一種藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及發(fā)酵領域，尤其是一種藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑及其制備方法。該發(fā)酵劑，按照重量份數(shù)計，其原料組份包括：從藏靈菇中分離出的混合菌沉淀物70-90份、保護劑10-30份；其中，混合菌沉淀物為將按體積份數(shù)計的乳球菌菌液沉淀物1.5份-2.5份、乳明串珠菌菌液沉淀物3.5-4.5份、干酪乳桿菌菌液沉淀物2.5-3.5份、酵母菌菌液沉淀物0.5-1.5份同時接種到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)、離心后獲得的沉積物；保護劑包括脫脂牦牛乳、牦牛奶油、殼寡糖、海藻糖、維生素以及谷氨酸鈉中的一種或多種。本發(fā)明提供的發(fā)酵劑，發(fā)酵獲得的酸乳還不易腐壞，保質(zhì)期長；復活率高、發(fā)酵性能好、易于保存以及適合規(guī)?；a(chǎn)。
【專利說明】一種藏靈薛菌凍干發(fā)酵劑及其制備方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明涉及發(fā)酵領域，具體而言，涉及一種藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]藏靈菇又名西藏雪蓮，是源自雪域高原海拔4500米處的特有珍稀菌種，是幾百年來藏區(qū)牧民制作牦牛酸奶的必需菌種。形態(tài)為似米粒狀的白色小顆粒，觸覺較軟、較韌、發(fā)粘，長期培養(yǎng)后，個體會逐漸長大，形態(tài)如盛開的雪蓮，故謂之西藏雪蓮。藏靈菇所發(fā)酵的酸奶，具有調(diào)理人體胃腸機能、預防感冒、治療風濕病、增強腸道免疫力、提升肝臟解毒功能、降低血壓血糖血脂、防癌抗癌等功效。食用藏靈菇是個巨大的寶庫，迄今為大眾所利用的，只是其中極少部分。
[0003]在相關(guān)技術(shù)中，在使用藏靈菇(一般采用藏靈菇菌菌團)作為發(fā)酵劑制作酸奶時，常見的方法是直接將藏靈菇菌菌團作為發(fā)酵劑使用。但是，由于藏靈菇菌菌團中的細菌種類較多，進而使得制成的酸奶不衛(wèi)生，較易造成腸胃疾病。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑，以解決上述的問題。
[0005]本發(fā)明的另一個目的在于提供一種上述藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑的制備方法。
[0006]在本發(fā)明的實施例中提供了藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑，按照重量份數(shù)計，其原料組份包括:從藏靈菇中分離出的混合菌沉淀物70-90份、保護劑10-30份；其中，所述混合菌沉淀物為將按體積份數(shù)計的乳球菌菌液沉淀物1.5份-2.5份、乳明串珠菌菌液沉淀物3.5-4.5份、干酪乳桿菌菌液沉淀物2.5-3.5份、酵母菌菌液沉淀物0.5-1.5份同時接種到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)、離心后獲得的沉積物；所述保護劑包括脫脂牦牛乳、牦牛奶油、殼寡糖、海藻糖、維生素以及谷氨酸鈉中的一種或多種。
[0007]本發(fā)明提供的這種藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑，其從藏靈菇中分離出四種優(yōu)勢菌種，四種優(yōu)勢菌(乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌、酵母菌)通過牦牛脫脂乳培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)、離心后，分別得到了四種菌的菌液沉淀物，將這四種菌液沉淀物按照既定的體積比在接入到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基中培養(yǎng)，進而得到了混合菌沉淀物；在混合菌沉淀物中，這四種菌均作為風味菌，與保護劑以既定的重量比例混合之后，通過真空冷凍干燥，即可得到凍干發(fā)酵劑。
[0008]本發(fā)明實施例提供的這種凍干發(fā)酵劑，其來源于藏靈菇菌，通過分離培養(yǎng)只獲得了四種優(yōu)勢菌種作為風味菌，進而克服了現(xiàn)有技術(shù)中直接將藏靈菇菌作為發(fā)酵劑時，其含有大量雜菌的缺陷，分離出的這四種菌，其以最佳的比例配合，通過培養(yǎng)并得到混合菌沉淀物，在作為發(fā)酵劑的時候，由于沒有雜菌，其發(fā)酵獲得的酸乳安全衛(wèi)生。并且由于不含雜菌，其發(fā)酵獲得的酸乳還不易腐壞，保質(zhì)期長。
[0009]另外，通過實踐證明，本發(fā)明實施例提供的這種凍干發(fā)酵劑，其還具有復活率高、發(fā)酵性能好、易于保存以及適合規(guī)?；a(chǎn)的優(yōu)點。[0010]可選的，所述乳球菌菌液沉淀物、乳明串珠菌液沉淀物、干酪乳桿菌菌液沉淀物和酵母菌菌液沉淀物為將從藏靈菇中分離出的乳球菌、乳明串珠、干酪乳桿菌和酵母菌分別用牦牛脫脂乳培養(yǎng)基培養(yǎng)后通過離心獲得的絮狀沉積物。
[0011]可選的，在所述保護劑中，按重量份數(shù)計；具體包括:脫脂牦牛乳13份、牦牛奶油2份、殼寡糖4份、維生素I份。
[0012]可選的，所述藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑為粉末狀。
