結(jié)核分枝桿菌的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種結(jié)核分枝桿菌的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本，包括以下步驟制得：對(duì)提供的標(biāo)本進(jìn)行前處理，制成濃集標(biāo)本；向濃集標(biāo)本中加入液體增菌培養(yǎng)基，制成液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo)本，增菌培養(yǎng)0～7天；將固體培養(yǎng)基加溫熔化，制成液態(tài)的固體培養(yǎng)基，然后將其溫度降至與上述液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo)本相應(yīng)的培養(yǎng)溫度；所述的固體培養(yǎng)基具有50℃～95℃的熔化溫度，25℃～45℃的凝固溫度；所述的固體培養(yǎng)基包括有瓊脂或瓊脂糖，以及營養(yǎng)物質(zhì)；將液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo)本與液態(tài)的固體培養(yǎng)基混合，制成液態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本；將液態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本凝固，制成帶有藥敏紙片的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本；將固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本培養(yǎng)5～15天，即可，本發(fā)明能縮短結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)的時(shí)間。
【專利說明】結(jié)核分枝桿菌的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及對(duì)結(jié)核分枝桿菌的耐藥性進(jìn)行試驗(yàn)的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，具體為一種結(jié)核 分枝桿菌的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本。

【背景技術(shù)】
[0002] 結(jié)核病的耐藥性是一個(gè)日益嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題，嚴(yán)重威脅著結(jié)核病的控制。中 國工程院院士鐘南山在兩會(huì)期間曾稱，中國其有450萬活動(dòng)性結(jié)核病人，帶菌者高達(dá)5. 5 億，而帶菌者一生中有10 %的可能性會(huì)發(fā)病。2009年4月，中國衛(wèi)生部部長(zhǎng)陳竺在北京舉行 的"耐多藥/廣泛耐藥結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家"部長(zhǎng)級(jí)會(huì)議上通報(bào)了中國耐藥結(jié)核病的情況：中 國疾病防控中心的抽樣調(diào)查顯示，中國結(jié)核病人中，耐多藥發(fā)病率為8. 32%，總計(jì)約為12 萬人，居世界第二位，廣泛耐藥發(fā)病率為0. 68%，總計(jì)大約1萬人，其危害遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過艾滋病。 藥敏試驗(yàn)是對(duì)結(jié)核分枝桿菌的耐藥性進(jìn)行檢測(cè)的重要試驗(yàn)?，F(xiàn)有的結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn) 方法，一般有紙片檢驗(yàn)法和濃度檢驗(yàn)法。紙片檢驗(yàn)法是通過觀察由于貼在固體培養(yǎng)基表面 上藥物紙片形成的藥物抑菌圈來確定結(jié)核分枝桿菌對(duì)藥物的敏感性；濃度檢驗(yàn)法是通過觀 察檢測(cè)不同藥物和不同藥物濃度試驗(yàn)容器中結(jié)核分枝桿菌的生長(zhǎng)情況來確定結(jié)核分枝桿 菌對(duì)藥物的敏感性。不管是紙片檢驗(yàn)法還是濃度檢驗(yàn)法，其整個(gè)藥敏試驗(yàn)過程一般可分為 標(biāo)本前處理、增殖或分離培養(yǎng)和藥敏檢驗(yàn)三個(gè)階段?，F(xiàn)有的紙片檢驗(yàn)法，標(biāo)本前處理階段的 步驟為：①用吸管吸取提供的標(biāo)本置于試驗(yàn)容器中；②向試驗(yàn)容器中加入消化液，對(duì)標(biāo)本 粘液進(jìn)行消化，使標(biāo)本中粘液和雜質(zhì)包裹的細(xì)菌充分暴露；③離心分離，倒掉上清液，獲得 濃集的標(biāo)本；在獲得濃集的標(biāo)本后再進(jìn)行增殖或分離培養(yǎng)。