一種提高脂肪酶酯化活力及重復(fù)利用的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種油脂加工方法，該方法包括將油脂與?；w、脂肪酶和氯化鈣接觸，進(jìn)行酯化的步驟。該方法不需要對(duì)固定化載體進(jìn)行額外的處理，只需將氯化鈣添加入油脂中，后續(xù)進(jìn)行分離，方法簡(jiǎn)單，便于生產(chǎn)操作，而且能夠明顯提高液體脂肪酶的酯化活性，能夠提高液體脂肪酶的重復(fù)利用次數(shù)，節(jié)約成本。
【專利說(shuō)明】一種提高脂肪酶酯化活力及重復(fù)利用的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食用油脂加工領(lǐng)域，更具體地涉及脂肪酶用于油脂加工，特別涉及提 高液體脂肪酶酯化活力及重復(fù)利用的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 為了保證油脂在后期使用過(guò)程中無(wú)酸敗味道，在煎炸過(guò)程中不會(huì)產(chǎn)生大量的油 煙，所以在油脂精煉過(guò)程中必須對(duì)油脂進(jìn)行脫酸處理，從而使得油脂的各項(xiàng)指標(biāo)符合國(guó)標(biāo) 規(guī)定。因此對(duì)于高酸值油脂，在堿煉的過(guò)程中就必須加入大量的堿進(jìn)行中和游離脂肪酸， 但是在加入堿之后在降低游離脂肪酸的同時(shí)會(huì)導(dǎo)致有益的微量成分大量損失，降低了其價(jià) 值，而且還能造成中性油的損失。
[0003] 對(duì)于高酸值油脂而言，如何將油脂中的游離脂肪酸降低而同時(shí)保留有益的微量成 分是一技術(shù)難題。以米糠油為例，由于米糠中存在脂肪酶，如果米糠不能及時(shí)處理，則米糠 中的油脂很容易被脂肪酶水解為游離脂肪酸，從而造成稻米油的酸價(jià)升高，酸價(jià)可以達(dá)到 15-80mgK0H/g，限制了稻米油的加工和利用。油脂工業(yè)中常用的堿煉脫酸和物理脫酸方法 用于高酸值米糠油都存在損耗過(guò)高的問(wèn)題，化學(xué)精煉還會(huì)造成油脂中谷維素等營(yíng)養(yǎng)成分的 大量損失，此外還將產(chǎn)生大量的有機(jī)廢水，污染環(huán)境。
[0004] 對(duì)于含油大量游離脂肪酸的稻米油來(lái)說(shuō)，能夠?qū)⑵渲械挠坞x脂肪酸酯化轉(zhuǎn)變?yōu)楦?三酯是增加產(chǎn)量，提高其利用率的最佳途徑。在酯化過(guò)程中，常用的酯化方法分為化學(xué)酯化 和生物酯化兩種。由于化學(xué)酯化需要高溫，對(duì)油脂中活性物質(zhì)如維生素 E、留醇等破壞嚴(yán)重， 而且會(huì)產(chǎn)生大量污染環(huán)境的廢水等，因此在實(shí)際生產(chǎn)中無(wú)法應(yīng)用。而生物酯化是利用脂肪 酶的高效催化活性在低溫情況下催化酯化，同時(shí)無(wú)廢水產(chǎn)生?，F(xiàn)在常用的脂肪酶為諾維信 公司的固定化脂肪酶Novozymes435、Lipozyme RM IM、Lipozyme TL IM，而這些固定化脂肪 酶在使用過(guò)程中主要是經(jīng)濟(jì)成本過(guò)高，不太適合用于高酸值油脂的生物脫酸過(guò)程。除了固 定化脂肪酶還有液體脂肪酶也可以用于高酸值油脂的生物酯化脫酸過(guò)程，對(duì)于液體脂肪酶 在酯化過(guò)程的應(yīng)用有些學(xué)者也進(jìn)行了研究。
[0005] Marchetti J M等公開了（Marchetti J M, Errazu A F. Comparison of different heterogeneous catalysts and different alcohols for the esterification reaction of oleic acid[J]· Fuel, 2008, 87 (15) :3477-3480.采用液體脂肪酶CALB (南極假絲酵母脂 肪酶B)進(jìn)行催化油酸和醇的酯化反應(yīng)，在這些反應(yīng)較為容易的體系中經(jīng)過(guò)25h的反應(yīng)游離 脂肪酸的轉(zhuǎn)化率為95%左右。但作者在結(jié)論中同時(shí)也指出，對(duì)于高酸值的油脂利用液體脂 肪酶進(jìn)行酯化，由于無(wú)法重復(fù)利用而造成生產(chǎn)成本昂貴。
[0006] 由于液體脂肪酶CALB在使用過(guò)程中比較昂貴，因此有人研究將其固定化，降低生 產(chǎn)成本，例如：
