一種富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、葡萄糖、碳酸氫鈉、蛋白胨、硝酸銨、酵母膏和維生素D；每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入1.0～5.0g葡萄糖、0.1-0.5g碳酸氫鈉、1.0～5.0g的蛋白胨、0.1-0.5g硝酸銨、0.05～0.1g的酵母膏和0.05～0.1g維生素D。用本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)富集耳炎假單胞菌，培養(yǎng)速度快，成本低。彌補(bǔ)了耳炎假單胞菌生長期過慢等方面的不足之處，提高了生長速率，使達(dá)到最大生長量的時(shí)間縮短了9～11個(gè)小時(shí)。
【專利說明】一種富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種富集細(xì)菌的培養(yǎng)基，具體涉及一種富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基。

【背景技術(shù)】
[0002] 耳炎假單胞菌（Pseudomonas otitidis.)是在2006年鑒定出的新型假單胞菌屬的 菌株，該菌株第一次是從感染的人耳臨床樣本中分離得到的，一種致病力較低但抗藥性強(qiáng) 的桿菌。該菌株是一種條件致病菌，只在某種特定條件下才能致病。并且耳炎假單胞菌具有 潛在工業(yè)運(yùn)用的標(biāo)志性特征，該菌株可用于水體凈化，具有好氧反硝化的功能，營養(yǎng)需求簡 單，因此，應(yīng)用前景十分廣闊，耳炎假單胞菌可降解廢水中的一些污染物質(zhì)，因此又具有很 高的研究和應(yīng)用價(jià)值。耳炎假單胞菌的推廣和應(yīng)用，關(guān)鍵在于需要合適的培養(yǎng)基質(zhì)，由于耳 炎假單胞菌生長期過慢，目前采用的富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基，其平均富集時(shí)間為28? 35d，周期均較長。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷和不足，本發(fā)明提供一種富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng) 基，用本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)富集耳炎假單胞菌，培養(yǎng)速度快，成本低。彌補(bǔ)了耳炎假單胞菌 生長期過慢等方面的不足之處，提高了生長速率，使達(dá)到最大生長量的時(shí)間縮短了 9?11 個(gè)小時(shí)。
[0004] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、 葡萄糖、碳酸氫鈉、蛋白胨、硝酸銨、酵母膏和維生素 D，每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入葡萄糖 1. 0?5. 0g、碳酸氫鈉0. 1-0. 5g、蛋白胨1. 0?5. 0g、硝酸銨0. 1-0. 5g、酵母膏0. 05?0. lg 和維生素 DO. 05?0. lg。
[0005] 優(yōu)選的，每l〇〇〇mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入葡萄糖3. 0g、碳酸氫鈉0. 3g、蛋白胨3. 0g、硝酸 銨〇. 3g、酵母膏0. 07g和維生素 DO. 07g。
[0006] 基礎(chǔ)培養(yǎng)基是假單胞菌的常用培養(yǎng)基?？梢赃x用現(xiàn)有技術(shù)中經(jīng)常用的，并已公開 的假單胞菌培養(yǎng)基。
[0007] 利用上述的培養(yǎng)基富集培養(yǎng)耳炎假單胞菌的方法：將上述富集耳炎假單胞菌的培 養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至7. 0?7. 2,121 °C滅菌30min，將耳炎假單胞菌按1 %的接種量接種于富集 耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基中，振蕩混勻，在溫度為30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0008] 葡萄糖對耳炎假單胞菌的生長量的影響隨著葡萄糖的濃度的增加而增大，經(jīng)過 20h的避光培養(yǎng)后，當(dāng)葡萄糖的用量為3. 0g/L時(shí)（每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入3. 0g)，其菌 體繁殖速度很快，菌液〇D6(?達(dá)1. 50,當(dāng)葡萄糖的用量小于3. 0g/L時(shí)，菌液0D_小于1. 50。 因此，葡萄糖的用量以3. 0g/L為宜。
[0009] 碳酸氫鈉對耳炎假單胞菌的生長量的影響隨著碳酸氫鈉的濃度的增加而增大，經(jīng) 過20h的避光培養(yǎng)后，當(dāng)碳酸氫鈉的用量為0. 3g/L時(shí)（每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入0. 3g)， 其菌體繁殖速度很快，菌液〇D_達(dá)1. 50,當(dāng)碳酸氫鈉的用量小于0. 3g/L時(shí)，菌液0D_小于 1.50。因此，碳酸氫鈉的用量以0. 3g/L為宜。