增殖或分離培養(yǎng)階段的步驟為： ④取已經(jīng)濃集的標(biāo)本少部分制成濃菌液；⑤將濃菌液接種于固體培養(yǎng)基例如羅氏培養(yǎng)基上 進(jìn)行增殖或分離培養(yǎng)，一般需在37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1月左右，把單個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)成細(xì)菌菌落； 在獲得細(xì)菌菌落后再進(jìn)入藥敏檢驗(yàn)階段。藥敏檢驗(yàn)階段的步驟為：⑥取少量的細(xì)菌菌落，一 般是取1 一一 3個(gè)細(xì)菌菌落，將其溶解分散制成濃菌液；⑦將濃菌液接種于固體培養(yǎng)基例如 瓊脂培養(yǎng)基表面上；⑧在固體培養(yǎng)基表面上貼上藥物紙片；⑨放入37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1個(gè) 月左右，觀察藥物抑菌圈，確定結(jié)核分枝桿菌對(duì)藥物的敏感性?，F(xiàn)有的紙片檢驗(yàn)法的優(yōu)點(diǎn)是 操作方便、設(shè)備簡(jiǎn)單、投資??；但其存在以下缺點(diǎn)：⑴整個(gè)檢驗(yàn)所需的時(shí)間太長(zhǎng)：增殖或分 離培養(yǎng)階段需要1個(gè)月左右，藥敏檢驗(yàn)階段大約需要1個(gè)月左右，整個(gè)試驗(yàn)過程大約需要2 個(gè)月左右。⑵不安全。整個(gè)試驗(yàn)需要兩次人工接種，由于結(jié)核分枝桿菌具有傳染性，這樣對(duì) 操作人員形成安全隱患，對(duì)環(huán)境形成污染隱患。
[0003] 現(xiàn)有的濃度檢驗(yàn)法，其在增殖培養(yǎng)階段采用固體培養(yǎng)基，其標(biāo)本前處理、增殖或分 離培養(yǎng)二個(gè)階段的步驟與現(xiàn)有的紙片檢驗(yàn)法相同，但藥敏檢驗(yàn)階段的步驟與現(xiàn)有的紙片檢 驗(yàn)法不同，具體為：從固體培養(yǎng)基上取增殖或分離培養(yǎng)獲得的細(xì)菌菌落，一般是取1個(gè)或數(shù) 個(gè)細(xì)菌菌落，一一將其溶解分散制成菌懸液一一將菌懸液倒入按不同的藥物和不同的濃度 配制成的多個(gè)試驗(yàn)容器中，制成對(duì)比試驗(yàn)標(biāo)本一一觀察檢測(cè)試驗(yàn)容器中細(xì)菌生長(zhǎng)情況，確 定結(jié)核分枝桿菌對(duì)藥物的敏感性。這種檢驗(yàn)方法的優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單、投資小；但其存在以下 缺點(diǎn)：⑴所需的時(shí)間長(zhǎng)。增殖或分離培養(yǎng)階段的方法和步驟與現(xiàn)有的紙片檢驗(yàn)法的方法和 步驟相同，因此，僅增殖或分離培養(yǎng)階段所需的時(shí)間就需要1個(gè)月左右；⑵操作麻煩、不安 全且容易造成錯(cuò)誤的檢驗(yàn)結(jié)果。由于需要配制多個(gè)試驗(yàn)容器，配制過程很麻煩且不安全，對(duì) 操作人員形成安全隱患，對(duì)環(huán)境也形成污染隱患；在配制多個(gè)試驗(yàn)容器過程中比較容易被 其他細(xì)菌污染，這樣就可能造成錯(cuò)誤的檢驗(yàn)結(jié)果。
[0004] 此外，還有利用儀器鑒定藥物敏感性的方法，例如BACTEC - ΤΒ460系統(tǒng)及BACTEC 960系統(tǒng)，其優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，試驗(yàn)過程時(shí)間短，平均檢出時(shí)間為14. 4天，最快10天左右。 但其存在的主要缺點(diǎn)是儀器設(shè)備的價(jià)位高，投資大；使用成本高，一是儀器設(shè)備的使用成本 高，二是需要多個(gè)對(duì)比試驗(yàn)標(biāo)本，試劑的成本較高，其費(fèi)用較大，一般醫(yī)院難以承受，難以推 廣普及。
[0005] 從上面詳細(xì)分析現(xiàn)有的結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)方法可以看出，現(xiàn)有的紙片檢驗(yàn)法 和濃度檢驗(yàn)法存在以下缺點(diǎn)：（1)整個(gè)檢驗(yàn)過程所需的時(shí)間長(zhǎng)。（2)操作麻煩。（3)不安全。 (4)容易出現(xiàn)誤檢。而利用儀器鑒定藥物敏感性的方法投資大，使用成本高，難以推廣普及。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種能縮短結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)過程時(shí)間的結(jié)核分枝桿 菌的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本；另一個(gè)目的是投資少、使用成本低；再一個(gè)目的是使用安全方便。