[0007] Tufvesson P 等公開了（Tufvesson P，Tdmvall U，Carvalho J，et al. Towards a cost-effective immobilized lipase for the synthesis of specialty chemicals[J]. Journal of Molecular Catalysis B:Enzymatic, 2011,68(2) :200-205.)將液體脂肪酶 CALB進(jìn)行固定化的技術(shù)。Tufvesson P等選用粒徑為250-500 μ m的載體MPlOOO分別用乙 醇（3ml/g)和磷酸鈉緩沖液清洗后加入液體脂肪酶CALB，震蕩攪拌8h后分離液體，再次用 緩沖液沖洗去除游離蛋白脂肪酶，然后在真空狀況下干燥12h后得到成品。
[0008] CN101736000B中公開了一種提高固定化脂肪酶活性和穩(wěn)定性的方法。其固定化方 法主要為：用lmol/L HCl將載體于室溫下浸泡3h后水洗至中性，然后將Ig經(jīng)預(yù)處理的固 定化載體加入30?50ml酶液中，于30°C、150rpm振蕩吸附2h，過(guò)濾分離得濕固定化酶，于 4°C放置24h，在20?50ml極性有機(jī)溶劑中加入Ig濕固定化酶，于25?35°C、150rpm振蕩 處理1?I. 5h，抽濾得處理過(guò)的固定化酶，于4°C放置24h后得到成品。
[0009] 上述專利和文獻(xiàn)通過(guò)各種工藝研究脂肪酶的酯化活性及提高利用率。但由于液體 脂肪酶在油脂的酯化過(guò)程中由于脂肪酶是水溶性蛋白質(zhì)，而游離脂肪酸為油溶性物質(zhì)，從 而造成二者不能完全接觸，酯化活性低，反應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng)；此外，為了提高脂肪酶的重復(fù)利用 率而采用的固定化技術(shù)對(duì)載體進(jìn)行多次的化學(xué)處理，處理過(guò)程步驟多，過(guò)程繁瑣，從而造成 生產(chǎn)效率低。
[0010] 因此，有必要對(duì)脂肪酶的酯化工藝加以改進(jìn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明提供了一種油脂加工方法，該方法不需要對(duì)固定化載體進(jìn)行額外的處理， 只需將氯化鈣添加入油脂中，后續(xù)進(jìn)行分離，方法簡(jiǎn)單，便于生產(chǎn)操作，而且能夠明顯提高 液體脂肪酶的酯化活性，能夠提高液體脂肪酶的重復(fù)利用次數(shù)，節(jié)約成本。
[0012] 本發(fā)明提供方法包括以下步驟：
[0013] 將所述油脂與酰基供體、脂肪酶和氯化鈣接觸，進(jìn)行酯化。
[0014] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的油脂為高酸價(jià)油脂。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方 案中，使用的高酸價(jià)油脂優(yōu)選為高酸價(jià)稻米油、高酸價(jià)棉籽油、高酸價(jià)魚油、和/或高酸價(jià) 棕櫚油。
[0015] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的?；w為甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丙三 醇、甘油、單甘脂、甘二酯、正己醇、異丙醇、正丁醇和/或苯酚，優(yōu)選為甘油、單甘脂和/或甘 二酯。
[0016] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的脂肪酶為液體脂肪酶，優(yōu)選為L(zhǎng)ipase CALB、 Lipase PALATASE100L、或 Lipase TL100L。
[0017] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以所述油脂重量計(jì)，所述脂肪酶的加入量為 523. 6-5236U/100g 油脂，優(yōu)選加入 1570. 8-4188. 8U/100g 油脂。
[0018] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以所述油脂重量計(jì)，所述氯化鈣的加入量為 l-10wt%，，優(yōu)選為加入2-8wt%，更優(yōu)選為加入3-5wt%。
[0019] 本發(fā)明還提供了一種油脂酯化方法，該方法包括在進(jìn)行酯化前，將所述油脂與酰 基供體、脂肪酶和氯化鈣接觸。
[0020] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的油脂為高酸價(jià)油脂。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方 案中，使用的高酸價(jià)油脂優(yōu)選為高酸價(jià)稻米油、高酸價(jià)棉籽油、高酸價(jià)魚油、和/或高酸價(jià) 掠桐油等。
