綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)的分子標記及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于家畜分子標記制備【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種作為綿羊標記輔助選擇應用的與綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)的分子標記的制備方法及其應用。所述的分子標記由LHβ基因克隆得到，它的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO：1所述。在序列表SEQ?ID?NO：1的第713bp處有1個C713-T713的堿基替換，導致BsrB?Ⅰ-RFLP酶切多態(tài)性。本發(fā)明還公開了擴增LHβ基因部分DNA序列所用的引物以及用于多態(tài)性檢測的方法，為綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀的標記輔助選擇提供了一個新的分子標記。
【專利說明】綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)的分子標記及其應用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及綿羊分子標記制備【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種與綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)的 分子標記及其應用，所述的分子標記從綿羊LHi3基因中克隆得到，它包括綿羊LHi3基因全 基因組序列突變位點的檢測方法與應用。

【背景技術(shù)】
[0002] 綿羊繁殖性狀是重要的經(jīng)濟性狀，而產(chǎn)羔數(shù)又是主要的繁殖性狀之一。研究表明， 綿羊繁殖性狀屬于低遺傳力的閾性狀，動物的產(chǎn)仔（羔）數(shù)是影響生產(chǎn)效益的一個重要因 素，它受到基因控制，而且為加性-顯性基因作用模式（儲明星等.主基因及其在動物育種 中的應用[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報，1995, 3(4) :23-31.)。本發(fā)明所選目標性狀為產(chǎn)羔數(shù)， 具有較容易度量的特點，為大樣本含量的試驗群體產(chǎn)羔記錄的采集提供了可行性。
[0003] 隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展，越來越多的與綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)的候選基因和分 子標記被發(fā)現(xiàn)，為標記輔助選擇（marker-assisted selection, MAS)在育種中的應用積累 了豐富的基因素材。目前，標記輔助選擇已作為常規(guī)選擇法的輔助手段而被廣泛應用，大大 提高了產(chǎn)羔數(shù)性狀的改良速度。標記輔助選擇包括隨機引物擴增多態(tài)性（RAPD)標記、微 衛(wèi)星標記、PCR-RFLP標記、分子標記與QTL位點的連鎖分析方法等（趙西彪，AREG，ESR和 FSHi3亞基基因與豬產(chǎn)仔數(shù)關(guān)系研究.揚州大學；2008.)。其中PCR-RFLP因具有檢測不受 發(fā)育階段、性別等外部條件的影響的優(yōu)點，所標記的變異數(shù)目不受限制，實用可靠而得到廣 泛的應用。
[0004] 促黃體素是腺垂體嗜堿性顆粒細胞分泌的糖蛋白質(zhì)激素，通過血液循環(huán)到達 性腺等靶器官發(fā)揮作用。促黃體生成素（LH)、卵泡刺激素（FSH)、促甲狀腺素（TSH)和 促性腺素（CG)4種糖蛋白激素均由α和β2個亞基共軛結(jié)合而組成，在同一種內(nèi)甚至 是所有哺乳動物中，α亞基為它們共有，而β亞基具有物種和激素的特異性（PIERCE J G, PARSONS T F.Glycoprotein hormones: structure and function[J]. Annu. Rev. Biochem. 1981,50:465-495.)，因此，對糖蛋白激素的研究重點在于β亞基。Ι?