[0013]本發(fā)明實施例還提供了一種根據(jù)上述藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑的制備方法，包括以下步驟:
[0014](I)、從新鮮的藏靈菇中分離提取出乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌和酵母菌；
[0015](2)、分別將所述乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌和酵母菌接入到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)后離心，得到四種菌液沉積物；
[0016](3)、將四種所述菌液沉積物按照既定的體積比接種到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基中，恒溫振蕩培養(yǎng)后離心，得到混合菌沉淀物；
[0017](4)、將所述混合菌沉淀物和保護劑按照既定的質(zhì)量比混合，依次在4°C平衡20-25分鐘、在_30°C預凍40-50分鐘、在_80°C預凍60-70分鐘，最后進行真空冷凍干燥，得到藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑。
[0018]可選的，步驟(I)具體包括:將新鮮的藏靈菇進行研磨勻漿，得到均漿液；將均漿液振蕩搖勻后用無菌生理鹽水稀釋，得到不同稀釋倍數(shù)的菌懸液；利用培養(yǎng)基培養(yǎng)所述述菌懸液，并通過分離和純化，得到乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌和酵母菌。
[0019]可選的，在步驟⑵中，具體包括:分別將所述乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌和酵母菌按照3.5%的接種量接入到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基中，在28-31°C、轉(zhuǎn)速180-190轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)4-5小時后離心，得到四種菌液沉積物。
[0020]可選的，在步驟(3)中:所述恒溫振蕩培養(yǎng)的溫度為37_42°C、時間為4小時_6小時、轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分-220轉(zhuǎn)/分；所述離心的轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分鐘、時間為5分鐘。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0021]為了更清楚地說明本發(fā)明【具體實施方式】或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對【具體實施方式】或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實施方式，對于本領域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。
[0022]圖1為本發(fā)明實施例四提供的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑的制備流程示意圖。
【具體實施方式】
[0023]為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明的技術(shù)方案進行清楚、完整的描述，基于本發(fā)明中的【具體實施方式】，本領域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動的前提下所得到的所有其它實施方式，都屬于本發(fā)明所保護的范圍。
[0024]本發(fā)明提供的這種藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑，其原料組份包括:從藏靈菇中分離出的混合菌沉淀物70-90份、保護劑10-30份；其中，所述混合菌沉淀物為將按體積份數(shù)計的乳球菌菌液沉淀物1.5份-2.5份、乳明串珠菌菌液沉淀物3.5-4.5份、干酪乳桿菌菌液沉淀物2.5-3.5份、酵母菌菌液沉淀物0.5-1.5份同時接種到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)、離心后獲得的沉積物。所述保護劑包括脫脂牦牛乳、牦牛奶油、殼寡糖、海藻糖、維生素以及谷氨酸鈉中的一種或多種。
[0025]本發(fā)明實施例提供的這種藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑，其從藏靈菇中分離出四種優(yōu)勢菌種，四種優(yōu)勢菌(乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌、酵母菌)通過牦牛脫脂乳培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)、離心后，分別得到了四種菌的菌液沉淀物，將這四種菌液沉淀物按照既定的體積比在接入到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基中培養(yǎng)，進而得到了混合菌沉淀物；在混合菌沉淀物中，這四種菌均作為風味菌。與保護劑以既定的重量比例混合之后，通過真空冷凍干燥，即可得到凍干發(fā)酵劑。
