一株對多種植物病原菌具抑菌活性的柑橘內生放線菌的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一株對多種植物病原菌具有抑菌活性的柑橘內生放線菌，屬于微生物【技術領域】。所述內生放線菌為鏈霉菌（Streptomyces?sp.）R1020，已于2014年3月17日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心登記保藏，保藏編號為CGMCCNo.8923。菌株R1020對柑橘炭疽病菌、柑橘潰瘍病菌、柑橘青霉病菌、柑橘綠霉病菌、楊梅枯枝病菌、楊梅褐斑病菌、楊梅炭疽病菌、枇杷炭疽病菌、枇杷葉斑病菌、枇杷輪斑病菌、番茄早疫病菌、黃瓜灰霉病菌、西瓜炭疽病菌、茶樹炭疽病菌和茶白星病菌均具有較好的抑制效果，具有被開發(fā)為生物農藥的潛能。
【專利說明】一株對多種植物病原菌具抑菌活性的柑橘內生放線菌
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一株對多種植物病原菌具有抑菌活性的柑橘內生放線菌，屬于微生物【技術領域】。
【背景技術】
[0002]植物內生菌是一類新的生防微生物資源，它是一種能在植物組織中定殖與運轉，并對植物無害甚至有益的微生物。由于它在植物體內有穩(wěn)定的生存空間，且能產生與宿主植物代謝相同或相似的生理活性物質，因而能有效地抑制病原菌的侵染或提高宿主植物的抗病性。內生菌分布于宿主植物組織內部，比暴露于外部環(huán)境的附生菌具有更穩(wěn)定的生存環(huán)境，更易于發(fā)揮作用。加之，植物內生放線菌具有一定的宿主專一性，除從其宿主植物吸取養(yǎng)料和對侵染宿主植物的其它生物起作用外，對宿主植物本身及其它生物幾乎沒有影響，而且內生放線菌可以通過人工接種被導入不同的植物并可以通過植物種子進行遺傳。因此植物內生菌具有作為生物農藥開發(fā)的優(yōu)良特性。
[0003]目前，對農作物病害的防治主要以化學防治為主，眾所周知，化學農藥的長期大量使用往往會導致環(huán)境污染、農藥殘留及病原菌的抗藥性等諸多問題難以解決。利用植物內生菌產生的抗菌活性物質進行植物病害的生物防治，則具有高效、低毒、低殘留、無污染、不易產生抗藥性和原料易得等優(yōu)點。
[0004]臺州市黃巖區(qū)作為世界寬皮柑橘的始祖地，有著2300多年的柑橘栽培歷史。其中摱橘是黃巖地區(qū)種植的一種古老的地方品種，分析認為其植株體內或會存在其他柑橘品種或植物中不具備的有益微生物。為此，我們對摱橘體內的微生物進行了大量的分離篩選，最終從摱橘根部分離獲得一株對多種植物病原菌具強抑菌活性的內生放線菌，鑒定后將其命名為鏈霉菌iStreptomycess^.)R1020,該發(fā)明為微生物源農藥的進一步研制和開發(fā)提供優(yōu)良的出發(fā)菌株。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一株對多種植物病原菌具抑制活性的柑橘內生放線菌，該菌株對多種植物病原菌具有明顯的拮抗作用，具有被開發(fā)為生物農藥的潛能。
[0006]本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)的:
本發(fā)明提供的一株柑橘內生放線菌，為鏈霉菌(Strepio焊cessp.)R1020,已于2014年3月17日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心登記保藏，保藏編號為CGMCCN0.8923 ο
