一種細胞裂解液及其制備工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種細胞裂解液及其制備工藝，它由Hepes鈉鹽、Hepes游離酸、氯化鋰、乙二胺四乙酸、十二烷基硫酸鋰、Proclin300、蛋白酶K組成，本發(fā)明是1.該裂解液裂解細胞過程，操作簡單、方便、省時省力。2.裂解后的宮頸上皮脫落細胞樣本可直接進行核酸檢測，無需DNA/RNA純化。
【專利說明】一種細胞裂解液及其制備工藝

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物制劑【技術(shù)領(lǐng)域】；具體涉及一種細胞裂解液及其制備工藝。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前，基因組提取及蛋白質(zhì)研究的一個關(guān)鍵步驟就是細胞裂解，不同的樣品其細 胞裂解方式不同，裂解液的選擇也有所差異。目前常見的細胞裂解方法又CTAB法、物理方 法、SDS法等。CTAB發(fā)適用于植物組織、真菌等細胞的裂解。物理方法由于對基因組的破壞 力較大而不建議采用此方法。SDS法適合于血液、細胞、動物組織、細菌、酵母等，是一種強力 細胞裂解方式。在實驗者的實際操作過程中，需要嚴格要根據(jù)樣品的來源和提取要求選擇 適當(dāng)?shù)募毎呀夥椒?。因此這幾種方法普遍存在的問題就是：1、裂解時間長；2、裂解效果 不充分等問題。
[0003] 因此，本發(fā)明是在主要解決目前現(xiàn)有技術(shù)存在以上不足的基礎(chǔ)上研發(fā)出來的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明的目的是解決以上技術(shù)問題，特別提出一種減少裂解時間，裂解充分、結(jié)構(gòu)簡 單、成本低廉的細胞裂解液及其制備工藝。
[0005] 基于上述目的，本發(fā)明所解決的技術(shù)問題采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：
[0006] -種細胞裂解液及其制備工藝，它由！fepes鈉鹽、！fepes游離酸、氯化鋰、乙二胺四 乙酸、十二烷基硫酸鋰、Proclin300、蛋白酶K組成，按重量百分比計，其中 a. Η印es 鈉鹽：13-25% ; b. Hepes 游離酸：1. 92-12% ; c. 氯化鋰：40. 88-62% ; d. 乙二胺四乙酸：2. 5-5% ; e. 十二烷基硫酸鋰：56-65% ; f. Proclin300 ：0. 2-2. 5% ； g. 蛋白酶K :1%。
[0007] 進一步，所述以下重量比為： a. Hepes 鈉鹽：13mg/ml ; b. Hepes 游離酸：11. 92mg/ml ; c. 氯化鋰：50. 88mg/ml ; d. 乙二胺四乙酸：3mg/ml ; e. 十二燒基硫酸鋰：60mg/ml ; f. Proclin300 ：0.2ul/m ； g. 蛋白酶 K :lmg/ml。
[0008] 進一步，所述上述產(chǎn)品重量比按以下步驟： a.將標(biāo)本轉(zhuǎn)移至離心管，3000rpm離心5分鐘，棄上清； b. 加入2ml裂解稀釋液重懸混勻，3000rpm離心5分鐘，棄上清； c. 加入300ul裂解液，再加入3ul蛋白酶K，重懸混勻； d. 放置恒溫箱65°C裂解，20分鐘左右震蕩一次，1小時后取出，將標(biāo)本恢復(fù)至室溫，取 上清液用于檢測。
[0009] 進一步，所述的蛋白酶K的濃度為20mg/ml。
[0010] 本發(fā)明組分的技術(shù)原理： Η印es :是一種非離子兩性緩沖液。 氯化鋰：作為一種RNA沉淀劑。 乙二胺四乙酸：變性劑，破壞細胞膜進行裂解細胞。 十二烷基硫酸鋰：陰離子表面活性劑?？捎糜赗NA、DNA離析，蛋白質(zhì)增溶劑。 Proclin300 :防腐劑。 蛋白酶K:抑制蛋白酶的活性，用于蛋白質(zhì)的降解。