β可以在 排卵前選擇性誘導卵泡生長發(fā)育同時誘發(fā)排卵；促進黃體形成、分泌孕酮；刺激卵泡膜細 胞分泌雄激素，擴散到卵泡液中被顆粒細胞攝取而芳構(gòu)化為雌激素（楊利國.動物繁殖學 [M].中國農(nóng)業(yè)出版社.2005:3-7.)。LHi3發(fā)揮作用必須依賴其受體，LHi3或LHR基因發(fā) 生突變，可能會導致LHi3表達量降低、與受體結(jié)合的活性部位發(fā)生失活或部分失活，或?qū)?致LHR降低或喪失受體功能，這些均會導致G蛋白偶聯(lián)及信號傳遞發(fā)生障礙，進而對家畜 的繁殖性能產(chǎn)生影響（張雪琴等.LH/CG受體研究進展[J].草業(yè)與畜牧.2008, 4:1-9.)。 師慶偉等（師慶偉等.促黃體素（LH) β亞基基因的單核苷酸多態(tài)性及其與豬繁殖性狀的 相關(guān)性[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學.2006, 6:302-304.)在檢測民豬LHi3基因多態(tài)性時，發(fā)現(xiàn)第二 外顯子SNP位點（T1757C)與母豬的產(chǎn)仔數(shù)（P〈0. 01)、初生窩重（P〈0. 01)及初生活仔窩重 顯著相關(guān)（P〈〇. 05)。劉源（劉源.綿羊高繁殖力候選基因 LHi3和GnRHR的研究[D].南 京：南京農(nóng)業(yè)大學.2009.)在綿羊Ι?β基因上檢測到6個多態(tài)位點（T286C、A424G、T439C、 G705A、C1042G、C1136T)，其中 T286C、C1042G、C1136T 與綿羊產(chǎn)羔數(shù)顯著相關(guān)（Ρ〈(λ 05)， 并且T286C還與綿羊的初生重相關(guān)（Ρ〈0.05)。黃勤華等（黃勤華等.貴州黑山羊促黃 體素 β基因多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)的關(guān)系[J].貴州農(nóng)業(yè)科學.2010, 38 (6) :162-164.)報 道在山羊群體中也存在與產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)的多態(tài)位點。Yang等（Yang W C，Tang K Q，Li S J, et al. Polymorphisms of the bovine luteinizing hormone/choriogonadotropin receptor(LHCGR)gene and its association with superovulation traits[J]. Molecular Biology R 印 orts. 2012, 39 (3) :2481-2487.)在奶牛 LHR 基因上檢測到 4 個 SNPs(G51656T、A51703G、A51726G、G51737A)，其中G51656T與經(jīng)過超數(shù)排卵處理后的排卵 數(shù)顯著相關(guān)（(P〈0.05)，A51703G與超數(shù)排卵處理后的排卵數(shù)顯著相關(guān)（P〈0.01)，可移植胚 胎數(shù)顯著相關(guān)（P〈〇.〇l)。
[0005] 通過以上資料我們可以得出LHi3基因參與動物繁殖調(diào)控過程并發(fā)揮著重要的作 用。尋找基因中的變異位點，通過與性狀間的關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)基因與性狀間的關(guān)系是研究基 因功能的一個重要手段，也是進行標記輔助選擇的基礎(chǔ)。為此本發(fā)明開展了綿羊LHi3基因 全基因組序列的克隆和SNP篩查、檢測及與產(chǎn)羔數(shù)性狀關(guān)聯(lián)分析。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，獲得一種與綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)的分子 標記。本發(fā)明的任務是從綿羊LHi3基因的全基因組序列克隆得到一種與綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀 相關(guān)的分子標記，尋找突變位點以及基因多態(tài)性的檢測方法，為綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀檢測提供 一種分子標記和檢測方法。
