、石油醚、乙醚和乙酸乙酯。
5.如權利要求1至4所述的制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的方法，其特征在于:所述醇類為脂肪烴、脂環(huán)烴或芳香烴側鏈中的氫原子被羥基取代而成的化合物，優(yōu)選甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇，進一步優(yōu)選乙醇。
6.如權利要求1至5所述的制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的方法，其特征在于:在第二步中，所述醇類的加入方式可以為一次性加入，也可以在攪拌過程中分批加入。
7.如權利要求1至6所述的制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的方法，其特征在于:所述酶制劑為來源于微生物或者動物組織提取的脂肪酶、磷脂酶Al和磷脂酶A2的固定化或者非固定化產(chǎn)品，優(yōu)選的酶制劑為來源于酵母菌、霉菌或者動物組織的固定化或非固定化的脂肪酶。
8.一種制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的方法，其特征在于，包括: 第一步，從海產(chǎn)動植物組織中提取磷脂； 第二步，將第一步提取產(chǎn)物溶于有機溶劑，加入醇類和酶制劑，加熱至20~60°C攪拌反應0.5~24h,所述醇類的添加量為海產(chǎn)動植物磷脂質量的5%~1000%,所述酶制劑的添加量為磷脂質量的0.1%~100%，所述醇類的加入方式可以為一次性加入，也可以在攪拌過程中分批加入。 第三步，將第二步反應后混合物過濾或離心，回收酶制劑； 第四步，將第三步過濾或離心后的產(chǎn)物減壓蒸餾脫除有機溶劑和未反應的醇類； 第五步，將第四步獲得的產(chǎn)物脫除醇解反應產(chǎn)生的脂肪酸醇酯，獲得富含n-3多不飽和脂肪酸的磷脂產(chǎn)品。
9.一種富含n-3多不飽和脂肪酸的磷脂，其特征在于:所述富含n-3多不飽和脂肪酸的磷脂是通過如下方法制備而成的， 第一步，從海產(chǎn)動植物組織中提取磷脂； 第二步，將第一步提取產(chǎn)物溶于有機溶劑，加入醇類和酶制劑，加熱至一定溫度攪拌反應； 第三步，將第二步反應后混合物過濾或離心，回收酶制劑； 第四步，將第三步過濾或離心后的產(chǎn)物減壓蒸餾脫除有機溶劑和未反應的醇類；第五步，將第四步獲得的產(chǎn)物脫除醇解反應產(chǎn)生的脂肪酸醇酯，獲得富含n-3多不飽和脂肪酸的磷脂產(chǎn)品。
10.權利要求1至8所述的制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂方法在制備保健產(chǎn)品中的應用。
11.一 種保健產(chǎn)品，其包括權利要求1至8所述方法制備而成的富含n-3多不飽和脂肪酸的磷脂產(chǎn)物。
【文檔編號】C12P9/00GK104031950SQ201410197002
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年5月7日 優(yōu)先權日:2014年5月7日
【發(fā)明者】蔡勝利, 蔡愛英, 孫兆敏, 黃莎莎, 李文平 申請人:威海博宇食品有限公司