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明結(jié)核分枝桿菌的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本，包括以下步驟制得 (1) 對(duì)提供的標(biāo)本進(jìn)行前處理，制成濃集標(biāo)本； (2) 向濃集標(biāo)本中加入液體增菌培養(yǎng)基，制成液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo)本，增菌培養(yǎng)0?7天； (3) 將固體培養(yǎng)基加溫熔化，制成液態(tài)的固體培養(yǎng)基，然后將其溫度降至與上述液態(tài)增 菌培養(yǎng)標(biāo)本相應(yīng)的培養(yǎng)溫度； 所述的固體培養(yǎng)基具有50°C?95°C的熔化溫度，25°C?45°C的凝固溫度； 所述的固體培養(yǎng)基包括有瓊脂或瓊脂糖，以及營養(yǎng)物質(zhì)； (4) 將液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo)本與液態(tài)的固體培養(yǎng)基混合，制成液態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本； (5) 將液態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本凝固，制成帶有藥敏紙片的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本； (6) 將固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本培養(yǎng)5?15天，即可。
[0008] 所述的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本，其固體培養(yǎng)基每一份固體培養(yǎng)基含有卵黃液50ml- 100ml，可溶性淀粉2g -8g, L一酪蛋白0. lg -0. 8g,酚紅2ml-8ml,瓊脂或瓊脂糖0. 5g- 3. 5g，抑菌劑適量。
[0009] 所述的結(jié)核分枝桿菌的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本，其固體培養(yǎng)基中加入尿素，尿素在每 一份固體培養(yǎng)基中的加入量為：〇. lg?〇. 5g。
[0010] 所述的結(jié)核分枝桿菌的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本，在液態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本中，固體培養(yǎng)基 與液體增菌培養(yǎng)基混合配比為：每l〇〇ml液體增菌培養(yǎng)基加一份固體培養(yǎng)基。
[0011] 利用本發(fā)明做結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)，與現(xiàn)有的紙片檢驗(yàn)法和濃度檢驗(yàn)法相比， 整個(gè)試驗(yàn)過程時(shí)間短的原因是：①提供的標(biāo)本中的待檢結(jié)核分枝桿菌得到了充分利用。由 于提供的標(biāo)本中的結(jié)核分枝桿菌被濃集后絕大部分用于制作液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo)本，而液態(tài)增 菌培養(yǎng)標(biāo)本又全部被用于做固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本，因此，提供的標(biāo)本中的待檢結(jié)核分枝桿菌 得到了充分的利用。②增殖培養(yǎng)階段的時(shí)間短。由于本發(fā)明的增菌培養(yǎng)是在液態(tài)增菌培 養(yǎng)基中進(jìn)行，相對(duì)而言，細(xì)菌在液態(tài)增菌培養(yǎng)基中的增殖速度比在固體培養(yǎng)基上的增殖速 度快；再加上充分利用了提供標(biāo)本中的待檢結(jié)核分枝桿菌，使增殖培養(yǎng)前的初始數(shù)量大，因 此，增殖培養(yǎng)階段的時(shí)間短，最多只需7天。如果所提供的標(biāo)本中的結(jié)核分以桿菌的數(shù)量很 大，在制作本發(fā)明固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本的過程中可以省略掉增殖培養(yǎng)。③形成抑菌圈的時(shí)間 短。采用本發(fā)明，是將增殖培養(yǎng)后的液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo)本與液態(tài)的固體培養(yǎng)基混合，采用傾注 法制成帶藥敏紙片的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本，這樣，增殖培養(yǎng)后的結(jié)核分枝桿菌全部都用于制 作本發(fā)明固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本，因此其起始菌量大，只需5到15天即可形成藥物抑菌圈，比現(xiàn) 有的紙片檢驗(yàn)法所需的時(shí)間短。④使用了指示劑。