[0010] 蛋白胨對耳炎假單胞菌的生長量的影響，隨著蛋白胨的濃度的增加而增加，經(jīng)過 20h的避光培養(yǎng)后，當(dāng)?shù)鞍纂说挠昧繛?.0g/L(每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入3.0g)時(shí)，其菌 體繁殖速度很快，菌液〇D 6(?達(dá)1. 50,當(dāng)?shù)鞍纂说挠昧看笥?. Og/L時(shí)，菌液0D_小于1. 50。 因此，蛋白胨以3.0g/L為宜。
[0011] 硝酸銨對耳炎假單胞菌的生長量的影響隨著硝酸銨的濃度的增加而增大，經(jīng)過 20h的避光培養(yǎng)后，當(dāng)硝酸銨的用量為0. 3g/L時(shí)（每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入0. 3g)，其菌 體繁殖速度很快，菌液〇D6(?達(dá)1. 50,當(dāng)硝酸銨的用量小于0. 3g/L時(shí)，菌液0D_小于1. 50。 因此，硝酸銨的用量以0. 3g/L為宜。
[0012] 酵母膏對耳炎假單胞菌的生長量的影響，隨著酵母膏的濃度的增加而增加，經(jīng)過 20h的避光培養(yǎng)后，當(dāng)酵母膏的用量為0. 07g/L (每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入0. 07g)時(shí)，其菌 體繁殖速度很快，菌液〇D6(?達(dá)1. 50,當(dāng)酵母膏的用量大于0. 07g/L時(shí)，菌液0D_小于1. 50。 因此，酵母膏以0.07g/L為宜。
[0013] 維生素 D對耳炎假單胞菌的生長量的影響，隨著維生素 D的濃度的增加而增加，經(jīng) 過20h的避光培養(yǎng)后，當(dāng)維生素 D的用量為0. 07g/L (每1000mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入0. 07g)時(shí)， 其菌體繁殖速度很快，菌液〇D6(?達(dá)1. 50,當(dāng)維生素D的用量大于0. 07g/L時(shí)，菌液0D_小 于1.50。因此，維生素 D以0. 07g/L為宜。
[0014] 本發(fā)明的有益效果是：
[0015] 利用本發(fā)明的培養(yǎng)基富集培養(yǎng)耳炎假單胞菌的方法富集培養(yǎng)速度快，由于在基礎(chǔ) 培養(yǎng)基中加入了葡萄糖、碳酸氫鈉、蛋白胨、硝酸銨、酵母膏和維生素 D等營養(yǎng)成分，為微生 物的生長不僅提供了碳源、氮源、能源，而且加入了作為生長因子的酵母膏和維生素 D，從而 為耳炎假單胞菌創(chuàng)造了一個(gè)更好的營養(yǎng)條件，使耳炎假單胞菌生長繁殖速度迅速提升，培 養(yǎng)20h后，其0D 6(?達(dá)到1. 50左右。
[0016] 耳炎假單胞菌生長期延長，最大生長量提高。隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，菌液〇D_逐 漸增加，培養(yǎng)20h時(shí)，其0D_為1. 50,菌液生長量達(dá)最高峰，比使用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)耳炎假 單胞菌時(shí)的〇D6(?有所提高，其生長量最大值提前了 9?11小時(shí)，對其繁殖更有促進(jìn)作用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0017] 圖1是本發(fā)明與常規(guī)培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基富集培養(yǎng)過程中，光密度〇D_的變化圖。
[0018] 圖中，a代表常規(guī)培養(yǎng)基，b代表本發(fā)明富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基。

【具體實(shí)施方式】
[0019] 實(shí)施例1
[0020](一）一種富集耳炎假單胞菌培養(yǎng)基的配制
[0021] 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：磷酸氫二鉀3. 8g、磷酸二氫鉀1. 0g、氯化鈉1. 0g、氯化銨0. lg、硫酸 鎂〇. 2g，蒸餾水1000mL。
[0022] 在上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，加入3. 0g葡萄糖、0. 3g碳酸氫鈉、3. 0g蛋白胨、0. 3g硝酸 銨、0. 07g酵母膏和0. 07g維生素 D。
[0023](二）耳炎假單胞菌的培養(yǎng)
[0024] 將上述培養(yǎng)基的pH調(diào)至7. 0,121 °C滅菌30min。將耳炎假單胞菌按1 %的接種量 接種于培養(yǎng)基中，振蕩混勻，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度30 °C。
[0025] 富集培養(yǎng)結(jié)果：恒溫培養(yǎng)18h后，菌液0D_為1. 40,恒溫培養(yǎng)20h后，達(dá)到最大生 長量，菌液〇D6(?為1. 50,使耳炎假單胞菌的最大生長量提前了 10h。
[0026] 實(shí)施例2
[0027](一）一種富集耳炎假單胞菌培養(yǎng)基的配制
[0028] 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：磷酸氫二鉀3. 8g、磷酸二氫鉀1. 0g、氯化鈉1. 0g、氯化銨0. lg、硫酸 鎂〇. 2g，蒸餾水1000mL。
