烏拉特柄扁桃sod蛋白基因序列及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種烏拉特柄扁桃SOD蛋白及其編碼基因克隆方法與序列。本發(fā)明通過RACE方法克隆得到烏拉特柄扁桃SOD基因全長，對其編碼蛋白進(jìn)行分析，從而探討該基因在提高轉(zhuǎn)基因植物抗氧化、鹽脅迫等方面的作用。烏拉特柄扁桃SOD基因作為一個潛在的抗逆候選基因，其全基因的克隆與功能分析以及對植物的遺傳轉(zhuǎn)化對于培育高抗逆的植物品種將具有一定的意義。本發(fā)明獲取的烏拉特柄扁桃SOD基因?qū)⒃跒趵乇馓铱寡趸瘷C制研究、薔薇科植物抗逆性中發(fā)揮重要作用。
【專利說明】烏拉特柄扁桃SOD蛋白基因序列及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種烏拉特柄扁桃S0D基因及其編碼蛋白序列、基因克隆方法及應(yīng) 用。

【背景技術(shù)】
[0002] 超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，簡稱S0D)是一種能夠催化超氧化物通 過歧化反應(yīng)轉(zhuǎn)化為氧氣和過氧化氫的酶，有效地防止它們對生物體的損害，幾乎參與了生 物體對各種逆境的生理生化反應(yīng)，是生物體內(nèi)一種很重要的抗氧化酶類。它廣泛存在于各 類動物、植物、微生物中。
[0003] 根據(jù)S0D結(jié)合的金屬離子的不同，可分為Fe-SOD、Mn-SOD和Cu/Zn-S0D3種類型。 目前，國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)先后從白楊、甘薯、木薯、桃等等作物中克隆出該基因的cDNA全長序 列或片段序列。
[0004] 烏拉特柄扁桃（Prunus pedunculatacv. Wulate)是薔薇科李屬灌木，利用野生柄 扁桃種子，經(jīng)多年栽培選育而成?？购?、耐寒、耐瘠薄、抗風(fēng)沙、耐沙埋、抗損傷性強。返青早、 枯黃晚，適口性較好。適宜內(nèi)蒙古自治區(qū)中西部地區(qū)種植。目前為止，從烏拉特柄扁桃中獲 得S0D基因序列尚未報道。通過RACE方法克隆得到烏拉特柄扁桃S0D基因全長，對其編碼 蛋白進(jìn)行分析，從而探討該基因在提高轉(zhuǎn)基因植物抗氧化、鹽脅迫等方面的作用。烏拉特柄 扁桃S0D基因作為一個潛在的抗逆候選基因，其全基因的克隆與功能分析以及對植物的遺 傳轉(zhuǎn)化對于培育高抗逆的植物品種將具有一定的意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種烏拉特柄扁桃S0D蛋白、基因序列及應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明所提供的S0D蛋白，來源于烏拉特柄扁桃（Prunus pedunculata CV.Wulate)，是具有序列表中SEQIDN 0:2氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)，或者是將SEQIDN0: 2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與SEQ ID No : 2的氣基酸殘基序列相同活性的由SEQ ID No :2衍生的蛋白質(zhì)。
[0007] 烏拉特柄扁桃S0D的基因，是下列核苷酸序列之一：
[0008] 1)序列表中的 SEQ ID No :1 ;
[0009] 2)編碼序列表中SEQ ID No :2蛋白質(zhì)序列的多核苷酸；
[0010] 3)與序列表中的SEQ ID No :1限定的DNA序列具有90%以上同源性，且編碼相同 功能蛋白質(zhì)的DNA序列。
[0011] 序列表中SEQ ID No :1由1207個堿基組成，其開放閱讀框為自5'端第76到第 789位堿基；序列表中SEQ ID No :2由237個氨基酸殘基組成。