[0007] 實現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0008] 申請人:克隆得到一種與綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)的分子標記，它包含綿羊（品種包含 杜泊和湖羊）LHi3基因1018bp的序列，其核苷酸序列如下所示：
[0009] TGCTCCAGGTAAGTCTGTAGGGCCCCCTGTGACTCCATCCAGGCCACAGCTGGCAGGAAGTGGGAGAGT CCGGGGACCTGGTAAAGGAGGCCTCTTTCTAGAAGAGTGTGGGGAGGGCAGTAGGCCTGACGGTGGGAGGAGGGCAG CAGGTGGGGCCTGAGGTGTTGGGGTGTCTGGGGTCCCTGGGGTCCCTGGGGATGGGAAATCCTTGAATGGAAGGTGG CAGGCACAGGAGCTGGGTCCCTGAACGTGTGCATGCAGGGCTTGGGGGTGGGGTGAGGATCTGGCTGGCCCTGAGGC ACTGGCCTTGTCCCAGGCACTGCTGCTGTGGCTGCTGCTGGGCGTGGCCGGGGTGTGGGCTTCCAGGGGGCCACTGC GGCCGCTGTGCCAGCCCATCAACGCCACCCTGGCGGCTGAGAAGGAGGCCTGCCCTGTCTGTATCACTTTCACCACC AGCATCTGCGCCGGCTACTGCCCCAGCATGGTGAGCTGCGGAGGGCGGGCGGGTGCCACCAACCCAGCTCCAGGCAA TTACTCGGGGCTAGGCCCACAGAAGACCCGCAGTGGCAGTGGGGGTGGAAGGGTGGCCTGCCGCCTGGGGAAGGGGC CGGGCAGGTGGGAAGGAGAGCACAGAGGGTCCCTGGGATCTGTGGGGTGCAGTGGGGGAGCTCGGGGGAGAGCTCAG CCCCATGGAAACACTCAAGCTCCCCGCY(C/T)
[0010] CTCCAGAAGCGGGTGCTGCCTGTCATCCTGCCGCCCATGCCCCAGCGGGTGTGCACCTACCACGAGCT GCGCTTCGCCTCCGTTCGGCTCCCCGGCTGCCCACCTGGCGTGGACCCAATGGTCTCTTTCCCCGTGGCCCTCAGC TGTCACTGTGGGCCCTGCCGCCTCAGCAGCACTGACTGCGGGGGTCCCAGAACCCAACCCTTGGCCTGTGACCAC CCCCCGCTCCCAGACATCCTCTTCCTCTAAGGATGCCCCACTTCAACCTCCCATGCCCACCCTAACTCCCAAAGC CAGCAGACGCT
[0011] 上述序列中的713位的Y為T或C，該突變導致PCR-BsrB I -RFLP多態(tài)性。
[0012] 通過上述序列進行SeqMan比對提供了位于該擴增片段內(nèi)部713bp處的C/T堿基 變異，該突變導致PCR-BsrB I -RFLP多態(tài)性（見圖3)。
[0013] 申請人:設(shè)計了一種擴增上述基因片段和用于檢測該基因片段αΗβ基因）的即分 子標記的引物對，其DNA序列如下所示：
[0014] 正向引物：TGCTCCAGGTAAGTCTGTAGGG，
[0015] 反向引物：CCAAAGCCAGCAGACGCT。
[0016] 申請人:設(shè)計了一種檢測上述分子標記的堿基突變的引物對，其DNA序列如下所 述：
[0017] 正向引物：TGCTCCAGGTAAGTCTGTAGGG，
[0018] 反向引物：CCAAAGCCAGCAGACGCT。
[0019] 申請人:提供了一種綿羊與產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)的分子標記的制備方法，其包括以下步 驟：
[0020] 從杜泊羊、湖羊、小尾寒羊全血中提取基因組DNA，在位于綿羊Ι?β基因突變位點 附近設(shè)計一對引物，該引物對的DNA序列如序列表SEQ ID Ν0:2和SEQ ID Ν0:3所示，對綿 羊基因組DNA進行PCR擴增和序列測定，得到如圖4所示的序列（除該序列的713bp處的堿 基是突變后的堿基外，該序列與序列表SEQ ID N0:1所示的基因片段基本是一致的，顯示了 第713位存在一個等位基因突變，通過序列比對，篩查SNP，再利用SEQ ID N0:2和SEQ ID NO: 3所示的引物對進行PCR擴增，將PCR擴增獲得的片段進行BsrB I酶切分型及檢測。