由于本發(fā)明在固體培養(yǎng)基中加入尿素， 結(jié)核分枝桿菌會(huì)產(chǎn)生尿素酶分解尿素，使固態(tài)藥檢試驗(yàn)標(biāo)本呈粉紅色或淡黃色，通過觀察 固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本的顏色，可以初步判斷固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng)情況，在 固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本呈粉紅色或淡黃色后，說明固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本中的結(jié)核分枝桿菌數(shù)量達(dá) 到了形成抑菌圈需要的數(shù)量，同時(shí)由于粉紅色或淡黃色的指示形成明顯的抑菌圈，這樣就 可以縮短形成明顯抑菌圈的時(shí)間。綜上所述，與現(xiàn)有的紙片檢驗(yàn)法和濃度檢驗(yàn)法相比，利用 本發(fā)明進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)實(shí)現(xiàn)了縮短試驗(yàn)過程時(shí)間的目的。
[0012] 利用本發(fā)明進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)投資少、使用成本低的原因是：利用本發(fā) 明進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)所需的設(shè)備只需配套離心裝置、培養(yǎng)箱、加熱恒溫機(jī)等。上述 離心裝置、培養(yǎng)箱、加熱恒溫機(jī)等制造簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低，因此，完成整個(gè)試驗(yàn)所需要的設(shè)備 投資少；利用本發(fā)明進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)需要配套使用一次性試驗(yàn)容器以及包括培 養(yǎng)基、指示劑等試劑，這些一次性試驗(yàn)容器和試劑的成本低且使用的數(shù)量少，加上本發(fā)明儀 器設(shè)備的投資少使用成本低，進(jìn)一步減少了利用本發(fā)明進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)的使用 成本。因此，與利用儀器鑒定藥物敏感性的方法相比，利用本發(fā)明進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌藥敏試 驗(yàn)有效地實(shí)現(xiàn)了投資少、使用成本低的目的。
[0013] 利用本發(fā)明進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)使用安全方便的原因是：利用本發(fā)明進(jìn)行 結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)過程的濃集待檢標(biāo)本、結(jié)果伴讀均可以在一次性密閉容器內(nèi)進(jìn)行， 不會(huì)污染其他器材，操作完成后進(jìn)行統(tǒng)一消毒處理，并且整個(gè)檢驗(yàn)過程手工操作的程序很 少且簡(jiǎn)單，這樣就減少了結(jié)核分枝桿菌對(duì)工作人員和環(huán)境的影響，大大地提高了試驗(yàn)的生 物安全性；減少了被其他細(xì)菌的污染，有效地減少了出現(xiàn)錯(cuò)誤的檢驗(yàn)結(jié)果。因此，與現(xiàn)有的 紙片檢驗(yàn)法和濃度檢驗(yàn)法相比，利用本發(fā)明進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)?zāi)苡行У貙?shí)現(xiàn)使用 安全方便的目的。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0014] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明 圖1所示為利用本發(fā)明進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)的加熱恒溫機(jī)俯視圖示意圖。
[0015] 圖2為圖1所示加熱恒溫機(jī)的A- A剖視圖示意圖。
[0016] 圖3所示為利用本發(fā)明進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)的培養(yǎng)盒去掉盒蓋后的俯視 圖不意圖。
[0017] 圖4為圖3所示培養(yǎng)盒的剖視圖示意圖。
[0018] 1、機(jī)殼，2、倒板卡槽，3、混合杯卡孔，4、導(dǎo)熱塊，5、隔熱墻，6、高溫杯卡孔，7、控制 面板，8、恒溫杯卡孔，9、電加熱裝置，10、盒體，11、藥敏紙片，12、標(biāo)尺，13、盒蓋。

【具體實(shí)施方式】
[0019] 圖1、圖2所示為加熱恒溫機(jī)，在機(jī)殼1上安裝有導(dǎo)熱塊4,導(dǎo)熱塊4分為高溫區(qū)和 恒溫區(qū)，高溫區(qū)的溫度為在50°C - 95°C范圍內(nèi)可調(diào)；其中最佳溫度為90°C，恒溫區(qū)的溫度 為在25°C-45°C范圍內(nèi)可調(diào)，其中最佳溫度為42°C ;在高溫區(qū)中設(shè)有高溫杯卡孔6和控制 面板7,在恒溫區(qū)中設(shè)有恒溫平衡區(qū)和混合區(qū)，在恒溫平衡區(qū)中設(shè)有恒溫杯卡孔8,在混合 區(qū)中設(shè)有混合杯卡孔3和倒板卡槽2,在高溫區(qū)和恒溫區(qū)之間設(shè)有隔熱墻5,在導(dǎo)熱塊4中 設(shè)有電加熱裝置9,在機(jī)殼1中設(shè)有溫度控制裝置。