[0021] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的?；w為甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丙三 醇、甘油、單甘脂、甘二酯、正己醇、異丙醇、正丁醇和/或苯酚，優(yōu)選為甘油、單甘脂和/或甘 二酯。
[0022] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的脂肪酶為液體脂肪酶，優(yōu)選為L(zhǎng)ipase CALB、 Lipase PALATASE100L、或 Lipase TL100L。
[0023] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以所述油脂重量計(jì)，所述脂肪酶的加入量為 523. 6-5236U/100g 油脂，優(yōu)選加入 1570. 8-4188. 8U/100g 油脂。
[0024] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以所述油脂重量計(jì)，所述氯化鈣的加入量為 l-10wt%，優(yōu)選為加入2-8wt%，更優(yōu)選為加入3-5wt%。
[0025] 本發(fā)明還提供了一種脂肪酶組合物，該組合物包括脂肪酶與氯化鈣。
[0026] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以所述氯化鈣的重量計(jì)，所述脂肪酶的加入量為 52. 36-5236U/g 氯化鈣，優(yōu)選為 26L 8-1570. 8U/g 氯化鈣。
[0027] 本發(fā)明還提供了一種油脂加工方法，該方法包括將上述的脂肪酶組合物與所述油 脂和酰基供體接觸，進(jìn)行酯化。
[0028] 本發(fā)明還提供了一種油脂酯化方法，該方法包括在進(jìn)行酯化前，將所述油脂與酰 基供體、上述的脂肪酶組合物接觸。

【具體實(shí)施方式】
[0029] 為了更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案和有益效果，下文結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選 實(shí)施方式進(jìn)行了更詳細(xì)地說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，這些說(shuō)明僅為示例性的，而不應(yīng)理解為以任何方 式對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限制。
[0030] 本文所公開的"范圍"以下限和上限的形式，例如一個(gè)或多個(gè)下限與一個(gè)或多個(gè)上 限的形式給出。給定范圍可通過(guò)選擇一個(gè)下限和一個(gè)上限來(lái)進(jìn)行限定，選定的下限和上限 限定了給定范圍的邊界。所有以這種方式限定的范圍是包含和可組合的，即任何下限可與 任何上限組合形成一個(gè)范圍。例如，針對(duì)特定參數(shù)列出了 60-110和80-120的范圍，理解為 60-120和80-110的范圍也是可預(yù)料到的。此外，如果列出的下限為1和2而列出的上限為 3,4和5，則下面的范圍都是可預(yù)料到的：1-3、1-4、1-5、2-3、2-4和2-5。
[0031] 在本文中，除非有其他說(shuō)明，數(shù)值范圍"a-b"表示a到b之間的任意實(shí)數(shù)組合的縮 略表示，其中a和b都是實(shí)數(shù)。例如數(shù)值范圍"0-5 "表示本文中已經(jīng)全部列出了 "0-5 "之 間的全部實(shí)數(shù)，"0-5"只是這些數(shù)值組合的縮略表示。
[0032] 在本文中，除非有其他說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)"其組合"或"它們的組合"表示所列出的各選擇 要素的任意組合，例如兩種、三種、四種以及直到最大可能數(shù)量的選擇要素的組合，如混合 物。
[0033] 如果沒(méi)有特別指出，本說(shuō)明書所用的術(shù)語(yǔ)"一種（個(gè)）"指"至少一種（個(gè)）"。
[0034] 在本文中，除非有其他說(shuō)明，本文所提到的所有實(shí)施方式以及優(yōu)選實(shí)施方式可以 相互組合形成新的技術(shù)方案。
[0035] 在本文中，除非有其他說(shuō)明，本文所提到的所有技術(shù)特征以及優(yōu)選特征可以相互 組合形成新的技術(shù)方案。