[0021] 本發(fā)明的分子標記可用于綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀標記輔助選擇中。
[0022] 所述的引物對也可應用于綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀標記輔助選擇中。
[0023] 此外。本發(fā)明提供了鑒定上述序列713bp處C/T變異的BsrB I -RFLP (限制性內(nèi) 切酶酶切片段長度多態(tài)性）基因型分型方法。
[0024] 本發(fā)明還提供了利用BsrB I -RFLP方法確定的不同基因型個體與產(chǎn)羔數(shù)性狀間 的關(guān)聯(lián)分析。
[0025] 更詳細的發(fā)明方案見《【具體實施方式】》所述。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026] 序列表SEQ ID NO: 1是本發(fā)明制備的綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)的分子標記，即擴增得 到的綿羊（品種為杜泊羊和湖羊）LHi3基因的部分核苷酸序列（在該序列表的第713位的 堿基處存在一個等位基因突變，即T/C突變），序列長度為1018bp。
[0027] 序列表SEQ ID NO:2是本發(fā)明制備SEQ ID NO: 1特異基因片段所用的正向引物， 也是實施綿羊C/T變異BsrB I -RFLP(限制性內(nèi)切酶酶切片段長度多態(tài)性）基因型分型方 法的正向引物。
[0028] 序列表SEQ ID N0:3是制備SEQ ID NO: 1特異基因片段所用的反向引物，也是實 施綿羊C/T變異BsrB I -RFLP(限制性內(nèi)切酶酶切片段長度多態(tài)性）基因型分型方法的反 向引物。
[0029] 圖1 :為本發(fā)明兩個綿羊品種LH@基因序列測序結(jié)果和SNP位點。需要說明的是： 該突變位點所列的727bp是針對該基因的全序列而言，在本發(fā)明克隆的基因片段中該突變 位點位于713bp處。
[0030] 圖2 :為本發(fā)明綿羊LHi3基因擴增所得目的片段的瓊脂糖凝膠電泳圖譜。瓊脂糖 凝膠濃度為2%，圖中標記說明：泳道Μ為DNA Marker DL2000,泳道1-8為序列表SEQ ID N0:2和SEQ ID N0:3所示引物在不同綿羊品種中的擴增片段，片段大小為1018bp ;
[0031] 圖3 :為綿羊LHi3基因 BsrB I -RFLP檢測結(jié)果。瓊脂糖凝膠濃度為1. 5%，圖中 標記說明：泳道Μ為DNA Marker DL2000, CC基因型片段大小分別為713bp、225bp，TT基因 型片段大小分別為938bp，而雜合基因型TC片段大小分別938bp、713bp和225bp。
[0032] 圖4:為本發(fā)明擴增的湖羊（但不限于湖羊，包括其他中國血緣地方品種綿羊）的 核苷酸序列，在該序列的713bp處存在一個等位基因（C/T)突變（圖4所示序列的713位 的Y為C或T)，該突變導致PCR-BsrB I -RFLP多態(tài)性。

【具體實施方式】
[0033] 實施例1 :基因片段的獲得及多態(tài)性檢測方法的建立
[0034] 綿羊LH@基因序列的擴增
[0035] ⑴采集血樣
[0036] 選擇一個國外綿羊品種（杜泊、南非肉用美利奴羊血樣采自民勤中天羊業(yè)有限公 司，為常規(guī)品種）和兩個中國綿羊地方品種（湖羊、小尾寒羊，血樣采自金昌中天羊業(yè)有限 公司，為常規(guī)品種）為試驗材料，采取綿羊的全血；
[0037] (2)基因組DNA提取
[0038] 從綿羊的全血中提取基因組DNA，DNA樣品全部采用北京天根生化技術(shù)有限公司 生產(chǎn)的基因組DNA試劑盒（TIANamp Genomic DNA Kit)，按該試劑盒提供的操作說明書進行 操作和提取。
[0039] ⑶引物設(shè)計
[0040] 根據(jù)綿羊Ι?β基因 （Gene Bank收錄號：NC_019471)突變位點附近序列，設(shè)計一 對特異引物。其DNA序列如下所示：
[0041] 正向引物為 LH β -F (5, -TGCTCCAGGTAAGTCTGTAGGG-3'），
