用于團(tuán)頭魴家系鑒定的srap分子標(biāo)記引物及其方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了用于團(tuán)頭魴家系鑒定的SRAP分子標(biāo)記引物及其方法和應(yīng)用，所用的SRAP分子標(biāo)記引物選自下述引物組合之一：Me2/Em18、Me3/Em19、Me9/Em13、Me9/Em15、Me9/Em16、Me11/Em4、Me11/Em15、Me11/Em18、Me12/Em13、Me12/Em16，各引物的序列如序列表所示。本發(fā)明所公開的SRAP分子標(biāo)記引物用于團(tuán)頭魴家系鑒定，通過對團(tuán)頭魴家系進(jìn)行SRAP分子標(biāo)記，所得到的條帶清晰、多態(tài)性好、重復(fù)性高，而且操作簡單，應(yīng)用前景廣闊。
【專利說明】用于團(tuán)頭魴家系鑒定的SRAP分子標(biāo)記引物及其方法和應(yīng) 用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于團(tuán)頭魴家系鑒定的SRAP分子標(biāo)記引物，屬于水產(chǎn)動物分子 生物學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性（sequence related amplified polymorphism, SRAP)是一 種基于傳統(tǒng)PCR發(fā)展出來的的標(biāo)記系統(tǒng)，通過獨(dú)特的引物設(shè)計(jì)對基因的閱讀框區(qū)域（Open Reading Frames, ORFs)進(jìn)行擴(kuò)增。該方法通過長17bp的正向引物對外顯子進(jìn)行特異擴(kuò)增， 長18bp的反向引物對內(nèi)含子及啟動子區(qū)域進(jìn)行特異擴(kuò)增。由于種內(nèi)或種間的內(nèi)含子、啟動 子之間間隔長度不同而產(chǎn)生多態(tài)性。與其他方法相比，SRAP分子標(biāo)記具有簡便、快速、穩(wěn)定、 重復(fù)性好、中等產(chǎn)率、可產(chǎn)生共顯性標(biāo)記、便于克隆測序目標(biāo)片段的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于指紋 圖譜的繪制、遺傳連鎖圖的構(gòu)建、比較基因組學(xué)、遺傳多樣性分析和基因定位研究。
[0003] 團(tuán)頭魴，又稱武昌魚，因其肉質(zhì)嫩滑，味道鮮美，是中國主要淡水養(yǎng)殖魚類之一，但 是對于該品種的家系分類鑒定一直是動物學(xué)領(lǐng)域的疑難問題，傳統(tǒng)的分類鑒定方法操作復(fù) 雜，耗時(shí)長久，難以在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明公開了一種基于分子生物學(xué)技術(shù)對團(tuán)頭魴家系進(jìn)行 鑒定的方法，具體的說是利用SRAP分子標(biāo)記引物對團(tuán)頭魴的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增以產(chǎn)生多 態(tài)性從而進(jìn)行家系的分類鑒定。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 用于團(tuán)頭魴家系鑒定的SRAP分子標(biāo)記引物，選自下述引物組合之一：Me2/Eml8、 Me3/Eml9、Me9/Eml3、Me9/Eml5、Me9/Eml6、Mell/Em4、Mell/Eml5、Mell/Eml8、Mel2/Eml3、 Mel2/Eml6,具體的，各引物名稱對應(yīng)的序列如下表I所不：
[0007] 表1用于SRAP分析的引物序列
[0008]

【權(quán)利要求】
1. 用于團(tuán)頭魴家系鑒定的SRAP分子標(biāo)記引物，選自下述引物組合之一：Me2/Eml8、 Me3/Eml9、Me9/Eml3、Me9/Eml5、Me9/Eml6、Mell/Em4、Mell/Eml5、Mell/Eml8、Mel2/Eml3、 Mel2/Eml6,各引物的序列如序列表所示。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的SRAP分子標(biāo)記引物，其特征在于引物組合選自Me3/Eml9, Mell/ Em4, Mell/Eml5〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求1的SRAP分子標(biāo)記引物，其特征在于引物組合為Mell/Em4。
4. 采用SRAP分子標(biāo)記引物組合對團(tuán)頭魴家系進(jìn)行鑒定的方法，其特征在于：采用權(quán)利 要求1中的任一引物組合，擴(kuò)增團(tuán)頭魴的基因組DNA并進(jìn)行檢測。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其特征在于SRAP-PCR反應(yīng)體系中，引物濃度為 0· 3-0. 8 μ M，Taq DNA 聚合酶濃度為 0· 2-0. 9U/15 μ L，Mg2+濃度為 1. 5-2. 5mM，dNTPs 濃度為 0· 2 - 0· 4mM，模板 DNA 濃度為 10-30ng/15 μ L。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其特征在于SRAP-PCR反應(yīng)體系中，引物濃度為0. 5 μ Μ，Taq DNA聚合酶濃度為0. 6U/15 μ L，Mg2+濃度為2. OmM，dNTPs濃度為0. 25mM，模板DNA濃度為 20ng/15 μ L。
7. 權(quán)利要求1的任一引物組合在團(tuán)頭魴家系鑒定中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12N15/11GK104293907SQ201410232059
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年5月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月28日
【發(fā)明者】魏開建, 張桂蓉, 姬偉, 冉瑋 申請人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)