一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法，包括如下步驟：S1、大蒜分瓣并切蒂，用30～45℃的水浸泡清洗、去皮，烘干備用；S2、將烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨；S3、將破碎的大蒜用2-5℃的0.5mol/L氯化鈉溶液中浸泡8-15個(gè)小時(shí)，用離心機(jī)去除雜質(zhì)，制成超氧化物歧化酶原液。S4、將超氧化物歧化酶原液采用熱變性、等電點(diǎn)沉淀和丙酮分級(jí)沉淀結(jié)合的方法進(jìn)行提純；S5、將提純超氧化物歧化酶原液進(jìn)行柱層析分離純化。本發(fā)明采用收集率可達(dá)到80％以上，超氧化物歧化酶比活高，并且優(yōu)化了工藝參數(shù)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及超氧化物歧化酶制作方法，具體涉及利用大蒜進(jìn)行一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]超氧物歧化酶(Superoxide Dismutase簡(jiǎn)稱(chēng)S0D)是一種新型酶制劑。它在生物界的分布極廣，幾乎從動(dòng)物到植物，甚至從人到單細(xì)胞生物，都有它的存在。SOD被視為生命科技中最具神奇魔力的酶、人體內(nèi)的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敵，是機(jī)體內(nèi)氧自由基的頭號(hào)殺手，是生命健康之本。目前的超氧物歧化酶的制法由于工藝的粗糙，SOD的收集比例較低，造成大量的浪費(fèi)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法，解決上述現(xiàn)有技術(shù)中一個(gè)或者多個(gè)問(wèn)題。
[0004]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括如下步驟:
[0005]S1、大蒜分瓣并切蒂,用30~45°C的水浸泡清洗、去皮,烘干備用； [0006]S2、將烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨；
[0007]S3、將破碎的大蒜用2_5°C的0.5mol/L氯化鈉溶液中浸泡8_15個(gè)小時(shí)，用離心機(jī)去除雜質(zhì)，制成超氧化物歧化酶原液。
[0008]在一些實(shí)施方式中，還包括S3后的如下步驟:
[0009]S4、將超氧化物歧化酶原液采用熱變性、等電點(diǎn)沉淀和丙酮分級(jí)沉淀結(jié)合的方法進(jìn)行提純；
[0010]S5、將提純超氧化物歧化酶原液進(jìn)行柱層析分離純化。
[0011]本發(fā)明收集率可達(dá)到80%以上，超氧化物歧化酶比活達(dá)到100 μ /mg,而傳統(tǒng)法只能達(dá)到50%，比活僅有60 μ /mg。
【具體實(shí)施方式】
[0012]實(shí)施例1:
[0013]本發(fā)明提供了一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括如下步驟:
[0014]S1、大蒜分瓣并切蒂,用30°C的水浸泡清洗、去皮,烘干備用；
[0015]S2、將烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨，以達(dá)到破損大蒜細(xì)胞壁的作用；
[0016]S3、將破碎的大蒜用2°C的0.5mol/L氯化鈉溶液中浸泡8個(gè)小時(shí)，用離心機(jī)去除雜質(zhì)，制成超氧化物歧化酶原液。
[0017]S4、將超氧化物歧化酶原液采用熱變性、等電點(diǎn)沉淀和丙酮分級(jí)沉淀結(jié)合的方法進(jìn)行提純，去除其中大部分雜蛋白質(zhì)，可得到10倍以上的純化效果，具體操作將超氧化物歧化酶原液先在60°C溫度下20min，然后調(diào)等電點(diǎn)至pH3.0，左后加入1.0 %體積分量的丙酮沉淀，離心雜質(zhì)，收集純化液；
[0018]S5、將提純超氧化物歧化酶原液進(jìn)行柱層析分離純化，將上述純化液再加入4.0%體積分量的丙酮，使超氧化物歧化酶全部沉淀下來(lái)，利用離心機(jī)收集沉淀物，將其置于緩沖洗液中，進(jìn)行柱層析分離純化，得到超氧化物歧化酶成品。