[0042] 反向引物為 LH β -R (5, -CCAAAGCCAGCAGACGCT-3'）；
[0043] (4)聚合酶鏈式反應（PCR)
[0044] 采用PCR法，以抽提的綿羊品種杜泊、湖羊血樣基因組DNA為模板，進行PCR擴 增。PCR 反應體系：10XLoading Bufferl.5ul，dNTP(2. 5mM)2. 5ul，上述制備的正向引物 LH3-F(10uM)0.5ul，反向引物 LHP-R(10uM)0.5ul，DNA 模板（50ng/ul)lul，lXTaq DNA 聚合酶 0. 15ul，ddH208. 85ul。PCR 擴增程序：94°C預變性 5min，94°C變性 30s，65. 7°C退火 30s，72°C延伸lmin30s(步驟2-4循環(huán)32次），72°C延伸10min，4°C保存。對長度為1018bp 的PCR產(chǎn)物進行序列測定，得到如SEQ ID NO: 1所述的核苷酸序列（或參見圖4所示的序 列）。將不同綿羊品種的PCR產(chǎn)物序列混合測序其峰圖結(jié)果見圖1。位于該片段的713bp 處的C/T變異引起了 BsrB I酶切位點（CCG丨CTC)多態(tài)性。
[0045] (5)限制性內(nèi)切酶酶切反應，多態(tài)位點限制性片段酶切多態(tài)性（RLFP)檢測
[0046] 采用BsrB I -RFLP方法對綿羊LH β基因 SNP進行基因分型，酶切反應條件：PCR 產(chǎn)物5111，10\冊811打6。111，88沖1(5"111)0.5111，(1(1!1 202.5111，371：酶切30111丨11。取10111 酶切產(chǎn)物在1. 5%的瓊脂糖凝膠中進行電泳檢測，之后進行基因型分析和鑒定。此擴增片段 大小為1018bp，BsrB I酶切多態(tài)性位點位于該片段的713bp處，當該處變異位點為T堿基 時，會產(chǎn)生限制性內(nèi)切酶BsrB I的酶切位點（CCG丨CTC)，BsrB I消化PCR產(chǎn)物后會產(chǎn)生 2個片段（938bp和225bp)，其基因型為TC ;當該處變異位點為C堿基時，則不存在Bmr I 酶切位點，BsrB I消化PCR產(chǎn)物后會產(chǎn)生2個片段（713bp和225bp)，其基因型為CC ;當該 處變異位點為C/T雜合基因型時，BsrB I消化PCR產(chǎn)物后會產(chǎn)生3個片段（938bp，713bp 和225bp)，其基因型為TC。
[0047] 實施例2 :本發(fā)明制備的分子標記在綿羊產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)性狀關(guān)聯(lián)分析中的應用
[0048] 試驗共檢測了 18只杜泊羊，270只湖羊，869只小尾寒羊，5只南非肉用美利奴羊，5 只杜寒F1代（?杜泊羊X小尾寒羊早），106只杜湖羊F1代（?杜泊羊X湖羊早），145 只美湖羊F1代（?南非肉用美利奴羊X湖羊早）的多態(tài)性，確定其基因型，并進行基因型 與產(chǎn)羔數(shù)的關(guān)聯(lián)分析。
[0049] 建立如下所述的最小二乘模型：
[0050] Yijkl = μ +Genotypei+Breedj+Pk+S1+Combination m+ ε ijklm〇
[0051] 其中,Yijkl是性狀觀察值，μ為總體均數(shù),Genotypei為基因型效應,Breedj為品種 效應，P k為胎次效應，Si為季節(jié)效應，C〇mbinati〇ni為組合的效應，ε ijkl為隨機誤差，假定 ￡$1相互獨立，服從N(0,。2)分布?；蛐蜋z測結(jié)果表明在1418個個體中CC基因型，有 981個，TC基因型有331個個體，TT基因型有106個個體。基因型與性狀關(guān)聯(lián)分析的結(jié)果 由表1可知，CC基因型個體的產(chǎn)羔數(shù)極顯著高于TC基因型個體的對應值，TT基因型個體的 對應值居中，TC基因型個體的對應值最低。結(jié)果見表1所示。
[0052] 表1綿羊LHi3基因BsrB I -RFLP酶切位點的多態(tài)性對產(chǎn)羔數(shù)性狀的影響
[0053]

【權(quán)利要求】