[0026]本發(fā)明實施例提供的這種凍干發(fā)酵劑，其來源于藏靈菇菌，通過分離培養(yǎng)只獲得了四種優(yōu)勢菌種作為風味菌，進而克服了現(xiàn)有技術(shù)中直接將藏靈菇菌作為發(fā)酵劑時，其含有大量雜菌的缺陷，分離出的這四種菌，其以最佳的比例配合，通過培養(yǎng)并得到混合菌沉淀物，在作為發(fā)酵劑的時候，由于沒有雜菌，其發(fā)酵獲得的酸乳安全衛(wèi)生。并且由于不含雜菌，其發(fā)酵獲得的酸乳還不易腐壞，保質(zhì)期長。
[0027]另外，通過實踐證明，本發(fā)明實施例提供的這種凍干發(fā)酵劑，其還具有復活率高、發(fā)酵性能好、易于保存以及適合規(guī)?；a(chǎn)的優(yōu)點。
[0028]作為可選的技術(shù)方案，在本發(fā)明中，所述乳球菌菌液沉淀物、乳明串珠菌液沉淀物、干酪乳桿菌菌液沉淀物和酵母菌菌液沉淀物為將從藏靈菇中分離出的乳球菌、乳明串珠、干酪乳桿菌和酵母菌分別用牦牛脫脂乳培養(yǎng)基培養(yǎng)后通過離心獲得的絮狀沉積物；并且，在所述保護劑中，按重量份數(shù)計；具體包括:脫脂牦牛乳13份、牦牛奶油2份、殼寡糖4份、維生素I份；另外，所述藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑可為粉末狀。
[0029]此外，本發(fā)明還結(jié)合上述的內(nèi)容，對藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑的組成提供了以下具體的實施例:
[0030]實施例一
[0031]本實施例的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑，按照重量份數(shù)計，其原料組份包括:
[0032]從藏靈菇中分離出的混合菌沉淀物70份、保護劑10份；
[0033]其中，所述混合菌沉淀物為將按體積份數(shù)計的乳球菌菌液沉淀物1.5份、乳明串珠菌菌液沉淀物3.5份、干酪乳桿菌菌液沉淀物2.5份、酵母菌菌液沉淀物0.5份同時接種到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)、離心后獲得的沉積物。所述保護劑包括脫脂牦牛乳、牦牛奶油、殼寡糖、維生素(脫脂牦牛乳13份、牦牛奶油2份、殼寡糖4份、維生素I份)。
[0034]實施例二
[0035]本實施例的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑，按照重量份數(shù)計，其原料組份包括:
[0036]從藏靈菇中分離出的混合菌沉淀物80份、保護劑20份；
[0037]其中，所述混合菌沉淀物為將按體積份數(shù)計的乳球菌菌液沉淀物2份、乳明串珠菌菌液沉淀物4份、干酪乳桿菌菌液沉淀物2份、酵母菌菌液沉淀物I份同時接種到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)、離心后獲得的沉積物。所述保護劑包括脫脂牦牛乳、牦牛奶油、殼寡糖、維生素以及谷氨酸鈉(脫脂牦牛乳13份、牦牛奶油2份、殼寡糖4份、維生素I份、谷氨酸鈉I份)。
[0038]實施例三[0039]本實施例的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑，按照重量份數(shù)計，其原料組份包括:
[0040]從藏靈菇中分離出的混合菌沉淀物90份、保護劑30份；
[0041]其中，所述混合菌沉淀物為將按體積份數(shù)計的乳球菌菌液沉淀物2.5份、乳明串珠菌菌液沉淀物4.5份、干酪乳桿菌菌液沉淀物3.5份、酵母菌菌液沉淀物1.5份同時接種到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)、離心后獲得的沉積物。所述保護劑包括脫脂牦牛乳、牦牛奶油、殼寡糖、維生素以及谷氨酸鈉(脫脂牦牛乳13份、牦牛奶油2份、殼寡糖4份、維生素I份、谷氨酸鈉I份)。
[0042]為了使得本發(fā)明上述實施例的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑得到更好的應用，更加有效應用到發(fā)酵領域中，本發(fā)明還在上述實施例的基礎之上提供了實施例四，實施例四給出了上述實施例的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑的制作方法，現(xiàn)做詳細的闡述和解釋，請參考圖1:
[0043]實施例四
[0044]請參考圖1，在本實施例中，藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑的制備方法包括以下步驟:
[0045]步驟101:從新鮮的藏靈菇中分離提取出乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌和酵母菌；
[0046]在步驟101中，對新鮮的藏靈菇進行處理，然后再通過分離、提取以及純化的操作，即可得到乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌和酵母菌，四種菌獲得之后需要保藏在4°C冰箱中備用。
[0047]步驟102:分別將所述乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌和酵母菌接入到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)后離心，得到四種菌液沉積物；