[0012] 含有本發(fā)明基因的表達(dá)載體及細(xì)胞系均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0013] 擴(kuò)增烏拉特柄扁桃S0D基因中任一片段的引物對也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0014] 本發(fā)明的S0D基因?qū)闉趵乇馓疑L發(fā)育過程研究，對植物生長發(fā)育的理論 研究打下堅實的基礎(chǔ)，以及SOD基因功能研究具有重要意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0015] 圖1 :烏拉特柄扁桃S0D基因3'端擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳圖譜
[0016] 圖2 :烏拉特柄扁桃S0D基因5'端擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳圖譜
[0017] 圖3 :烏拉特柄扁桃S0D全長基因擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳圖譜
[0018] 圖4 :烏拉特柄扁桃S0D蛋白與其它植物S0D蛋白序列比對 [0019] 圖5 :烏拉特柄扁桃S0D蛋白與其它植物S0D蛋白進(jìn)化樹分析
[0020] 圖6 :轉(zhuǎn)基因與野生型擬南芥S0D活性檢測
[0021] 圖7 :離體葉片H202處理

【具體實施方式】
[0022] 實施例1、烏拉特柄扁桃S0D蛋白編碼基因的獲得
[0023] 1. 1RNA 的提取
[0024] RNA提取參照張勁松等人的方法進(jìn)行（張勁松，等·中國科學(xué)，B輯，1995, 25 (5): 659?669)，烏拉特柄扁桃根在液氮中研碎，懸于抽提液（4mol/L硫氰酸胍中鈉，5g/L十二 烷基肌氨酸，25mmol/L檸檬酸鈉，0. lmol/L β -巰基乙醇），混合物用酸性苯酚、氯仿抽提， 上清中加入無水乙醇沉淀總RNA，再經(jīng)4mol/L LiCl懸浮RNA沉淀、氯仿抽提1次，然后用乙 酸鈉/乙醇沉淀總RNA，最后將RNA溶于水中，貯存于-20°C (備用，用0. 8%的瓊脂糖檢測 RNA的完整性。
[0025] 1.23' RACE 序列獲得：
[0026] 利用NCBI網(wǎng)站上公布的桃S0D基因序列，設(shè)計一條引物SP1 : 5 ' _GGAGCATGCGTACTACTTACA-3 '，用于 3 ' RACE PCR 擴(kuò)增。按照 SMART RACE cDNA Amplification Kit(Clontech，Cat. no. K1811-1)的方法作 RT-PCR。3'端的擴(kuò)增的循環(huán)參 數(shù)為：94°C變性5s，68°C退火10s，72°C延伸2min，35個循環(huán)。PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳分析得 知，獲得約為500-bp的DNA條帶（圖1)，產(chǎn)物回收純化，連接，轉(zhuǎn)化，通過測序獲得了 534-bp 的DNA片段，3'端序列為SEQ ID No:4。
[0027] 1.35' RACE 序列獲得：
[0028] 利用3 ' RACE測序結(jié)果，設(shè)計一條引物SP 2 : 5，-CGCTGGCATACTTCCAGTTGATT-3'，用于 5，RACE PCR 擴(kuò)增。按照 SMART RACE cDNA Amplification Kit的方法作RT-PCR。Y端的擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)為：94°C變性5s，72°C延伸 3min，5個循環(huán)；94°C變性5s，70°C退火10s，72°C延伸3min，5個循環(huán)；94°C變性5s，68°C退 火10s，72°C延伸2min，25個循環(huán)。PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳分析得知，獲得約為750-bp的DNA 條帶（圖2)，產(chǎn)物回收純化，連接，轉(zhuǎn)化，通過測序獲得了 763-bp的DNA片段，5'端序列為 SEQ ID No ：5.