[0011] 本發(fā)明的有益效果是：1.該裂解液裂解細胞過程，操作簡單、方便、省時省力。 2.裂解后的宮頸上皮脫落細胞樣本可直接進行核酸檢測，無需DNA/RNA純化。3.裂解過程 溫和，有效降低了裂解過程中核酸的損傷。4.成本低廉、適于常規(guī)試驗中上皮脫落細胞的研 究。

【具體實施方式】
[0012] 以下通過具體的實施方式，進一步闡述本發(fā)明。
[0013] 一種細胞裂解液及其制備工藝，它由ifepes鈉鹽、！fepes游離酸、氯化鋰、乙二胺四 乙酸、十二烷基硫酸鋰、Proclin300、蛋白酶K組成，按重量百分比計，其中 a. Η印es 鈉鹽：13-25% ; b. Hepes 游離酸：1. 92-12% ; c. 氯化鋰：40. 88-62% ; d. 乙二胺四乙酸：2. 5-5% ; e. 十二烷基硫酸鋰：56-65% ; f. Proclin300 ：0. 2-2. 5% ； g. 蛋白酶K :1%。
[0014] 實施例1，本發(fā)明的細胞裂解液配制配方為， a. Hepes 鈉鹽：13mg/ml ; b. Hepes 游離酸：11. 92mg/ml ; c. 氯化鋰：50. 88mg/ml ; d. 乙二胺四乙酸：3mg/ml ; e. 十二燒基硫酸鋰：60mg/ml ; f. Proclin300 ：0.2ul/m ； g. 蛋白酶 K :lmg/ml。 取自將上述產(chǎn)品重量比按以下步驟制備： a. 將標(biāo)本轉(zhuǎn)移至離心管，3000rpm離心5分鐘，棄上清； b. 加入2ml裂解稀釋液重懸混勻，3000rpm離心5分鐘，棄上清；
【權(quán)利要求】
1. 一種細胞裂解液及其制備工藝，其特征在于，它由ifepes鈉鹽、ifepes游離酸、氯化 鋰、乙二胺四乙酸、十二烷基硫酸鋰、Proclin300、蛋白酶K組成，按重量百分比計，其中 a. Η印es 鈉鹽：13-25% ; b. Hepes 游離酸：1· 92-12% ; c. 氯化鋰：40. 88-62% ; d. 乙二胺四乙酸：2. 5-5% ; e. 十二烷基硫酸鋰：56-65% ; f. Proclin300 ：0. 2-2. 5% ； g. 蛋白酶K:l%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的細胞裂解液，其特征在于，所述以下重量比為： a. Hepes 鈉鹽：13mg/ml ; b. Hepes 游離酸：11. 92mg/ml ; c. 氯化鋰：50. 88mg/ml ; d. 乙二胺四乙酸：3mg/ml ; e. 十二燒基硫酸鋰：60mg/ml ; f. Proclin300 ：0. 2ul/m ； g. 蛋白酶 K :lmg/ml。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的細胞裂解液制備工藝，其特征在于，所述上述產(chǎn)品重量比按 以下步驟： a. 將標(biāo)本轉(zhuǎn)移至離心管，3000rpm離心5分鐘，棄上清； b. 加入2ml裂解稀釋液重懸混勻，3000rpm離心5分鐘，棄上清； c. 加入300ul裂解液，再加入3ul蛋白酶K，重懸混勻； d. 放置恒溫箱65°C裂解，20分鐘左右震蕩一次，1小時后取出，將標(biāo)本恢復(fù)至室溫，取 上清液用于檢測。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的細胞裂解液及其制備工藝，其特征在于，所述的蛋白酶K的濃 度為 20mg/ml。
【文檔編號】C12N15/10GK104046614SQ201410274589
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年6月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月19日
【發(fā)明者】張鷺鷺, 程昀靜, 郭利杰, 李先坤, 李小磊 申請人:科蒂亞(新鄉(xiāng))生物技術(shù)有限公司