[0048]在步驟102中，分別將4種菌利用牦牛脫脂乳培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，進而獲得四種菌的純培養(yǎng)物，通過離心之后，即可獲得四種菌液沉積物。
[0049]步驟103:將四種所述菌液沉積物按照既定的體積比接種到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基中，恒溫振蕩培養(yǎng)后離心，得到混合菌沉淀物；
[0050]在步驟103中，將獲得的4中菌液沉積物按照既定的體積比接種到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基中，進行再次培養(yǎng)，通過離心后，獲得混合菌沉淀物。
[0051]步驟104:將所述混合菌沉淀物和保護劑按照既定的質(zhì)量比混合，依次在4°C平衡20-25分鐘、在_30°C預凍40-50分鐘、在_80°C預凍60-70分鐘，最后進行真空冷凍干燥，得到藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑；
[0052]在步驟104中，得到的混合菌沉淀物(絮狀液體)，將其以既定的比例和保護劑混勻，通過平衡、預凍之后，進行真空冷凍干燥，進而獲得粉末狀的凍干發(fā)酵劑，得到發(fā)酵劑之后在4 C冰箱中保存，待用。
[0053]此外，為了使得上述的方法更加清楚明了、便于實施，本發(fā)明還在上述實施例四的基礎之上提供了實施例五，實施例五是對實施例四提供的方法做出的進一步的限定以及增力口，具體的步驟請參考以下內(nèi)容:
[0054]實施例五
[0055]本實施例的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑的制備方法具體包括以下步驟:
[0056]S1:將新鮮的藏靈菇進行研磨勻漿，得到均漿液；
[0057]具體的，藏靈菇采用西藏當?shù)氐男迈r藏靈菇取(其重量約為5g)，無菌條件下研磨勻漿，進而得到勻漿液。[0058]S2:將均漿液振蕩搖勻后用無菌生理鹽水稀釋，得到不同稀釋倍數(shù)的菌懸液；
[0059]在稀釋的過程中，取ImL勻漿液，加入9mL無菌生理鹽水，稀釋成10'再吸取ImL上級稀釋液加入到9mL無菌生理鹽水中稀釋，配成10_2倍稀釋液，依次按10倍法稀釋，稀釋到10_7梯度。
[0060]在本實施例中，為了保證菌種的生長條件，接種的均漿液的稀釋倍數(shù)優(yōu)選為:10_5、10_6、10_7濃度的梯度稀釋液(菌懸液)。
[0061]S3:利用培養(yǎng)基培養(yǎng)所述述菌懸液，并通過分離和純化，得到乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌和酵母菌；
[0062]具體的，將上述的稀釋液(菌懸液)取0.1mL倒入MRS培養(yǎng)基中，輕輕搖晃使液體均勻的平鋪在培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng)72小時。觀察培養(yǎng)基上菌落，挑取有透明圈的菌落，進行革蘭氏染色并觀察其形態(tài)。挑取革蘭氏染色陽性菌落再進行接觸酶實驗，陰性者為乳酸菌；將確定為乳酸菌菌落的再次在培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，重復2-3次，直至鏡檢為純培養(yǎng)物止。純化后的菌株接種至MRS斜面上培養(yǎng)，培養(yǎng)后至4°C冰箱中保存?zhèn)溆谩?br>
[0063]另外，進一步的，為了分離出乳酸菌球菌，分別從上述2種菌懸液中選擇3個最高稀釋度，每個稀釋度取0.1ml，分別涂布于MRS+和LEE平板，30°C，培養(yǎng)48_72h，然后挑取不同形態(tài)的典型菌落制片，革蘭氏染色觀察并進行接觸酶試驗。凡屬革蘭氏陽性菌兼接觸酶陰性的菌落繼續(xù)在原培養(yǎng)基上劃線純化，重復3次，直至鏡檢為純培養(yǎng)物止。純化后的菌株接種至MRS斜面上培養(yǎng)，培養(yǎng)后至4°C冰箱中保存?zhèn)溆谩?br>
[0064]對于酵母菌的分離和純化，可以按照以下的操作進行:分別從2種菌懸液中選擇3個稀釋度，每個稀釋度取0.1ml分別涂布于YGC平板，30培養(yǎng)24_48h，挑取不同形態(tài)的單個菌落畫線純化，純化重復3次，直至鏡檢為純培養(yǎng)物止，純化后的菌株接種至YGC斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后至4°C冰箱中保存、備用。
[0065]另外，對于菌種的鑒定操作，乳酸菌的生理生化鑒定包括明膠液化試驗、石蕊牛乳試驗、吲哚試驗、淀粉水解試驗、產(chǎn)硫化氫試驗、硝酸鹽還原試驗、產(chǎn)黏液試驗及糖發(fā)酵試驗等完成。酵母菌的生理生化鑒定操作包括產(chǎn)淀粉類化合物試驗、尿素分解試驗、高滲透壓試驗、硝酸鹽同化試驗、產(chǎn)子囊孢子試驗、產(chǎn)擲孢子試驗、牛奶胨化試驗、同化乙醇試驗等完成。
[0066]具體的，通過上述的操作之后，從藏靈菇中分離到5株乳酸菌，其形態(tài)及部分生理學特性見表I。該5株菌均不運動，均在10°C下生長，45°C不生長，硝酸鹽還原、明膠液化、產(chǎn)硫化氫及淀粉水解試驗皆為陰性，其中ZLG2、ZLG4菌株產(chǎn)氣，且能在7% NaCl中生長，初步確定:ZLG2為乳酸乳球菌；ZLG4為乳明串珠菌；ZLG7為干酪乳桿菌。具體結(jié)果請參照表
I:
[0067]表I藏靈菇中乳酸菌鑒定結(jié)果