[0036] 在本文中，除非有其他說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)"包括"、"包含"、"含有"、"具有"和類似措詞表示 開放式，但是也應(yīng)當(dāng)理解為同時(shí)明確公開了封閉式的情形。例如，"包括"表示還可以包含沒(méi) 有列出的其他要素，但是也同時(shí)明確公開了僅包括所列出的要素的情形。
[0037] 在本文中，除非有其他說(shuō)明，實(shí)施例中記載的具體步驟、具體數(shù)值以及具體物質(zhì)可 與說(shuō)明書其它部分的其他特征結(jié)合。例如，說(shuō)明書
【發(fā)明內(nèi)容】
或【具體實(shí)施方式】部分提到反應(yīng) 的溫度為10-KKTC，而實(shí)施例記載的具體反應(yīng)溫度為20°C，那么可以認(rèn)為本文已經(jīng)具體公 開了 10-20°C的范圍，或者20-KKTC的范圍，且該范圍可以與說(shuō)明書其它部分的其他特征 結(jié)合起來(lái)形成新的技術(shù)方案。
[0038] 本發(fā)明的發(fā)明人在研發(fā)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，在利用脂肪酶進(jìn)行酯化過(guò)程中，普遍存在酯 化活性低，反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，固定化步驟繁瑣等缺點(diǎn)，因此，有必要對(duì)現(xiàn)有利用脂肪酶進(jìn)行酯化 的方法進(jìn)行改進(jìn)。發(fā)明人通過(guò)研發(fā)發(fā)現(xiàn)，在利用脂肪酶進(jìn)行油脂脫酸酯化過(guò)程中加入氯化 鈣，不僅能夠明顯提高液體脂肪酶的酯化活性，而且能夠提高液體脂肪酶的重復(fù)利用次數(shù)， 節(jié)約成本。同時(shí)該方法能夠避免對(duì)固定化載體進(jìn)行多久的處理，只需將氯化鈣添加入油脂 中，后續(xù)進(jìn)行分離，方法簡(jiǎn)單，便于生產(chǎn)操作。
[0039] 基于此，發(fā)明人提供了一種油脂加工方法，該方法包括以下步驟：
[0040] 將所述油脂與?；w、脂肪酶和氯化鈣接觸，進(jìn)行酯化。
[0041] 在本發(fā)明中，使用的油脂為動(dòng)物油脂和/或植物油脂。
[0042] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的油脂為高酸價(jià)油脂。
[0043] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的高酸價(jià)油脂優(yōu)選為高酸價(jià)稻米油、高酸價(jià)棉 籽油、高酸價(jià)魚油、和/或高酸價(jià)棕櫚油。
[0044] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的?；w為甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丙三 醇、甘油、單甘脂、甘二酯、正己醇、異丙醇、正丁醇和/或苯酚，優(yōu)選為甘油、單甘脂和/或甘 二酯。
[0045] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的脂肪酶為液體脂肪酶，優(yōu)選為L(zhǎng)ipase CALB、 Lipase PALATASE100L、或 Lipase TL100L。
[0046] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以所述油脂重量計(jì)，所述脂肪酶的加入量為 523. 6-5236U/100g油脂。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)脂肪酶的加入量為1570. 8-4188. 8U/100g油脂時(shí)， 高酸價(jià)稻米油的利用率，保留稻米油的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值等方面的效果更為明顯，因此，在本發(fā)明的 一個(gè)實(shí)施方案中，以所述油脂重量計(jì)，所述脂肪酶的加入量?jī)?yōu)選為1570. 8-4188. 8U/100g 油脂。
[0047] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以所述油脂重量計(jì)，所述氯化鈣的加入量為 I-IOwt %，綜合考慮酯化效率、生產(chǎn)操作等因素，氯化鈣的加入量?jī)?yōu)選為加入2_8wt %，更優(yōu) 選為加入3_5wt%。
[0048] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述油脂中游離脂肪酸與所述?；w的摩爾比為 5:1-1:2 優(yōu)選為 3:1-1:1。