[0020] 圖3、圖4所示為培養(yǎng)盒，盒體10為周壁和底部封閉、上端敞開的結(jié)構(gòu)形式，在盒體 10的底部設(shè)有標(biāo)尺12,在盒體10底部的上側(cè)面上貼有藥敏紙片11，在盒體10的敞開端配 套有盒蓋13。
[0021] 下面給出本發(fā)明的實(shí)施例： 本實(shí)施例的培養(yǎng)盒，在盒體10底部的上側(cè)面上貼有六片藥敏紙片11，盒體10的容積為 30 ml。
[0022] 1、將標(biāo)本痰5ml用2%氫氧化鈉和0. 5%NALC混合液消化； 2、 置于尚心機(jī)中，以4500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速尚心分尚10分鐘，將標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌充 分沉淀； 3、 去掉上清液，制成濃集標(biāo)本，完成標(biāo)本的前處理； 4、 用10ml液體增菌培養(yǎng)基將濃集標(biāo)本洗脫制成液體菌懸液形式的液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo) 本； 5、 將液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo)本放入37°C的培養(yǎng)箱中增菌培養(yǎng)，具體培養(yǎng)時(shí)間視標(biāo)本痰中的含 菌量定； 6、 制作液態(tài)結(jié)核分枝桿菌藥檢試驗(yàn)標(biāo)本： (1) 將加熱恒溫機(jī)中的高溫區(qū)溫度設(shè)定為90°C，恒溫區(qū)溫度設(shè)定為42°C ; (2) 將固體培養(yǎng)基放入加熱恒溫機(jī)高溫區(qū)中的高溫杯卡孔6中加熱熔化至液態(tài)；液態(tài) 增菌培養(yǎng)標(biāo)本與液態(tài)的固體培養(yǎng)基混合后的體積為30ml ;固體培養(yǎng)基的物理性能為：在溫 度上升到90°C時(shí)，固體培養(yǎng)基從固態(tài)熔化為液態(tài)；而當(dāng)溫度下降時(shí)到40°C后，又從液態(tài)凝 固成固態(tài)； (3) 將液態(tài)的固體培養(yǎng)基放入加熱恒溫機(jī)恒溫區(qū)中的恒溫杯卡孔8中降溫，使液態(tài)的 固體培養(yǎng)基的溫度降至42°C，此時(shí)，固體培養(yǎng)基仍呈液態(tài)； (4) 將增菌培養(yǎng)后的液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo)本放入加熱恒溫機(jī)恒溫區(qū)中的恒溫平衡區(qū)中的恒 溫杯卡孔8中，使其溫度上升到42°C。
[0023] (5)將溫度為42°C的液態(tài)固體培養(yǎng)基和溫度為42°C的液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo)本倒入混 合杯中混合，制成液態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本。為了確?；旌掀陂g固體培養(yǎng)基呈液態(tài)，混合杯應(yīng)放入 加熱恒溫機(jī)恒溫區(qū)中的混合杯卡孔3中進(jìn)行混合； 7、 制作固態(tài)藥檢試驗(yàn)標(biāo)本： (1) 將去掉盒蓋13后的盒體10放入加熱恒溫機(jī)恒溫區(qū)中的倒板卡槽2中，使其溫度上 升到42°C。； (2) 將液態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本倒入盒體10中； (3)蓋上盒蓋13,取出培養(yǎng)盒，放在常溫下使液態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本凝固，制成固態(tài)藥檢試 驗(yàn)標(biāo)本； 8、將固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本放入37 °C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本的顏色和抑 菌圈，根據(jù)抑菌圈大小判斷藥物對(duì)細(xì)菌的作用效果。
[0024] 本實(shí)施例中的液體增菌培養(yǎng)基采用7H9。
[0025] 本實(shí)施例中的固體培養(yǎng)基與液體增菌培養(yǎng)基混合配比比例為：每100ml7H9加一 份固體培養(yǎng)基。每一份固體培養(yǎng)基含卵黃液75 ml，可溶性淀粉4 .6g，L一鉻蛋白0.25g， 酚紅4ml，瓊脂糖1. 25g，尿素 0. 2g，抑菌劑孔雀綠適量。
[0026] 本實(shí)施例中的指示劑的還可以選用亞碲酸鈉。
[0027] 本發(fā)明固體培養(yǎng)基中的瓊脂的糖的作用是使藥敏試驗(yàn)時(shí)的培養(yǎng)基凝固，還可以用 瓊脂。