[0029] 在上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，加入1. 0g葡萄糖、0. lg碳酸氫鈉、1. 0g蛋白胨、0. lg硝酸 銨、0. 05g酵母膏和0. 05g維生素 D。
[0030] (二）耳炎假單胞菌的培養(yǎng)
[0031] 將上述培養(yǎng)基的pH調(diào)至7. 0,121 °C滅菌30min。將耳炎假單胞菌按1 %的接種量 接種于培養(yǎng)基中，振蕩混勻，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度30 °C。
[0032] 富集培養(yǎng)結(jié)果：光照培養(yǎng)18h后，菌液0D_為1. 30,避光培養(yǎng)21h后，達(dá)到最大生 長量，菌液〇D6(?為1. 50,使鮑曼不動(dòng)桿菌的最大生長量提前了 9h。
[0033] 實(shí)施例3
[0034] (一）一種富集耳炎假單胞菌培養(yǎng)基的配制
[0035] 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：磷酸氫二鉀3. 8g、磷酸二氫鉀1. 0g、氯化鈉1. 0g、氯化銨0. lg、硫酸 鎂〇. 2g，蒸餾水1000mL。
[0036] 在上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，加入5. 0g葡萄糖、0. 5g碳酸氫鈉、5. 0g蛋白胨、0. 5g硝酸 銨、〇. lg酵母膏和〇. lg維生素 D。
[0037](二）耳炎假單胞菌的培養(yǎng)
[0038] 將上述培養(yǎng)基的pH調(diào)至7. 0,121 °C滅菌30min。將耳炎假單胞菌按1 %的接種量 接種于培養(yǎng)基中，振蕩混勻，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度30 °C。
[0039] 富集培養(yǎng)結(jié)果：避光培養(yǎng)20h后，達(dá)到最大生長量，菌液0D_為1. 50,使耳炎假單 胞菌的最大生長量提前了 9h?llh。
[0040] 對比例
[0041] 分別取實(shí)施例1中富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基與已公開的實(shí)施例1中的基礎(chǔ)培養(yǎng) 基，分別調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH為7,121°C滅菌30min。將耳炎假單胞菌按1 %的接種量分別接種 于兩種培養(yǎng)基中，振蕩混勻，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度30°C。避光培養(yǎng)40h，測定培養(yǎng)基 富集培養(yǎng)過程中光密度〇D_變化如圖1所示。從圖1中a可知，使用常規(guī)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基培 養(yǎng)耳炎假單胞菌，30h左右時(shí)菌液0D 6(?為0.985 ;從圖1中b可知，使用本發(fā)明培養(yǎng)基培養(yǎng) 耳炎假單胞菌，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，菌液〇D_逐漸增加，培養(yǎng)20h左右，其0D 6(?為1. 50， 本發(fā)明的培養(yǎng)基使耳炎假單胞菌達(dá)到最大生長量的時(shí)間提前了 9h?llh，并且對其繁殖和 快速培養(yǎng)更有促進(jìn)作用。
【權(quán)利要求】
1. 一種富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基，其特征在于，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、葡萄糖、碳酸氫鈉、 蛋白胨、硝酸銨、酵母膏和維生素 D，每lOOOmL基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入葡萄糖1. 0?5. Og、碳酸氫 鈉0.1-0.58、蛋白胨1.0?5.(^、硝酸銨0.1-0.58、酵母膏0.05?0.18和維生素00.05? 0. lg〇
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基，其特征在于：每lOOOmL基礎(chǔ)培 養(yǎng)基加入葡萄糖3. 0g、碳酸氫鈉0. 3g、蛋白胨3. 0g、硝酸銨0. 3g、酵母膏0. 07g和維生素 DO. 07g〇
3. -種利用權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基富集培養(yǎng)耳炎假單胞菌的方法，其特征在 于：將權(quán)利要求1或2所述的富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基的pH調(diào)至7. 0?7. 2,121°C滅菌 30min，將耳炎假單胞菌按1 %的接種量接種于富集耳炎假單胞菌的培養(yǎng)基中，振蕩混勻，在 溫度為30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK104046582SQ201410245469
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年6月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月4日
【發(fā)明者】徐成斌, 王聞燁, 東天, 馬溪平, 孟雪蓮, 李鮮珠 申請人:遼寧大學(xué)