[0049] 本發(fā)明還提供了一種油脂酯化方法，該方法包括在進(jìn)行酯化前，將所述油脂與酰 基供體、脂肪酶和氯化鈣接觸。
[0050] 在本發(fā)明中，使用的油脂為動(dòng)物油脂和/或植物油脂。
[0051] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的油脂為高酸價(jià)油脂。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方 案中，使用的高酸價(jià)油脂優(yōu)選為高酸價(jià)稻米油、高酸價(jià)棉籽油、高酸價(jià)魚油、和/或高酸價(jià) 棕櫚油。
[0052] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的?；w為甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丙三 醇、甘油、單甘脂、甘二酯、正己醇、異丙醇、正丁醇和/或苯酚，優(yōu)選為甘油、單甘脂和/或甘 二酯。
[0053] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用的脂肪酶為液體脂肪酶，優(yōu)選為L(zhǎng)ipase CALB、 Lipase PALATASE100L、或 Lipase TL100L。
[0054] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以所述油脂重量計(jì)，所述脂肪酶的加入量為 523. 6-5236U/100g 油脂，優(yōu)選加入 1570. 8-4188. 8U/100g 油脂。
[0055] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以所述油脂重量計(jì)，所述氯化鈣的加入量為 l-10wt%，優(yōu)選為加入2-8wt%，更優(yōu)選為加入3-5wt%。
[0056] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述油脂中游離脂肪酸與所述?；w的摩爾比為 4:1_1:2,優(yōu)選為
[0057] 本發(fā)明還提供了一種脂肪酶組合物，該組合物包括脂肪酶與氯化鈣。
[0058] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以所述氯化鈣重量計(jì)，所述脂肪酶的加入量為 52. 36-5236U/g 氯化鈣，優(yōu)選為 261. 8-1570. 8U/g 氯化鈣。
[0059] 本發(fā)明還提供了一種油脂加工方法，該方法包括將上述的脂肪酶組合物與所述油 脂和?；w接觸，進(jìn)行酯化。
[0060] 本發(fā)明還提供了一種油脂酯化方法，該方法包括在進(jìn)行酯化前，將所述油脂與酰 基供體、上述的脂肪酶組合物接觸。
[0061] 在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"油脂"具有本領(lǐng)域通常接受的含義，特別是表示植物或動(dòng)物來(lái) 源的以高級(jí)脂肪酸甘油酯為主要成分的混合物，例如，可以包括但不限于，茶籽油、稻米油、 棉籽油、蓖麻油、玉米油、棕櫚油、菜籽油、鯨魚油、牛脂、奶油、大豆油、紅花籽油、亞麻油、杏 仁油葵花籽油、芝麻油、玉米胚芽油、橄欖油、花生油、椰子油、棕櫚仁油、豬油、魚油等等。適 用于本發(fā)明工藝的油脂優(yōu)選為高酸價(jià)油脂，例如可以包括但不限于高酸價(jià)稻米油、高酸價(jià) 棕櫚油、高酸價(jià)魚油、高酸價(jià)棉籽油等。
[0062] 在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"高酸價(jià)油脂"指的是采用國(guó)標(biāo)GB/T5530-2005《動(dòng)植物油脂酸 值和酸度測(cè)定》滴定法測(cè)得酸價(jià)大于等于5mgK0H/g，例如酸價(jià)高于2mgK0H/g的油脂，優(yōu)選 酸價(jià)高于5mgK0H/g的油脂。在本發(fā)明中，"高酸價(jià)油脂"包括但不限于高酸價(jià)的稻米油、棕 櫚油、魚油、棉籽油、大豆油、菜籽油、茶油、葵籽油、玉米油等。