[0068]
【權(quán)利要求】
1.一種藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑，其特征在于，按照重量份數(shù)計，其原料組份包括: 從藏靈菇中分離出的混合菌沉淀物70-90份、保護劑10-30份； 其中，所述混合菌沉淀物為將按體積份數(shù)計的乳球菌菌液沉淀物1.5份-2.5份、乳明串珠菌菌液沉淀物3.5-4.5份、干酪乳桿菌菌液沉淀物2.5-3.5份、酵母菌菌液沉淀物0.5-1.5份同時接種到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng)、離心后獲得的沉積物； 所述保護劑包括脫脂牦牛乳、牦牛奶油、殼寡糖、海藻糖、維生素以及谷氨酸鈉中的一種或多種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑，其特征在于，所述乳球菌菌液沉淀物、乳明串珠菌液沉淀物、干酪乳桿菌菌液沉淀物和酵母菌菌液沉淀物為將從藏靈菇中分離出的乳球菌、乳明串珠、干酪乳桿菌和酵母菌分別用牦牛脫脂乳培養(yǎng)基培養(yǎng)后通過離心獲得的絮狀沉積物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑，其特征在于，在所述保護劑中，按重量份數(shù)計；具體包括: 脫脂牦牛乳13份、牦牛奶油2份、殼寡糖4份、維生素1份。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑，其特征在于，所述藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑為粉末狀。
5.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)、從新鮮的藏靈菇中分離提取出乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌和酵母菌； (2)、分別將所述乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌和酵母菌接入到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)后離心，得到四種菌液沉積物； (3)、將四種所述菌液沉積物按照既定的體積比接種到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基中，恒溫振蕩培養(yǎng)后離心，得到混合菌沉淀物； (4)、將所述混合菌沉淀物和保護劑按照既定的質(zhì)量比混合，依次在4°C平衡20-25分鐘、在_30°C預凍40-50分鐘、在-80°C預凍60-70分鐘，最后進行真空冷凍干燥，得到藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于，步驟(1)具體包括: 將新鮮的藏靈菇進行研磨勻漿，得到均漿液； 將均漿液振蕩搖勻后用無菌生理鹽水稀釋，得到不同稀釋倍數(shù)的菌懸液； 利用培養(yǎng)基培養(yǎng)所述述菌懸液，并通過分離和純化，得到乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌和酵母菌。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于，在步驟(2)中，具體包括: 分別將所述乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳桿菌和酵母菌按照3.5%的接種量接入到牦牛脫脂乳培養(yǎng)基中，在28-31°C、轉(zhuǎn)速180-190轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)4_5小時后離心，得到四種菌液沉積物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于，在步驟(3)中:所述恒溫振蕩培養(yǎng)的溫度為37-42°C、時間為4小時-6小時、轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分-220轉(zhuǎn)/分； 所述離心的轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分鐘、時間為5分鐘。
9.根據(jù)權(quán)利要求5-8任一項所述的藏靈菇菌凍干發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于，每100mL所述牦牛脫脂乳培養(yǎng)基中，包括: 葡萄糖1.5-2.5g、牦牛肉膏0.8-1.2g、檸檬酸三銨0.2g、乙酸鈉0.5g、MgSO4.7Η200.058g、MnSO4.4Η200.025g、VB60.06g、吐溫 7_9ml，余量為蒸餾水。
【文檔編號】A23C9/12GK103999934SQ201410243682
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年6月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月3日
【發(fā)明者】色珠, 佘永新, 馬興斌, 吳金措姆, 拉巴次旦, 巴桑旺堆, 朱彥賓, 四朗玉珍, 羅布頓珠, 姚海潮, 班旦 申請人:西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學院畜牧獸醫(yī)研究所