[0029] 1. 4該基因編碼區(qū)序列的獲得
[0030] 以測序的:V RACE和Y RACE片段序列為基礎(chǔ)，設(shè)計一對引物S0D-1和S0D-2用 于擴(kuò)增完整編碼區(qū)序列。
[0031] S0D_1 ：5/ -GTACATCTCCTCCCAGCAACACACT-3;
[0032] SOD-2 :5' -GGCCTCATTTGTCACACAGATCATT-3,
[0033] 擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)為：94°C變性30s，55°C延伸30s，72°C延伸lmin，30個循環(huán)。PCR產(chǎn) 物經(jīng)凝膠電泳分析得知，獲得約為750bp的DNA條帶（圖3)，產(chǎn)物回收純化，連接，轉(zhuǎn)化，通 過測序獲得了 763bp的DNA片段，借助DNA拼接軟件contig，獲得該基因的cDNA的完整序 列，該序列全長為1207bp，具有SEQ ID No:l的DNA序列，76-786bp為其完整編碼區(qū)域，具 有SEQ ID No :3的DNA序列編碼的蛋白含有237個氨基酸殘基，具有SEQ ID No :2的氨基 酸殘基序列。
[0034] 實施例2、烏拉特柄扁桃S0D蛋白的序列及功能分析實驗
[0035] 2. 2生物信息學(xué)分析：
[0036] 用BLAST和DNAMAN軟件對烏拉特柄扁桃S0D蛋白的序列進(jìn)行比較分析，結(jié)果表明 烏拉特柄扁桃S0D與桃、橡膠樹及野草莓的S0D具有極大的同源性（如圖4,圖5所示）。
[0037] 2. 2轉(zhuǎn)基因分析：
[0038] 2. 2. 1表達(dá)載體的構(gòu)建
[0039] 設(shè)計引物1對引物用于構(gòu)建植物表達(dá)載體
[0040] S0D-f ：5/ -cccTCTAGAATGGCTCTTCGAGCTCTCGTGGCC-3,
[0041] S0D-r ：5/ -cccGGATCCTCAAGGGCTTTCTTTCTCGTACAC-3'
[0042] (其中下劃線部分分別表示Xbal，BamHI酶切位點）。
[0043] 植物表達(dá)載體的構(gòu)建過程：提取烏拉特柄扁桃葉片的總RNA，用oligo (dT) 18作反 轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物用引物S0D-f，S0D-r進(jìn)行PCR，得到含有完整開放閱讀框的DNA片段，連 接到PMD19-T載體上，獲得重組克隆載體，命名為pMD-SOD。轉(zhuǎn)化大腸桿菌，并送到生物公司 測序。對于含有正確序列的菌株，搖菌提取質(zhì)粒，用Xbal和BamHI分別雙酶切pMD-SOD和 PBI121載體，回收、純化酶切產(chǎn)物。按照pBI121載體：S0D片段為1 :7的比例，用T4DNA連 接酶于16°C連接過夜，從而獲得含有烏拉特柄扁桃S0D編碼序列的重組表達(dá)載體，命名為 pBI-SOD。
[0044] 2. 2. 3擬南芥轉(zhuǎn)化及鑒定
[0045] 利用質(zhì)粒小提試劑盒提取pBI-SOD質(zhì)粒，用CaCl2-冷凍法轉(zhuǎn)化方法導(dǎo)入農(nóng)桿菌 GV3101中。對轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌進(jìn)行PCR檢測分析，利用花序浸泡法，對處于花蕾期的野生型擬 南芥進(jìn)行處理，具體步驟為：用已制備好的含有PBI-S0D植物表達(dá)載體質(zhì)粒的農(nóng)桿菌菌液 對已經(jīng)長出腋生花序的擬南芥植株進(jìn)行侵染，約浸泡2min，罩上塑料薄膜保持濕度，遮光處 理Id后重新放置到人工氣候箱中培養(yǎng)。收獲轉(zhuǎn)基因擬南芥種子，經(jīng)75%的酒精消毒10min 后，均勻點播至含有50mg/L卡那霉素1/2MS培養(yǎng)基上，待種子發(fā)芽，選取能夠正常生根的擬 南芥轉(zhuǎn)移至土壤中繼續(xù)培養(yǎng)。對轉(zhuǎn)基因擬南芥植株，進(jìn)行PCR檢測。
[0046] 2. 2. 4抗氧化性檢測
[0047] 收集轉(zhuǎn)基因和野生型擬南芥植株相同部位的葉片0. 5g，放入預(yù)冷的研缽中，加入 lml預(yù)冷的磷酸緩沖液在冰浴上研磨成楽，加緩沖液使終體積為5ml。取1. 5-2ml于lOOOrpm 下離心20min，上清液即為SOD粗提液。采用氮藍(lán)四唑（NBT)，測定SOD含量。
[0048] 收集成熟轉(zhuǎn)基因和野生型擬南芥植株相同部位的葉片，分別放置在含有5% H202 的MES緩沖液中（3mM，pH5. 7)。待三天后，觀察離體葉片情況。
[0049] 2. 2. 5結(jié)果分析
[0050] 通過測定轉(zhuǎn)基因擬南芥和野生型擬南芥葉片中SOD含量，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因植株 中S0D含量明顯升高（圖6)。通過分析轉(zhuǎn)基因植物的抗氧化能力，將離體葉片放置在含有 5% H202的1^5緩沖液中，三天后，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因擬南芥葉片還能保持部分綠色，而野生 型擬南芥的綠色則部分或完全褪去（圖7)。以上結(jié)果表明：轉(zhuǎn)烏拉特柄扁桃S0D基因能夠 提高轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗氧化能力，烏拉特柄扁桃S0D基因在植物抗氧化方面起著重要的作 用。