[0063] 在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"?；w"指的是含油羥基的烷烴類，例如，包括但不限于甲 醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丙三醇、甘油、單甘脂、甘二酯、正己醇、異丙醇、正丁醇、苯酚等。 [0064] 在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"脂肪酶"指的是任何能夠催化酯交換反應(yīng)或酯化反應(yīng)的酶，在 本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"液體脂肪酶"指的是含有脂肪酶的液體，例如包括但不限于：包含脂肪酶的 溶液（例如商品化銷售的脂肪酶酶活或其稀釋液），表達(dá)脂肪酶的菌株或重組菌株的發(fā)酵 液、發(fā)酵上清液等。在本發(fā)明中，使用的脂肪酶可以使用菌株發(fā)酵表達(dá)的脂肪酶，例如包括 但不限于：假絲酵母南極脂肪酶（Candida antarctica lipase)、thermomyces lanuginosa 脂肪酶、突光假單胞菌脂肪酶（pseudomonas fluorescens lipase)、假單胞桿菌脂肪酶 (pseudomonas cepacia lipase) > chromobacterium viscosum 月旨肪酶、P. aeruginosa 月旨 肪酶、P. fluorescens 脂肪酶、Pseudomonas 脂肪酶、B. cepacia 脂肪酶、C. viscosum 脂 肪酶、Bacillus subtilis 脂肪酶、Achromobacter sp.脂肪酶、Alcaligenes 脂肪酶和 Serratia marcescens脂肪酶以及來(lái)自真菌的C.antarctica B脂肪酶和C.rugosa脂肪 酶等，也可以使用商品化銷售的脂肪酶，例如包括但不限于：Lipase A〃Amano〃6、Lipase AY"Amano"30SD、Lipase G"Amano"50、Lipase R"Amano"、Lipase DF"Amano"15、Lipase MER"Amano"、Newlase F、Lipase CALB、Lipase PALATASE100L、或 Lipase TLlOOL 等。
[0065] 在本發(fā)明中，油脂與?；w、脂肪酶和氯化鈣接觸，既可以將油脂、?；w、月旨 肪酶、氯化鈣一同混合，也可分別混合，例如，將油脂、?；w混合后，再與脂肪酶、氯化鈣 一同混合；或使脂肪酶和氯化鈣接觸，然后再與油脂、?；w接觸；或向油脂中分別加入 酰基供體、脂肪酶和氯化鈣，也可采用本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知或方便使用的方式，使油脂 與?；w、脂肪酶和氯化鈣接觸。
[0066] 在本發(fā)明中，酯化反應(yīng)為酶法酯化，具體工藝為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知或可通 過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。例如，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，酯化反應(yīng)的反應(yīng)溫度為30-KKTC，優(yōu)選為 50-90°C。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，酯化反應(yīng)于真空度小于5000Pa條件下進(jìn)行，優(yōu)選在 小于3000Pa條件下進(jìn)行，更優(yōu)選在小于IOOOPa條件下進(jìn)行。
[0067] 為了使表述更加簡(jiǎn)潔，在說(shuō)明書中本發(fā)明的各種優(yōu)選實(shí)施方式是分開單獨(dú)描述 的，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，在不相矛盾的情況下，各優(yōu)選實(shí)施方式的技術(shù)特征可以 重新組合形成其它的或者更進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式，這些實(shí)施方式應(yīng)當(dāng)視為已經(jīng)被本文明 確公開并且落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0068] 實(shí)施例
[0069] 以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了示例性的描述，應(yīng)當(dāng)理解這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明目 的而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。
[0070] 在本發(fā)明的下述實(shí)施例中，使用的高酸值稻米油采用羅曉嵐，朱文鑫.浸出米糠 油精煉工藝及難點(diǎn)分析[J].中國(guó)油脂，2008, 33(11) :57-60.的方法制備，經(jīng)檢測(cè)，其酸價(jià) 為28. 72mgK0H/g ;使用的原料稻米油通過(guò)市場(chǎng)購(gòu)買獲得。