1. 一種克隆的與綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)的分子標記，它的核苷酸序列如下所示： TGCTCCAGGTAAGTCTGTAGGGCCCCCTGTGACTCCATCCAGGCCACAGCTGGCAGGAAGTGGGAGAGTCCG GGGACCTGGTAAAGGAGGCCTCTTTCTAGAAGAGTGTGGGGAGGGCAGTAGGCCTGACGGTGGGAGGAGGGCAGCAG GTGGGGCCTGAGGTGTTGGGGTGTCTGGGGTCCCTGGGGTCCCTGGGGATGGGAAATCCTTGAATGGAAGGTGGCAG GCACAGGAGCTGGGTCCCTGAACGTGTGCATGCAGGGCTTGGGGGTGGGGTGAGGATCTGGCTGGCCCTGAGGCACT GGCCTTGTCCCAGGCACTGCTGCTGTGGCTGCTGCTGGGCGTGGCCGGGGTGTGGGCTTCCAGGGGGCCACTGCGGC CGCTGTGCCAGCCCATCAACGCCACCCTGGCGGCTGAGAAGGAGGCCTGCCCTGTCTGTATCACTTTCACCACCAGC ATCTGCGCCGGCTACTGCCCCAGCATGGTGAGCTGCGGAGGGCGGGCGGGTGCCACCAACCCAGCTCCAGGCAATTA CTCGGGGCTAGGCCCACAGAAGACCCGCAGTGGCAGTGGGGGTGGAAGGGTGGCCTGCCGCCTGGGGAAGGGGCCGG GCAGGTGGGAAGGAGAGCACAGAGGGTCCCTGGGATCTGTGGGGTGCAGTGGGGGAGCTCGGGGGAGAGCTCAGCCC CATGGAAACACTCAAGCTCCCCGCYCTCCAGAAGCGGGTGCTGCCTGTCATCCTGCCGCCCATGCCCCAGCGGGTGT GCACCTACCACGAGCTGCGCTTCGCCTCCGTTCGGCTCCCCGGCTGCCCACCTGGCGTGGACCCAATGGTCTCTTTC CCCGTGGCCCTCAGCTGTCACTGTGGGCCCTGCCGCCTCAGCAGCACTGACTGCGGGGGTCCCAGAACCCAACCCTT GGCCTGTGACCACCCCCCGCTCCCAGACATCCTCTTCCTCTAAGGATGCCCCACTTCAACCTCCCATGCCCACCCTA ACTCCCAAAGCCAGCAGACGCT 上述序列第713bp處的Y是C或T，該突變導致PCR-BsrB I -RFLP多態(tài)性。
2. -種檢測權(quán)利要求1所述分子標記的PCR引物對，該引物對的DNA序列如下所示： 正向引物：TGCTCCAGGTAAGTCTGTAGGG， 反向引物：CCAAAGCCAGCAGACGCT。
3. -種檢測權(quán)利要求1所述分子標記的堿基突變的引物對，其DNA序列如下所述： 正向引物：TGCTCCAGGTAAGTCTGTAGGG， 反向引物：CCAAAGCCAGCAGACGCT。
4. 一種與綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)的分子標記的制備方法，其包括以下步驟： 從綿羊杜泊羊、湖羊和小尾寒羊全血中提取基因組DNA，在位于綿羊LHi3基因突變位 點附近設(shè)計一對引物，該引物對的DNA序列如序列表SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3所示， 對綿羊基因組DNA進行PCR擴增和序列測定，得到如圖4所示的序列，通過序列比對，篩查 SNP，再利用SEQ ID N0:2和SEQ ID勵:3所示的引物對進行？0?擴增，將？0?擴增獲得的 片段進行BsrB I酶切分型及檢測。
5. 權(quán)利要求1所述的分子標記在綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)檢測中的應用。
6. 權(quán)利要求2所述的PCR引物對在綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)檢測中的應用。
7. 權(quán)利要求3所述的堿基突變引物對在綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀相關(guān)檢測中的應用。
【文檔編號】C12N15/11GK104099330SQ201410327930
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月10日
【發(fā)明者】李發(fā)弟, 王維民, 潘香羽, 劉世佳, 翁秀秀, 馬友記, 唐德富, 李沖 申請人:蘭州大學