一種重復(fù)性好的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種重復(fù)性好的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，包括體積比為6:1的R1和R2，本發(fā)明與常用的檢測(cè)試劑盒相比，減少了R2的劑量，降低了成本，并可以有效地增強(qiáng)試劑的重復(fù)性，從而增強(qiáng)了試劑檢測(cè)的精確性可信度。同時(shí)操作方法簡(jiǎn)單，可在醫(yī)療市場(chǎng)廣泛推廣。
【專利說(shuō)明】—種重復(fù)性好的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種重復(fù)性好的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，屬體外診斷試劑【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]同型半胱氨酸(Homocysteine, HCY)是引起心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。研究表明:Hcy每升高5umol/L腦卒中風(fēng)險(xiǎn)升高59%，缺血性心臟病風(fēng)險(xiǎn)升高32% ；Hcy每降低5umol/L腦卒中風(fēng)險(xiǎn)降低24%，缺血性心臟病風(fēng)險(xiǎn)降低16%。HCY對(duì)心血管疾病的早期評(píng)價(jià)的前瞻性優(yōu)于膽固醇40倍，但由于人體HCY沒(méi)有編碼基因，食物中也不含HCY，只是蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物，使得HCY作為心血管疾病獨(dú)立危險(xiǎn)因子具有更大優(yōu)勢(shì)和意義。
[0003]血漿中同型半胱氨酸的測(cè)定主要采用HPLC方法，是需要特殊設(shè)備，對(duì)還原型Hcy的熒光衍生物或使用電化學(xué)檢測(cè)器直接測(cè)量。由于時(shí)間和價(jià)格因素，僅在大醫(yī)院或檢驗(yàn)中心應(yīng)用。
[0004]酶聯(lián)免疫法檢測(cè)同型半胱氨酸的原理是基于小分子捕獲技術(shù)(SMT)基礎(chǔ)上，通過(guò)循環(huán)酶法使含量極低的小分子代謝物HCY檢測(cè)得以實(shí)現(xiàn)。游離型HCY與共價(jià)底物S-腺苷甲硫氨酸SAM催化反應(yīng)形成蛋氨酸(HCY的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)。SAH被SAH水解酶水解成腺苷和HCY，形成的HCY可以循環(huán)加入反應(yīng)，從而放大了檢測(cè)信號(hào)，腺苷(Ado)立即水解為次黃嘌呤和氨，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下，使NADH轉(zhuǎn)化為NAD+，樣本中的HCY的濃度與NADH的變化成正比。
[0005]利用酶法對(duì)同型半胱氨酸進(jìn)行檢測(cè)的方法操作簡(jiǎn)單，而且檢測(cè)同型半胱氨酸對(duì)臨床心血管疾病診斷有著很好指導(dǎo)意義，因此最近幾年得到了很好的推廣。但是該檢測(cè)方法，容易受到血清中丙酮酸等雜質(zhì)物質(zhì)的干擾，造成檢測(cè)的結(jié)果不準(zhǔn)確，重復(fù)性差，在與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒比對(duì)時(shí)，結(jié)果有偏差，不利于臨床檢測(cè)應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種重復(fù)性好的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒。
[0007]本發(fā)明的試劑盒主要成分包括:包括體積比為6:1的Rl和R2，各組分的組成和含量如下:
Rl:
S-腺苷甲硫氨酸(SAM)0.2mM
NADH0.4mM
乙酸納0.6 mM
α 一酮戊二酸6mM
三(2羧乙 基)膦氯化氫(TCEP )0.6mM
抗壞血酸酶2 KU/L ；R2:
Hcy 甲基轉(zhuǎn)移酶(HMTase)6KU/L
谷氨酸脫氫酶(GLDH)12KU/L
S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)水解酶(SAHase)3KU/L
腺苷脫氨酶(ADA)6 KU/L
牛血清白蛋白0.5g/L 。
[0008]本發(fā)明的試劑盒采用酶法檢測(cè)，與使用昂貴HPLC (高壓液相色譜儀)檢測(cè)相比，該試劑盒適用于全自動(dòng)生化分析儀，操作簡(jiǎn)單，成本較低，適合于各大中型醫(yī)院和大部分小醫(yī)院。并且在臨床上檢測(cè)心血管病人及有心血管病家族史但無(wú)臨床癥狀的亞健康人群的血液中HCY的含量表現(xiàn)出重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高的優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)，增大試劑I的用量，在不影響檢測(cè)結(jié)果的前提下減少了費(fèi)用?！揪唧w實(shí)施方式】
[0009]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0010]實(shí)施例1
通過(guò)將樣品與試劑按一定的體積比混合，使之發(fā)生酶促反應(yīng)，再將反應(yīng)物置于可見(jiàn)光分析儀下，檢測(cè)主波長(zhǎng)340nm處吸光度上升的大小程度，從而測(cè)算出同型半胱氨酸的濃度。
[0011]試劑及含量如下:
Rl:
S-腺苷甲硫氨酸(SAM)0.2mM
NADH0.4mM
乙酸納0.6 mM
α 一酮戊二酸6mM
三(2羧乙基)膦氯化氫(TCEP )0.6mM
抗壞血酸酶2 KU/L ；
R2:
Hcy 甲基轉(zhuǎn)移酶(HMTase)6KU/L
谷氨酸脫氫酶(GLDH)12KU/L
S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)水解酶(SAHase)3KU/L
腺苷脫氨酶(ADA)6 KU/L
牛血清白蛋白0.5g/L 。
[0012]按照以下的使用量進(jìn)行檢測(cè):
表1本試劑盒檢測(cè)方法
【權(quán)利要求】
1.一種重復(fù)性好的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括體積比為6:1的Rl和R2，各組分的組成和含量如下:
Rl: S-腺苷甲硫氨酸0.2mM NADH0.4mM 乙酸納0.6 mM α 一酮戊二酸6mM 三(2羧乙基)膦氯化氫0.6mM 抗壞血酸酶2 KU/L ；
R2: Hcy甲基轉(zhuǎn)移酶6KU/L 谷氨酸脫氫酶12KU/L S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)水解酶3KU/L 腺苷脫氨酶6 KU/L 牛血清白蛋白 0.5g/L 。
【文檔編號(hào)】C12Q1/28GK103952461SQ201410202766
【公開(kāi)日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2014年5月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月14日
【發(fā)明者】譚柏清, 葉麗華, 甘宜梧, 李靜 申請(qǐng)人:山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司