[0028] 本發(fā)明中的固體培養(yǎng)基的物理性能為：在常溫下為固態(tài)；當(dāng)溫度上升直到低于熔 化溫度前仍為固態(tài)，當(dāng)溫度上升到高于熔化溫度后，才熔化成液態(tài)；當(dāng)溫度下降直到高于熔 化溫度前仍為液態(tài)，當(dāng)溫度下降到低于凝固溫度后，才凝固為固態(tài)。
[0029] 本發(fā)明中的固體培養(yǎng)基的熔化溫度的選擇標(biāo)準(zhǔn)為：①當(dāng)固體培養(yǎng)基的溫度上升達(dá) 到熔化溫度時(shí)，其中的營養(yǎng)成份不被破壞；②當(dāng)固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本放入37°C的培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)時(shí)，藥敏試驗(yàn)標(biāo)本仍呈固態(tài)；③方便操作。根此，本發(fā)明中的固體培養(yǎng)基的熔化溫度選擇 為 50°C-95°C。
[0030] 本發(fā)明中的固體培養(yǎng)基的凝固溫度的選擇標(biāo)準(zhǔn)為：①當(dāng)固體培養(yǎng)基的溫度下降達(dá) 到凝固溫度前，結(jié)核分枝桿菌與其混合時(shí)，其溫度應(yīng)為結(jié)核分枝桿菌能夠存活的溫度；②能 較快達(dá)到37°C的結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)溫度；③方便操作。根此，本發(fā)明中的固體培養(yǎng)基的凝 固溫度選擇為25°C - 45°C。如果凝固溫度太低就可能低于室溫，特別在天氣較熱的時(shí)候， 需要放入冷藏設(shè)備中才能凝固，不方便操作；同時(shí)，距37°C的結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)溫度相距 較大，不便于盡快達(dá)到結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)溫度。如果凝固溫度太高，不利于結(jié)核分枝桿菌的 存活。
【權(quán)利要求】
1. 一種結(jié)核分枝桿菌的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本，其特征在于，包括以下步驟制得 (1) 對(duì)提供的標(biāo)本進(jìn)行前處理，制成濃集標(biāo)本； (2) 向濃集標(biāo)本中加入液體增菌培養(yǎng)基，制成液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo)本，增菌培養(yǎng)0?7天； (3) 將固體培養(yǎng)基加溫熔化，制成液態(tài)的固體培養(yǎng)基，然后將其溫度降至與上述液態(tài)增 菌培養(yǎng)標(biāo)本相應(yīng)的培養(yǎng)溫度； 所述的固體培養(yǎng)基具有50°C?95°C的熔化溫度，25°C?45°C的凝固溫度； 所述的固體培養(yǎng)基包括有瓊脂或瓊脂糖，以及營養(yǎng)物質(zhì)； (4) 將液態(tài)增菌培養(yǎng)標(biāo)本與液態(tài)的固體培養(yǎng)基混合，制成液態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本； (5) 將液態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本凝固，制成帶有藥敏紙片的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本； (6) 將固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本培養(yǎng)5?15天，即可。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本，其特征在于，固體培養(yǎng)基每一份固體培 養(yǎng)基含有卵黃液50ml - 100ml，可溶性淀粉2g - 8g，L一酪蛋白0. lg - 0.8g，酚紅2ml- 8ml，瓊脂或瓊脂糖0. 5g - 3. 5g，抑菌劑適量。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本，其特征在于，固體培養(yǎng)基中加入尿素，尿 素在每一份固體培養(yǎng)基中的加入量為：0. lg?0. 5g。
4. 權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的固態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本，其特征在于，在液態(tài)藥敏試驗(yàn)標(biāo)本 中，固體培養(yǎng)基與液體增菌培養(yǎng)基混合配比為：每l〇〇ml液體增菌培養(yǎng)基加一份固體培養(yǎng) 基。
【文檔編號(hào)】C12Q1/02GK104195212SQ201410304254
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2010年8月23日 優(yōu)先權(quán)日:2010年6月2日
【發(fā)明者】彭鈞 申請(qǐng)人:湖南省天騎醫(yī)學(xué)新技術(shù)有限公司