[0019]本發(fā)明收集率達(dá)到78%，超氧化物歧化酶比活達(dá)到92 μ /mg。
[0020]實(shí)施例2:
[0021]本發(fā)明提供了一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括如下步驟:
[0022]S1、大蒜分瓣并切蒂,用37°C的水浸泡清洗、去皮,烘干備用；
[0023]S2、將烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨，以達(dá)到破損大蒜細(xì)胞壁的作用；
[0024]S3、將破碎的大蒜用3°C的0.5mol/L氯化鈉溶液中浸泡12個(gè)小時(shí)，用離心機(jī)去除雜質(zhì)，制成超氧化物歧化酶原液。
[0025]S4、將超氧化物歧化酶原液采用熱變性、等電點(diǎn)沉淀和丙酮分級(jí)沉淀結(jié)合的方法進(jìn)行提純，去除其中大部分雜蛋白質(zhì)，可得到10倍以上的純化效果，具體操作將超氧化物歧化酶原液先在60°c溫度下20min，然后調(diào)等電點(diǎn)至pH3.5，左后加入1.0%體積分量的丙酮沉淀，離心雜質(zhì)，收集純化液； [0026]S5、將提純超氧化物歧化酶原液進(jìn)行柱層析分離純化，將上述純化液再加入4.0%體積分量的丙酮，使超氧化物歧化酶全部沉淀下來(lái)，利用離心機(jī)收集沉淀物，將其置于緩沖洗液中，進(jìn)行柱層析分離純化，得到超氧化物歧化酶成品。
[0027]本發(fā)明收集率達(dá)到79%，超氧化物歧化酶比活達(dá)到95 μ /mg。
[0028]實(shí)施例3:
[0029]本發(fā)明提供了一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括如下步驟:
[0030]S1、大蒜分瓣并切蒂,用45°C的水浸泡清洗、去皮,烘干備用；
[0031]S2、將烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨，以達(dá)到破損大蒜細(xì)胞壁的作用；
[0032]S3、將破碎的大蒜用5°C的0.5mol/L氯化鈉溶液中浸泡15個(gè)小時(shí)，用離心機(jī)去除雜質(zhì)，制成超氧化物歧化酶原液。
[0033]S4、將超氧化物歧化酶原液采用熱變性、等電點(diǎn)沉淀和丙酮分級(jí)沉淀結(jié)合的方法進(jìn)行提純，去除其中大部分雜蛋白質(zhì)，可得到10倍以上的純化效果，具體操作將超氧化物歧化酶原液先在60°c溫度下20min，然后調(diào)等電點(diǎn)至pH4.0，左后加入1.0 %體積分量的丙酮沉淀，離心雜質(zhì)，收集純化液；
[0034]S5、將提純超氧化物歧化酶原液進(jìn)行柱層析分離純化，將上述純化液再加入4.0%體積分量的丙酮，使超氧化物歧化酶全部沉淀下來(lái)，利用離心機(jī)收集沉淀物，將其置于緩沖洗液中，進(jìn)行柱層析分離純化，得到超氧化物歧化酶成品。
[0035]本發(fā)明收集率達(dá)到80%，超氧化物歧化酶比活達(dá)到100 μ /mg。
[0036]以上表述僅為本發(fā)明的優(yōu)選方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括如下步驟: 。51、大蒜分瓣并切蒂，用30~45°C的水浸泡清洗、去皮，烘干備用； 。 52、將烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨；。 。53、將破碎的大蒜用2-5°C的0.5mol/L氯化鈉溶液中浸泡8_15個(gè)小時(shí)，用離心機(jī)去除雜質(zhì)，制成超氧化物歧化酶原液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，還包括S3后的如下步驟: 。54、將超氧化物歧化酶原液采用熱變性、等電點(diǎn)沉淀和丙酮分級(jí)沉淀結(jié)合的方法進(jìn)行提純； 。55、將提純超氧化物 歧化酶原液進(jìn)行柱層析分離純化。
【文檔編號(hào)】C12N9/02GK104031891SQ201410307343
【公開(kāi)日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年6月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月30日
【發(fā)明者】施佩蓓 申請(qǐng)人:施佩蓓