[0051] 以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實施例，并非對本發(fā)明作任何形式上和實質(zhì)上的限 制，凡熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案范圍內(nèi)，當(dāng)可利用以上所揭示的技 術(shù)內(nèi)容，而作出的些許更動、修飾與演變的等同變化，均為本發(fā)明的等效實施例；同時，凡依 據(jù)本發(fā)明的實質(zhì)技術(shù)對以上實施例所作的任何等同變化的更動、修飾與演變，均仍屬于本 發(fā)明的技術(shù)方案的范圍內(nèi)。
[0001] 序列表.txt SEQUENCE LISTING <110〉 申請人: <120〉烏拉特柄扁桃SOD蛋白基因序列及應(yīng)用 <130〉烏拉特柄扁桃S0D蛋白基因序列及應(yīng)用 <160> 5 <170> Patentln version 3. 3 <210〉 1 <211> 1207 <212> DNA <213> Prunus pedunculata <400> 1 aagtcttctc tcactctctc tctgccccct cctttctcgt cctttctgta catctcctcc 60 cagcaacaca cttcgatggc tcttcgagct ctcgtggcca ggaaatccct tggattgggg 120 tttcagagca aagccaaaat cctcgccgta ggttctacag ctcattcccg tggctttcaa 180 accttctcgc ttcccgacct tccgtacgac tatggcgctc tcgagcctgc aattagtggc 240 gagatcatgc agctccatca ccagaagcac caccagactt acgtcaccaa ctacaacaaa 300 gctcttgagc agctccacga cgccatcgcc aagggtgatg ctgctgctgt tgttaaattg 360 caaagcgcca tcaagttcaa tggcggaggt catgtcaacc actcgatttt ctggaagaat 420 ctgactcctg ttggtgtagg aggtggtgag ccccctcatg gttccctggg ctgggctatt 480 gacacaaatt ttggttctat ggaagcatta gtgcaaaaga tcaatgcaga aggcgctgct 540 ttgcagggtt ctggatgggt gtggctggct ctagaaaaag agttgaagaa acttgtggtt 600 gaaaccactg caaatcagga cccattggtt accaaaggac caactttagt tccattgctt 660 ggtattgatg tttgggagca tgcgtaclac ttacagtata agaatgtgag gccagattat 720 ctgaagaaca tatggaaagt aatcaactgg aagtatgcca gcgaagtgta cgagaaagaa 780 agcccttgag gctttgagca aatgaaggtg gcatttgcag ctagttgaga tgatgaaata 840 aaatgatctg tgtgacaaat gaggcccccc cttatttaat catcgacata tcccatccca 900 atcccatccc ttgtatgaaa ttgagatagt gtaagagtta tgtacgtatt taatcactgt 960 ttgtttcttt tttgtttgtt ccactgtttg atcgttcgat gcaataagtt atgtacgtaa 1020 ttggagcttt gtctattttg ctgcctgaaa tgagctttgt cgtcaacttt tgctatgatt 1080 tcgaggggct tgttgagggt aagtaaagtc gaggcactat tcaaatcgtt gcgatccaac 1140 catgttgaaa tcttatagaa ataaataact gtcttgtaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1200 SS30.33.3. 1207 <210〉 2 <211〉 237 <212〉 PRT <213> Prunus pedunculata <400> 2 Met Ala Leu Arg Ala Leu Val Ala Arg Lys Ser Leu Gly Leu Gly Phe 15 10 15 Gin Ser Lys Ala Lys He Leu Ala Val Gly Ser Thr Ala His Ser Arg 20 25 30