[0007]本發(fā)明提供了所述的柑橘內生放線菌的應用，即鏈霉菌)R1020在抑制植物病原菌中的應用，所述植物病原菌為柑橘炭疽病菌、柑橘潰瘍病菌、柑橘青霉病菌、柑橘綠霉病菌、楊梅枯枝病菌、楊梅褐斑病菌、楊梅炭疽病菌、枇杷炭疽病菌、枇杷葉斑病菌、枇杷輪斑病菌、番茄早疫病菌、黃瓜灰霉病菌、西瓜炭疽病菌、茶樹炭疽病菌和茶白星病菌。[0008]更具體地,所述鏈霉菌iStreptomyces^.) R1020的發(fā)酵產物粗提物在抑制植物病原菌中的應用，所述植物病原菌為柑橘炭疽病菌、柑橘潰瘍病菌、柑橘青霉病菌、柑橘綠霉病菌、楊梅枯枝病菌、楊梅褐斑病菌、楊梅炭疽病菌、枇杷炭疽病菌、枇杷葉斑病菌、枇杷輪斑病菌、番茄早疫病菌、黃瓜灰霉病菌、西瓜炭疽病菌、茶樹炭疽病菌和茶白星病菌。
[0009]所述發(fā)酵產物粗提物的制備步驟如下:(1)取高氏合成I號培養(yǎng)基上活化的鏈霉菌(Sirepio焊cessp.) R1020,接種到高氏合成I號液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，28°C下?lián)u床200rpm/min振蕩培養(yǎng)4 d ；
(2)發(fā)酵產物粗提物的制備:取發(fā)酵液經由無菌濾紙抽濾，分別獲得上清液和菌絲體。取上清液，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，得上清液的乙酸乙酯萃取液；菌絲體用80%丙酮水溶液浸泡過夜后，用超聲波破碎提取3次，合并提取液，并將提取液減壓濃縮至無丙酮后，所得水相再用等體積的乙酸乙酯萃取3次，得菌絲體的乙酸乙酯萃取液。將上清液和菌絲體的乙酸乙酯萃取液合并，減壓濃縮至干，得到該菌株的發(fā)酵產物粗提物。
[0010]本發(fā)明還提供了所述的柑橘內生放線菌鏈霉菌iStreptomyces鄧.) R1020在制備生物農藥中的應用。
[0011]所述鏈霉菌iStreptomyces鄧.) R1020是從浙江省臺州市黃巖區(qū)授橘根部采用內生菌微生物分離技術分離獲得的，該菌株的培養(yǎng)特征、形態(tài)特征、生理生化特征、16S rDNA序列和菌種分類結果如下:
1、菌株R1020的培養(yǎng)特征和形態(tài)特征:菌株R1020在高氏合成I號培養(yǎng)基、酵母精麥芽糖瓊脂(ISP-2)培養(yǎng)基、燕麥粉瓊脂(ISP-3)培養(yǎng)基和無機鹽淀粉瓊脂(ISP-4)培養(yǎng)基上生長良好，可產生較豐富的氣生菌絲。而在葡萄糖天冬素瓊脂(ISP-5)培養(yǎng)基和蛋白胨酵母鐵瓊脂(ISP-6)培養(yǎng)基上生長貧乏。其中菌株R1020在ISP-6培養(yǎng)基上可產生黑色素，而在上述其他培養(yǎng)基上無可溶性色素產生。菌株R1020具體培養(yǎng)特征詳見表1，其中在高氏合成I號培養(yǎng)基上菌株R1020生長良好，氣生菌絲為淺粉色，基內菌絲為乳黃色，無可溶性色素產生(如圖1示)。光學顯微鏡下觀察到孢子絲直(如圖2示)，孢子圓形至柱形，表面光滑(如圖3示)。
[0012]表1菌株R1020的培養(yǎng)特
【權利要求】
1.一株柑橘內生放線菌，為鏈霉菌)R1020,已于2014年3月17日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心登記保藏，保藏編號為CGMCC N0.8923。
2.如權利要求1所述的柑橘內生放線菌在抑制植物病原菌中的應用，其特征在于:所述植物病原菌為柑橘炭疽病菌、柑橘潰瘍病菌、柑橘青霉病菌、柑橘綠霉病菌、楊梅枯枝病菌、楊梅褐斑病菌、楊梅炭疽病菌、枇杷炭疽病菌、枇杷葉斑病菌、枇杷輪斑病菌、番茄早疫病菌、黃瓜灰霉病菌、西瓜炭疽病菌、茶樹炭疽病菌和茶白星病菌。
3.如權利要求1所述的內生放線菌在制備生物農藥中的應用。
【文檔編號】C12N1/20GK103952362SQ201410202696
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月14日 優(yōu)先權日:2014年5月14日
【發(fā)明者】胡秀榮, 鹿連明, 杜丹超, 陳國慶, 黃振東, 蒲占湑 申請人:浙江省柑桔研究所