[0071] 在本發(fā)明的下述實(shí)施例中，使用的CALB購(gòu)自諾維信（中國(guó)）投資有限公司濟(jì)南分 公司創(chuàng)新與發(fā)展中心。
[0072] 在本發(fā)明的下述實(shí)施例中，堿煉脫酸的具體方法為：取IOOg高酸價(jià)稻米油，攪拌 加熱至80°C，然后在半小時(shí)內(nèi)緩慢加入理論計(jì)算的濃度為10%的KOH溶液，之后在8000rpm 轉(zhuǎn)速下離心分離皂腳和油脂，將分離的油脂水洗三次，然后干燥脫水即為堿煉脫酸稻米油。
[0073] 在本發(fā)明的下述實(shí)施例中，酸價(jià)的檢測(cè)方法為：GB/T5530-2005《動(dòng)植物油脂酸值 和酸度測(cè)定》；
[0074] 酯化率的計(jì)算方法如下：
[0075] 酯化率=(AVAV1VAV0
[0076] 其中：AVtl為酯化前AV !AV1為酯化反應(yīng)后AV。
[0077] 在本發(fā)明的下述實(shí)施例中，CALB液體脂肪酶的酶活測(cè)定方法為丁酸丁醇法，具體 過(guò)程如下：
[0078] 底物：丁酸丁醇正庚烷混合物，其中丁酸濃度為0. 16M和丁醇濃度為0. 33M。
[0079] 底物配制方法：將 I. 35ml 丁酸（butyric acid)和 2. 7ml 丁醇（butanol)溶于 85. 95ml正庚燒（n-heptane)混勻即可。
[0080] 酯化反應(yīng)過(guò)程
[0081] 取兩個(gè)50ml具塞三角瓶，分別加入3ml上述底物，樣品瓶加 50vl酶液，對(duì)照瓶不 力口。于50°C水浴，220rpm反應(yīng)1小時(shí)，分別加 Iml甲醇終止，對(duì)照瓶補(bǔ)加 50vl酶液。分別 加 2-3滴酚酞溶液，用0. 02M NaOH滴定至淡粉紅色。
[0082] 3，計(jì)算公式：酯化活力單位：μ mol/min. ml lipase

【權(quán)利要求】
1. 一種油脂加工方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： 將所述油脂與?；w、脂肪酶和氯化鈣接觸，進(jìn)行酯化。
2. -種油脂酯化方法，其特征在于，在進(jìn)行酯化前，將所述油脂與?；w、脂肪酶和 氯化鈣接觸。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述油脂為高酸價(jià)油脂，所述高酸價(jià)油 脂優(yōu)選為高酸價(jià)稻米油、高酸價(jià)棉籽油、高酸價(jià)魚油和/或高酸價(jià)棕櫚油。
4. 如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述?；w為甲醇、乙醇、乙二醇、丙 醇、丙三醇、甘油、單甘脂、甘二酯、正己醇、異丙醇、正丁醇和/或苯酚，優(yōu)選為甘油、單甘脂 和/或甘二酯。
5. 如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述脂肪酶為液體脂肪酶，優(yōu)選為 Lipase CALB、Lipase PALATASE100L、和 / 或 Lipase TL100L。
6. 如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，以所述油脂重量計(jì)，所述脂肪酶的加入 量為 523. 6-5236U/100g 油脂，優(yōu)選加入 1570. 8-4188. 8U/100g 油脂。
7. 如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，以所述油脂重量計(jì)，所述氯化鈣的加入 量為l-10wt %，優(yōu)選為加入2-8wt %，更優(yōu)選為加入3-5wt %。
8. -種脂肪酶組合物，其特征在于，所述組合物包括脂肪酶與氯化鈣；優(yōu)選的，以所述 氯化鈣重量計(jì)，所述脂肪酶的加入量為52. 36-5236U/g氯化鈣，優(yōu)選為261. 8-1570. 8U/g氯 化鈣。
9. 一種油脂加工方法，其特征在于，所述方法將權(quán)利要求8所述的脂肪酶組合物與所 述油脂和?；w接觸，進(jìn)行酯化。
10. -種油脂酯化方法，其特征在于，在進(jìn)行酯化前，將所述油脂與?；w、權(quán)利要求 8所述的脂肪酶組合物接觸。
【文檔編號(hào)】C12P7/64GK104293840SQ201410229160
【公開日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年5月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月18日
【發(fā)明者】李磊, 孫周平, 洪豐, 王勇 申請(qǐng)人:豐益(上海)生物技術(shù)研發(fā)中心有限公司