[0002] Gly Phe Gin Thr Phe Ser Leu Pro Asp Leu Pro Tyr Asp Tyr Gly Ala 35 40 45 Leu Glu Pro Ala lie Ser Gly Glu He Met Gin Leu His His Gin Lys 50 55 60 His His Gin Thr Tyr Val Thr Asn Tyr Asn Lys Ala Leu Glu Gin Leu 65 70 75 80 His Asp Ala lie Ala Lys Gly Asp Ala Ala Ala Val Val Lys Leu Gin 85 90 95 Ser Ala He Lys Phe Asn Gly Gly Gly His Val Asn His Ser He Phe 100 105 110 Trp Lys Asn Leu Thr Pro Val Gly Val Gly Gly Gly Glu Pro Pro His 115 120 125 Gly Ser Leu Gly Trp Ala He Asp Thr Asn Phe Gly Ser Met Glu Ala 130 135 140 Leu Val Gin Lys lie Asn Ala Glu Gly Ala Ala Leu Gin Gly Ser Gly 145 150 155 160 Trp Val Trp Leu Ala Leu Glu Lys Glu Leu Lys Lys Leu Val Val Glu 165 170 175 Thr Thr Ala Asn Gin Asp Pro Leu Val Thr Lys Gly Pro Thr Leu Val 180 185 190 Pro Leu Leu Gly He Asp Val Trp Glu His Ala Tyr Tyr Leu Gin Tyr 195 200 205 Lys Asn Val Arg Pro Asp Tyr Leu Lys Asn He Trp Lys Val He Asn 210 215 220 Trp Lys Tyr Ala Ser Glu Val Tyr Glu Lys Glu Ser Pro 225 230 235 <210> 3 <211> 711 <212> DNA <213> Prunus pedunculata <400> 3 atggctcttc gagctctcgt ggccaggaaa tcccttggat tggggtttca gagcaaagcc 60 aaaatcctcg ccgtaggttc tacagctcat tcccgtggct ttcaaacctt ctcgcttccc 120 gaccttccgt acgactatgg cgctctcgag cctgcaatta gtggcgagat catgcagctc 180 catcaccaga agcaccacca gacttacgtc accaactaca acaaagctct tgagcagctc 240 cacgacgcca tcgccaaggg tgatgctgct gctgttgtta aattgcaaag cgccatcaag 300 ttcaatggcg gaggtcatgt caaccactcg attttctgga agaatctgac tcctgttggt 360 gtaggaggtg gtgagccccc tcatggttcc ctgggctggg ctattgacac aaattttggt 420 tctatggaag cattagtgca aaagatcaat gcagaaggcg ctgctttgca gggttctgga 480
[0003] tgggtgtggc tggctctaga aaaagagttg aagaaacttg tggttgaaac cactgcaaat 540 caggacccat tggttaccaa aggaccaact ttagttccat tgcttggtat tgatgtttgg 600 gagcatgcgt actacttaca gtataagaat gtgaggccag attatctgaa gaacatatgg 660 aaagtaatca actggaagta tgccagcgaa gtgtacgaga aagaaagccc t 711 <210> 4 <211> 533 <212> DNA <213> Prunus pedunculata <400> 4 ggagcatgcg tactacttac agtataagaa tgtgaggcca gattatctga agaacatatg 60 gaaagtaatc aactggaagt atgccagcga agtgtacgag aaagaaagcc cttgaggctt 120 tgagcaaatg aaggtggcat ttgcagctag ttgagatgat gaaataaaat gatctgtgtg 180 acaaatgagg ccccccctta tttaatcatc gacatatccc atcccaatcc catcccttgt 240 atgaaattga gatagtgtaa gagttatgta cgtatttaat cactgtttgt ttcttttttg 300 tttgttccac tgtttgatcg ttcgatgcaa taagttatgt acgtaattgg agctttgtct 360 attttgctgc ctgaaatgag ctttgtcgtc aacttttgct atgatttcga ggggcttgtt 420 gagggtaagt aaagtcgagg cactattcaa atcgttgcga tccaaccatg ttgaaatctt 480 atagaaataa ataactgtct tgtaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 533 <210> 5 <211〉 763 <212> DNA <213> Prunus pedunculata <400> 5 aagtcttctc tcactctctc tctgccccct cctttctcgt cctttctgta catctcctcc 60 cagcaacaca cttcgatggc tcttcgagct ctcgtggcca ggaaatccct tggattgggg 120 tttcagagca aagccaaaat cctcgccgta ggttctacag ctcattcccg tggctttcaa 180 accttctcgc ttcccgacct tccgtacgac tatggcgctc tcgagcctgc aattagtggc 240 gagatcatgc agctccatca ccagaagcac caccagactt acgtcaccaa ctacaacaaa 300 gctcttgagc agctccacga cgccatcgcc aagggtgatg ctgctgctgt tgttaaattg 360 caaagcgcca tcaagttcaa tggcggaggt catgtcaacc actcgatttt ctggaagaat 420 ctgactcctg ttggtgtagg aggtggtgag ccccctcatg gttccctggg ctgggctatt 480 gacacaaatt ttggttctat ggaagcatta gtgcaaaaga tcaatgcaga aggcgctgct 540 ttgcagggtt ctggatgggt gtggctggct ctagaaaaag agttgaagaa acttgtggtt 600 gaaaccactg caaatcagga cccattggtt accaaaggac caactttagt tccattgctt 660 ggtattgatg tttgggagca tgcgtactac ttacagtata agaatgtgag gccagattat 720 ctgaagaaca tatggaaagt aatcaactgg aagtatgcca gcg 763
【權(quán)利要求】
1. 一種烏拉特柄扁桃SOD蛋白，是具有序列表中SEQ ID No :2氨基酸殘基序列的蛋白 質(zhì)，或者是將SEQ ID No :2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失或添 加且具有與SEQ ID No :2的氨基酸殘基序列相同活性的由SEQ ID No :2衍生的蛋白質(zhì)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)，其特征在于：所述烏拉特柄扁桃SOD蛋白是序列表 中的 SEQ ID No :2。
3. 烏拉特柄扁桃SOD蛋白的編碼基因，是下列核苷酸序列之一： 1) 序列表中的SEQ ID No :1 ; 2) 編碼序列表中SEQ ID No :2蛋白質(zhì)序列的多核苷酸； 3) 與序列表中的SEQ ID No :1限定的DNA序列具有95%以上同源性，且編碼相同功能 蛋白質(zhì)的DNA序列。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的基因，其特征在于：所述烏拉特柄扁桃SOD蛋白的編碼基因 是序列表中的SEQ IDNo:l。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的基因，其特征在于：所述烏拉特柄扁桃SOD蛋白的編碼基因 的讀碼框為序列表中SEQ ID No :1的自5'端第76到第786位堿基。
6. 含有權(quán)利要求3-5任一所述基因的重組表達(dá)載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。
7. 擴(kuò)增權(quán)利要求3-5任一所述基因中任一片段的引物。
8. 權(quán)利要求3所述烏拉特柄扁桃SOD蛋白的編碼基因在植物耐鹽分子機制研究中的應(yīng) 用。
9. 權(quán)利要求3所述烏拉特柄扁桃SOD蛋白的編碼基因在植物耐鹽性狀改良中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12Q1/68GK104120111SQ201410235695
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2014年5月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月26日
【發(fā)明者】孫杰, 劉永志, 晁躍輝, 張愛東, 羿靜, 李敬忠, 王鳳武, 青格樂 申請人:內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院